Tanggal praktikum :

Tanggal penyerahan :
Asisten : Rizki Lutfiani

ANALISIS PROTEIN
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Nadia Laksmita Dewi (240210160002)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor
Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022) 7798844,
779570Fax. (022) 7795780 Email: laksmita.dewi.nadia@gmail.com

ABSTRACT

Protein is one of the giant biomolecules, in addition to polysaccharides, lipids, and

polynucleotides, which are the main constituents of living things. In addition, protein is one
of the most widely researched molecules in biochemistry. The levels of protein contained in
each ingredient vary. Therefore, measurement of protein content of a material is necessary.
the purpose of the practicum is protein analysis performed by various methods, namely
Kjeldahl method, Biuret method, and Lowry method.

Keywords: Levels of protein, Protein, protein analysis

PENDAHULUAN ke-10 asam amino itu disebut protein tidak

Protein adalah zat makanan yang
paling kompleks. Protein terdiri dari
karbon, hydrogen, oksigen, nitrogen, dan
sulfur, dan biasanya fosfor. Protein sering
disebut sebagai zat makanan bernitrogen
karena protein merupakan satu-satunya
zat makanan yang mengandung unsur
nitrogen. Protein esensial untuk
pembangunan protoplasma hidup karena
terdiri dari unsure karbon, hidrogen,
oksigen, nitrogen, dan sulfur.
Protein dalam bahan makanan yang
berbeda mengandung kombinasi asam
amino yang berbeda.Sepuluh asam amino
esensial ditemukan dalam protein
manusia. Asam amino tersebut merupakan
asam amino yang tidak dapat diproduksi
oleh tubuh. Protein yang mengandung ke-
10 asam amino tersebut disebut protein
lengkap, misalnya albumin, myosin, dan
kasein. Protein yang tidak mengandung
lengkap, misalnya gelatin yang
terkandung dalam semua jaringan fibrosa
dan diekstraksi dari tulang dan kaki anak
sapi dalam pembuatan sup dan agar-agar.
Kadar protein yang terkandung dalam
setiap bahan berbeda-beda. Karena itu,
pengukuran kadar protein suatu bahan
sangat diperlukan. Secara umum analisa
protein dapat dilakukan dengan berbagai
metode, yaitu metode Kjeldahl, metode
Biuret, dan metode Lowry.
Metode Kjeldahl merupakan metode
yang sederhana untuk penetapan nitrogen
total pada asam amino, protein dan
senyawa yang mengandung nitrogen.
Sampel didestruksi dengan asam sulfat
dan dikatalisis dengan katalisator yang
sesuai sehingga akan menghasilkan
amonium sulfat. Setelah pembebasan
dengan alkali kuat, amonia yang terbentuk
disuling uap secara kuantitatif ke dalam
larutan penyerap dan ditetapkan secara
titrasi. Metode ini telah banyak
mengalami modifikasi. Metode ini cocok
digunakan secara semimikro, sebab hanya
memerlukan jumlah sampel dan pereaksi
yang sedikit dan waktu analisa yang
pendek.
Analisa protein cara Kjeldahl pada
dasarnya dapat dibagi menjadi tiga
tahapan yaitu proses destruksi, proses
destilasi dan tahap titrasi.
1. Tahap destruksi
Pada tahapan ini sampel dipanaskan
dalam asam sulfat pekat sehingga terjadi
destruksi menjadi unsur-unsurnya. Elemen
karbon, hidrogen teroksidasi menjadi CO,
CO2 dan H2O. Sedangkan nitrogennya (N)
akan berubah menjadi (NH4)2SO4. Untuk
mempercepat proses destruksi sering
ditambahkan katalisator berupa campuran
Na2SO4 dan HgO (20:1). Gunning
menganjurkan menggunakan K2SO4 atau
CuSO4. Dengan penambahan katalisator
tersebut titk didih asam sulfat akan
dipertinggi sehingga destruksi berjalan
lebih cepat. Selain katalisator yang telah
disebutkan tadi, kadang-kadang juga
diberikan Selenium. Selenium dapat
mempercepat proses oksidasi karena zat
tersebut selain menaikkan titik didih juga
mudah mengadakan perubahan dari
valensi tinggi ke valensi rendah atau
sebaliknya.
2. Tahap destilasi
Pada tahap destilasi, ammonium sulfat
dipecah menjadi ammonia (NH3) dengan
penambahan NaOH sampai alkalis dan
dipanaskan. Agar supaya selama destilasi
tidak terjadi superheating ataupun
pemercikan cairan atau timbulnya
gelembung gas yang besar maka dapat
ditambahkan logam zink (Zn). Ammonia
yang dibebaskan selanjutnya akan
ditangkap oleh asam khlorida atau asam
borat 4 % dalam jumlah yang berlebihan.
Agar supaya kontak antara asam dan
ammonia lebih baik maka diusahakan
ujung tabung destilasi tercelup sedalam
mungkin dalam asam. Untuk mengetahui
asam dalam keadaan berlebihan maka
diberi indikator misalnya BCG + MR atau
PP.
3. Tahap titrasi
Apabila penampung destilat
digunakan asam khlorida maka sisa asam
khorida yang bereaksi dengan ammonia
dititrasi dengan NaOH standar (0,1 N).
perubahan warna larutan menjadi merah
muda dan tidak hilang selama 30 detik
bila menggunakan indikator PP.
%N = × N. NaOH × 14,008 × 100%
Apabila penampung destilasi
digunakan asam borat maka banyaknya
asam borat yang bereaksi dengan
ammonia dapat diketahui dengan titrasi
menggunakan asam khlorida 0,1 N dengan
indikator (BCG + MR). Akhir titrasi
ditandai dengan perubahan warna larutan
dari biru menjadi merah muda.
%N = × N.HCl × 14,008 × 100 %
Metode Lowry mengkombinasikan
pereaksi biuret dengan pereaksi lain
(Folin-Ciocalteauphenol) yang bereaksi
dengan residu tyrosine dan tryptophan
dalam protein. Reaksi ini menghasilkan
warna kebiruan yang bisa dibaca di antara
500 – 750 nm, tergantung sensitivitas
yang dibutuhkan. Akan muncul puncak
kecil di sekitar 500 nm yang dapat
digunakan untuk menentukan protein
dengan konsentrasi tinggi dan sebuah
puncak besar disekitar 750 nm yang dapat
digunakan untuk menentukan kadar
protein dengan konsentrasi rendah.
 Uji biuret ini dapat digunakan untuk
mengetahui ada atau tidaknya ikatan
peptide dalam suatu senyawa sehingga uji
biuret dapat dipakai untuk menunjukan
adanya senyawa protein. Langkah
pengujian yang dapat dilakukan adalah
larutan sampel yang diduga mengandung
protein ditetesi dengan larutan NaOH
kemudian diberi beberapa tetes larutan
CuSO4 encer. Apabila larutan berubah
menjadi arna unggu maka larutan tersebut
mengandung protein.
METODOLOGI
Alat dan bahan
alat yang digunakan dalam praktikum
kali ini adalah alat dekstruksi, bulb pipet,
buret, desilator, Erlenmeyer, kuvet, labu
kjehdal, labu ukur, neraca, pipet tetes,
pipet volume, sentrifugator,
spektrofotometer, tabung reaksi, tabung
sentrifugasi, dan vortex.
Bahan yang digunakan adalah aquades,
asam borat jenuh (H3BO3), biscuit, biuret,
folin-ciocalteu, H2SO4 pekat, HCl 0,02 N,
heksana, indikator metil merah biru, mie
instan, NaOH, nasi sorgum, pereaksi
tembaga sulfat, sistik ebi,standar protein
(BSA), susu, TCA 10%, tempe, tablet
kjehdal, dan tepung pisang.
Metode lowry
Sampel ditimbang sebanyak 1 gram
kemudian dimasukan ke dalam tabung
sentrifugasi dan ditambahkan akuades 1
ml. lalu ditambahkan TCA 10% dan
disentrifugasi pada keceoatan 3000 rpm
selama 10 menit. Dibuang suoernatan
kemudian ditambahkan 2 ml heksana dan
divortex. Dikeringkan pada suhu ruang
dan kemudian ditambahkan 2 ml heksana
dan divortex. Dikeringan pada suhu ruang
dan kemudian ditambahkan 2 mL
akuades. Divortex kembali dan
ditambahkan 5.5 mL pereaksi tembaga
sulfat. Divortex kembali. Setelah itu
diinkubasi pada suhu runag selama 10-15
menit. Ditambahkan 0.5 FC. Divortex
kembali. Lalu diinkubasi selama 30 menit
pada suhu ruang hingga warna biru
terbentuk. Dibaca absorbansi pada
panjang gelombang 600 nm.
Metode kjehdal
Sampel ditimbang sebanyak 0.5 gram.
Kemudian dtambahkan 1 buah tablet
kjeldahl dan 10 mL H2SO4. Dididihkan
selama 3 jam (sampai jernih).
Ditambahkan akuades secara perlahan
lewat dinding labu sebanyak 25 mL dan
dinetralkan dengan NaOH. Pada
erlemeyer ditambahkan 30 mL asam borat
dan 3 tetes indikator metil merah-metil
biru. Kemudian dilakukan destilasi selama
3 menit. Hasil destilasi dititrasi dengan
HCl yang telah distandarisasi. Dicatat
volume titrasi dan dihitung kadar nitrogen
dan protein dengan rumus berikut:
Kadar N(%) =
(𝑉𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙−𝑉𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜)𝑥 𝑁 𝐻𝐶𝑙 𝑥 𝐴𝑟
𝑊 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑚𝑔)
Kadar protein (%bb) = %N x Faktor
konversi
Metode Biuret
Sampel tempe ditimbang sebanyak 1
gram. Kemudian ditepatkan dalam labu
ukur 25 mL. Diambil 1 mL aliquot dan
dimasukkan ke dalam tabung sentrifugasi.
Ditambahkan 1 mL akuades dan 2 mL
TCA 10%. Disentrifugasi pada kecepatan
3000 rpm selama 10 menit. Dibuang
supernatan dan ditambahkan 2 mL
heksana. Kemudian divortex dan
dikeringan pada suhu ruang. Lalu
ditambahkan 2 mL akuades dan divortex
kembali. Ditambahkan 6 mL biuret dan
diinkubasi pada suhu ruang selama 30
menit. Dibaca absorbansi pada panjang
gelombang 540 nm.
Sampel susu dipipet 0.5 mL.
Dimasukkan ke dalam tabung sentrifugasi
dan ditambahkan 0.5 mL akuades.
Ditambahkan 1 mL TCA 10%.
Disentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm
selama 10 menit. Dibuang supernatan dan
ditambahkan 2 mL heksana. Kemudian
divortex dan dikeringan pada suhu ruang.
Lalu ditambahkan 2 mL akuades dan
divortex kembali. Ditambahkan 6 mL
biuret dan diinkubasi pada suhu ruang
selama 30 menit. Dibaca absorbansi pada
panjang gelombang 540 nm.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode lowry
Metode Lowry merupakan
pengembangan dari metode Biuret. Dalam
metode ini terlibat 2 reaksi. Awalnya,
kompleks Cu(II)-protein akan terbentuk
sebagaimana metode biuret, yang dalam
suasana alkalis Cu(II) akan tereduksi
menjadi Cu(I).
Tabel 1. Hasil analisis protein metode lowry
Kode Absorbansi (Y) PPM (X)
532 0.733 78.46512
215 0.495 50.7907
324 0.539 55.90698
134 0.836 90.44186
(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2018)
Ion Cu+ kemudian akan mereduksi
reagen Folin-Ciocalteu, kompleks
phosphomolibdat phosphotungstat
menghasilkan heteropoly-molybdenum
blue akibat reaksi oksidasi gugus aromatik
(rantai samping asam amino) terkatalis
Cu, yang memberikan warna biru intensif
yang dapat dideteksi secara kolorimetri.
Kekuatan warna biru terutama bergantung
pada kandungan residu tryptophan
dan tyrosine-nya. (Rohman 2007).
Penetapan total kadar protein dapat
dikatakan sulit karena beberapa faktor
diantaranya protein dapat membentuk
grup yang beragam dan kompleks
sehingga sulit untuk memisahkan,
memurnikan atau mengekstrak. Selan itu
protein juga memiliki sifat amfoterik,
kemampuan untuk mengabsorbansi yang
tinggi sehingga terkadang dibutuhkan
TCA (Trichloro Acetic Acid) untuk
mengendapkan protein dan
menghilangkan supernatan agar dapat
dianalisa, dan sensifitasnya tinggi
terhadap elektrolit, panas, pH dan pelarut.
FP Konsentrasi (ppm)
40 3138.604651
40 2031.627907
40 2236.27907
40 3617.674419
Grafik 1. Hasil analisis protein metode lowry
(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2018)
Berdasarkan hasil percobaan
praktikum analsis kadar
protein,menghasilkan kurva standart yang
semakin tinggi konsentrasi, maka
semakintinggi juga absorbansinya, karena
mengindikasikan protein yang terlarut
dalamlarutan semakin banyak. Dan
menghasilkan persamaan y = 0,0086x +
0,0582 dengan nilai R² = 0.9923.
Apabila dilihat dari tabel hasil
pengamatan untuk setiap kenaikan
konsentrasi susu akan menaikan nilai
absorbansi dan PPM nya. Berdasarkan
teori, semakin besar konsentrasi larutan
uji, maka semakin besar pula nilai
absorbansinya (Khopkar 2007). Dengan
demikian, dapat disimpulkan bahwa
semakin banyak volume protein sampel
dalam campuran, jumlah protein yang
terlarut akan semakin sedikit, sehingga
nilai absorbansinya semakin besar.
Sehingga dapat disimpulkan bahwa yogurt
dengan kode 134 memiliki kandungan
protein yang lebih tinggi sehingga
mempengaruhi nillai absorbansi dan PPM
nya.
Metode kjehdal
Metode Kjeldahl dilakukan untuk
menganalisis kadar protein kasar dalam
bahan makanan secara tidak la ngsung,
karena yang dianalisis dengan cara ini
adalah kadar nitrogennya (Winarno,
1986). Prinsip analisis Kjeldahl adalah
sebagai berikut: bahan organik dididihkan
dengan asam sulfat pekat sehingga unsur-
unsur dapat terurai. Atom karbon menjadi
CO2 dan nitrogen menjadi amonium
sulfat. Larutan tersebut kemudian dibuat
alkalis dengan menambahkan NaOH
berlebihan sehingga ion amonium bebas
menjadi amonia bebas. Amonia yang
dipisahkan dengan cara distilasi kemudian
dijerat dengan larutan asam borat. Garam
borat yang terbentuk dititrasi dengan HCl
(Sudarmadji et al, 1996).
Analisis kadar protein metode kjeldahl
terdapat tiga tahap, yaitu tahap destruksi,
tahap destilasi, dan tahap titrasi. Tahap
destruksi berfungsi untuk memecah
protein-protein dalam sampel dari
senyawa organik menjadi senyawa
anorganik. Pertama sampel ditimbang
sebanyak 0.5 gram dan dimasukan ke
dalam labu kjeldahl dan ditambahkan
tablet kjehdahl dan 10 mL H2SO4. Tablet
kjehdahl menggandung K2SO4 dan CuSO4
serta HgO. Penambahan tablet kjeldahl ini
berfungsi sebagai katalisator untuk
mempercepat destruksi. Dengan
penambahan katalisator tersebut titik didih
asam sulfat akan dipertinggi sehingga
destruksi berjalan cepat. Menurut
Sudarmadji et al (1996) tiap 1 gram
K2SO4 dapat menaikkan titik didih 3ºC,
suhu destruksi berkisar antara 370º-410ºC.
Labu yang digunakan untuk destruksi
memiliki leher panjang sehingga
mencegah terjadinya kehilangan bahan
dan letupan yang kuat karena saat
destruksi sampel digunakan asam kuat
yaitu H2SO4. Penambahan H2SO4 bertujuan
agar senyawa organik seperti C, H, O
dalam sampel dapat teroksidasi menjadi
CO2, H2O, O2, tanpa diikuti oksidasi
nitrogen menjadi N2. Unsur nitrogen
tersebut terikat dengan asam sulfat sebagai
amonium sulfat ((NH4)2SO4). (Diniz, et al,
2013). Reaksi yang terjadi adalah sebagai
berikut:
HgO + H2SO4 HgSO4 + H2O
2 HgSO4 Hg2SO4 + SO2 + 2On
Hg2SO4 + 2H2SO4 2HgSO4 + 2H2O
+ SO2
(CHON) + On + H2SO4 CO2 + H2O+
(NH4)2SO4
(Sudarmadji, 1989).
Destuksi dilakukan selama 3 jam. Proses
destruksi berakhir apabila larutan menjadi
jernih.
Tahap destilasi, hasil destruksi
diencerkan dengan akuades. Pengenceran
ini perlu dilakukan untuk mengurangi
kehebatan reaksi yang nanti akan terjadi
apabila larutan ditambahkan senyawa
alkali. Larutan dijadikan basa dengan
menambahkan NaOH. Tujuan
penambahan NaOH untuk memecah
senyawa amonium sulfat menjadi amonia
(NH3). (Magomya, et al, 2014)
Pada erlenemyer diisi dengan asam
borat (H3BO3) dan indikator metil merah-
metil biru. Larutan asam borat (H3BO3)
berfungsi sebagai penangkap NH3 sebagai
destilat berupa gas yang bersifat basa.
Supaya ammonia dapat ditangkap secara
maksimal, maka sebaiknya ujung alat
destilasi ini tercelup semua ke dalam
larutan asam borat sehingga dapat
ditentukan jumlah protein sesuai dengan
kadar protein bahan.
Penambahan campuran indikator metil
merah dan metil biru merupakan indikator
yang bersifat amfoter, yaitu dapat bereaksi
dengan asam maupun basa. Indikator ini
digunakan untuk mengetahui asam dalam
keadaan berlebih. Selain itu alasan
pemilihan indikator ini adalah karena
memiliki trayek pH 6-8 (melalui suasana
asam dan basa / dapat bekerja pada
suasana asam dan basa) yang berarti
trayek kerjanya luas (meliputi asam-
netral-basa). Reaksi yang terjadi :
(NH4)SO4 + NaOH Na2SO4 + 2 NH4OH
2NH4OH 2NH3 + 2H2O
4NH3 + 2H3BO3 2(NH4)2BO3 +H2
(Sudarmadji, et al, 1996)
Tahap titrasi merupakan tahap akhir
dari seluruh metode Kjeldahl. Destilat
dititrasi dengan HCl yang telah
distandarisasi. Titik akhir titrasi ditandai
dengan warna merah muda berbayang.
Reaksi yang berlangsung selama titrasi NH4(H2BO3) + HCl →NH4Cl + H2BO3
adalah: (merah muda berbayang)

(Sudarmadji, et al, 1996)

Tabel 2. Hasil Pengamatan Kadar Protein (Metode Kjeldahl)

W sampel V HCl Kadar N Kadar Protein
Kelompok Sampel
(mg) (mL) (%) (%)
1A 507.2 7.3 2.0412 12.7572
Mie instan
6A 508.5 7.6 2.1219 13.2622
2A 506 3 0.8069 5.0429
Nasi Sorgum
7A 500.4 3.2 0.8742 5.4636
3A 501 7.6 2.1537 13.4608
Sistik Ebi
8A 503.4 7.8 2.2014 13.7587
4A 500.1 2.2 0.5831 3.6446
Tepung Pisang
9A 501 2.4 0.6403 4.0019
5A Biskuit 500 5.7 1.604 10.0246
(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2018)

Berdasarkan hasil pengamatan, tiap mendekati literatur. Perbedaan kadar

sampel memiliki kadar protein yang
berbeda-beda. Sampel mie instan memiliki
kadar protein sebesar 12.7572% dan
13.2622%. Menurut SNI 3551-2012,
kadar protein dalam mie instan minimal
8%. Pada kemasan mie instan tersebut
tertera dalam komposisi nutrisi bahwa
AKG protein sebesar 12%. Hasil analisis
sudah sesuai dengan literatur yang ada.
Kadar protein dalam mie dapat
dipengaruhi oleh jenis tepung yang
digunakan. Biasanya dalam pembuatan
mie digunakan tepung protein tinggi
dengan kadar protein sebesar 11-14.5%.
(Lubis, 2013)
Nasi sorgum memiliki kadar protein
sebesar 5.0429% dan 5.4636%. Sorgum
sendiri memiliki kandungan protein kasar
sebesar 8.9-10.48%. (Etuk et al, 2012).
Sistik Ebi memiliki kadar protein
sebesar 13.4608% dan 13.7587%.
Tepung pisang memiliki kadar protein
sebesar 3.6446% dan 4.0019%. Menurut
Suyanti dan Supriadi (2008), kadar protein
dalam tepung pisang mengkal adalah
4.4%, dan pada tepung pisang matang
adalah 4.84%. Hasil analisis hampir
protein antara hasil analisis dengan
literatur dapat disebabkan perbedaan jenis
pisang yang digunakan, tingkat
kematangan pisang, serta dapat
dipengaruhi proses pengolahan terutama
dengan pemanasan karena protein dapat
mengalami denaturasi.
Rata-rata kadar protein dalam sampel
biskuit regal adalah 10,02463481%.
Menurut SNI 2973-2011, kadar protein
dalam biskuit berkisar antara 3-5%. Hasil
pengamatan memiliki perbedaan yang
cukup jauh dengan kadar protein yang
sesuai dengan SNI. Kadar protein hasil
pengamatan yang tidak sesuai ini dapat
disebabkan oleh ketidaktelitian saat
melakukan titrasi, sehingga volume HCl
yang digunakan berlebih. Kelebihan
volume HCl dapat menyebabkan kadar
protein menjadi semakin besar. Selain itu,
adanya pengotor yang mengandung
nitrogen pada alat-alat destilasi atau
pun alat-alat lainnya juga dapat
mempengaruhi hasil perhitungan.
Perbedaan pada beberapa hasil analisis
dan literatur dapat disebabkan oleh
berbagai faktor. Perbedaan tersebut dapat
disebabkan proses destruksi yang kurang
sempurna sehingga molekul protein tidak
terurai sempurna. Selain itu, perbedaan
tersebut mungkin juga dipengaruhi oleh
NH3 –yang belum tertampung semua pada
saat destilasi atau semua Nitrogen pada
sampel belum bereaksi sempurna dengan
NaOH, masih ada nitrogen yang tertinggal
di dalam sampel bahan pangan sehingga
mengurangi kadar protein sampel. Faktor
kedua yang menyebabkan terjadinya
perbedaan kadar protein antara hasil
praktikum dengan literatur mungkin
disebabkan oleh faktor kebersihan alat.
Kemungkinan zat pengotor yang
mengandung atom N tersebut terdapat
pada labu kjeldahl dan ikut terdestruksi
bersama sampel, sehingga kadar N
menjadi lebih besar dari yang seharusnya.
Menurut Nielsen (2010), metode Kjeldahl
sendiri memiliki kelemahan, yaitu sebagai
berikut:
• Metode ini tidak memberikan
pengukuran protein sesungguhnya,
karena tidak semua nitrogen dalam
makanan bersumber dari protein.
• Protein yang berbeda memerlukan
faktor koreksi yang berbeda karena
susunan residu asam amino yang
berbeda.
• Penggunaan asam sulfat pada suhu
tinggi berbahaya, demikian juga
beberapa katalis.
• Teknik ini membutuhkan waktu lama.
Metode Biuret
Prinsip pengujian kadar protein
dengan metode biuret adalah pengukuran
serapan cahaya kompleks berwarna ungu
dari protein yang bereaksi dengan pereaksi
biuret. Kompleks warna yang terbentuk
adalah hasil reaksi protein dengan ion
Cu2+ yang terdapat dalam pereaksi biuret
dalam suasana basa. Semakin tinggi
konsentrasi cahaya yang diserap oleh
larutan, maka semakin tinggi konsentrasi
protein yang ada dalam sampel tersebut
(Harr 2002).
Pertama, sampel dimasukan ke dalam
tabung reaksi sebanyak 0 mL, 0,1 mL, 0,2
mL, 0,4 mL, 0,6 mL, 0,8 mL, dan 1 mL.
Tujuan penambahan pereaksi biuret
adalah untuk membuat larutan menjadi
berwarna, karena penentuan selanjutnya
dengan menggunakan spektrofotometer
dimana larutan harus berwarna.
Penambahan pereaksi biuret pada sampel
menghasilkan warna ungu. Perubahan
warna tersebut terjadi karena adanya
pembantukan kompleks antara ion Cu2+
pada pereaksi biuret dengan gugus amino
pad protein. Reaksi biuret bergantung
pada pembentukan suatu kompleks antara
ion Cu2+ dan 4 atom N-peptida pada
protein dalam suasana basa. Setelah
penambahan pereaksi biuret, sampel di
vortex dan disimpan pada suhu 37ºC
selama 10 menit atau pada suhu 30ºC
selama 30 menit. Setelah itu, sampel
dihitung absorbansi-nya dengan
menggunakan alat, yaitu spektrofotometer.
Pada spektrofotometer akan diperoleh
nilai absorbansi suatu larutan. Absorbansi
atau biasa disebut pula nilai serapan
merupakan sinar yang diserap oleh
senyawa dalam larutan. Dalam
spektrofotometer akan memancarkan sinar
tampak yang kemudian melewati suatu
larutan dan diserap oleh larutan yang
dilewati sehingga serapannya tersebut
yang dikatakan sebagai absorbansi.
Namun, sinar tampak tersebut hanya dapat
melewati larutan berwarna, sehingga
untuk larutan yang tidak berwarna perlu
diwarnakan terlebih dahulu.
Prinsip kerja spektrofotometer ialah
dengan memasukkan suatu larutan blanko
dalam kuvet dan memasukkan-nya dalam
spektrofotometer, kemudian absorbansi
pada spektrofotometer di-nolkan. Larutan
blanko merupakan pelarut yang digunakan
untuk melarut-kan sampel dan
diperlakukan sama dengan larutan sampel.
Dalam praktikum ini, larutan blanko yang
digunakan adalah air, sedangkan larutan
sampel ialah putih telur 1 ml. Berdasarkan
hasil pengamatan yang diperoleh
menunjukkan bahwa semakin banyak Nilai konsentrasi berbanding lurus dengan
volume putih telur yang ditambahkan, absorbansi suatu larutan, dimana
nilai absorbansi atau serapanya pun peningkatan konsentrasi larutan tersebut
semakin meningkat. Hal rsebut berkaitan akan diikuti oleh peningkatan serapan atau
dengan besarnya konsetrasi putih telur absorbansinya. Berikut adalah tabel hasil
pada larutan tersebut. Semakin banyak pengamatan
volume putih telur yang ditambahkan
maka semakin tinggi pula konsentrasinya.

Tabel 3. Hasil analisis protein metode biuret

Konsentrasi
Sampel No Absorbansi ppm (X) FP (PPM)
1 0.313 1009.333 3.5 3532.666667
2 0.194 612.6667 3.5 2144.333333
Susu 3 0.463 1509.333 3.5 5282.666667
4 0.847 2789.333 3.5 9762.666667
5 0.234 746 3.5 2611
1 0.485 1582.667 6 9496
2 0.386 1252.667 6 7516
Tempe
3 0.317 1022.667 6 6136
4 0.353 1142.667 6 6856
(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2018)

Grafik 2. Hasil analisis protein metode biuret

(Sumber: Dokumentasi Pribadi, 2018)

konsentrasi maka semakin tinggi pula nilai
Berdasarkan hasil pengamatan absorbansi yang terbaca pada
menunjukkan bahwa semakin tinggi spektrofotometer. Data yang diperoleh
dari nilai absorbansi dan konsentrasi BSA
diperoleh gambar grafik seperti di atas.
Persamaan yang didapatkan adalah y =
0.0003x + 0.0102 dengan nilai R2 adalah
0,998. Nilai ini cukup baik karena nilai R2
yang baik adalah nilai yang mendekati
angka 1. Persamaan ini digunakan untuk
menentukan nilai konsentrasi larutan
sampel protein yang diukur selanjutnya.
Pengukuran kadar protein dengan
menggunakan metode Biuret ini memiliki
kelemahan dan kelebihan. Kelemahan
menggunakan metode ini adalah hasil
yang ditunjukkan belum tentu murni
merupakan protein, melainkan dapat
berupa kadar senyawa yang mengandung
benzena, gugus fenol, atau gugus
sulfhidrin juga ikut terbaca kadarnya.
Selain itu, waktu yang digunakan untuk
pengukuran absorbansinya tergolong lama
karena harus melakukan proses
pemanasan sapel dengan penangas
terlebih dulu. Kelebihan yang bisa
diperoleh dengan menggunakan metode
Biuret ini adalah reagen yang digunakan
hanya satu macam, berbeda dengan
metode Lowry yang menggunakan empat
macam reagen.

KESIMPULAN

DAFTAR PUSTAKA