Keseragaman kandungan parasetamol menggunakan HPLC

Kromatografi cair yang digunakan dalam farmakope Indonesia adalah kromatografi cair tekanan
tinggi atau kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan teknik pemisahan berdasarkan fase
diam berupa padatan dan fase gerak berupa cairan.

1. SKEMA KERJA

1.1 Pengkondisian Kolom HPLC

Larutan pencuci kolom (metanol dan air (70:30 v/v)) difiltrasi melalui
membran

Metanol dan air (70:30 v/v) difiltrasi.

Diinjeksikan metanol dan air (70:30 v/v) sebanyak 10 L ke alat melalui selang
pelarut dengan kecepatan alir 1 mL/menit.

1.2 Pembuatan Larutan Stok Parasetamol 100 µg/mL

Ditimbang parasetamol menggunakan beaker glass sebanyak 50 mg.

Dilarutkan dengan sedikit metanol dan air (70:30 v/v), dimasukkan ke dalam
labu ukur 50 mL.
Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) sampai tanda batas, digojog hingga
homogen.

Dipipet sebanyak 1 mL, dimasukan kedalam labu ukur 10 mL.

Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) sampai tanda batas.

1.3 DigojogParasetamol
Pembuatan Seri Larutan Standar hingga homogen.
5 µg/mL; 10 µg/mL; 15 µg/mL; 20 µg/mL; 25
µg/mL

Larutan stok parasetamol 100 µg/mLdipipet 0,5 mL; 1 mL; 1,5 mL; 2 mL; 2,5 mL
dimasukan ke dalam labu ukur 10 mL.
 Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) hingga tanda batas.

Digojog hingga homogen.

1.4 Pembuatan Larutan Sampel 1 mg/mL

Digerus tablet parasetamol sebanyak 3 buah menggunakan stamper dan mortir.

Ditimbang serbuk mengandung sebanyak 100 mg parasetamol.

Dimasukan ke dalam beaker glass, setelah itu serbuk ini dilarutkan dengan
metanol dan air (70:30 v/v), dimasukan kedalam labu ukur 100 mL.

Ditambahkan pelarut hingga tanda batas kemudian digojog hingga homogen.

Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) ke dalam labu ukur sampai tanda
batas.
Digojog hingga homogen.
1.4.1 Pengenceran Larutan Sampel 1 mg/mL menjadi 100 µg/mL

Dipipet larutan parasetamol 1 mg/mL sebanyak 10 mL, dimasukkan ke dalam

labu ukur 100 mL.

Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) hingga tanda batas.

Digojog homogen.

1.4.2 Pengenceran Larutan Sampel 100 µg menjadi 15 µg/mL

Dipipet larutan sampel 100 µg/mL sebanyak 1,5 mL, dimasukan ke dalam labu
ukur 10 mL.

Ditambahkan metanol dan air (70:30 v/v) sampai tanda batas.

Digojog hingga homogen.

 Diulangi sebanyak 2 kali.

1.5 Pembuatan Kurva Kalibrasi

Diinjeksikan larutan seri parasetamol konsentrasi terendah diinjeksikan ke

membran (difiltrasi) sebanyak 20 L pada injektor HPLC.

Larutan seri di-scan pada panjang gelombang 200 nm-300 nm.

Ditentukan panjang gelombang maksimumnya.

Larutan standar lain diukur pada panjang gelombang maksimum.

Dibuat kurva kalibrasi standar parasetamol dan persamaan regresi linier

y = bx + a, y = AUC dan x = kadar sampel (µg/mL).