Aksi Amilase Saliva pada Pati

Tujuan kami

Tujuan penelitian ini adalah untuk mempelajari pengaruh perbedaan suhu dan pH terhadap
aktivitas kandungan saliva, amilase pada pati.

Teori

Semua makhluk hidup membutuhkan energi untuk bertahan hidup. Dari makanan yang kita
konsumsi itulah kita mendapatkan energi kita. Kita tahu bahwa energi yang kita peroleh
adalah melalui proses pencernaan yang memecah zat kompleks pati menjadi molekul glukosa
yang lebih sederhana, yang selanjutnya dimetabolisme menjadi CO2 dan air melalui proses
glikolisis. Saluran pencernaan manusia dimulai dari mulut dan berakhir di anus.

Pada awalnya

Pencernaan makanan dimulai segera setelah kita memasukkan makanan ke dalam mulut kita.
Gigi kita memotong makanan menjadi potongan-potongan kecil dan kelenjar ludah
mengeluarkan air liur yang bercampur dengan bahan makanan ini. Air liur mengandung
enzim yang disebut amilase saliva yang menghidrolisis pati menjadi maltosa. Pencernaan
lengkap pati hanya terjadi di usus kecil oleh aksi amilase pankreas.

Pengaruh Suhu

Semua enzim bersifat protein. Pada suhu yang lebih rendah, enzim amilase saliva
dinonaktifkan dan pada suhu yang lebih tinggi, enzim tersebut mengalami denaturasi. Oleh
karena itu, lebih banyak waktu akan diambil oleh enzim untuk mencerna pati pada suhu yang
lebih rendah dan lebih tinggi. Suhu optimal untuk aktivitas enzimatik amilase saliva berkisar
antara 32 ° C hingga 37 ° C. Temperatur optimum berarti temperatur dimana enzim
menunjukkan aktivitas yang maksimal. Pada suhu optimal ini, enzim paling aktif sehingga
membutuhkan waktu lebih sedikit untuk mencerna pati.

Pengaruh pH

PH optimum untuk aktivitas enzimatik amilase saliva berkisar antara 6 sampai 7. Di atas dan
di bawah kisaran ini, laju reaksi berkurang saat enzim mengalami denaturasi. Enzim amilase
saliva paling aktif pada pH 6,8. Lambung kita memiliki tingkat keasaman yang tinggi yang
menyebabkan amilase saliva berubah sifat dan bentuknya. Jadi amilase saliva tidak berfungsi
begitu masuk ke perut.

Bagaimana cara mengujinya?

Pengaruh suhu dan pH terhadap aktivitas amilase saliva pada pati dapat dipelajari dengan
menggunakan uji Yodium. Jika kita menambahkan saliva pada pati, amilase saliva yang ada
dalam saliva secara bertahap bekerja pada pati dan mengubahnya menjadi maltosa. Pati terus
memberi warna biru dengan yodium hingga tercerna sempurna menjadi maltosa. Pada titik
ini, tidak ada warna biru yang terbentuk. Ini adalah titik akhir atau titik akromik.

Pengaruh Perbedaan Temperatur terhadap Aktivitas Saliva Amilase pada Pati

Bahan yang Dibutuhkan

Tiga rangkaian tabung reaksi yang masing-masing memiliki larutan yodium, tabung reaksi, es
batu, air, 15 ml larutan pati 1% + 3 ml NaCl 1%, larutan saliva, penetes, termometer,
pembakar Bunsen dan kasa kawat.

Prosedur Lab Nyata

• Ambil beker berisi 15 ml larutan kanji 1% + 3 ml larutan NaCl 1%.

• Bagi dan tuangkan larutan ini ke dalam tiga tabung reaksi dan tandai sebagai A, B dan
C.
• Pertahankan suhu gelas kimia yang berisi es batu pada 5 ° C.
• Ambil gelas kimia berisi es batu dan simpan di atas meja.
• Ambil dua gelas kimia lagi yang berisi air dan panaskan di atas pembakar Bunsen.
• Sekarang pindahkan tabung percobaan A ke dalam gelas kimia yang berisi es.
• Pindahkan tabung percobaan kedua B ke dalam penangas air yang disetel pada 37 ° C
dan tabung percobaan ketiga C ke dalam gelas kimia dengan suhu 50 ° C.
• Dengan menggunakan pipet, ambil 1 ml larutan air liur dan pindahkan larutan tersebut
ke dalam tabung reaksi A.
• Demikian pula, tambahkan 1 ml larutan saliva ke dalam tabung reaksi B dan tabung
reaksi C.
• Segera, dengan menggunakan pipet, ambil beberapa tetes dari tabung percobaan A dan
pindahkan ke seri pertama tabung reaksi yang memiliki larutan iodin.
• Demikian pula, dengan menggunakan pipet baru, lakukan prosedur yang sama untuk
tabung reaksi B dan tabung reaksi C dan pindahkan larutan ke dalam tabung reaksi seri
kedua dan ketiga yang memiliki larutan yodium.
 • Catat waktu ini sebagai pembacaan nol menit.
• Setelah selang waktu 2 menit, ambil lagi beberapa tetes dari tiap tabung dan
tambahkan ke tabung yodium dan perhatikan perubahan warna yodium.
• Terus ulangi percobaan dengan interval setiap 2 menit sampai warna yodium tidak
berubah.

Hasil : Dibutuhkan lebih sedikit waktu untuk mencapai titik achromic pada 37 ° C, karena
enzim aktif maksimum pada suhu ini, sedangkan pada suhu yang lebih tinggi dan lebih
rendah lebih banyak waktu dibutuhkan untuk mencapai titik achromic.

Kesimpulan Semua enzim bersifat proteinaceous. Pada suhu yang lebih rendah, enzim
amilase saliva dinonaktifkan dan pada suhu yang lebih tinggi, enzim tersebut mengalami
denaturasi. Oleh karena itu, lebih banyak waktu yang dibutuhkan oleh enzim untuk mencerna
pati pada suhu yang lebih rendah dan lebih tinggi. Pada suhu 37 ° C, enzim paling aktif, oleh
karena itu, membutuhkan waktu lebih sedikit untuk mencerna pati.

Pengaruh Perbedaan pH terhadap Aktivitas Saliva Amilase pada Pati

Bahan yang Dibutuhkan

Tiga seri tabung reaksi yang masing-masing memiliki larutan yodium, tabung reaksi, tablet
pH 5, 6,8 dan 8, gelas kimia berisi air dengan termometer, 15 ml larutan pati 1% + 3 ml NaCl
1%, larutan saliva, penetes, pembakar Bunsen dan kawat kasa.

Prosedur Lab Nyata

• Ambil gelas kimia berisi 15 ml larutan kanji 1% + 3 ml larutan NaCl 1%.

• Bagi dan tuangkan larutan ini ke dalam tiga tabung reaksi dan tandai sebagai A, B dan
C.
• Tambahkan tablet pH 5 ke dalam tabung reaksi A, tablet pH 6,8 ke dalam tabung
reaksi B dan tablet pH 8 ke dalam tabung reaksi C.
• Sekarang pindahkan tabung percobaan A, B dan C ke dalam gelas kimia berisi air dan
termometer untuk mencatat suhu. Temperatur gelas kimia ini harus dipertahankan pada
37 ° C.
• Dengan menggunakan pipet, ambil 3 ml larutan air liur dan tambahkan 1 ml larutan ke
masing-masing dari ketiga tabung reaksi.
• Segera menggunakan pipet, ambil beberapa tetes dari tabung percobaan A dan
pindahkan ke seri pertama tabung reaksi yang memiliki larutan yodium.
• Demikian pula, lakukan prosedur yang sama untuk tabung reaksi B dan tabung reaksi
C dan pindahkan larutan ke dalam tabung reaksi seri kedua dan ketiga yang memiliki
larutan yodium.
• Catat waktu ini sebagai pembacaan nol menit.
• Setelah selang waktu 2 menit, teteskan lagi dari setiap tabung dan tambahkan ke
tabung yodium dan perhatikan perubahan warna yodium.
 • Terus ulangi percobaan dengan interval setiap 2 menit sampai warna yodium tidak
berubah.

Hasil

pH 5 bersifat asam dan pH 8 bersifat basa, oleh karena itu amilase saliva tidak bekerja dalam
tabung ini. Sedangkan enzim bekerja di dalam tabung dengan pH 6,8 (yaitu, sedikit asam)
dan mencerna pati.

Prosedur Simulator (seperti yang dilakukan melalui Lab Online)

• Anda dapat memilih jenis pengujian dari daftar drop-down 'Select the test:' (Uji Suhu
dan Uji pH).
• Anda dapat memilih suhu dari daftar drop-down 'Select the temperature:' atau pH dari
daftar drop-down 'Select the pH'.
• Klik dan tarik penetes dari botol larutan saliva dan pindahkan ke dalam tabung reaksi
yang berisi larutan pati untuk meneteskan larutan saliva ke dalamnya.
• Klik dan seret penetes dari dudukannya dan pindahkan ke larutan di dalam tabung
reaksi yang berisi larutan kanji dan air liur untuk mengumpulkan sampel.
• Masih memegang pipet, gerakkan menuju tabung reaksi yang berisi larutan iodium
untuk meneteskan campuran ke dalamnya.
• Pertimbangkan penambahan waktu sebagai pembacaan nol menit. Pembacaan akan
ditampilkan di bawah tabung reaksi.
• Setelah selang waktu, teteskan lagi dari larutan dan tuangkan ke dalam tabung reaksi
berikutnya yang berisi larutan iodium.
• Perhatikan perubahan warna yodium.
• Terus ulangi prosedur ini setelah selang waktu yang teratur sampai warna yodium
tidak berubah.
• Anda dapat mengulangi eksperimen dengan mengklik tombol 'Reset'.

Catatan: Jika kita menambahkan saliva pada pati, amilase saliva yang ada dalam saliva secara
bertahap bekerja pada pati dan mengubahnya menjadi maltosa. Pati terus memberi warna biru
dengan yodium hingga tercerna sempurna menjadi maltosa. Pada titik ini, tidak ada warna
biru yang terbentuk. Ini adalah titik akhir atau titik akromik.
Pengaruh Konsentrasi Substrat pada Kinetika Enzim

Objektif: Untuk menganalisis pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas enzim.

Teori:

Enzim adalah molekul protein yang bertindak sebagai katalis biologis dengan meningkatkan
laju reaksi tanpa mengubah proses secara keseluruhan. Mereka adalah asam amino rantai
panjang yang diikat oleh ikatan peptida. Enzim terlihat di semua sel hidup dan
mengendalikan proses metabolisme di mana mereka mengubah nutrisi menjadi energi dan sel
baru. Enzim juga membantu memecah bahan makanan menjadi bentuk yang paling
sederhana. Reaktan reaksi yang dikatalisis oleh enzim disebut sebagai substrat. Setiap enzim
memiliki karakter yang cukup spesifik, bekerja pada substrat tertentu untuk menghasilkan
produk tertentu. Pendekatan utama untuk mempelajari mekanisme reaksi yang dikatalisasi
oleh enzim adalah dengan menentukan laju reaksi dan perubahannya sebagai respons dengan
perubahan parameter seperti konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, pH, suhu, dll. Ini
dikenal sebagai kinetika enzim. .

Salah satu parameter penting yang mempengaruhi laju reaksi yang dikatalisis oleh enzim
adalah konsentrasi substrat, [S]. Selama reaksi substrat enzim, kecepatan awal V0 secara
bertahap meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat. Akhirnya suatu titik tercapai,
di luar itu kenaikan V0 tidak akan bergantung pada [S]. Ketika kita memplot grafik dengan
konsentrasi substrat pada sumbu X dan kecepatan yang sesuai pada sumbu Y. Dapat diamati
dari grafik bahwa dengan meningkatnya konsentrasi substrat, ada peningkatan yang sesuai
pada V0. Namun di luar konsentrasi substrat tertentu, kecepatannya tetap konstan tanpa
peningkatan lebih lanjut. Kecepatan maksimum reaksi yang dikatalisis oleh enzim di bawah
kejenuhan substrat ini disebut Vmax, kecepatan maksimum.

Michaelis - Persamaan Menten

Leonor Michaelis dan Maud Menten mendalilkan bahwa enzim pertama-tama bergabung
secara reversibel dengan substratnya untuk membentuk kompleks substrat enzim dalam
langkah reversibel yang relatif cepat:

Persamaan 1

Pada langkah berikutnya, kompleks ES ini dipecah menjadi enzim bebas dan produk reaksi P:

Persamaan.2

Karena langkah kedua adalah langkah pembatas laju, laju reaksi keseluruhan harus sebanding
dengan konsentrasi ES yang bereaksi pada langkah kedua. Hubungan antara konsentrasi
substrat, [S] dan Kecepatan awal enzim, V0 (Gbr. 1) memiliki bentuk umum yang sama
untuk kebanyakan enzim (mendekati hiperbola persegi). Ini dapat diekspresikan secara
aljabar dengan persamaan Michaelis-Menten. Berdasarkan hipotesis dasar mereka bahwa
langkah pembatas laju dalam reaksi enzimatik adalah pemecahan kompleks ES menjadi
enzim dan produk bebas, Michaelis dan Menten menurunkan persamaan yaitu;

Persamaan 3

Suku-suku yang diperlukan dalam reaksi ini adalah [S], V0, Vmaks, dan Km (konstanta
Michaelis) ,. Semua istilah ini dapat diukur secara eksperimental.

Lineweaver - plot Burke

Pada tahun 1934, Lineweaver dan Burke membuat perubahan matematis sederhana dalam
prosesnya dengan membuat grafik pembalikan ganda konsentrasi substrat dan laju reaksi.
Persamaan 4

Untuk enzim yang mematuhi hubungan Michaelis-Menten, "timbal balik ganda" dari V0
versus [S] dari grafik pertama, (gbr1) menghasilkan garis lurus (Gbr. 2). Kemiringan garis
lurus ini adalah KM / Vmaks, yang memiliki perpotongan 1 / Vmaks pada sumbu 1 / V0, dan
perpotongan -1 / KM pada sumbu 1 / [S]. Presentasi timbal balik ganda, juga disebut plot
Lineweaver-Burk. Keuntungan utama dari plot Lineweaver-Burk adalah untuk menentukan
Vmax dengan lebih akurat, yang hanya dapat didekati dari grafik sederhana V0 versus [S]
(Gambar 1).

Fig2: Plot Lineweaver-Burk.

Diadaptasi dari David L. Nelson, Michael M. Cox, prinsip biokimia Lehninger, edisi ke-4.

Prinsip:

Enzim α Amilase dapat mengkatalisis hidrolisis ikatan α -1,4-glikosidik internal yang ada
dalam pati dengan produksi gula pereduksi. Dalam studi konsentrasi substrat pada kinetika
enzim, enzim dijaga konstan dimana konsentrasi pati diambil dengan urutan yang meningkat.
Saat konsentrasi substrat meningkat, jumlah produk yang diproduksi di setiap tabung
berturut-turut juga meningkat. Hal ini dijelaskan oleh Michealis dan yang lainnya bahwa
reaksi katalis enzim pada berbagai konsentrasi substrat adalah difasik yaitu pada konsentrasi
substrat rendah situs aktif pada molekul (enzim) tidak ditempati oleh substrat dan laju enzim
bervariasi dengan konsentrasi molekul substrat (fase1). Ketika jumlah molekul substrat
meningkat, enzim mencapai tingkat kejenuhan, karena tidak ada lagi lokasi reaksi yang
tersisa untuk pengikatan. Jadi enzim dapat bekerja dengan kapasitas penuh dan laju reaksinya
tidak tergantung pada konsentrasi substrat. (Tahap II).

Reaksi enzim-substrat ini dapat ditentukan dengan mengukur peningkatan gula pereduksi
menggunakan reagen asam salisilat 3, 5 Dinitro. Dalam kondisi basa, warna kuning pucat
pada asam salisilat 3, 5- dinitro mengalami reduksi sehingga menghasilkan asam 3-amino -5-
nitrosalisilat berwarna oranye. Absorbansi larutan yang dihasilkan dibaca pada 540nm.
Intensitas warna tergantung pada konsentrasi gula pereduksi yang dihasilkan

α Amylase
Starch Maltose + glucose

Bahan yang Dibutuhkan:

1. 10ml larutan 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, Soluble Starch.
2. 10ml larutan ∞ Amylase
3. 10ml Natrium Hidroksida (NaOH) 2N
4. 15ml asam salisilat DiNitro (DNS)
5. Air Suling - 150ml

Persiapan reagen:

1) α - Larutan amilase:

• Larutan pati 0,5% - 0,5 gram pati larut dalam 100ml air deionisasi.
• Larutan pati 1 %- 1g pati larut dalam 100ml air deionisasi
• Larutan pati 2 %- 2g pati larut dalam 100ml air deionisasi
• Larutan pati 3 %- 3g pati larut dalam 100ml air deionisasi
• Larutan pati 4 %- 4g pati larut dalam 100ml air deionisasi
• Larutan pati 5% - 5g pati larut dalam 100ml air deionisasi
2) Larutan NaOH 2N: 8g NaOH dalam 100ml air suling.

3) Solusi DNS:

1g DNS dilarutkan dalam 50ml air suling. 30g sodium potassium tartarate tetrahydrate
ditambahkan dalam jumlah kecil. Larutannya berubah warna menjadi kuning susu. Kemudian
20ml 2N NaOH ditambahkan, yang mengubah larutan menjadi warna kuning oranye
transparan. Volume akhir dinaikkan menjadi 100 ml dengan air suling. Larutan ini disimpan
dalam botol berwarna kuning.

Prosedur

1. Membuat konsentrasi pati larut yang berbeda (0,5%, 1%, 2%, 3%, 4% dan 5%,).
2. Ambil 12 tabung rebus bersih dan kering. Label tabung sebagai kontrol "C" dan Uji
"T" untuk setiap konsentrasi. Tambahkan 0,5ml (500µl) larutan pati ke semua tabung.
3. Preinkubasi larutan pati dari semua konsentrasi dan larutan α amilase selama 10 menit
pada 37 ° C.
4. Tambahkan 0,5ml (500µl) enzim α Amylase ke dalam tabung berlabel T dengan
konsentrasi masing-masing.
5. Inkubasi semua tabung pada suhu 37 ° C selama 10 menit
6. Setelah diinkubasi, segera tambahkan NaOH 2N ke dalam tabung reaksi yang berisi
larutan uji lalu ke tabung reaksi yang berisi larutan kontrol. Campur larutan di setiap
tabung reaksi.
7. Pipet 0,5ml (500µl) α Amylase ke dalam tabung reaksi yang berisi larutan kontrol.
Campur solusinya dengan baik.
8. Tambahkan 1 ml reagen DNS ke semua tabung. Campur larutan dalam tabung reaksi
dengan baik.
9. Simpan dalam bak air mendidih selama 5 menit pada suhu 100 ° C dan dinginkan.
10. Encerkan semua tabung dengan menambahkan 9,5 ml air suling.
11. Campurkan larutan di setiap tabung reaksi dengan menggunakan vortex mixer.
12. Absorbansi larutan uji dibaca pada 540nm terhadap Kontrol.