1.

PENGANTAR
Asam Mefenamat memiliki struktur sebagai berikut:
OH O
H CH3

N CH3

 
Analisis unsur asam mefenamat menghitung sebagai berikut:
Karbon 74,67%
Hidrogen 6,27%
Nitrogen 5,81%
Oksigen 13,26%
Rumus empiris asam mefenamat adalah C15H15NO2, dan bobot formulanya dihitung
menjadi 241,285.
Menurut USP 26 [1] dan Farmakopoeia Indonesia [4], asam mefenamat ditetapkan untuk
mengandung tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 102,0% dari C15H15NO2,
dihitung secara kering. Substansi harus dipertahankan dalam ketat, wadah tahan cahaya.
Farmakope Inggris 2002 [2], Pharmacopoeia Eropa [5] dan Pharmacopoeia India [6]
menjelaskan bahwa asam mefenamat mengandung tidak kurang dari 99,0%, dan tidak
lebih dari setara dengan 100,5% dari N-2, asam 3xylylanthranilic, dihitung dengan
mengacu pada zat kering. Pharmacopoeia Republik Rakyat Cina [7] menjelaskan bahwa
asam mefenamat adalah 2-[(2, 3-dimethylphenyl) amino] asam benzoat, dan berisi tidak
kurang dari 99,0% C15H15NO2, dihitung secara kering.
Menurut USP 26 [1], Farmakope Indonesia [4], Pharmacopoeia India [6], dan
Pharmacopoeia Republik Rakyat Cina [7], kapsul asam mefenamat ditetapkan untuk
mengandung tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah berlabel
C15H15NO2. Menurut Farmakopoeia Inggris 2002 [3], kapsul asam mefenamat dan
tablet yang ditetapkan untuk mengandung tidak kurang dari 95,0% dan tidak lebih dari
105,0 persen dari jumlah yang dinyatakan substansi.

2. METODE ANALISIS KOMPENDIAL

2.1 Identifikasi
 Zat obat curah menurut Pharmacopoeia 26 [1] dan Pharmacopoeia Indonesia [4],
asam mefenamat diidentifikasi melalui pemeriksaan menggunakan Spektrofotometri
penyerapan inframerah (metode 197) yang membandingkan dengan spektrum yang
diperoleh dengan USP Standar referensi asam mefenamat (Test A). Selain tes
penyerapan inframerah, USP 26 [1] termasuk pemeriksaan menggunakan
kromatografi cair, di mana waktu retensi puncak utama dalam kromatogram dari
persiapan assay sesuai dengan bahwa dalam kromatogram dari persiapan standar ,
seperti yang diperoleh dalam assay (Test B). Test B menurut Pharmacopoeia
Indonesia [4] menggunakan tes kromatografi lapis tipis, dimana nilai RF dari tempat
utama dalam kromatogram larutan uji sesuai dengan yang ada dalam kromatogram
larutan standar.
Pengujian identifikasi dalam Pharmacopoeia British 2002 [2] dan Pharmacopoeia
Eropa [5] disusun dalam dua tingkatan, diklasifikasikan sebagai identifikasi pertama
oleh Test B, dan (B) identifikasi kedua oleh tes A, C dan D.
a. Uji A: sekitar 20 mg sampel asam dilarutkan dalam campuran 1 volume asam
klorida 1 M dan 99 volume metanol, dan diencerkan menjadi 100 mL dengan
campuran pelarut yang sama. Sekitar 5 mL larutan diencerkan menjadi 50 mL
dalam campuran 1 volume 1 M asam klorida dan 99 volume metanol. Solusi yang
dihasilkan diperiksa antara 250 Nm dan 380 NM, sedangkan solusi menunjukkan
dua penyerapan Maxima di 279 Nm dan 350 Nm. Rasio absorbansi diukur pada
maksimum pada 279 Nm yang diukur pada 350 NM adalah 1,1 untuk 1,3.
b. Uji B: pemeriksaan sampel asam dengan Spektrofotometri penyerapan
inframerah, dibandingkan dengan spektrum yang diperoleh dengan standar
referensi asam mefenamat. Periksa zat yang dipersiapkan sebagai pelet KBr. Jika
spektrum yang diperoleh menunjukkan perbedaan, membubarkan substansi yang
akan diperiksa dan substansi referensi secara terpisah dalam alkohol, menguap
menjadi kering, dan merekam spektrum baru menggunakan residu.
c. Uji C: tentang 25 mg sampel asam dilarutkan dalam 15 mL metilen klorida.
Solusinya diperiksa dalam cahaya ultraviolet di 365 Nm untuk menunjukkan
fluoresensi kuning kehijauan yang kuat. Tambahkan 0,5 ml larutan jenuh pada
 bertetes asam trikloroasetat dan periksa di bawah sinar ultraviolet pada 365 Nm.
Solusinya tidak menunjukkan fluoresensi.
d. Test D: tentang 5 mg sampel asam dilarutkan dalam 2 ml asam sulfat, yang
ditambahkan 0,05 ml larutan kalium dikromat. Warna biru yang intens dihasilkan,
berubah dengan cepat menjadi kecoklatan-hijau.
Pengujian identifikasi menurut Pharmacopoeia India [6] dilakukan dengan
menggunakan tiga tes (dilambangkan sebagai tes A, B, dan C).
1. Uji A: spektrum penyerapan inframerah adalah kesesuaian dengan spektrum
referensi asam mefenamat atau dengan spektrum yang Diperoleh dari standar
referensi asam mefenamat. Jika spektrum tidak kesesuaian, melarutkan kuantitas
yang cukup dari zat dalam volume minimum etanol (95%), menguap menjadi
kekeringan, dan mempersiapkan spektrum baru dari residu.
2. Uji B: Sekitar 25 mg sampel asam dilarutkan dalam 15 mL kloroform. Solusinya
diperiksa di bawah sinar ultraviolet pada 365 nm untuk menunjukkan fluoresensi
kuning kehijauan yang kuat. Dengan hati-hati tambahkan 0,5 mL larutan asam
jenuh trikloroasetat tetes demi tetes dan periksa di bawah sinar ultraviolet pada
365 nm. Solusinya tidak menunjukkan fluoresensi.
3. Uji C: Sekitar 5 mg sampel asam dilarutkan dalam 2 mL asam sulfat, yang
ditambahkan 0,05 mL larutan 0,0167 M kalium dikromat. Warna biru pekat
dihasilkan, yang cepat memudar menjadi hijau kecoklatan.
Menurut Farmakope Republik Rakyat Tiongkok [7], asam mefenamat
diidentifikasi oleh kinerja empat tes (dilambangkan sebagai Tes 1, 2, 3, dan 4).
1. Tes 1: Sekitar 25 mg sampel asam dilarutkan dalam 15 mL kloroform. Solusinya diperiksa
di bawah sinar ultraviolet pada 254 nm untuk menunjukkan fluoresensi hijau yang kuat.
2. Uji 2: Sekitar 5 mg sampel asam dilarutkan dalam 2 mL asam sulfat, yang ditambahkan
0,05 mL larutan kalium dikromat. Warna biru tua dihasilkan yang langsung memudar
menjadi hijau kecoklatan.
3. Uji 3: Penyerapan ringan larutan 20 mg / mL dalam campuran asam klorida (1 mol / L)
dan metanol (1:99), menunjukkan dua penyerapan maksimum, pada 279 nm dan 350 nm.
Absorbansi ini adalah masing-masing sekitar 0,69 - 0,74 dan 0,59 - 0,6.
4. Uji 4: Spektrum serapan inframerah sesuai dengan spektrum standar referensi asam
mefenamat.
2.1.2 Zat obat dalam sediaan farmasi
Uji identifikasi asam mefenamat dalam sediaan kapsul menurut Farmakope
Amerika Serikat 26 [1] dan Farmakope Indonesia [4] dilakukan dengan pelaksanaan dua
tes (dilambangkan sebagai Tes A dan B)
1. Uji A: Sebagian isi kapsul (setara dengan sekitar 250 mg asam mefenamat)
ditempatkan dalam 250 mL cairan volumetrik, yang ditambahkan sekitar 100 mL
campuran kloroform dan metanol (3: 1) dengan pengocokan kuat. Ini kemudian
diencerkan dengan campuran kloroform dan metanol (3: 1) hingga volume, dicampur,
dan disaring dan filtrat diperoleh. Solusi ini menanggapi Uji Identifikasi
Kromatografi Lapis Tipis h201i ketika dielusi dengan sistem pelarut yang terdiri dari
campuran kloroform, etil asetat, dan asam asetat glasial (75: 25: 1). Tes visualisasi
h466i Ordinary Impurities umum digunakan.
2. Uji B: Pemeriksaan menggunakan Kromatografi Cair: waktu retensi puncak utama
dalam kromatogram preparat Assay sesuai dengan yang ada di kromatogram preparat
Standar, diperoleh sesuai petunjuk dalam Assay.
Menurut British Pharmacopoeia 2002 [2] dan Indian Pharmacopoeia [6], asam
mefenamat dalam sediaan kapsul dan tablet diidentifikasi dengan pemeriksaan
menggunakan spektrofotometri serapan inframerah sebagai prosedur berikut. Ekstrak
sejumlah isi kapsul (atau tablet bubuk) yang mengandung 0,25 g asam mefenamat dengan
dua eter dalam jumlah 30 mL. Cuci ekstrak gabungan dengan air, menguap sampai kering
di bak air, dan mengeringkan residunya pada 105 C. Larutkan kuantitas yang cukup
dalam volume minimum etanol absolut, dan menguap hingga kering di bak air. Spektrum
serapan inframerah sesuai dengan spektrum referensi asam mefenamat.
Menurut Farmakope Republik Rakyat Tiongkok [7], metode pengujian
identifikasi asam mefenamat dalam sediaan kapsul dan tablet didasarkan pada
spektrofotometri serapan ringan. Kuantitas khusus dari bubuk kapsul (atau tablet bubuk),
setara dengan 0,25 g asam mefenamat, dilarutkan dalam campuran 10 mL asam
hidroklorat / metanol 0,1 mL / L (1:99), dikocok, dan disaring. Kemudian beberapa
jumlah filtrat diencerkan dengan larutan campuran di atas untuk menghasilkan larutan
yang memiliki konsentrasi sekitar 20 mg / mL. Spektrum serapan larutan menunjukkan
maksimum pada 279 nm dan 350 nm.

2.2 Metode analisis fisik

2.2.1 Kerugian karena pengeringan
Ketika sampel asam dikeringkan pada suhu 105 C selama 4 jam sesuai dengan
prosedur umum USP 26 h731i, atau dengan prosedur Farmakope Indonesia dan India, ia
kehilangan tidak lebih dari 1,0% dari beratnya [1, 4, 6]. Menurut Farmakope Inggris dan
Eropa, serta Farmakope Republik Rakyat Tiongkok, kehilangan tidak lebih dari 0,5%
ditentukan pada 1.000 g dengan pengeringan pada 100-105 C hingga berat konstan [2, 5,
7] .
2.2.2 Residu pada pengapian
Ketika diperiksa sesuai dengan prosedur umum USP h281i serta prosedur
Farmakope Indonesia dan Farmakope Republik Rakyat Tiongkok, abu yang diperoleh
untuk sampel asam tidak boleh melebihi 0,1% [1, 4, 7].
2.2.3 Abu tersulfasi
Ketika diperiksa sesuai dengan prosedur umum British Pharmacopoeia 2002
h2.4.14i, serta prosedur Farmakope Eropa dan India, abu sulfat yang diperoleh untuk
sampel asam tidak boleh melebihi 0,1%, ditentukan pada 1,0 g [2, 5, 6].
2.2.4 Penyerapan cahaya
Absorbansi larutan 0,002% b / v (dalam campuran 99 volume metanol dan 1
volume asam klorida 1 M) adalah 0,69-0,74 pada maksimum pertama 279 nm, dan 0,56-
0,60 pada maksimum kedua 360 nm [6].

2.3 Analisis pengotor

2.3.1 Logam berat
Kandungan logam berat asam mefenamat ditentukan dengan menggunakan
prosedur umum USP 26 h231i, serta prosedur Farmakope Indonesia [1, 4]. Batas logam
berat dalam zat tersebut adalah 0,002%.
2.3.2 Tembaga
 Kandungan tembaga asam mefenamat ditentukan menggunakan spektrometri
serapan atom, menurut prosedur umum British Pharmacopoeia 2002 h2.2.23, Metode Ii,
serta prosedur Farmakope Eropa [2,5]. Zat ini mungkin tidak mengandung lebih dari 10
ppm Cu.
Farmakope India menentukan kandungan tembaga menggunakan metode
intensitas warna, sesuai dengan prosedur berikut. Basahi 1 g zat dengan asam sulfat dan
nyalakan sampai semua karbon dihilangkan.

Tambahkan 10 mL asam sulfat 1 M ke residu dan diamkan selama 10 menit.

Transfer ke corong pisah menggunakan 20 mL air dan tambahkan 10 mL larutan yang
mengandung 20% b / v diammonium hidrogen sitrat dan 5% b / v disodium edetate.
Tambahkan 0,2 mL larutan timol biru dan netralkan dengan amonia 5 M. Tambahkan 10
mL larutan natrium diethyldithiocarbamate dan 15 mL karbon tetraklorida, kocok, dan
biarkan terpisah. Warna kuning dari lapisan karbon tetraklorida tidak lebih kuat daripada
yang dihasilkan dengan mengolah 2 mL larutan standar tembaga (10 ppm Cu) dengan
cara yang sama dimulai dari arah, '' Transfer ke corong pisah menggunakan 20 mL air,
seperti dijelaskan di atas '' (20 ppm).
Menurut Farmakope Republik Rakyat Tiongkok, lapisan karbon tetraklorida yang
dipisahkan di atas diukur dengan spektrofotometri serapan cahaya pada 435 nm.
Absorbansi larutan itu tidak lebih dari 0,35.
2.3.3 Kemurnian kromatografi
Kemurnian kromatografi menurut USP 26 ditentukan dengan menggunakan
Kromatografi Cair. Kandungan pengotor zat tidak lebih dari 0,1% untuk pengotor
individu, dan tidak lebih dari 0,5% untuk pengotor total.
2.3.4 Zat terkait
Menurut Farmakope Inggris 2002 dan Farmakope Eropa dan India, kandungan zat
terkait diperiksa dengan kromatografi lapis tipis menggunakan pelat TLC silika gel
GF254. Suatu larutan uji disiapkan dengan melarutkan 0,125 g zat yang akan diperiksa
dalam campuran 1 volume metanol dan 3 volume metilena klorida, dan pengenceran
hingga 5 mL dengan campuran pelarut yang sama. Larutan referensi (a) dibuat dengan
mengencerkan 1 mL larutan uji menjadi 50 mL dengan campuran 1 volume metanol dan
3 volume metilen klorida, kemudian mengencerkan 1 mL larutan menjadi 10 mL dengan
campuran pelarut yang sama.
Larutan referensi (b) dibuat dengan melarutkan 5 mg asam flufenamat dan 5 mg
standar referensi asam mefenamat dalam campuran 1 volume metanol dan 3 volume
metilen klorida, dan diencerkan sampai 10 mL dengan campuran pelarut yang sama.
Oleskan 20 mL setiap larutan ke pelat TLC silika gel GF254. Kembangkan lebih dari 15
cmmenggunakansekitar 90volumeoftoluene, 25volumeofdioksida, dan 1 volume asam
asetat glasial. Keringkan piring dalam aliran udara hangat, dan paparkan lempeng
tersebut ke uap yodium selama 5 menit, dan periksa dalam sinar ultraviolet (254 nm).
Setiap titik dalam kromatogram yang diperoleh dengan larutan uji, selain dari titik utama,
tidak lebih intens daripada titik dalam kromatogram yang diperoleh dengan larutan
referensi (a) (0,2%). Tes ini tidak valid kecuali kromatogram yang diperoleh dengan
solusi referensi (b) menunjukkan dua tempat yang terpisah dengan jelas.
Prosedur serupa disebutkan dalam Farmakope Republik Rakyat Tiongkok yang
menggunakan campuran 3 volume isobutanol dan 1 volume larutan amonia pekat sebagai
fase gerak
3.3.5 2,3-Dimethylaniline
Kandungan 2,3-dimetylaniline ditentukan oleh metode intensitas warna, menurut
British Pharmacopoeia 2002 dan European Pharmacopoeia. Larutan (a) dibuat dengan
melarutkan 0,250 g zat yang akan diperiksa dalam campuran yang terdiri dari 1 volume
metanol dan 3 volume metilen klorida, dan pengenceran hingga 10 mL dengan campuran
pelarut yang sama. Solusi ini digunakan untuk menyiapkan solusi pengujian. Larutan (b)
dibuat dengan melarutkan 50 mg 2,3-dimetilanilin dalam campuran 1 volume metanol
dan 3 volume metilen klorida, dan pengenceran hingga 100 mL dengan campuran pelarut
yang sama. Kemudian 1 mL larutan diencerkan hingga 100 mL dengan campuran pelarut
yang sama. Solusi ini digunakan untuk menyiapkan standar. Dengan menggunakan tiga
tabung datar, tempatkan 2 mL larutan (a) di tempat pertama, 1 mL larutan (b) di tempat
kedua, dan 1 mL campuran 1 volume metanol dan 3 volume metilen klorida di tempat
ketiga. Tabung kosong dibuat dengan membuat 2 mL campuran 1 volume metanol dan 3
volume metilen klorida. Untuk setiap tabung tambahkan 1 mL larutan 10 g / L yang baru
disiapkan dari dimethylamino-benzaldehyde dalam metanol dan 2 mL asam asetat glasial.
 Diamkan pada suhu kamar selama 10 menit. Intensitas warna kuning dari larutan uji
adalah antara yang kosong dan yang standar (100 ppm).
Menurut Farmakope India, 2,3-dimetilanilin diperiksa oleh TLC menggunakan pelat
silika gel G, dan campuran 90 volume toluena, 25 volume dioksan, dan 1 volume 18 M
amonia sebagai fase gerak. Oleskan 40 mL dari masing-masing dua larutan dalam campuran
3 volume kloroform dan 1 volume metanol yang mengandung (1) 2,5% b / v zat yang sedang
diperiksa secara terpisah ke piring, dan (2) 0,00025% b / v dari 2,3-dimethylaniline. Setelah
melepas piring, keringkan di udara hangat. Semprotkan pelat kering dengan asam sulfat
etanol (20%), panaskan di 105 C selama 30 menit, dan segera terpapar dengan uap nitrat
dalam ruang gelas tertutup selama 15 menit (uap nitrat dapat dihasilkan dengan
menambahkan asam sulfat encer secara tetes demi tetes ke larutan yang mengandung 10% b /
v natrium nitrit dan 3% w / v kalium iodida). Tempatkan pelat dalam aliran udara hangat
selama 15 menit, dan semprotkan dengan larutan 0,5% b / v N- (1naphthyl) ethylenediamine
dihydrochloride dalam etanol (95%). Jika perlu, biarkan mengering, dan ulangi
penyemprotan. Setiap titik yang sesuai dengan 2,3-dimetilanilin dalam kromatogram yang
diperoleh dengan larutan (1) tidak lebih kuat daripada titik di dalam kromatogram yang
diperoleh dengan larutan.

2.4 Metode pengujian

2.4.1 Metode titrasi
Menurut British Pharmacopoeia 2002, Farmakope Eropa dan India, dan Farmakope
Republik Rakyat Tiongkok, pengujian asam mefenamat dilakukan dengan metode titrasi.
Sekitar 0,200 g zat yang akan diuji dilarutkan dengan bantuan USG dalam 100 mL etanol
hangat yang sebelumnya telah dinetralkan ke titik akhir fenol merah. Sekitar 0,1 mL larutan
fenol merah ditambahkan dan dititrasi dengan 0,1 M natrium hidroksida. Setiap mililiter 0,1
M NaOH setara dengan 24,13 mg asam mefenamat.
2.4.2 Kromatografi cair kinerja tinggi
Menurut USP 26 dan Farmakope Indonesia, pengujian untuk asam mefenamat dilakukan
dengan metode kromatografi cair. Larutan buffer disiapkan sebagai larutan 50 mM dari
monobasa amonium fosfat, disesuaikan dengan 3 M amonium hidroksida hingga pH 5,0.
Sistem ini menggunakan campuran acetonitrile, larutan buffer, dan tetrahydrofuran (23: 20:
7) sebagai fase gerak. Liquid chromatograph dilengkapi dengan detektor 254 nm dan kolom
4,6 25 cm yang berisi kemasan L1. Laju aliran sekitar 1 mL / menit. Efisiensi kolom tidak
kurang dari 8200 pelat teoritis, faktor tailing untuk puncak analit tidak lebih dari 1,6, dan
standar deviasi relatif untuk injeksi ulangan tidak lebih dari 1,0%.
3. METODE ANALISA TITRIMETRIK
3.1. Metode titrasi non-berair (titrasi bebas air)
Sejumlah isi campuran 20 kapsul asam mefenamat yang mengandung 0,5 g
bahan, atau jumlah tablet bubuk(Setelah penimbangan dan bubuk 20 tablet asam
mefenamat) yang mengandung 0,5 g zat, dilarutkan dalam 100 mL etanol absolut hangat
yang sebelumnya dinetralkan ke titik akhir fenol merah. Solusi yang dihasilkan dari
setiap persiapan dititrasi dengan 0,1 M natrium hidroksida menggunakan larutan fenol
merah sebagai indikator. Setiap mL 0,1 M NAOH setara dengan 24,13 mg asam
mefenamat [2, 6, 7].
Berdasarkan fakta bahwa asam mefenamat bereaksi secara kuantitatif dengan N-
bromosuccinimide (NBS) dalam media asam, Hassib et al. [8] melaporkan penentuan
titrimetri asam mefenamat. Suatu larutan asam mefenamat dalam asam asetat (0,02% m /
V) disiapkan. Volume larutan ini yang mengandung 1,5-3,5 mg asam mefenamat
diizinkan bereaksi dengan 40 mL larutan 0,05 M NBS selama 10 menit dalam gelap
(suhu 25 + 2 ° C). Larutan kalium iodida (10 mL) ditambahkan, dan larutan dititrasi
dengan 0,01 N natrium tiosulfat ke titik akhir pati. Tekad kosong dilakukan. Untuk
penentuan asam mefenamat dalam kapsul, isi 20 kapsul Ponstan dicampur secara
menyeluruh dan bagian bubuk campuran yang ditimbang secara akurat (secara nominal
mengandung 25 mg asam mefenamat) diekstraksi dengan dietil eter (3 x 10 mL). Residu
yang tersisa setelah penguapan dietil eter dilarutkan dalam asam asetat, dan prosedur
dilanjutkan seperti yang dijelaskan untuk penentuan asam mefenamat
Issa et al. [9] menggunakan berbagai ion logam untuk penentuan volumetrik asam
mefenamat. Asam mefenamat adalah diendapkan dari larutan alkohol netralnya dengan
larutan standar baik perak nitrat, merkuri asetat, atau kalium aluminium sulfat .Dalam
prosedur argentimetri, residu Ag (I) dititrasi dengan standar NH4SCN. Dengan Hg (OAc)
2 atau kalium alum, logam residu ditentukan dengan menambahkan EDTA dan
melakukan titrasi balik kelebihan EDTA dengan Pb standar (NO :) menggunakan
 indikator xylenol orange. Metode yang diterapkan digunakan untuk rminasi dalam
substansi obat massal, dan dalam formulasinya.
3.2 Metode titrasi potensiometri
Melaporkan metode titrasi potensiometri dalam media tak berair untuk penentuan
beberapa agen antiinflamasi yang umum digunakan. Titrasi potensiometri langsung dari
asam mefe- namic, fenbufen, dan ibuprofen, dan titrasi potensiometri tidak langsung dari
natrium diklofenak, dilakukan dalam asetonitril menggunakan larutan
tetrabutylammonium hidroksida dalam 2-propanol / metanol sebagai titran. Titrasi
dilakukan pada 25 ° C di bawah atmosfer nitrogen. Metode ini memberikan pemulihan
yang sangat tepat, memiliki standar deviasi relatif tidak lebih dari 1,0% untuk semua
agen antiinflamasi yang diteliti.

4. METODE ANALISA ELEKTROKIMIA

4.1 Polarografi
Mengembangkan metode polarografi untuk penentuan asam mefenamat dalam
tablet, yang didasarkan pada nitrosasi cepat asam mefenamat dengan natrium nitrit dalam
asam asetat, dan pengukuran selanjutnya dari turunan N-nitroso asam mefenamat dengan
linear-sweep polarography. Metode ini sederhana, sensitif, dan spesifik, dan ditandai
dengan batas deteksi 2 x 10 mol / L.
4.2 Conductimetry
Aly dan Belal melaporkan penentuan konduksi dari beberapa obat antiinflamasi non-
steroid dalam bentuk sediaan mereka.
5. METODE ANALISA SPEKTROSKOPIK
5.1 Spektrofotometri
Atas dasar perubahan spektral yang diinduksi dengan mengubah media pelarut
dari HCI (0,01 M) menjadi NaOH (0,01 M), Hassan dan Shaaban mengembangkan
metode spektrofotometri koefisien selisih analisis untuk mefenamic asam menggunakan
urutan kuadrat enam poin dari polinomial ortogonal. Kisaran panjang gelombang optimal
adalah 326-386 nm, diukur pada interval 12 nm. Pemulihan rata-rata adalah 100,1 +
0,89% pada rentang konsentrasi 0,6-2,6 mg / 100 mL (p 0,05). Percobaan untuk
mengadaptasi teknik perbedaan panjang gelombang tunggal serta urutan kubik
polinomial ortogonal juga dilakukan; hasilnya dibahas berdasarkan statistik. Prosedur
yang dikembangkan telah diterapkan pada analisis beberapa persiapan pasar yang
dikumpulkan secara acak, dan hasilnya membuktikan kesesuaian metode untuk
penerapannya dalam analisis rutin.
Shinkuma et al. [14] melaporkan uji spektrofotometri dari berbagai kapsul asam
mefenamat komersial. Isi 20 kapsul masing-masing merek dengan hati-hati dikeluarkan
dan ditimbang dengan akurat. Setelah menemukan berat rata-rata dari isi kapsul, isinya
dicampur secara seragam dan digunakan sebagai sampel merek. Sejumlah bubuk ini,
setara dengan sekitar 150 mg asam mefenamat, dilarutkan dalam 200 mL larutan asam
klorida-metanol (0,84 mL asam klorida pekat / 1000 mL metanol). Setelah penyaringan
dan pengenceran yang sesuai, sampel diuji secara spektrofotometri pada 350 nm
menggunakan spektrofotometer sinar ganda. Hukum Beer-Lambert dipatuhi rentang
konsentrasi yang digunakan dalam pekerjaan ini.
Das et al menetapkan prosedur spektrofotometri untuk penentuan simultan asam
mefenamat dan parasetamol dalam campuran. Menggunakan 0,01 M asam hidroklorat
metanol sebagai pelarut, absorbansi campuran diukur pada 248, 279, dan 351 nm.
Konsentrasi masing-masing komponen dapat dihitung dengan menyelesaikan dua
persamaan menggunakan dua panjang gelombang, baik 248 dan 279 nm, atau 248 dan
351 nm. Jumlah asam mefenamat dan parasetamol dihitung menggunakan salah satu dari
dua set persamaan: 332.2A351
Set A: Massa (mg) asam mefenamat = : 332.2A351
113.04A248 - 84.4A351 Massa (mg) dari parasetamol
Set B: Massa (mg) mefenamat acid = 314.8A279 - 53.0A248
Massa (mg) parasetamol = 126.6A248 - 79.9A279
Metode ini diterapkan untuk penentuan obat-obatan ini dalam tablet komersial
dengan pemulihan dalam kisaran 99,1-101,7% (set A), dan 96,7- 100,75% (set B) untuk
asam mefenamat dan 95,9-99,5% (set A) dan 96,4-99,6% (set B) untuk parasetamol.
Gangwal dan Sharma [16] menjelaskan metode spektrofotometri simultan untuk
penentuan asam mefenamat dan parasetamol dalam bentuk sediaan gabungan mereka
berdasarkan maxima serapan UV asli dari asam mefenamat dan parasetamol dalam 0,02
M NAOH. Asam Mefenamat menunjukkan dua maksimum penyerapan pada 285 nm dan
333 nm, sementara parasetamol memiliki satu maksimum penyerapan pada 257 nm.
Dalam penelitian terpisah, kelompok yang sama juga melaporkan prosedur
spektrofotometri untuk asam mefenamat dan parasetamol dalam dua formulasi tablet
komponen. Metode ini didasarkan pada metode perhitungan dua-panjang gelombang.
Perbedaan absorbansi pada 217 nm dan 285 nm digunakan untuk penentuan asam
mefenamat, dan perbedaan absorbansi pada 257 nm dan 308,8 nm digunakan untuk
penentuan parasetamol. Hukum Beer dipatuhi oleh kedua obat dalam rentang konsentrasi
yang digunakan untuk analisis. Metode ini telah divalidasi secara statistik, dan
ditemukan memuaskan.
Parimoo et al menetapkan metode spektrofotometri UV untuk penentuan simultan
asam mefenamat dan parasetamol dalam preparat kombinasi. Penentuan dilakukan dalam
dua pelarut yang berbeda, yaitu metanol dan 0,1 N NAOH. Panjang gelombang
maksimum untuk asam mefenamat ditemukan pada 284 nm, dan 248 nm untuk
parasetamol. Panjang gelombang maksimum untuk asam mefenamat dalam NaOH
ditemukan pada 219 nm, dan 256 nm untuk parasetamol. Tidak ada gangguan dalam
estimasi analit. Metode spektrofotometri derivatif pertama yang langsung dan sederhana
telah dikembangkan oleh Toral et al. [19] untuk penentuan asam mefenamat dan
parasetamol dalam formulasi farmasi. Suatu larutan asam metanol hidroklorat digunakan
sebagai pelarut untuk mengekstraksi obat dari formulasi, dan kemudian sampel dievaluasi
secara langsung dengan spektrofotometri turunan. Penentuan simultan kedua obat dapat
dilakukan dengan menggunakan zero-crossing dan metode grafis, dan metode ini tidak
memerlukan persamaan simultan yang harus dipecahkan. Grafik kalibrasi linier dalam
kisaran dari 1,8 x 10-0 hingga 1,6 x 104 M asam mefenamat, dan dari 4,1 x 10- hingga
1,4 x 10 M parasetamol. Bahan-bahan yang biasa ditemukan dalam formulasi farmasi
komersial tidak mengganggu, sehingga metode yang diusulkan diterapkan pada
penentuan obat-obatan ini dalam tablet.
Damar et al. [20] mengembangkan empat metode baru untuk penentuan simultan
asam mefenamat dan parasetamol dalam formulasi kombinasinya. Dalam metode
turunan spektra rasio, sinyal analitik diukur pada panjang gelombang yang sesuai dengan
maxima atau minima untuk kedua obat dalam spektrum turunan pertama dari spektrum
rasio yang diperoleh dengan membagi spektrum standar salah satu dari dua obat dalam
 campuran 0,1 M NAOH dan metanol (1: 9). Dalam tiga metode kemometrik (kuadrat-
terkecil, kuadrat-terkecil, dan regresi komponen utama (PCR)}, pelaksanaan prosedur
dipilih secara acak dengan menggunakan komposisi campuran berbeda yang
mengandung dua obat dalam campuran 0,1 M NaOH dan metanol (1: 9). Data absorbansi
diperoleh dengan pengukuran pada 13 titik dalam kisaran panjang gelombang 235-355
nm. Kalibrasi chemometrik dikonstruksi dari data absorbansi dan pelatihan ditetapkan
untuk prediksi jumlah asam mefenamat dan paracetamol dalam sampel. Dalam metode
PCR, matriks kovarians yang sesuai dengan data absorbansi dihitung untuk vektor basis
dan matriks yang berisi koordinat baru. Kurva kalibrasi yang diperoleh digunakan untuk
menentukan obat dalam campurannya. Kisaran linearitas pada semua itu metode
ditemukan pada kisaran 2-10 ug / mL untuk asam mefenamat dan 4-20 ug / mL untuk
parasetamol. Pemulihan rata-rata ditemukan memuaskan (lebih dari 99%). Prosedur
tidak memerlukan langkah pemisahan apa pun, dan telah berhasil diterapkan pada
formulasi farmasi (tablet).
5.2 Colorimetry
Deveaux et al. melaporkan bahwa asam mefenamat, yang merupakan turunan N-
aril dari asam antranilat, dapat dikarakterisasi dengan dua reaksi warna. Reaksi warna,
negatif dengan turunan N-aril dari asam aminonicotinic, berhubungan dengan struktur
difenilamin. Untuk reaksi warna pertama, tambahkan ke tabung reaksi sekitar 0,5 g asam
oksalat dihidrat dan setidaknya 1 mg bahan uji. Tempatkan tabung ke dalam penangas
minyak pada 180-200 ° C selama 4-5 menit. Setelah pendinginan, larutkan residu dalam
10 mL etanol 95% untuk mendapatkan larutan biru yang stabil dan intens (maksimum
penyerapan pada 586-590 nm). Untuk menggunakan reaksi untuk formulasi kapsul,
ekstrak bahan aktif dengan aseton dan saring sebelum pengujian. Untuk reaksi warna
kedua, tambahkan asam mefenamat (100-800 ug) dalam 1 mL HOAC-H, SO4 (98: 2, v /
v), 5 mL HOAC-HCI (50:50, v / v) dan 1 mL levulosa berair 0,10% (berat / berat).
Panaskan campuran selama 25 menit pada 100 ° C, dan setelah pendinginan, ukur
absorbansi pada 597 nm.
Vinnikova [22, 23] menggambarkan penentuan spektrofotometri asam mefenamat
pada 490 nm setelah konversi ke kompleks berwarna dengan garam B Cepat Merah pada
pH 6,60 (buffer fosfat). Metode ini diterapkan untuk penentuan asam mefenamat bebas
dan terikat, dan terbukti bermanfaat untuk mempelajari pengikatan, penyerapan,
distribusi protein plasma darah, dan ekskresi asam mefenamat.
Sastry dan Rao [24] melaporkan penentuan asam mefenamat dan beberapa
OAINS dalam obat-obatan dengan metode spektrofotometri. Metode ini didasarkan pada
pembentukan kompleks biru dengan pereaksi Folin-Ciocalteu, dan pengukuran
absorbansi berikutnya pada 750-760 nm. Metode ini ditemukan sederhana, sensitif,
akurat, dan cepat, dengan pemulihan 98,0-102,3% dan standar deviasi relatif 1,04-1,66%.
Sastry et al. [25] juga menjelaskan metode spektrofotometri yang cukup sensitif
untuk penentuan asam mefenamat berdasarkan pembentukan kompleks ikatan ion
berwarna yang larut kloroform antara asam mefenamat dan metilen violet pada pH 7,6.
Absorbansi dari Lapisan kloroform yang terpisah diukur pada 540 nm. Absorptivitas
molar adalah 2,29 x 10 L / mol x cm, dan batas deteksi adalah 2- 16 μg asam mefenamat /
mL. Metode ini diterapkan dengan sukses pada penentuan asam mefenamat dalam
sampel curah dan sediaan farmasi, dengan perolehan 99,2-99,9%.
Laporan lain oleh kelompok Sastry menggambarkan penentuan asam mefenamat
berdasarkan reaksi asam mefenamat dengan pN, N-dimethylphenylenediamine di
hadapan S, Os atau Cr (VI), di mana produk berwarna yang intens memiliki daya serap
maksimum pada 740 nm dikembangkan. Absorptivitas molar adalah 4,15 x 10 * L / mol
cm. Reaksi ini cukup sensitif untuk memungkinkan penentuan 0,25-4,0 ug asam
mefenamat / mL, dan berhasil diterapkan pada penentuan asam mefenamat dalam sampel
curah dan dalam sediaan farmasi, dengan perolehan 99,4-99,8%.
Mahrous et al. menggambarkan penentuan kolorimetri asam mefenamat dengan
kalium ferricyanide dalam medium NaOH. Produk oranye diukur pada 464 nm, dan
absorptivitas molar adalah 1,9 x 10 L / mol cm. Metode ini diterapkan dengan sukses
pada penentuan asam mefenamie dalam kapsul. Garcia et al. melaporkan metode
spektrofotometri injeksi aliran untuk penentuan asam mefenamat dalam sampel massal
dan obat-obatan, juga didasarkan pada reaksi asam mefenamat dengan kalium
ferricyanide dalam media NaOH. Absorbansi produk yang diperoleh diukur pada 465
nm, dan grafik kalibrasi yang sesuai adalah linier pada kisaran 1,00-100 mg / L, dengan
batas deteksi 0,18 mg / L.
 Hassib et al. menentukan asam mefenamat dengan pembentukan kompleks besi
hidroksamat dan pengukuran absorbansi kompleks berwarna pada 530 nm. Metode ini
berlaku untuk jumlah asam mefenamat yang bervariasi dari 0,5 hingga 74,5 mg / 25 mL,
dan kapsul Ponstan "berhasil ditentukan menggunakan metode ini.
Khier et al. menentukan asam mefenamat setelah kompleksasi dengan tembaga
(II) amina sulfat. kompleks diekstraksi dengan kloroform dan diolah dengan larutan
diethyldithiocarbamate, di mana kompleks tembaga (II) lain (panjang gelombang
maksimum 430 nm) terbentuk. Hukum bir diikuti dengan kisaran konsentrasi asam
mefenamat 6-48 ug / mL. Metode ini diterapkan berhasil menentukan asam mefenamat
dalam sampel curah dan sediaan farmasi, dengan pemulihan 98,0-101,0%.
Abdel-Hay et al. menggambarkan penentuan asam mefenamat berdasarkan
reaksinya dalam medium etanol dengan 2-nitrofenilhidrazin dengan adanya
dicyclohexylcarbodiimide untuk menghasilkan asam hidrazin, yang menunjukkan warna
violet yang kuat (penyerapan maksimum sekitar 550 nm). Efek konsentrasi reagen (2-
nitrophenylhydrazine-HCI, pyridine, dan dicyclohexylcarbodiimide), suhu pemanasan,
dan waktu pemanasan dipelajari untuk mengoptimalkan kondisi reaksi. Metode ini
berhasil diterapkan pada penentuan asam mefenamat dalam bentuk murni dan sediaan,
dengan standar deviasi relatif kurang dari 2%.
Bojarowicz dan Zommer-Urbanska [32] melaporkan bahwa kompleks besi asam
mefenamat (stoikiometri 1: 1, 1: 2, 1: 3, dan 1: 4, tergantung pada jumlah ligan yang
digunakan) terbentuk pada 90% metanol berair pada pH 2,8. Semua menunjukkan
absorbansi pada 540-550 nm.
Metode fotometrik sederhana di wilayah yang terlihat dijelaskan oleh Babu et al.
[33] untuk penentuan asam mefenamat dalam bentuk sediaan farmasi. Metode ini
didasarkan pada reaksi obat dengan 4-aminophenazone dan kalium ferricyanide untuk
menghasilkan kromofor berwarna kemerahan-hijau, yang menunjukkan penyerapan
maksimum pada 590 nm. Kromofor stabil selama 40 menit, dan hukum Beer dipatuhi
pada kisaran konsentrasi 0,5-4 ug / mL.
Amin et al. [34] melaporkan penentuan asam mefenamat berdasarkan
pembentukan kompleks biru yang diperoleh dari reaksi metilen biru dengan asam
mefenamat. Metode ini diterapkan untuk analisis sediaan farmasi yang mengandung
 asam mefenamat, dan ternyata sederhana, dapat direproduksi. Kondisi nitrosasi anilin
dan difenilamin (parasetamol, fenacetin, asam mefenamat, dan natrium diklofenak),
dengan pembentukan selanjutnya produk berwarna dalam media alkali, dipelajari
prosedur penentuan kuantitatif analit dalam zat obat massal dan tablet dikembangkan.
5.3 Fluorimetri
Pengaruh pretreatment sampel dengan saponifikasi dan oksidasi alkali oleh K, Cr,
O, dalam asam asetat, dan pengaruh pelarut dan penambahan asam haloasetat (mis.,
Asam trikloroasetat yang diperlukan untuk fluoresensi), pada intensitas fluoresensi asam
mefenamat dan asam N-arylanthranilic lainnya dipelajari oleh Dell dan Kutschbach [36]
dengan mengacu pada penentuan fluorimetrie dalam urin. Hidrolisis diperlukan untuk
menentukan ester dan amida dari asam mefenamat. Pelarut polar mengurangi intensitas
fluoresensi, dan pelarut dengan konstanta dielektrik yang diabaikan (terutama CCl4, ChC
= CC12, dan decalin) diperlukan untuk membuat larutan fluoresen. Di antara asam
haloasetat yang diteliti, hanya asam dengan nilai pK kurang dari 1 yang cocok (mis.,
CI3CCO, H dan F3CCO, H). Substitusi Aryl mempengaruhi posisi fluoresensi
maksimum tetapi tidak intensitasnya. Asam antranilat ditemukan berfluoresensi dalam
CCl-Cl, CCO, H, sedangkan meta dan para analognya dan Ph, NH tidak.
Deveaux et al. [21] menjelaskan reaksi fluoresen dari asam mefenamat dengan
pembentukan asridon tersubstitusi setelah melarutkan asam mefenamat dalam H, SO4
pekat dan pemanasan selama 10 menit pada 100 ° C. Asridon menunjukkan fluoresensi
hijau yang intens ketika tereksitasi oleh cahaya putih, dan biru ketika tereksitasi oleh
sinar ultraviolet. Berbeda dengan metode Deveaux di atas, Mehta dan Schulman [37]
menggambarkan bahwa fluoresensi asli dari asam mefenamat, flufenamat dan
meklofamat lebih berguna untuk penentuan obat-obat ini dibandingkan dengan
fluoresensi akridon tersubstitusi turunan dan benzoksazin dari obat ini oleh pengobatan
dengan H2SO4 dan HCHO, masing-masing. Penentuan asam mefenamat pada tingkat
jejak oleh spektrometri fluoresensi juga dilaporkan oleh Miller et al. [38].
Huang dan Xu [39] mengembangkan metode fluorimetri untuk analisis beberapa
obat asam dengan menggunakan pyronine untuk membentuk kompleks pewarna obat.
Dalam Na, larutan HPO4, asam mefenamat bereaksi dengan pyronine untuk membentuk
kompleks yang larut dalam CHC13. Pyronine berfluoresensi kuat pada panjang
gelombang eksitasi 542 nm, dan memancarkan pada panjang gelombang emisi 566 nm.
Intensitas pironin dalam kompleks sebanding dengan asam mefenamat dalam kompleks.
Sensitivitas metode ditemukan 10-50 ng / mL, dan pemulihan serta presisi yang baik
diperoleh. Berdasarkan pembentukan kompleks senyawa dengan Al (III) dalam media
etanol, metode fluorimetri injeksi sensitif dan cepat diusulkan oleh Albero et al. [40]
untuk penentuan asam mefenamat. Grafik kalibrasi yang dihasilkan dari pengukuran
fluoresensi setelah eksitasi kompleks dengan asam mefenamat pada 355 nm (panjang
gelombang emisi 454 nm) adalah linear pada kisaran 0,30-16,1 ug / mL. Metode ini telah
diterapkan pada penentuan zat dalam sediaan farmasi.
Ioannou et al. melaporkan penggunaan fluoresensi peka terbium untuk
mengembangkan metode fluorimetri yang sensitif dan sederhana untuk penentuan
turunan asam antranilat, asam mefenamat. Metode ini memanfaatkan transfer energi
radiasi dari anthranilate ke Tb (III) dalam larutan metanol alkali. Kondisi optimal untuk
pembentukan kompleks anthranilate-Tb (III) diselidiki. Di bawah kondisi yang
dioptimalkan, batas deteksi adalah 1,4 x 10 mol / L, dan rentang aplikasi adalah 2,5 x 10-
8 hingga 5,0 x 10 mol / L. Metode ini berhasil diterapkan pada penentuan asam
mefenamat dalam serum setelah ekstraksi sampel dengan etil asetat, penguapan lapisan
organik di bawah aliran nitrogen pada suhu 40 ° C, dan rekonstitusi residu dengan larutan
terbium metanol metalik sebelum digunakan - pengukuran mental. Pemulihan rata-rata
dari sampel serum yang dibubuhi asam mefenamat (3,0 x 10-, 9,0 x 10-, 3,0 x 10-5 mol /
L) adalah 101 5%. Presisi yang berjalan dalam (RSD) untuk metode untuk dua sampel
serum bervariasi dari 2 hingga 8%, dan presisi harian untuk dua tingkat konsentrasi
bervariasi dari 2 hingga 13%. Penggunaan spektrometri fluoresensi sinkron turunan
kedua dilaporkan oleh Ruiz et al. untuk mengembangkan metode fluorimetri sederhana,
cepat dan sensitif untuk penentuan campuran biner dari obat antiinflamasi nonsteroid
flufenamic (FFA), meclofenamic (MCFA) dan asam mefenamic (MFA) dalam serum dan
dalam formulasi farmasi. Metode ini didasarkan pada fluoresensi intrinsik dari senyawa-
senyawa ini dalam kloroform. Panjang gelombang diferensial 105 nm digunakan untuk
resolusi campuran FFA-MFA dan MFA-MCFA, sedangkan campuran FFA-MCFA
ditentukan pada panjang gelombang diferensial 40 nm. Sampel serum diperlakukan
 dengan asam trikloroasetat terhadap protein, dan analit diekstraksi dalam penentuan
kloroform sebelumnya. Sediaan farmasi dianalisis tanpa langkah pemisahan sebelumnya.
Capitán-Vallvey et al. [43] telah mengembangkan metode spektrofluorimetri
untuk penentuan kuantitatif asam flufenamat, mefenamat dan meklofamat dalam
campuran dengan merekam spektrum emisi fluoresensi antara 370 dan 550 nm dengan
panjang gelombang eksitasi 352 nm. Spektrum emisi-eksitasi dari senyawa-senyawa ini
sangat tumpang tindih yang tidak memungkinkan penentuan langsung tanpa pemisahan
sebelumnya. Metode yang diusulkan berlaku kuadrat terkecil parsial kalibrasi multivariat
untuk resolusi campuran ini menggunakan satu set panjang gelombang yang sebelumnya
dipilih oleh jaringan saraf tiruan Kohonen. Grafik kalibrasi linier yang digunakan untuk
membangun matriks kalibrasi dipilih dalam kisaran 0,25 hingga 1,00 μg / mL untuk asam
flufenamat dan meklofamat, dan dari 1,00 hingga 4,00 pug / mL untuk asam mefenamat.
Prosedur validasi silang digunakan untuk memilih sejumlah faktor. Model kalibrasi yang
dipilih telah diterapkan pada penentuan senyawa-senyawa ini dalam campuran sintetis
dan formulasi farmasi. Sabry [44] melaporkan bahwa sifat fluoresensi asam flufenamat
dan mefenamat diperoleh dalam pelarut organik berair dan biner dengan atau tanpa a- dan
B-siklodekstrin (CD). Perilaku spektrum senyawa model dalam sistem misel berair dari
surfaktan ionik dan non-ionik diselidiki. Dalam larutan asam berair, analit yang
diselidiki lebih baik dimasukkan dalam CD (asam flufenamat) dan misel (asam
flufenamat dan mefenamat). Emisi luminescence dari analit ditemukan sangat
ditingkatkan oleh surfaktan. Fluoresensi sistem surfaktan analit padam dengan
meningkatnya jumlah pelarut organik. Perubahan konstanta disosiasi asam flufenamat
dan mefenamat dalam larutan surfaktan anionik dan nonionik (masing-masing natrium
dodesil sulfat dan Triton X-100) dipelajari secara spektrofluorimetri. Peningkatan
intensitas fluoresensi dalam media CD relatif terhadap larutan encer berkisar antara 1,3
hingga 1,6. Metode spektrofluorimetri yang ditingkatkan dengan micellar yang sensitif
untuk penentuan asam flufenamat dan mefenamat dikembangkan, dengan rentang
aplikasi hingga ng / mL. Rentang dinamis linier dan standar deviasi relatif dilaporkan.
Metode yang diterapkan memuaskan untuk penentuan kedua senyawa dalam sediaan
farmasi dengan pemulihan 98-101%.
5.4 chemiluminescent
 Aly et al telah menyelidiki metode chemiluminescent baru menggunakan injeksi
aliran untuk penentuan cepat dan sensitif asam flufenamat dan mefenamat. Metode ini
didasarkan pada reaksi chemiluminescence tris (2,2'-bipyridyl) ruthenium (III). Ru
(bipy); + dihasilkan secara kimia dengan mencampur dua aliran yang mengandung
larutan tris (2,2'-bipyridyl) ruthenium (II) dan acidic cerium (IV) sulfate. Setelah
memilih parameter operasi terbaik, grafik kalibrasi diperoleh pada rentang konsentrasi
0,07-6,0 dan 0,05-6,0 ug / mL untuk masing-masing asam flufenamat dan mefenamat.
Batas deteksi (s / n = 3) adalah asam flufenamat 3,6 x 10-9 M dan asam mefenamat 2,1 x
10-M. Metodenya adalah berhasil diterapkan pada penentuan senyawa ini formulasi
farmasi dan cairan biologis.
5.5 Spektrometri resonansi magnetik protonnya
Mansour et al. mengembangkan metode resonansi magnetik magnetik sederhana dan
efisien cepat untuk penentuan asam mefenamat dalam kapsul Ponstan. Metode ini didasarkan
pada perbandingan antara jumlah integral dari dua singlet metil asam mefenamie dan integral
dari singlet tajam p-metoksibenzilidenemalononitril (standar internal). Metode ini memberikan
hasil yang akurat dan dapat direproduksi.
5.6 Spektrometri massa
De Kanel et al. menggambarkan metode untuk analisis simultan dari 14 obat
antiinflamasi nonsteroid dalam serum manusia menggunakan spektroskopi ionisasi elektrospray
negatif-tandem massa. Setelah penambahan standar internal dan presipitasi protein
menggunakan asetonitril, sampel dipindahkan ke botol autosampler untuk analisis langsung
tanpa kromatografi. Injeksi gelembung udara dengan sampel dan metode pemantauan reaksi
berganda menggunakan argon yang diinduksi tabrakan analit (MH) ion memungkinkan integrasi
area puncak ion produk untuk menghasilkan data kuantitatif yang dapat direproduksi melalui
rentang konsentrasi yang diharapkan dalam serum selama penggunaan rutin obat-obatan ini.
Metode ini memungkinkan analisis 30 sampel per jam. Dua ratus lima puluh analisis berturut-
turut tidak mempengaruhi sensitivitas instrumen.
5.7 Spektrometri serapan atom
Salem et al. melaporkan metode sederhana dan akurat untuk penentuan kuantitatif
flufenamat, mefenamat, dan traneksamat yang memanfaatkan reaksi presipitasi dengan kobal,
kadmium, dan mangan. Obat-obatan asam diendapkan dari larutan alkohol netral dengan larutan
standar kobalt sulfat, kadmium nitrat atau mangan klorida diikuti dengan penentuan langsung ion
dalam endapan atau penentuan tidak langsung ion dalam filtrat dengan spektroskopi serapan
atom (AAS). Kondisi optimal untuk presipitasi dipelajari dengan cermat. Rasio molar reaktan
dipastikan. Analisis statistik dari hasil dibandingkan dengan hasil dari metode resmi
mengungkapkan ketepatan dan akurasi yang sama. Prosedur yang disarankan diterapkan untuk
menentukan flufenamat, mefenamat dan asam traneksamat dalam sediaan farmasi juga dan
terbukti valid. Metode serupa menggunakan nikel (II) bukan kobalt, kadmium dan mangan juga
diselidiki oleh Salem et al. [49] untuk penentuan kuantitatif asam flufenamat, mefenamat dan
traneksamat, furoseide, natrium diklofenak dan asam throfrofenat. Analisis statistik dari hasil
dibandingkan dengan tes yang digunakan dalam pharmacopoeias dan metode Amax
mengungkapkan presisi dan akurasi yang sama. Selanjutnya, tes juga diterapkan untuk
penentuan obat-obatan ini dalam sediaan farmasi. Alpdogan dan Sungur [50] mengembangkan
metode spektroskopi serapan atom tidak langsung untuk penentuan asam mefenamat dan
flufenamat, dan natrium diklofenak, berdasarkan kompleksasi dengan tembaga (II) amina sulfat.
Kompleks diekstraksi menjadi kloroform, dan konsentrasi zat ditentukan secara tidak langsung
dengan pengukuran tembaga AAS setelah re-ekstraksi menjadi larutan asam nitrat 0,3 N.
Metode yang dikembangkan diterapkan pada pengujian zat dalam formulasi tablet komersial.
Hasilnya secara statistik dibandingkan dengan yang diperoleh dengan metode HPLC dengan uji t
dan F pada tingkat kepercayaan 95%. Nilai Calculatedt dan F keduanya lebih rendah dari nilai
tabel. Khalil et al. [51] menggambarkan penentuan mikroquantitatif asam mefenamat
berdasarkan reaksi asam mefenamat dengan larutan perak nitrat dalam media alkohol netral.
Curah hujan yang terbentuk ditentukan secara kuantitatif langsung atau tidak langsung melalui
kandungan perak dari presipitasi yang terbentuk atau sisa ion perak yang tidak bereaksi dalam
filtrat dengan spektrofotometri serapan atom. Hasil yang diperoleh dalam prosedur baik dalam
bentuk murni atau dalam formulasi farmasi mereka adalah akurat dan tepat. Hubungan
stoikiometrik reaksi dipelajari menggunakan metode variasi kontinyu Ayub, dan ditemukan
menjadi (1: 1) obat: Ag + untuk asam mefenamat.
6. METODE ANALISIS KROMATOGRAFI
romatografi lapis tipis Deteksi asam mefenamat dan metabolitnya {N (2-metil-3- karboksifenil)
asam antranilat dan N- (2-metil-3-hidroksimetil-fenil) asam anthranilic } dalam urin dengan
kromatografi lapis tipis dilaporkan oleh Demetriou dan Osborne [52]. Pelat dibuat dari bubur
silika gel G (30 g) dalam air (65 mL). Lapisan dengan ketebalan 250 u disiapkan dan
dikeringkan pada 110 ° C selama 30 menit. Untuk prosedur ekstraksi, urin (10 mL) dirawat
dengan natrium hidroksida (10 M, 1 μL) selama 20 menit pada suhu kamar. Sampel kemudian
diasamkan dengan asam klorida pekat, dan diekstraksi dengan petroleum eter (p. 40-60 ° C; 10
mL) selama 10 menit pada pengocok mekanis. Lapisan organik dipisahkan, dan ditempatkan
dalam tabung kerucut 10 mL, kemudian pelarut dihilangkan. Ekstrak dilarutkan dengan metanol
(100 μL) dan larutan alikuot 30- μL digunakan untuk bercak, bersama dengan 10-uL alikuot
larutan referensi (asam mefenamat dalam metanol, 1 ug / 1 μL). Sistem pelarut yang digunakan
untuk pengembangan kromatogram adalah asam toluena-asetat (9: 1) yang memberikan nilai R
0,75 untuk asam mefenamat. Sodium nitrit (1% dalam asam sulfat 1%) digunakan sebagai
reagen deteksi untuk memberikan warna hijau asam mefenamat.
By et al. [53] menggambarkan identifikasi dan penentuan kromatografi dari beberapa bahan obat
yang tidak dinyatakan dari pengobatan tradisional oriental. Pemeriksaan kualitatif indometasin,
asam meefinik, diazepam dan hidroklorotiazid dilakukan pada silika gel menggunakan sistem
pelarut etil asetat (sistem A) dan etil asetat-metanol (4: 1, v / v) (sistem B). Bintik-bintik
diidentifikasi menggunakan sinar UV gelombang pendek untuk menghasilkan R, nilai 0,42 dan
0,50 untuk asam mefenamat dalam sistem pelarut A dan B, masing-masing. Pemanfaatan
metode TLC dilaporkan oleh Dharmananda [54] untuk penyelidikan produk ramuan Cina impor
yang dicampur dengan obat-obatan.
Argekar dan Sawant [55] mengembangkan penentuan simultan parasetamol dan asam
mefenamat dalam tablet dengan metode kromatografi lapis tipis (HPTLC) kinerja tinggi.
Prosedur ini dilakukan pada silika gel menggunakan toluene-aseton-metanol (8: 1: 1) sebagai
sistem pelarut. Deteksi dan kuantifikasi zat diuji dengan densitometri pada 263 nm. Kisaran
linearitas adalah 120-360 ng / μL; dan RSD antara 0,41 dan 0,78%. Batas deteksi dan batas
kuantifikasi masing-masing adalah 1,80 dan 5,5 ng / uL. Pemulihan berada di kisaran 95,50-
103,60%.

6.2 Kromatografi kolom

Adams [56] melaporkan kromatografi partisi ion pasangan asam mefenamat dengan
kation tetraalkilammonium sebagai upaya untuk mengembangkan metode analitik dari data
ekstraksi. Pasangan ion mefenamic asam dengan Me4NOH, Et, NOH, Pr, NOH dan BU4NOH
dibentuk dan diekstraksi dari larutan berair dengan CHCI3 atau campuran CHCI; dan isooctane.
Konstanta ekstraksi pasangan ion (KOA) meningkat satu faktor - 500.000 dari metil ke butil
homolog, dan plot KoA VS. Angka C linear. Rasio distribusi (D) dari pasangan ion antara fase
air dan organik dipengaruhi oleh polaritas pelarut, yang bervariasi dengan menambahkan hingga
60% isooctane ke CHC13. Kromatografi membutuhkan nilai D <0,01 untuk retensi dan> 0,06
untuk elusi. Untuk kromatografi, Celite 545 dicampur dengan PraNOH (reagen berpasangan ion
terbaik), ditempatkan dalam kolom, ditutup dengan larutan alkali ion-berpasangan dengan
Pr4NOH berlebih dan mengandung lebih banyak Celite 545. Kolom dicuci dengan 33% CHCI,
dalam isooctane untuk mengurangi rasio distribusi menjadi <0,01, dan CHCI3 murni digunakan
untuk mengelusi pasangan ion, yang dikumpulkan dalam HCI-MEOH untuk memutus pasangan
ion. Asam mefenamat kemudian mendeteksi spektrometri dalam CHCI3 pada 353 nm.
Pemulihan rata-rata dari solusi standar adalah 99,01%, dan hasil dengan solusi kapsul dapat
direproduksi.

6.3 Kromatografi gas

Bland et al. melaporkan penentuan asam mefenamat dalam darah dan urin kuda. Pada
2,0 mL cairan biologis ditambahkan 1,0 mL larutan berair KH jenuh, PO4 dan 2,0 mL CH, Cl ,.
Obat diekstraksi menjadi CH, Cl, fase, dipindahkan ke tabung biakan bersih, dan diuapkan
sampai kering di bawah aliran nitrogen. Ke residu ditambahkan 50 μL pentafluoropropionik
anhidrida dan 50 μL etil asetat jenuh dengan ZnCl, yang bertindak sebagai asam Lewis. Tabung
ditutup dan ditempatkan dalam penangas air pada 60 ° C selama 5 menit untuk menyelesaikan
derivatisasi. Setelah derivatisasi, 1,0 mL sikloheksana ditambahkan ke residu dan pelarut dicuci
dengan kuat dengan 8,0 mL larutan natrium tetraborat jenuh. Setelah sentrifugasi, turunan dalam
fase sikloheksana kemudian dianalisis menggunakan kromatografi gas-cair yang merupakan
Beckman GC-5, dilengkapi dengan detektor penangkap elektron nonradioaktif Beckman. Kolom
adalah 4 kaki, 2 mm i.d. kolom kaca dikemas dengan 3% OV-1 pada 80/100 mesh Chromosorb
GHP yang disediakan oleh Supelco, Inc. Instrumen ini dioperasikan secara isotermal pada suhu
oven 190 ° C. Sampel disuntikkan ke kolom, pada suhu masuk 215 ° C. Temperatur
kompartemen detektor adalah 290 ° C. Aliran gas pembawa (He) adalah 40 mL / menit.
Turunan obat dielusi dalam 3 menit 43 detik dalam kondisi ini. Sedikitnya 50 ng / mL asam
mefenamat dapat diukur dengan prosedur ini. [16.47, 16/2/2020] +62 896-6371-9851: Penentuan
kromatografi gas-cair asam mefenamat dalam serum manusia ditetapkan oleh Dusci dan Hackett
[58]. Sampel serum 2 mL diasamkan dengan 0,5 mL asam klorida 1 M dan diekstraksi dengan
15 mL CH2Cl2 dengan pengocokan selama 5 menit dalam tabung gelas. Tabung disentrifugasi
dan fase berair aspirasi dari permukaan. Lapisan organik disaring melalui kertas saring
Whatman No. 54 yang dicuci dengan pelarut. Ke 12 mL alikuot pelarut ditambahkan 50 μL
larutan mg / L dari 5- (p-tolyl) -5-fenilhidantoin dalam etanol sebagai standar internal, dan
campuran diambil sampai kering pada 50 ° C di bawah aliran nitrogen. Ke residu ditambahkan
80 μL N, N-dimethylacetamide, 10 uL tetramethylammonium hydroxide dan 20 μL 1-
iodobutane. Isi tabung dicampur setelah setiap penambahan dan dibiarkan selama 5 menit.
Sampel disentrifugasi dan alikuot 2,0 μL supernatan disuntikkan ke kromatografi gas Pye GCD
yang dilengkapi dengan detektor ionisasi nyala. Kolom adalah 1,5 mx 4 mm i.d. tabung gelas
dikemas dengan 3% SP 2250 DA pada Supelcoport 100-200 mesh. Pengaturan instrumen adalah
sebagai berikut; suhu injeksi 285 ° C; suhu detektor 290 ° C; laju aliran gas pembawa, 60 mL /
menit; laju aliran hidrogen, 240 mL / mnt. Dalam kondisi ini, waktu retensi asam mefenamat
dan standar internal masing-masing 1,8 menit dan 4,1 menit. Rasio ketinggian puncak asam
mefenamat dengan standar internal adalah linier pada kisaran 0,05-0,8 ug obat.
Singh et al. [59] menjelaskan metode kromatografi gas untuk analisis simultan flunixin,
naproxen, asam etakrilat, indometrom, fenilbutazon, asam mefenamie dan asam tiosalisilat dalam
plasma kuda dan urin. Untuk persiapan sampel dari plasma, sampel plasma 1-mL yang
mengandung 0,1, 0,5, 1,0, 2, 2,5, 5,0 dan 10 ug dari berbagai obat dicampur dengan 1 mL asam
hidroklorat 0,1 M dan 10 mL diklorometana. Campuran di-rackack selama 10 menit dan
disentrifugasi (1500 g) selama 15 menit, dan fase berair disedot dari permukaan. Lapisan
organik dikumpulkan ke dalam tabung lain dan dikeringkan pada suhu 45 ° C di bawah aliran
nitrogen. Residu kering diderivatisasi dengan pencampuran dengan 10 μL bis (trimethylsilyl)
trifluoroacetamide (BSTFA) sebelum analisis. Asam mefenamat dan indometasin digunakan
sebagai standar internal untuk analisis kuantitatif. Untuk persiapan sampel dari urin, 1-2 mL urin
(kontrol atau dihidrolisis NaOH) diasamkan sampai pH 3 dengan buffer fosfat jenuh dan
diekstraksi dengan 10 mL diklorometana. Lapisan diklorometana dipisahkan dengan sentrifugasi
pada 10.000 g, dan dikeringkan pada 45 ° C di bawah nitrogen. Residu kering diderivatisasi
dengan menambahkan 10 μL BSTFA ke sampel, dan 1 μL residu derivatisasi diinjeksikan ke
dalam sistem GC-MS.[16.48, 16/2/2020] +62 896-6371-9851: Analisis GC-MS dilakukan
dengan menggunakan kolom kapiler Econocap, SE-54 (30 mx 0,25 mm i.d.). Temperatur oven
diprogram pada 20 ° C / menit dari suhu awal 150 ° C hingga suhu akhir 280 ° C; jangka waktu
adalah 15 menit. Suhu injektor adalah 250 ° C dan mode injeksi tidak terbagi. Untuk
pemantauan ion terpilih (SIM), tiga ion dipilih untuk setiap obat. Pemulihan setiap obat dari
plasma adalah ca. 95%, dan pengujian menunjukkan ketepatan yang baik. Keakuratan uji
terbaik pada tingkat 10,0 ug / mL.
Giachetti et al. [60] membandingkan kinerja detektor selektif massa (MSD), detektor
penangkapan elektron (ECD) dan detektor nitrogen-fosfor (NPD) sistem kromatografi gas dalam
pengujian enam obat antiinflamasi non-steroid dalam sampel plasma. Sebagai tes praktis, enam
NSAIDA (asam mefenamat, flufenamat, meklofamat dan niflumik, diklofenak, dan klonixin)
yang ditambahkan ke sampel plasma terdeteksi dan dikuantifikasi. Analisis dilakukan setelah
ekstraksi pelarut dari media asam dan metilasi berikutnya. Linearitas respons diuji untuk semua
sistem deteksi dalam kisaran 1-25 ng / mL. Ketepatan dan akurasi terdeteksi pada 1, 5 dan 10 ng
/ mL. Tingkat kuantitatif minimum untuk enam obat adalah sekitar 1 ng / mL dengan masing-
masing dari tiga sistem deteksi.
Gonzáles dkk. [61] menjelaskan prosedur spektrometri massa kromatografi gas (GC-
MS) untuk mendeteksi tujuh belas obat antiinflamasi nonsteroid (termasuk asam mefenamat)
dalam plasma kuda dan sampel urin. Ekstraksi senyawa dari matriks biologis dilakukan pada pH
asam (2-3) dengan dietil eter. Ekstrak Ethereal dicuci dengan larutan natrium hidrogencarbonat
(urin) jenuh atau diolah dengan campuran padat natrium karbonat dan natrium hidrogencarbonat
(plasma). Ekstrak ethereal dikeringkan dan diderivatisasi dengan inkubasi pada suhu 60 ° C
dengan metil iodida dalam aseton dengan adanya kalium karbonat padat. Turunan mono atau
bismethyl dari NSAID diperoleh. Setelah studi kinetika derivatisasi, 90 menit adalah waktu
inkubasi yang akhirnya dipilih untuk tujuan skrining untuk metilasi yang memadai dari semua
senyawa yang diteliti. Untuk analisis konfirmasi individual, waktu inkubasi yang lebih pendek
dapat digunakan. Analisis kromatografi turunan dilakukan dengan kromatografi gas Model
5890A Seri II yang digabungkan dengan detektor selektif dampak massa Model 5970 elektron
melalui antarmuka kapiler langsung (Hewlett-Packard). Kolom itu berukuran 25 mx 0,2 mm i.d.
menyatu silika silang metilsilicone dengan ketebalan film 0,11-um (Hewlett-Packard). Helium
digunakan sebagai gas pembawa pada 0,65 mL / menit. port injeksi dan suhu detektor adalah 280
° C. Suhu oven ditingkatkan dari 100 menjadi 200 ° C pada 25 ° C / menit dan kemudian ke 300
° C pada 15 ° C / menit, dengan waktu penahanan terakhir 2,3 menit; total jangka waktu adalah
13 menit. Volume injeksi adalah 2 uL dan rasio pemisahan 10: 1 digunakan. Secara umum,
pemulihan ekstraksi berkisar antara 23,3 hingga 100% dalam plasma dan dari 37,5 hingga 83,8%
dalam sampel urin. Batas deteksi dari kurang dari 5 hingga 25 ng / mL diperoleh untuk sampel
plasma dan urin menggunakan pemantauan ion terpilih. Prosedur ini diterapkan pada
penyaringan dan konfirmasi NSAID dalam kontrol doping rutin sampel kuda.
Maurer et al. [62] mengembangkan prosedur skrining kromatografi gas-spektrometri
massa (GC-MS) untuk deteksi NSAID dalam urin sebagai bagian dari prosedur analisis
toksikologis sistematis untuk obat-obatan asam dan racun setelah ekstraktif met kapiler GC dan
diidentifikasi oleh MS terkomputerisasi secara penuh. mode -scan. Menggunakan kromatografi
massa dengan ion m / z 119, 135, 139, 152, 165, 229, 266, 272, dan 326, kemungkinan adanya
NSAID dan metabolitnya dapat diindikasikan. Identitas sinyal positif dalam kromatogram massa
seperti itu dikonfirmasi oleh perbandingan puncak yang mendasari spektrum massa penuh
dengan spektrum referensi yang direkam selama penelitian ini. Metode ini memungkinkan
pendeteksian konsentrasi terapi acemetacin, acetaminophen (paracetamol), asam asetilsalisilat,
diklofenak, diflunisal, etodolac, fenbufen, fenoprofen, asam flufenamat, flurbiprofen, ibuprofen,
asam lakamamin, asam siku asam, mofebutazon, naproksen, asam niflumat, fenilbutazon,
suxibuzone, asam setiaprofenat, asam tolfenamat, dan tolmetin dalam sampel urin. Pemulihan
keseluruhan NSAIDS yang berbeda berkisar antara 50 dan 80% dengan koefisien variasi kurang
dari 15% (n = 5), dan batas deteksi NSAID yang berbeda adalah antara 10 dan 50 ng / mL (s / n
= 3) dalam mode pindai penuh. Metilasi ekstraktif juga telah digunakan untuk analisis plasma.
di.
Senyawa dipisahkan oleh Takeda et al. [63] menggambarkan analisis sistematis obat-
obatan asam, netral dan basa dalam plasma kuda dengan kombinasi ekstraksi fase padat, partisi
nonaqueous dan spektrometri massa kromatografi gas. Metode persiapan sampel dimulai dengan
menggunakan kolom 6 mL yang dikemas dengan 1 g Bond Elut Certify untuk ekstraksi 4 mL
plasma kuda. Fraksinasi dilakukan dengan 6 mL CHCI, -Me, CO (8: 2) dan 5 mL TEA-MEOH
1% sesuai dengan propertinya. Pembersihan sederhana dan efektif berdasarkan partisi
nonaqueous diadopsi untuk menghilangkan kontaminan yang dielusi bersama dalam fraksi asam
dan basa. Dua macam 1- (N, N-diisopropylamino) -n-alkana disuntikkan bersama sampel ke
dalam sistem GC-MS untuk kaleulasi indeks retensi. Total pemulihan 107 obat (termasuk asam
mefenamat) diperiksa. Prosedur ini mencapai pemulihan yang cukup dan ekstrak bersih untuk
GC-MS. Metode ini mampu mendeteksi kadar obat dalam plasma kuda.
Lo et al. [64] melaporkan penyaringan obat asam dan netral dalam darah dengan
kuantisasi menggunakan kromatografi gas-detektor nyala api kapiler. Darah yang sebelumnya
diasamkan dengan larutan amonium klorida jenuh air diekstraksi dengan etil asetat. Ekstrak
kering menjadi sasaran partisi asetonitril-heksana. Bagian asetonitril dianalisis untuk keberadaan
obat asam dan netral oleh GC-FID (25 m sempit x 0,25 mm i. HP-5 kolom dengan ketebalan film
0,33 um). Protokol ditemukan cocok untuk toksikologi klinis (termasuk toksikologi darurat) dan
toksikologi postmortem. Kuantisasi difasilitasi dengan memasukkan standar darah kalibrasi
dalam setiap kelompok uji. Lima obat yang paling sering ditemui dalam spesimen darah klinis
(1150 kasus) adalah: parasetamol (47,4% dari kasus), chlormezanone (6,6%), theophilin
(1,74%), naproxen (1,65%) dan asam mefenamat (1,56%).
Arrizabala ga et al. [65] melaporkan penentuan komposisi obat palsu dengan metode
kromatografi gabungan (GC-MS, GC-FTIR, HPLC-DAD). Pil Cina, Chuifong Toukuwan,
sebagai obat herbal tradisional yang diklaim memiliki komposisi alami, dipelajari dengan metode
yang tepat ini. Analisis ekstrak kasar dan turunan pil menunjukkan bahwa mereka terdiri dari
campuran obat sintetis (asam mefenamat, indometasin, hidroklorotiazid, dan diazepam) dan
beberapa senyawa herbal. Prosedur serupa juga dilaporkan oleh Fraser et al. [66] untuk
penentuan obat resep yang tidak diumumkan dalam ekstrak metanol-eter dari produk Black
Pearl, sebuah persiapan herbal Cina umumnya dipasarkan untuk konsumen Amerika yang
menderita radang sendi dan sakit punggung. Mereka mendeteksi obat resep berikut: diazepam,
diklofenak, hidroklorotiazid, indometasin dan asam mefenamat.
6.4 Kromatografi cair kinerja tinggi
kinerja tinggi Seperti yang disebutkan di atas, uji kompendial menggunakan kromatografi cair
kinerja tinggi dijelaskan oleh USP 26 dan Farmakope Indonesia Pemisahan sampel yang
mengandung lebih dari 15-20 analit (n> 15-20) biasanya sulit dan biasanya membutuhkan solusi
gradien. Mempertimbangkan masalah ini, Dolan et al. [67, 68] melaporkan pemisahan
kromatografi cair (RP-LC) fase terbalik dari sampel kompleks dengan mengoptimalkan suhu dan
waktu gradien. Mereka memeriksa pemisahan kromatografi cair fase terbalik dari 24 analit
dengan 8 <n <48 (n = jumlah analit) sebagai fungsi suhu T dan waktu gradien tg. Kapasitas
puncak yang diperlukan ditentukan untuk setiap sampel, setelah memilih T dan tg untuk
selektivitas optimal dan resolusi sampel maksimum. Perbandingan hasil ini dengan perkiraan
kapasitas puncak maksimum yang dimungkinkan dalam elusi gradien fase terbalik digunakan
untuk menghitung nilai maksimum "n" untuk beberapa resolusi sampel yang diperlukan (ketika
T dan tG telah dioptimalkan). Hasil ini juga dibandingkan dengan studi literatur tentang
pemisahan isokratik yang sama sebagai fungsi komposisi fase gerak pelarut terner, di mana
proporsi metanol, tetrahidrofuran dan air bervariasi secara bersamaan. Giliran ini memberikan
informasi tentang keefektifan relatif dari dua prosedur pengembangan metode yang berbeda ini
(optimasi T dan tG vs% metanol dan% tetrahidrofuran) untuk mengubah selektivitas dan
mencapai resolusi maksimum. Kondisi kromatografi: asetonitril 0-100% dalam gradien buffer
dalam 40 menit, suhu 50 ° C, kolom 25 x 0,46 cm, 2,0 mL / menit. Pengamatan ini
mengejutkan, karena kemampuan T atau tg untuk memvariasikan jarak pita dan memaksimalkan
pemisahan jauh lebih sedikit daripada yang diamati untuk perubahan tipe pelarut (mis.,
Memvariasikan rasio metanol terhadap tetrahidrofuran). Pendekatan alternatif adalah melakukan
dua pemisahan dengan kondisi yang berbeda (T, tG) di setiap putaran. Kombinasi hasil dari
kedua proses ini kemudian memungkinkan analisis total sampel, dengan ketentuan bahwa setiap
komponen sampel cukup diselesaikan dalam satu proses atau yang lainnya. Salah satu senyawa
yang memiliki puncak terselesaikan paling buruk adalah asam mefenamat (R, = 1,7, tG = 103
menit, T = 74 ° C).
Ahrer et al. [69] mengembangkan metode untuk penentuan residu obat dalam air berdasarkan
kombinasi kromatografi cair (LC) atau elektroforesis kapiler (CE) dengan spektrometri massa
(MS). Amonium asetat 2 mM pada pH 5,5 dan gradien metanol digunakan untuk HPLC-MS
yang memungkinkan pemisahan sejumlah obat seperti parasetamol, asam klofibrat, penisilin V,
naproxen, bezafibrate, karbazazepin, diklofenak, ibuprofen, dan asam mefenamat. Terlepas dari
teknik pemisahan analitis, sampel air harus diolah terlebih dahulu untuk menyingkirkan
komponen matriks dan untuk memperkaya analit; cara biasa untuk mencapai tujuan ini adalah
dengan melakukan ekstraksi fase padat (SPE) langkah menggunakan fase diam yang cocok
(bahan fase terbalik) dan kondisi. Dengan menggunakan prosedur SPE yang dioptimalkan,
sampel air volume 500 mL dibawa ke pH 2 dengan asam klorida pekat dan dilewatkan melalui
kartrid SPE (6 mL) yang dikemas dengan 500 mg Bondesil ODS 40 um (Varian) yang
dikondisikan dengan aseton, metanol, dan air , pH 2 (masing-masing satu volume kartrid). Laju
aliran disesuaikan hingga sekitar 10 mL / menit. Setelah kartrid dibiarkan kering selama 30
menit, obat dielusi menggunakan volume keseluruhan 2 mL metanol. Ekstrak dibawa ke
kekeringan dalam aliran nitrogen (kemurnian 4.6) dan akhirnya dicairkan kembali dalam 50 μL
metanol dan diencerkan dengan 300 μL air yang kemudian digunakan untuk injeksi (volume
injeksi 100 puL). Pemisahan kromatografi cair dilakukan pada sistem HPLC HP 1100 yang
dilengkapi dengan autosampler (Agilent) HP 1050 yang menggunakan kolom YMC ODS-AM
250 x2 mm i.d. (YMC). Menggunakan laju alir 150 μL / mnt fase gerak yang dioptimalkan
adalah gradien terner dari larutan amonium asetat 2 mM yang disesuaikan dengan pH 5,5 dengan
1 M asam asetat (A), metanol (B) dan air (C) sebagai berikut. form: 0 men: ABC (10:15:75); 3
men: A-B-C (10:15:75); 10 men: A-B-C (10:50:40); 20 mnt: A-B-C (10: 90: 0). Deteksi MS
dilakukan pada sistem quadrupole HP 5989B (Agilent) yang dilengkapi dengan hexapole hanya
radiofrekuensi (Analytica of Branford) menggunakan antarmuka ionisasi elektrospray (ESI)
pneumatik yang dibantu pneumatik HP 59987A (Agilent) atau ionisasi kimia tekanan atmosfer
(APCI) antarmuka (Analytica of Branford) untuk kombinasi dengan instrumen LC. HPLC-MS
adalah teknik yang ampuh untuk menentukan residu obat dalam air yang menawarkan
selektivitas tinggi dan batas deteksi yang baik antara 0,05 dan 1 ug / L dalam larutan yang
disuntikkan; dengan prosedur pretreatment sampel berdasarkan SPE sebelum pemisahan LC,
batas deteksi dalam sampel sekitar 1 ng / L dan di bawah ini dapat dicapai. Penerapan teknik ini
dapat ditunjukkan untuk analisis beberapa sampel air sungai; konsentrasi antara sekitar 2 dan
130 ng / L dari bezafibrate, carbamazepine, diklofenak, dan asam mefenamat ditemukan.
Ku et al. [70] menggunakan HPLC dengan detektor array fotodioda (DAD) untuk identifikasi
pezina dalam pengobatan Cina reumatik dan analgesik. Sebuah studi dilakukan dengan
menggunakan gradien elusi dengan asetonitril dan larutan asam asetat 0,1% pada kolom C-18.
Metode ini diterapkan untuk secara bersamaan menyaring tujuh belas obat sintetik yang
tercampur dalam pengobatan Cina tradisional dalam waktu setengah jam. Obat-obatan termasuk
dalam enam kategori farmakologis, yaitu analgesik antipiretik, glukokortikoid, diuretik, stimulan
SSP, pelemas otot dan obat penenang. Mereka termasuk acetaminophen, aminopyrine, bucetin,
etoxybenzamide, indometasin, ketoprofen, asam mefenamat, fenil-butazon, piroksikam,
salisilamid, deksametason, prednisolon, klor-mezanon, klorzoksazon, hidrokloramin, diazamin
Metode ini dapat memberikan resolusi yang lebih tinggi dan efisiensi yang lebih besar daripada
kromatografi lapis tipis untuk skrining obat-obatan sintetik yang tercemar. sistem ekstraksi
pasangan-pasangan HPLC fase-balik terbalik dikembangkan oleh Kim dan Stewart [71, 72]
untuk analisis obat asam karboksilat dan garamnya (natrium format, natrium asetat, asam 3-
bromopropionat, asam 6-aminokaproat, 11-bromoundecanoic acid, 1-heptanesulfonic acid, p-
nitrophenylacetic acid, sodium benzoate, sodium salicylate, asam valproic, probenecid,
naproxen, ketoprofen, ibuprofen, asam mefenamic, asam flufenamat, dan natrium cefuroxime)
menggunakan a- (3,4- dimethoxy- phenyl) -4'-trimethylammoniummethylcinnamonitrile (DTM)
sebagai reagen pasangan ion fluorescent.
Sistem HPLC terdiri dari tiga pompa; Alcott Chromatography Model 760 HPLC pump untuk
fase gerak, sebuah mini-pompa LDC / Milton Roy VS dengan peredam pulsa (SSI Model LP-21)
untuk pereaksi pasangan ion, dan sistem pengiriman pelarut Kratos Spectraflow 400 dengan
peredam denyut untuk pelarut ekstraksi; injektor Rheodyne Model 7125 yang dilengkapi
dengan loop sampel 50 μL, dan dua tee pencampur (Alltech). Detektor ini adalah Program
Pendeteksi Fluoresensi (Hewlett-Packard) yang diprogram dengan HP Model 1046A dengan
eksitasi 355 nm dan emisi 460 nm (juga dilengkapi dengan filter cut-off emisi 408 nm). Kolom
analitis adalah kolom 5 mm RP-8 (Spheri-5, 10 cm x 4,6 mm i.d.). Kumparan ekstraksi adalah
kumparan teflon rajutan tiga dimensi (1,8 mx 0,3 mm i.d., LDC / Milton Roy) yang dirajut
menggunakan empat pin "Strickliesel". Fase gerak disiapkan sebagai campuran buffer fosfat
berair metanol-pH 7 absolut (30:70, v / v) dan laju aliran ditetapkan pada 1 mL / menit.
Konsentrasi reagen pasangan ion 1,12 x 10 M (5 mg / 100 mL fase gerak) adalah yang paling
tepat untuk meminimalkan kontribusi kebisingan latar belakang dalam sistem. 30% n-pentanol
dalam kloroform digunakan sebagai pelarut ekstraksi. Natrium salisilat, ketoprofen, ibuprofen,
probenecid dan asam valproat digunakan sebagai senyawa model untuk mengevaluasi sistem
ekstraksi pasangan-ion. Metode ini diterapkan pada bentuk sediaan farmasi yang mengandung
ketoprofen dan asam valproat. Senyawa asam lainnya yang dievaluasi menggunakan pereaksi
pasangan ion menunjukkan bahwa asam lipofilik menghasilkan pasangan ion yang lebih dapat
diekstraksi dan sensitivitas yang lebih tinggi daripada asam hidrofilik. Asam Mefenamat
menunjukkan faktor kapasitas (k ') 7,503939 dan batas deteksi 100 ng dan 2 ug / mL (s / n 2).
Methosulfate Shinozuka et al. [91] mengembangkan metode sensitif untuk penentuan empat
turunan asam anthranilic (natrium diklofenak, aluminium flufenamate, mefenamic dan asam
tolfenamat) dengan prosedur HPLC. Keempat obat dikonversi menjadi turunan metilftalatimida
(MPI) dalam hasil konstan dengan reaksi dengan N-klorometilftalatimid pada 60 ° C selama 30
menit. Produksi turunan MPI dikonfirmasi oleh spektrometri massa. Turunan MPI dari empat
obat dipisahkan oleh HPLC menggunakan fase terikat C-18 LiChrospher RP-18 kolom (250 x 4
mm i.d.) dengan air asetonitril (80:20, v / v) sebagai fase gerak. Laju aliran adalah 0,8 mL /
menit. Absorbansi UV diukur pada 282 nm. Kurva kalibrasi derivatif MPI obat linier dari 1,0
menjadi 5,0 ug / mL. Batas deteksi dari empat obat adalah 0,5-5 ng. Prosedur ekstraksi untuk
empat turunan asam antranilat yang ditambahkan dalam plasma dan urin dilakukan dengan
menggunakan kolom Extrelut 1. Hasil ekstraksi kolom 100 uL sampel plasma dan urin
(mengandung 0,5 μg turunan asam antranilat) dengan 6 mL etil asetat adalah 84-106%.
Metode lain untuk analisis HPLC asam mefenamat, seperti yang dijelaskan oleh beberapa
kelompok, disajikan pada Tabel 1.
 Jagota dan Stewart menyelidiki kromatografi fluida sangat kritis (SFC) untuk pemisahan
zat antiinflamasi nonsteroid. Kromatografi dilakukan pada kromatografi fluida superkritis Lee
Model Ilmiah 600D yang dilengkapi dengan pompa, oven, dan detektor ionisasi api dan
dikendalikan oleh komputer Dell (ACI 600D, versi perangkat lunak versi 2.2). SFC dilakukan
pada tiga fase diam yang berbeda: a 5 mx 100 μm i.d. SB-metil-100 (200 um dan ketebalan flim
0,25 μm), 10 mx 50 μm i.d. SB-bifenil-30 dan SB-sianopropil-50 (keduanya 195 um dan
ketebalan film 0,25 um). Larutan masing-masing NSAID dibuat dengan menimbang 5 mg setiap
obat secara akurat dan melarutkan dalam 5 mL metanol absolut untuk memberikan konsentrasi
akhir sekitar 1 mg / mL. Parameter kromatografi adalah program pompa, program tekanan
multilinear: tahan 7 menit pada tekanan awal 100 atm, lalu 25 atm / menit ramp ke 250 atm,
diikuti oleh 4.0 atm / menit ramp ke 290 atm; program oven, isotermal pada 130 ° C; jenis
injeksi, waktu split ditetapkan pada 200 ms, rasio injeksi sekitar 20: 1 memberikan volume
injeksi sekitar 25 mL; detektor, ionisasi nyala pada 375 ° C; fase gerak, kromatografi fluida
superkritis karbon dioksida. Pemisahan dasar asam flufenamat, asam mefenamat, fenbufen dan
campuran indometasin dicapai pada kolom SB-biphenyl-30 menggunakan gradien tekanan.
Campuran yang mengandung asam flufenamat, asam mefenamat, asam asetilsalisilat, ketoprofen
dan fenbufen, dan campuran lain yang mengandung ibuprofen, fenoprofen, naproxen ketoprofen
dan tolmetin dipisahkan dengan baik pada kolom SB-cyanopropyl-50 menggunakan gradien
tekanan. Waktu analisis khas untuk campuran NSAIDA pada kolom bifenil atau sianopropil
adalah sekitar 20-25 menit. Penerapan metode menggunakan kolom bifenil untuk penentuan
NSAID yang ada dalam bentuk sediaan terpilih dilakukan.
6.6 Elektroforesis kapiler
mengembangkan mikromaril kapiler kromatografi mikron (MEKC) untuk
mengidentifikasi pezina dalam pengobatan tradisional Cina reumatik dan analgesik. Teknik
kromatografi ini dilakukan dengan menggunakan buffer (pH 9,0) 0,02 M sodium tetraborate dan
dihydrogenphosphate (mengandung 0,15 M sodium lauryl sulfate). Metode ini diterapkan untuk
secara bersamaan menganalisis empat belas obat kimia sintetik yang tercemar dalam pengobatan
Cina tradisional dalam 25 menit. Mereka mewakili lima kategori farmakologis, analgesik
namley antipiretik, glukokortikoid, stimulan SSP, pelunak otot dan obat penenang, dan termasuk
asetaminofen, aminoprin, bucetin, natrium diklofenak, etoksibenzamid, indometasin, ketoprofen,
asam mefenamat, asam taksamin, sulfonazon, sulphonezone pam dan kafein. Pemulihan obat
kimia sintetis menambahkan Dwu-Hwo-JIIH-Seng-Tang berkisar antara 92,1 hingga 102,5%.
Metode ini digunakan untuk menilai dua obat tradisional Tiongkok yang dijual oleh distributor
obat-obatan alami Tiongkok yang dikumpulkan oleh pusat konsumen biro kesehatan setempat
dari Oktober 1991 hingga Juni 1992. MEKC ditemukan sebagai teknik kromatografi yang efisien
dan sensitif untuk mengukur pezina dalam reumatik. dan obat tradisional Cina analgesik.
 Kemungkinan memisahkan asam flufenamat, mekofenamik dan mefenamat dengan
elektroforesis kapiler menggunakan B-siklodekstrin telah dipelajari oleh Pérez-Ruiz et al. [104].
Sebuah elektroforesis kapiler P / ACE System 5500 (Beckman Instruments) yang dilengkapi
dengan detektor dioda-array, injektor otomatis, kartrid berpendingin cairan dan stasiun Sistem
Emas digunakan dalam penelitian ini. Elektroforesis dilakukan dalam 57 cm x 75 um i.d. (50
cm ke detektor) tabung kapiler menyatu-silika (Beckman Instruments). Catu daya tegangan
tinggi diatur ke 12 kV (polaritas normal, setara dengan kekuatan medan 210 V / cm) yang
menghasilkan arus tipikal 90-92 μA. Pengenalan sampel dibuat di anoda sisi menggunakan opsi
tekanan (0,5 hal. 33,3 mbar) selama 4-10 detik. Deteksi analit dilakukan pada 285 nm.
Pendekatan terbaik melibatkan menggabungkan pH yang sesuai dari elektrolit pembawa (pH
12,0) dengan efek kompleksasi host-tamu dari B-siklodekstrin. Sebuah buffer berjalan yang
terdiri dari 30 mM buffer fosfat (pH 12.0), 2 mM B-CD dan 10% (v / v) asetonitril ditemukan
memberikan sistem elektroforesis yang sangat efisien dan stabil untuk analisis asam fenamat
oleh elektroforesis zona kapiler ( CZE). Tanggapan linear dari 0,4 hingga 40 μg / mL untuk tiga
obat dengan batas deteksi sekitar 0,3 ng / mL. Nilai presisi intra dan hari sekitar 1-2% R.S.D. (n
= 11) dan 3-4% R.S.D. (n = 30), masing-masing, diperoleh. Metode ini sangat kuat dan tidak
ada gangguan saat ini atau penyumbatan kapiler diamati selama beberapa minggu. Penerapan
umum dari prosedur CZE cepat ini (migrasi kurang dari 12 menit) ditunjukkan untuk beberapa
sampel praktis, termasuk serum, urin, dan obat-obatan.
Cherkaoui dan Veuthey [105] menggambarkan pemisahan simultan dari sembilan obat
antiinflamasi nonsteroid oleh elektroforesis kapiler nonaqueous (NACE). NACE ditemukan
menjadi alternatif yang baik untuk analisis obat-obatan farmasi dan metabolitnya, yang sulit
untuk dipisahkan dalam media berair. Data CE dihasilkan dalam sistem CE Hewlett-Packard
yang dilengkapi dengan detektor array dioda kolom, sampler otomatis, dan catu daya yang
mampu menghasilkan hingga 30 kV. Total panjang kapiler (Composite Metal Services) adalah
48,5 cm, sedangkan panjang detektor adalah 40 cm, dengan diameter internal 50 μm. Antarmuka
penyelarasan, berisi celah optik yang cocok dengan diameter internal, digunakan dan panjang
gelombang deteksi ditetapkan pada 200 nm dengan bandwidth 10 nm. Semua percobaan
dilakukan dalam mode kationik (anoda di inlet dan katoda di outlet). Kapiler dipertahankan
dalam termostat pada 20 ° C, kecuali dinyatakan lain. Tegangan konstan 30k V, dengan langsing
awal 500 V / s, diterapkan selama analisis. Injeksi sampel (volume injeksi 8 nL) dicapai dengan
menggunakan mode ressure selama 10 detik pada 25 mbar. Media elektroforetik yang dipilih,
campuran metanol-asetonitril (40:60, v / v) yang mengandung 20 mM amunium asetat,
menghasilkan kompromi terbaik dalam hal waktu analisis, selektivitas dan efisiensi pemisahan
untuk pemisahan simultan baclofen, indoprofen, ibuprofen, fenoprofen, indometasin,
ketoprofen, suprofen, diklofenak, dan asam mefenamat.
Ahrer et al. [69] mengembangkan metode untuk penentuan residu obat dalam air
berdasarkan kombinasi kromatografi cair (LC) atau elektroforesis kapiler (CE) dengan
spektrometri massa (MS). A 20 mM larutan amonium asetat yang disesuaikan dengan pH 5.1
dengan asam asetat digunakan sebagai elektrolit pembawa untuk pemisahan asam klofibrat,
naproksen, bezafibrate, diklofenak, ibuprofen, dan asam mefenamat dengan CE-MS. Untuk
penentuan residu obat dengan CE-MS, sampel air didahului dengan ekstraksi cair-cair (LLE)
sebelum ekstraksi fase padat (SPE). Sampel air volume 500 mL dibawa ke pH 2 dengan asam
klorida pekat; setelah penambahan 50 g natrium sulfat, sampel diekstraksi dua kali dengan 25
mL campuran heksana-MTBE (metil tert-butil eter) (1: 1, v / v). Fase organik diekstraksi ulang
dua kali dengan 50 mL 2 mM larutan natrium hidroksida, dibawa ke pH 2 dengan asam klorida
dan diencerkan menjadi 250 mL dengan air, pH 2. Ekstrak dilewatkan melalui kartrid SPE (6
mL) dikemas dengan 500 mg Bondesil ODS 40 um (Varian) dikondisikan dengan aseton,
metanol, dan air, pH 2 (masing-masing satu volume kartrid). Laju aliran disesuaikan hingga
sekitar 10 mL / menit. Setelah kartrid dibiarkan kering selama 30 menit, obat dielusi
menggunakan volume keseluruhan 2 mL metanol. Ekstrak dibawa sampai kering dalam aliran
nitrogen (kemurnian 4.6) dan akhirnya dilarutkan kembali dalam 50 uL dari campuran elektrolit
pembawa metanol (80:20, v / v) sebelum injeksi (5 kPa, 0,3 menit). Instrumen Crystal 310 CE
(Thermo CE) digunakan untuk eksperimen CE-MS. Kapiler silika menyatu 50 um i.d. diperoleh
dari Polymicro Technologies; kapiler baru dengan panjang 70 cm dikondisikan dengan
pembilasan dengan 0,1 M NAOH diikuti oleh air (masing-masing selama 10 menit). Akhirnya,
prosedur pengkondisian diselesaikan dengan pembilasan dengan elektrolit pembawa CE yang
terdiri dari 20 mM amonium asetat, pH 5,1 selama 5 menit; sebelum masing-masing aliran
kapiler dibilas dengan elektrolit pembawa selama 3 menit. Deteksi MS dilakukan pada sistem
quadrupole HP 5989B (Agilent) yang dilengkapi dengan hexapole hanya frekuensi radio
(Analytica of Branford) menggunakan antarmuka ionisasi electrospray yang dibantu pneumatik
HP 59987A (Agilent). Probe CE digunakan untuk percobaan CE-MS. Sheat-liquid untuk CE-
MS terdiri dari 2-propanol-air (80:20, v / v) yang mengandung asam asetat 0,1% (v / v) untuk
mode deteksi positif atau 0,1% (v / v) trietilamina untuk mode negatif dan dikirim oleh pompa
jarum suntik (Model 22; Peralatan Harvard) pada laju aliran 4 uL / mnt. Laju aliran gas
pengering adalah 1,4 L / mnt pada 150 ° C. CE-MS terbukti menjadi alternatif yang berguna
untuk HPLC-MS, meskipun pretreatment sampel harus diperluas oleh LLE sebelum SPE.
Karena standar deviasi yang agak tinggi dari pemulihan karena kombinasi dari tiga langkah
ekstraksi, metode berdasarkan penambahan standar direkomendasikan untuk kuantisasi. Seperti
yang diharapkan batas deteksi untuk metode CE-MS lebih buruk daripada batas deteksi yang
diperoleh HPLC-MS yaitu antara 27 dan 93 ug / L untuk standar injeksi yang menghasilkan
batas deteksi dalam sampel antara 4,8 dan 19 ng / L. Namun demikian, CE-MS mungkin
merupakan teknik yang berguna untuk konfirmasi hasil yang dipertanyakan yang diperoleh oleh
HPLC-MS. Mengenai pekerjaan yang dijelaskan di atas, Ahrer dan Buchberger [106] mencatat
bahwa berbeda dengan teknik kromatografi gas (GC) yang digabungkan dengan MS, CE-MS
memiliki keuntungan dalam hal derivatisasi analit yang tidak mudah menguap dapat dihindari.
HPLC-MS menghasilkan batas deteksi yang lebih baik, tetapi CE-MS adalah alternatif
pelengkap yang berharga, yang dapat digunakan ketika selektivitas pemisahan HPLC tidak
memuaskan atau ketika hasil dari HPLC harus dikonfirmasi dengan teknik yang berbeda. Oleh
karena itu, mereka mengembangkan å elektroforesis kapiler nonaqueous (NACE) untuk
pemisahan asam klofibrat, penisilin V, diklofenak, asam mefenamat, bezafibrate, naproxen dan
ibuprofen menggunakan elektrolit pembawa yang terdiri dari 20 mM amonium asetat, 60 mM
asam asetat dalam metanolit 40:60). Pemisahan elektroforesis kapiler dilakukan menggunakan
instrumen HPD (Agilent Technologies). Deteksi spektrometri massa telah dilakukan pada HP
5989 MS yang dilengkapi dengan antarmuka electrospray HP 59897A (Agilent Technologies).
Jarum penyemprot untuk kopling CE-MS adalah kapiler baja stainless yang di-ground dengan
kapiler CE koaksial. Antara kapiler CE dan kapiler adalah aliran selubung yang membentuk
kontak listrik dan memberikan semprotan yang stabil. Kapiler CE adalah silika leburan 50 mm x
70 cm. Tegangan konstan -30 kV diterapkan selama analisis. Injeksi sampel (masing-masing 10
mg / L) dicapai dengan menggunakan mode tekanan selama 18 detik pada 50 mbar. Kapiler
disiram dengan heksadimetrin bromida sebelum penggunaan pertama untuk mendapatkan
pembalikan permanen dari aliran electroosmotic tampilan (EOF). Berbeda dengan metode CE
berair, pemisahan analit dasar tidak dapat dilakukan dengan menggunakan kondisi ini, tetapi
senyawa asam dapat dideteksi dengan batas kuantisasi antara 10 dan 160 ug / L.
6.7 Isatachophoresis kapiler
Polásek et al. menggunakan anionic capillary isatachophoresis (ITP) dengan deteksi
konduktor untuk menentukan obat antiinflamasi nonsteroid dan analgesik dari kelompok
phenamate, yaitu asam tolfenamat, flufenamat, mefenamat, dan niflumik. Analisis
Isatachophoresis dilakukan dengan menggunakan EA 100 ITP analyzer yang dikendalikan
komputer (VILLA s.r.o.) yang dioperasikan dalam mode satu kolom. Alat analisis dilengkapi
dengan katup pengambilan sampel 30-uL, 160 mm x 0,3 mm i.d. kapiler analitis yang terbuat
dari kopolimer etilena-propilen (FEP) berfluorinasi dan detektor konduktivitas. Awalnya nilai
pKa (kehilangan proton) dari asam tolfenamat, flufenamat, mefenamat, dan niflumik ditentukan
masing-masing sebesar 5,11, 4,91, 5,39, dan 4,31, oleh spektrofotometri UV dalam 50% (b / b)
metanol berair. Sistem elektrolit ITP yang dioptimalkan terdiri dari 10 mM HCl + 20 mM
imidazole (pH 7,1) sebagai elektrolit terkemuka dan 10 mM 5,5'-dietilbarbiturat asam (pH 7,5)
sebagai elektrolit terminasi. Arus penggerak dan pendeteksian masing-masing adalah 100 μA
(untuk 450 detik) dan 30 μA (analisis tunggal membutuhkan waktu sekitar 20 menit). Dalam
kondisi seperti itu mobilitas efektif asam tolfenamat, flufenamat, mefenamat dan niflumic
bervariasi antara 23,6 dan 24,6 m2 V- s- (dievaluasi dengan asam orotik sebagai standar
mobilitas). Grafik kalibrasi yang menghubungkan panjang zona ITP dengan konsentrasi analit
adalah bujursangkar (r 0,9987-0,9999) dalam kisaran 10-100 mg / L dari standar obat. RSDS
adalah 0,96-1,55% (n = 6) ketika menentukan 50 mg / L analit dalam larutan uji murni. Metode
ini telah diterapkan untuk menguji phenamate dalam enam sediaan farmasi yang diproduksi
secara massal komersial (Mobilisin "gel dan salep, kapsul Lysalgo, Nifluril. Menurut prosedur
validasi berdasarkan teknik penambahan standar, pemulihan adalah 98,4-104,3% dari obat dan
nilai RSD adalah 1,25-3,32% (n = 6). krim, Niflugel * gel, dan kapsul Clotam ".
7. PENENTUAN DALAM FLUIDA BADAN DAN JARINGAN
7.1 Metode spektroskopi
Chemiluminescence dapat digunakan untuk menentukan asam mefenamat dalam cairan
biologis sesuai dengan prosedur yang dijelaskan sebelumnya oleh Aly [45] (lihat Bagian 5.4).
Untuk plasma, proses ekstraksi dilakukan dengan etil asetat setelah pengasaman dengan asam
asetat. Untuk plasma berduri, grafik kalibrasi diperoleh pada rentang konsentrasi 0,07-6,0 dan
0,05-6,0 ug / mL masing-masing untuk asam flufenamat dan mefenamat. Berarti masing-masing
99,17 + 0,98 untuk asam flufenamat dan mefenamat, masing-masing. Dalam kasus urin, proses
ekstraksi dilakukan dengan dietil eter setelah pengasaman dengan asam klorida. Untuk urin
berduri, intensitas chemiluminescence (I, mV) secara linier terkait dengan konsentrasi asam
flufenamat dan mefenamat pada kisaran 0,5-6,0 ug / mL. Persentase rata-rata pemulihan masing-
masing adalah 99,94 0,41 dan 100,10 + 0,57 untuk asam flufenamat dan mefenamat. 99,57 +
0,56 dan persentase pemulihan adalah Analisis simultan dari 14 obat antiinflamasi nonsteroid
dalam serum manusia menggunakan ionisasi elektrospray negatif-tandem spektrometri massa
tanpa kromatografi dijelaskan oleh De Kanel (lihat Bagian 5.6).
7.2 Metode kromatografi Deteksi
sederhana asam mefenamat dan metabolitnya dalam urin dengan kromatografi lapis tipis
dilaporkan sebelumnya oleh Demetriou dan Osborne [52] (lihat Bagian 6.1). Seperti dijelaskan
dalam Bagian 6.3, prosedur kromatografi gas telah digunakan untuk menentukan asam
mefenamat dalam plasma dan urin manusia dan kuda [57-64]. Demikian pula, kromatografi cair
kinerja tinggi terbukti menjadi prosedur yang paling diterapkan untuk penentuan asam
mefenamat dalam cairan biologis (lihat Tabel 1). Penentuan asam flufenamat, meklofenamik
dan mefenamat dalam sampel urin manusia dan serum menggunakan elektroforesis zona kapiler
(CZE) dijelaskan oleh Pérez-Ruiz [104] (lihat Bagian 6.6). Analisis obat dalam sampel urin oleh
CZE selalu merupakan masalah yang sulit. Jika urin disuntikkan langsung ke kapiler, protein
dan biomolekul lain dalam matriks urin teradsorpsi ke dinding kapiler dan dengan demikian
dengan cepat merusak kinerja kolom. Selain itu, kondisi yang sesuai harus ditemukan di mana
tidak ada komponen lain yang bergabung dengan analit. Eksperimen dengan rasio pengenceran
urin yang berbeda telah menunjukkan bahwa pengenceran urin 10 kali lipat cocok untuk analisis
karena asam flufenamat, mekofenamik dan mefenamat dijaga bebas dari efek matriks yang
merugikan. Serum diperlakukan dengan asetonitril untuk memisahkan protein. Setelah
sentrifugasi (3 menit pada 1000 g), supernatan cair diperlakukan dengan 0,1 mL 0,01 M natrium
hidroksida, disaring melalui filter 0,45 um dan diencerkan dengan air demineralisasi ke volume
yang sesuai. Dalam rentang konsentrasi yang diteliti (3-20 dan 3-30 ug / mL untuk sampel urin
dan serum, masing-masing), kurva kalibrasi dibuat linier dan waktu migrasi dapat direproduksi.
Pemisahan asam fenamat di bawah kondisi terbaik untuk sampel urin manusia dan serum
memberikan hasil dengan pemulihan rata-rata di kisaran 98,6-102,1% dan 98,0-102,7% untuk
asam mefenamat dalam sampel urin dan serum.