Ringkasan Materi Quinon

Aktivitas kimia dan biologis kuinon: tinjauan umum dan implikasi dalam deteksi analitis

Abstrak:

Kuinon adalah pembawa elektron yang berperan dalam fotosintesis. Sebagai vitamin,
mereka mewakili kelas molekul yang mencegah dan mengobati beberapa penyakit seperti
osteoporosis dan penyakit kardiovaskular. Kuinon, dengan aktivitas antioksidannya,
meningkatkan kondisi kesehatan secara umum. Banyak obat yang disetujui secara klinis atau
masih dalam uji klinis terhadap kanker adalah senyawa yang berhubungan dengan kuinon.
Kuinon juga memiliki efek toksikologis melalui kehadirannya sebagai fotoproduk dari polutan
udara. Kuinon adalah molekul siklus redoks cepat dan berpotensi mengikat gugus tiol, amina,
dan hidroksil. Properti tersebut membuat deteksi analitis kuinon bermasalah. Namun, kemajuan
terbaru dari teknik analitik yang tersedia memudahkan deteksi kuinon. Ulasan ini merangkum
pengetahuan saat ini sehubungan dengan sifat oksido-reduktif dan elektrofilik kuinon serta alat
analitik yang digunakan untuk analisis kuinon. Ini mencakup pengenalan umum tentang fungsi
fisiologis, dan terapi kuinon. Sejumlah penelitian dilaporkan mencakup reaktivitas kimia dalam
upaya untuk memahami kuinon sebagai senyawa yang aktif secara biologis. Data mulai dari
metode analisis normal hingga mempelajari kuinon yang berasal dari tumbuhan atau matriks
biologis hingga penggunaan senyawa berlabel disajikan. Itu contoh menggambarkan bagaimana
bahan kimia, biologis, dan pengetahuan analitis dapat diintegrasikan untuk memiliki yang lebih
baik memahami mode aksi kuinon.

Pengantar:

Kuinon mewakili kelas senyawa quinoid yang tersebar luas di alam. Sejauh ini, lebih dari
1.200 kuinon telah dideskripsikan (Dey dan Harborne 1989 ). Kuinon dicirikan oleh sebuah pola
struktural dasar umum: an ortho atau a para dion tersubstitusi terkonjugasi baik ke nukleus
aromatik (benzoquinon) (1, 2) atau ke kondensasi sistem aromatik polycyclic, seperti
naphtoquinones (3), anthraquinones (4), anthracyclinone (5) dan seterusnya seperti yang
diberikan pada Gambar. 1.

Kuinon ditemukan di berbagai keluarga tumbuhan seperti Ranunculaceae (Salem 2005 ),

Aphodelaceae (Bringmann et al. 2008 ), Fabaceae (Bakasso et al. 2008 ), Ebenaceae (McGaw
et al. 2008 ), dan Rhamnaceae (Wei et al. 2008b).Mereka juga hadir dalam jamur, bakteri
(Carrasco et al.2008; Kim et al. 2008; Thomson1991; Wei et al.2008a; Wijeratne et al.2008)
dan dalam jumlah kecil pada hewan, khususnya pada echinodermata (Singh et al. 1967;
Thomson1991). Namun demikian, kuinon beracun seperti antrakuinon (4) dan 1-
hidroksiantraqui- nones (6) dapat dibentuk di lingkungan dengan foto-oksidasi sinar matahari
dari kontaminan lingkungan seperti polycyclic aromatic hydrocarbon (PAHs) (Mallakin et al.
1999; Mallakin et al.2000). Karena kemunculannya yang luas di alam bersama dengan
keterlibatannya dalam sejumlah proses biologis dan kimia yang penting. Sebagai contoh, peran
kuinon dalam fotosintesis pada tanaman dan bakteri sudah mapan (Breton dan Nabedryk1996;
Lubitz2003). Selain itu Koenzim Q (7) bertindak sebagai antioksidan kuat dan penstabil
membran, mencegah kerusakan sel yang dihasilkan dari proses metabolisme normal
(Nageswara Rao et al. 2008 ), dan melindungi terhadap beberapa penyakit kronis, termasuk
Parkinson dan penyakit kardiovaskular (Cleren et al. 2008 ; Pepe et al. 2007 ). Vitamin K (8a,
b) sangat penting untuk mempertahankan hidup dengan fungsinya dalam proses pembekuan
darah (Ahmed et al. 2007 ; Azharuddin et al. 2007 ; Benzakour 2008 ), dalam mencegah
penyakit kardiovaskular (Beulens et al. 2008 ; Wallin et al. 2008 ), serta dalam pencegahan
dan pengobatan osteoporosis (Bugel 2008 ; Lanham-Baru 2008 ; Weber 2001 ). Selain itu,
banyak kuinon memiliki antioksidan [vitamin E (a-tokoferol) (9)], anti-inflamasi [vitamin E
(a-tokoferol) (9)], thymoquinone (10), antrakuroksi-2,6-asam sulfonat (11)), antibiotik [fosfon-
tidak ada (12)], antimikroba [antrakuinon (4)], dan antikanker [thymoquinone (10),
Tanshinone IIA (13),emodin (14), doxorubicin (15)] kegiatan. Apalagi kuinon terdiri dari
kelas besar kuinon antitumor yang disetujui untuk penggunaan klinis terhadap beberapa jenis
kanker atau yang masih dalam berbagai tahap perkembangan klinis dan praklinis seperti yang
ditinjau dalam (Asche 2005). Meskipun mekanisme aksi mereka yang tepat belum sepenuhnya
dipahami, disarankan bahwa target utama mereka adalah DNA. Sementara beberapa
berinteraksi dengan DNA melalui alkilasi atau interkalasi, yang lain menginduksi istirahat
DNA untai ganda dan kedua DNA topoisomerase I dan II diperantarai pembelahan DNA
(Asche2005; Cai et al.2007, 2008; Marinho-Filho et al.2010).

Kimia kuinon
Pengetahuan tentang reaktivitas kimia bawaan dari kuinon relevan untuk memahami sifat
fisiologis dan toksikologisnya. Kuinon memiliki dua sifat yang penting untuk memahami efek
biologisnya. Pertama, kuinon dapat mengalami reaksi reduksi oksidoid yang dapat dibalik dan,
kedua, banyak dari mereka dapat mengalami serangan nukleofilik karena sifat elektrofiliknya.
Pada bagian di bawah ini disajikan ikhtisar tentang sifat oksido-reduktif dan elektrofilik
kuinon.

Satu dan dua pengurangan kuinon elektron

Mekanisme sitotoksisitas kuinon terutama disebabkan oleh kemudahan reduksi dan oleh
karena itu kemampuan mereka untuk bertindak sebagai agen pengoksidasi atau dehidrogenasi.
Dalam sistem biologis kuinon dapat mengalami reduksi satu atau dua elektron dengan
reduktase seluler yang masing-masing mengarah ke semiquinon atau hidrokinin yang sesuai
(Skema1). Meskipun sifat redoks kuinon sangat bergantung pada potensi kimianya,
interaksinya dengan protein pada situs pengikatan spesifik dapat lebih lanjut memodulasi sifat
elektronik dan dengan demikian potensi redoksnya in situ (Breton dan Nabedryk1996; Song
dan Jeon 2003).

Mengurangi enzim

Skema 1 Ilustrasi, menggunakan benzoquinone sebagai contoh, masing-masing dari satu dan
dua reduksi elektron menghasilkan semiquinone dan hidrokuinon. NQO1: NAD (P) H: kuinon
akseptor oksidoreduktase
 Pengurangan satu elektron dari kuinon dapat dikatalisis oleh sejumlah enzim, termasuk
NADPH sitokrom P450 reduktase mikro-somal (P450R), mikrosom NADH sitokrom b5
reduktase (b5R), dan mitokondria NADH ubiquinone oxidoreductase (Holtz et al. 2003; Biksu
dan Jones2002; Wang et al.2010; Yan et al.2008). Radikal semiquinone, yang dibentuk oleh
satu reduksi elektron, teroksidasi dalam kondisi aerobik menjadi kuinon awal dengan
menghasilkan radikal anion superoksida. Dalam larutan air, mantan radikal berinteraksi
dengan oksigen molekuler untuk menghasilkan hidrogen peroksida yang, di hadapan besi,
membentuk radikal hidroksil beracun yang dikaitkan dengan toksisitas kuinon (Asche2005;
Kappus1986). Karena aktivitas mereka dalam meningkatkan toksisitas obat, enzim pereduksi
satu elektron dapat digunakan dalam desain agen kemoterapi bioreduktif (Celik dan
Arinc¸).2008; Pan et al.1984; Yan et al.2008). Panel obat antikanker telah menarik perhatian
untuk digunakan sebagai obat bioreduktif. Bukti yang cukup membuktikan bahwa aktivasi
bioreduktif dari obat antitumor: doxorubicin (15), tirapazamine (16), dan indoloquinone (EO9)
(17) oleh seluler oxido-reductases P450R menyebabkan peningkatan yang signifikan dalam
ikatan kovalen mereka terhadap DNA dan aktivitas sitotoksik terhadap sel tumor (Bailey et
al.2001; Bartoszek dan Wolf1992; Chinje et al.1999; Cowen et al.2003; Cullinane et al.1994;
Kostrzewa-Nowak et al.2005; Patterson et al.1995, 1997; Skladanowski dan Konopa1994).
Bioreduksi mitomycin C (MMC) (18) oleh P450R mengarah pada pembentukan radikal bebas
yang menyebabkan peroksidasi lipid, kerusakan protein dan DNA, dan, akhirnya kematian sel
(Belcourt et al. 1998; Joseph et al.1996; Kappus1986; Wang et al.2007). Demikian pula,
toksisitas 5-fluorouracil (19) ditingkatkan melalui P450R. Produksi spesies oksigen reaktif
(ROS) dan Penipisan NADPH dalam sel P450R-overexpressing (Martinez et al. 2008). Enzim
P450R karenanya merupakan target yang menarik untuk peningkatan kemoterapi terapi 5-
fluorourouril (19) (Martinez et al. 2008 ). Terlepas dari kenyataan bahwa satu enzim pereduksi
elektron berperan dalam aktivasi bioreiduktif beberapa agen antitumor, efek ini tampaknya
bergantung pada tingkat aktivitas enzimatik dan konsentrasi obat. Ini dapat diilustrasikan
dengan contoh pada 2,5-Diaziridinyl-3- (hydroxymethyl) -6-methyl-1,4-benzoquinone (RH1)
(20), substrat untuk P450R dan b5R (Nemeikaite-Ceniene et al .2003). Meskipun reduksi RH1
menyebabkan produksi ROS dan kerusakan untai DNA dan ikatan silang DNA (Begleiter et
al.2007; Hasinoff dan Begleiter2006), toksisitasnya hanya diamati pada sel tumor pada tingkat
aktivitas enzim yang tinggi dan dosis obat yang tinggi (Begleiter et al. 2007; Hasinoff dan
Begleiter2006; Nemeikaite-Ceniene et al.2003; Yan et al.2008). Akibatnya, kontribusi b5R
dan P450R dalam bioaktivasi dan sitotoksisitas RH1 (20) diperkirakan kecil pada sel kanker
yang mengandung tingkat aktivitas normal dari enzim ini (Yan et al.2008).
Selain reduksi satu-elektron, kuinon dapat menjalani proses reduksi dua-elektron yang
dikatalisis oleh flavoenzymes sitosolik NAD (P) H: kuinon akseptor oksidoreduktase (NQO).
NQO1, juga dikenal sebagai DT-diaphorase, adalah NQO yang dipelajari dengan baik,
sedangkan enzim iso-nya, NRH: quinone oxidoreductase 2 (NQO2), dipelajari pada tingkat
yang lebih rendah.
Meskipun NQO1 dan NQO2 dapat menggunakan NAD (P) H sebagai sumber
pengurangan setara, yang pertama menggunakan kofaktor ini lebih efisien (Wu et al. 1997;
Zhao et al.1997). NQO2 mengkatalisasi reaksi yang sama dengan DT-diaphorase tetapi pada
tingkat yang jauh lebih rendah (Jaiswal et al.1990; Jaiswal1994). Dibandingkan dengan DT-
diaphorase, NQO2 adalah oksidoreduktase transfer dua elektron yang kurang efektif dan
transfer oksidoreduktase empat elektron yang lebih efektif (Wu et al.1997). Faktanya, DT-
diaphorase adalah flavoenzyme yang khas karena tiga alasan. Pertama, ini menampilkan
reaktivitas spesifik terhadap NADH dan NADPH dan menunjukkan spesifisitas akseptor
elektron yang luas, mengkatalisis reduksi kuinon dan senyawa yang terkait secara struktural.

DT-diaphorase dapat mengkatalisasi reduksi berbagai orto dan para-kuinon (Gaikwad et

al. 2007). Kedua, sangat dihambat oleh NAD (P) H inhibitor dicumarol dan antikoagulan oral
lainnya. Ketiga, fitur yang paling mencolok adalah kemampuannya untuk mengkatalisasi apa
yang disebut transfer dua-elektron 'wajib' (Bianchet et al.2004; Cadenas1995). Pengurangan 2-
elektron wajib ini bersaing dengan reduksi kuinon satu-elektron oleh enzim seperti P450R dan
melindungi sel terhadap stres oksidatif (Gong et al.2008). Perlindungan ini hasil dari konversi
kuinon menjadi hidroksi bukan semiquinon dan ROS yang dihasilkan oleh siklus redoks
semiquinon dengan adanya oksigen molekuler (Bianchet et al. 2004; Kappus dan Sies1981;
Tampo dan Yonaha1996).
Tiga jenis hidrokuinon dibentuk oleh aksi DT-diaphorase, 1) hidrokuinon redoks-stabil, 2)
hidrokuinon redoks-labil yang kemudian dioksidasi secara otomatis dengan pembentukan ROS
dan 3) hidrokuinon yang siap diatur ulang menjadi partikel elektrofil potensial dalam reaksi
bioalkilasi (Cadenas 1995). Sifat-sifat hidrokuinon yang dihasilkan oleh DT-diaphorase
menentukan apakah pengurangan ini mengarah pada aktivasi atau deaktivasi kuinon. Properti
detoksifikasi DT-Diaphorase dan perannya dalam perlindungan seluler telah didukung oleh
banyak penelitian (Joseph dan Jaiswal1994; Tampo dan Yonaha1996). Detoksifikasi kuinon
yang efisien oleh DT-diaphorase berasal dari generasi, melalui reduksi dua elektron, dari
hidrokuinon yang lebih larut dalam air dan relatif lebih stabil yang mudah diekskresikan setelah
konjugasi glukuronida atau sulfat (Lind1985). Mekanisme detoksifikasi untuk menadione (21)
disebabkan oleh reduksi dua elektronnya oleh DT-diaphorase diikuti oleh UGT-glukuronidasi
(Nishiyama et al.2008). Mekanisme yang sama dari reduksi DT-diaphorase dan
glucuronidation selanjutnya telah didokumentasikan untuk senyawa antikanker Tanshinone IIA
(13) (Hao et al.2007). Selain itu, penurunan efek antioksidan yang bermanfaat dari turunan
rantai pendek CoQ telah dihasilkan dari pembentukan konjugat CoQ1 sulfat yang bergantung
pada DT-diaphase dan sulfotransferase (Chan dan O'Brien2003).
Penggunaan dicumarol, penghambat DT-diaphorase, telah ditemukan untuk meningkatkan
toksisitas kuinon (Thor et al. 1982), dan induksinya melindungi sel-sel yang dikultur terhadap
toksisitas kuinon (Lim et al. 2008).
In vivo, detoksifikasi kuinon oleh DT-diaphorase telah dikonfirmasi pada tikus KO DT-
diaphorase (Radjendirane et al. 1998). Peningkatan toksisitas menadione (21) telah diamati
pada tikus nol dibandingkan dengan tikus tipe liar di mana 70% tikus nol mati setelah paparan
10 mg menon / kg berat badan (Radjendirane et al.1998). Hasil ini menunjukkan peran protektif
DT-diafrase terhadap toksisitas kuinon melalui detoksifikasi.
Selain perannya yang mungkin dalam detoksifikasi kuinon makanan, enzim telah
terbukti mengkatalisis aktivasi reduktif senyawa kemoterapi terapeutik, seperti E09 (17),
MMC (18), MM1 (20), benzoquinone ansamycin ( BA) (22),
streptonigrin (23) dan b-lapachone (24) (Begleiter et al. 2007; Bianchet et al.2004; Cai et
al.2008; Cummings et al. 2003; Danson et al.2011; Guo et al.2008; Vainchtein et al.2008; Yan
et al.2008). Dalam hal ini bioaktivasi menghasilkan pembentukan metabolit yang lebih toksik
(Cadenas)1995; Danson et al.2011; Tukang 1994). Hal ini dapat dijelaskan oleh fakta bahwa
beberapa hidrokuinon seperti yang disebutkan sebelumnya dapat melakukan autoksidasi untuk
menghasilkan ROS atau menjalani rentang belakang untuk menghasilkan spesies alkilasi yang
reaktif (Cadenas).1995). Properti bioaktivasi DT-diaphorase ini bersama dengan fakta bahwa
ini sangat diekspresikan dalam jenis tumor tertentu telah digunakan dalam pengembangan
agen kemoterapi bioreduktif untuk terapi tumor yang kaya DT-diaphase (Bianchet et al.2008;
Danson et al.2011; Malkinson et al. 1992; Mikami et al.1998; Siegel et al.1998; Siegel dan
Ross2000; Winski et al.1998; Tukang 1994).

Penambahan kuinon nukleofilik

Karakter elektrofilik Quinones memungkinkan mereka menjalani serangan nukleofilik
yang dapat menyebabkan detoksifikasi atau peningkatan toksisitas (Skema 2).
Adduksi facile Quinone dengan spesies nukleofilik kaya-elektron seperti amino aktif, hidroksil,
dan gugus tiol terjadi pada penambahan Michael klasik (Land et al. 2004; Li et al.2005; Song
dan Buettner2010). Dalam sistem biologis, nukleofilik tersebut dapat ditemukan sebagai
kelompok samping reaktif dari lisin, serin dan sistein (Magee).2000). Namun, gugus tiol
glutathione (GSH) merupakan yang pertama yang terlibat dalam penambahan nukleofilik
dengan kuinon. Bahkan, garis pertahanan seluler pertama adalah dikendalikan oleh GSH yang
merupakan pemulung ROS aktif dan kehadiran antioksidan non-protein yang paling berlimpah
dalam sel. Banyak kuinon dapat terkonjugasi dengan kelompok sulfhidril GSH, dan
penambahan reduktif ini merupakan rute utama eliminasi mereka. Konjugasi kuinon-GSH
adalah reaksi detoksifikasi karena sifat hidrofilik dari aduk yang terbentuk lebih tinggi
dibandingkan dengan kuinon induk. Konjugasi ini dapat terjadi secara spontan melalui adisi
reduktif atau dikatalisis oleh glutathione-S-transferase yang mengarah pada konjugat
hidrokuinon-glutationionil (Buffinton et al.1989; Jakoby dan Ziegler1990). PAH o-kuinon
dapat didetoksifikasi oleh konjugasi non-enzimatik atau enzimatik dengan tiol seluler (Murty
dan Penning1992). Konjugasi kuinon-GSH oleh enzim detoksifikasi glutationione-S-
transferase mewakili mekanisme pertahanan melanosit terhadap bahan kimia melanocytotoxic
hydroquinone (25) dan 4-hydroxyanisole (26), senyawa yang setelah oksidasi menyebabkan
depigmentasi kulit ( Bolognia et al.1995; Kasraee et al.2003).
Meskipun telah ditunjukkan pada bagian di atas bahwa penambahan nukleofilik
menyebabkan detoksifikasi kuinon, namun, dalam beberapa kasus hal itu dapat menyebabkan
peningkatan toksisitas. Misalnya, konjugasi kuinon-GSH juga dapat berkontribusi terhadap
toksisitas senyawa. Hal ini disebabkan dalam beberapa kasus oleh siklus redoks yang lebih
cepat dari konjugat glutathionyl dibandingkan dengan yang dari kuinon induk (Bufnton et al.
1989 ; Jakoby dan Ziegler 1990 ; van Ommen dkk. 1992 ). Studi terbaru menunjukkan bahwa
konjugasi tiol dalam posisi 19 dari cincin kuinon dari empat senyawa antikanker turunan BAs
(22) dapat berperan dalam mekanisme toksisitas hati mereka (Cysyk et al. 2006; Guo et al.
2008). Mekanisme toksisitas lainnya berasal dari penipisan signifikan dari bentuk tiol
tereduksi dari glutathione oleh alkilasi dengan adanya konsentrasi tinggi kuinon. Setelah
sistem detoksifikasi dijenuhkan oleh deplesi GSH, protein yang tergantung pada seluler SH
dapat dialkilasi, sehingga menyebabkan perubahan yang tidak dapat dikembalikan dan
kematian sel (Buffinton et al.1989; Jakoby dan Ziegler1990). Kecenderungan kuinon untuk
berikatan dengan gugus fungsi nukleofilik, umumnya ditemukan pada banyak seluler
(Buffinton et al.1989; Jakoby dan Ziegler1990; van Ommen dkk.1992). Studi terbaru
menunjukkan bahwa konjugasi tiol dalam posisi komponen, merupakan teori mekanistik
paling populer yang mendasari toksisitasnya. Reaktivitas kimia intrinsik kuinon
mengendalikan kecepatan dan jenis reaksi konjugasi protein kuinon (Ito dan Wakamatsu2008).
Mutasi dan / atau disfungsi protein dapat dihasilkan dari konjugasi kuinon menjadi protein
atau DNA. Pengikatan kuinon ke protein juga dapat menyebabkan, melalui pengakuan epitop
terikat kuinon dari protein terdegradasi, ke kerusakan imunologis. Misalnya, konjugasi
protein-kuinon telah terlibat dalam memainkan peran kausatif dalam timbulnya reaksi obat
alergi atau idiosinkratik tertentu (Lepoittevin dan Benezra1991; Parrish et al.1997;
Petersen2002). Reaksi alergi kontak telah dikaitkan dengan 2-hydroxy-2,4-naphthoquinone
(henna) (27), bahan utama dalam banyak jenis pewarna tubuh (Bolhaar et al.2001; Calogiuri et
al. 2010). Menadione (21) juga telah ditemukan bereaksi secara non-enzimatis dengan protein
tiol yang terdapat dalam plasma tikus dan menghasilkan ROS yang mempotensiasi cedera
seluler pada trombosit (Chung et al.1999).

Metode analitik untuk mendeteksi kuinon

Berbagai metode analitis telah dilaporkan untuk penentuan kuinon pada tanaman, sediaan
farmasi, serta dalam sampel biologis. Kromatografi gas (GC) (Raspotnig et al.2010; Zuo et
al.2008), Raman microscopy (Beattie et al. 2007), kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC)
(Sakunphueak dan Panichayupakaranant 2010; Xue et al.2008), dan spektrometri massa (MS)
(Zhao et al. 2010telah digunakan untuk identifikasi dan kuantifikasi kuinon. Pencarian literatur
yang luas menunjukkan bahwa di antara metode, HPLC atau HPLC / MS adalah metode yang
paling sering digunakan. Terlepas dari kenyataan bahwa banyak metode telah digunakan,
identifikasi dan kuantifikasi kuinon masih menantang. Upaya untuk menetapkan prosedur yang
efisien, akurat dan tepat untuk kuantifikasi mereka sedang berlangsung.
Contoh prosedur pembersihan quinones adalah biasanya dilakukan dengan menggunakan
ekstraksi fase padat (SPE), ekstraksi cair-cair (LLE) atau presipitasi protein. Pengendapan
protein menggunakan metanol, etanol, dan asetonitril biasanya digunakan untuk mengganggu
ikatan protein dan menghilangkan gangguan dari sampel biologis. SPE, selain penggunaannya
sebagai metode pembersihan, dilakukan untuk memusatkan sampel. Kartrid C18 dan Oasis
HLB adalah yang paling umum digunakan selama persiapan sampel (Azharuddin et al.2007;
Karpinska et al.2006; Vainchtein et al. 2008).
Metode deteksi seperti UV (Fahmy et al. 2004; Ojha et al. 2009; Qian et al.2008; Song et
al.2010; Xue et al. 2008), chemiluminescence (CL) (Ahmed et al. 2007; Ahmed et al.2009),
dan fluoresensi (Azharuddin et al. 2007), telah digabungkan dengan metode HPLC. Beberapa
kuinon dapat dideteksi oleh chemiluminescence karena kemampuannya untuk menghasilkan
hidrogen peroksida dan fluorofor ketika mengalami iradiasi UV, sebuah properti yang
memungkinkan penentuannya dengan mencampurkan aryloxalate melalui reaksi
chemiluminescence (PO-CL) peroxyoxalate (PO-CL) (Ahmed et al.2007). Juga pengurangan
bahan kimia pasca kolom untuk mendeteksi bentuk kuinon tereduksi menggunakan kolom
tereduksi katalis dan fase gerak metanol-etanol sebagai reduktor telah digunakan (Azharuddin
et al.2007).
Kromatografi gas juga dapat digunakan untuk mendeteksi berbagai kuinon. Sampel sering
memerlukan derivatisasi dengan N, O –Bis (trimetilsilil) trifluo-roacetamide)? 1% TMCS
(trimethylchlorosilane) (El Sohly et al.2004); mereka sering dipisahkan menggunakan kolom
berbasis dimethylpolysiloxane dan silika (El Sohly et al.2004; Zuo et al.2008).

Spektrometri massa, dalam mode ionisasi negatif atau positif, sering digabungkan ke GC
atau HPLC untuk identifikasi kuinon. Analisis massa yang berbeda digunakan, tergantung
pada struktur senyawa yang diteliti, terutama ionisasi electrospray (ESI) dan ionisasi kimia
tekanan atmosfer. (APCI) instrumen seperti instrumen triple-quadrupole dan trap ion yang
memungkinkan pengukuran tandem mass specrometri (MS / MS).
Ada variasi besar dalam batas kuantifikasi (LOQ) yang dilaporkan untuk berbagai kuinon,
karena LOQ berkisar dari 0,067 hingga 6.070 ng / ml dengan metode HPLC, sementara
mereka dapat berkisar dari 0,5 hingga 600 ng / ml dengan metode GC. Data ini menunjukkan
bahwa, walaupun semua senyawa adalah kuinon, sifat aktual dan sifat kimianya bervariasi,
dan kemampuan analisisnya bergantung pada struktur kimiawi senyawa tersebut, tetapi juga
pada metode analisis yang digunakan.
Meskipun jarang digunakan, mikroskop Raman telah diterapkan untuk identifikasi dan
lokalisasi vitamin E (9) dan senyawa lipofilik terkait dalam sampel biologis kompleks.
Analisis non-destruktif ini dapat memungkinkan diskriminasi antara tokoferol yang berbeda
dan spesimen oksidasi serta visualisasi interaksi protein-lipid. Sebagai teknik pencitraan,
mikroskop Raman dapat membantu mengidentifikasi fungsi biologis alfa tokoferol terutama,
berkaitan dengan distribusi intraseluler dan nasib metabolisme (Beattie et al.2007).
Ringkasan berbagai metode analitik yang digunakan untuk mendeteksi kuinon dalam
berbagai matriks disajikan pada Tabel 1. Untuk setiap metode disajikan ringkasan berikut ini:
senyawa yang dianalisis, matriks, pembersihan sampel, pemisahan, deteksi, dan batas
kuantifikasi minimum.

Deteksi kuinon berlabel dalam sampel biologis

Di mana pun metode analitik konvensional untuk mempelajari kuinon dalam sampel biologis
telah gagal dalam pendeteksiannya, pendekatan lain seperti penggunaan senyawa berlabel
radiolabeled atau berlabel isotopically telah diadopsi.
Senyawa pelacak apakah isotopik atau radioaktif adalah alat yang berguna untuk mengukur
dan memahami metabolisme dan disposisi molekul dan obat endogen. Ini berlaku untuk
senyawa yang tidak stabil atau perlu dideteksi pada konsentrasi rendah.
Mempelajari kuinon adalah tantangan karena reaktivitasnya yang tinggi sebagai molekul siklus
redoks yang cepat serta potensi mereka untuk mengikat gugus hidroksil, tiol, dan amina. Oleh
karena itu, merancang radiolabeled atau molekul quinone berlabel isotopically dapat
meningkatkan deteksi mereka. Beberapa penelitian menggunakan kuinon berlabel telah
dilakukan sejauh ini dan sangat berperan dalam mengklarifikasi nasib metabolik dan / atau cara
kerja mereka. Masalah keamanan khususnya, karena aplikasi in vivo membatasi penggunaan
pelacak radioaktif; Akibatnya, upaya diarahkan pada penggunaan isotop stabil yang merupakan
bentuk non-radioaktif dari unsur-unsur yang secara alami terjadi di lingkungan dan aman untuk
penelitian pada manusia. Isotop-isotop ini dapat dipisahkan dan dikuantifikasi dengan
spektrometri massa yang memungkinkan juga menentukan secara serentak pelacak dan
penelusuran rasio molar.
 Pencarian literatur menyeluruh menunjukkan bahwa upaya yang luas telah dilakukan untuk
mempelajari Vitamin K1 (8a). Tantangan khusus untuk analisis vitamin K1 (8a) dalam plasma
dihasilkan dari konsentrasinya yang rendah, mengganggu komponen lipid plasma, dan
sensitivitas molekul terhadap degradasi oleh basa yang ringan dan kuat. Oleh karena itu,
penelitian in vivo menggunakan vitamin K1 (8a) berlabel telah dilakukan. Upaya ekstensif
untuk mempelajari vitamin K1 (8a) berlabel telah dilakukan selama 30 tahun terakhir untuk
lebih memahami pergantian metabolisme serta penyerapan dan disposisi. Antara 1972 dan
1979, tiga upaya untuk mengukur pergantian vitamin K1 (8a) pada manusia telah dilakukan
dengan menggunakan [10, 20-3H2] vitamin K1 (8a). Namun,1979; Shearer et al. 1972, 1974).
Hampir 20 tahun kemudian, Olson et al., Berhasil menentukan total vitamin K1 tubuh (8a) dan
pergantiannya pada manusia pada dua tingkat asupan vitamin K menggunakan vitamin K1 (8a)
tritiated (Ola et al.2002). Metode GC / MS telah divalidasi untuk pengukuran rasio isotop
vitamin K1 (metil-13C atau cincin deuterasi) yang diperoleh dari sukarelawan manusia.
Metode ini melibatkan ekstraksi cair-cair, hidrolisis enzim, ekstraksi fase padat dan derivatisasi
selanjutnya dengan pentafluoropropionic anhydride sebelum analisis. Keuntungan utama dari
derivatisasi adalah peningkatan berat molekul vitamin K1 ke wilayah spektrum massa di mana
terdapat sedikit gangguan dari senyawa biologis lainnya (Jones et al.2006).
Dalam sebuah studi manusia penggunaan metode HPLC untuk penilaian transportasi vitamin
K selama konsumsi collard greens yang mengandung dosis fisiologis vitamin K1 (8a) yang
telah dilabeli secara endogen dengan deuterium telah dilaporkan. Metode pemberian label dan
pengiriman intrinsik memungkinkan pelacakan vitamin K1 (8a) eksogen yang berasal dari
makanan uji yang termasuk collard greens. Metode ini telah menunjukkan bahwa vitamin K1
(8a) yang dideuterisasi dengan cepat dibersihkan dari plasma dan fraksi lipoprotein kaya
trigliserida adalah pembawa utamanya, sedangkan fraksi LDL dan HDL membawa jumlah
kecil. Persentase pemulihan vitamin K1 (8a) dari subfraksi kurang dari 50%, menunjukkan
bahwa deteksi dibatasi oleh sensitivitas uji (Erkkila et al.2004).
Penyerapan dan pembersihan vitamin K-deuterasi yang diekstrak dari brokoli juga telah
dipelajari dalam serum manusia oleh HPLC dan GC / MS (Dolnikowski et al. 2002).
Ketersediaan hayati 13C-vitamin K telah ditentukan setelah pemberian karbon-13 berlabel
kale (Brassica oleracea var. Acephala) kepada sukarelawan dewasa. Metode LC-APCI-MS
telah memungkinkan deteksi selektif simultan dari molekul berlabel dan tidak berlabel serta
menentukan kurva kinetik mereka (Kurilich et al.2003).
Penggunaan bentuk vitamin K1 (8a) yang berlabel deuterium bersama dengan tugas struktural
oleh spektrometri NMR dan kromatografi cair - spektrometri massa tandem (LC-MS / MS)
telah menawarkan bukti nyata tentang asal-usul vitamin K2 dalam serigala tikus ketika
diberikan vitamin K1 sebagai satu-satunya sumber vitamin K (Okano et al. 2008). Dua bentuk
vitamin K terjadi secara alami. Vitamin K1 (8a) diproduksi oleh tumbuhan dan ganggang,
sementara vitamin K2 (8b) berasal dari bakteri dan hewan (Kamao et al.2007). Lebih dari 90%
vitamin diet adalah vitamin K1 (8a) tetapi konsentrasinya dalam jaringan hewan jauh lebih
rendah dibandingkan dengan vitamin K2 (8b) yang berhubungan dengan lebih dari 90%
vitamin K dalam jaringan (Okano et al.2008). Telah dilaporkan bahwa hati ayam, diberi makan
dengan vitamin K1 (8a) sebagai satu-satunya sumber vitamin K, mengandung vitamin K2
sebanyak vitamin K1 (Will et al.1992). Dikatakan bahwa vitamin K2 dalam jaringan berasal
dari konversi vitamin K1 (8a) (Davidson et al.1998; Ronden et al.1998). Penggunaan senyawa
berlabel D telah menunjukkan bahwa vitamin K2 otak berasal melalui dua mekanisme
potensial, 1) dari konversi sistemik yang terdiri dari pelepasan menadione dari vitamin K1 di
usus dan prenilasi menadione menjadi vitamin K2 di dalam otak dan 2) di dalam sel konversi
vitamin K1 menjadi vitamin K2 di cerebra (Okano et al. 2008).
Meskipun masalah keamanan membatasi penggunaan senyawa berlabel radio in vivo,
metode ini masih digunakan secara in vitro. Miao et al. (Miao et al.2008) telah ditampilkan di
sebuah studi in vitro bahwa b-lapachone (24), senyawa antikanker yang menjanjikan,
dimetabolisme oleh darah merah sel (sel darah merah). Saat mempelajari metabolisme in vitro
dalam plasma dan seluruh darah, senyawa ini tidak dapat dideteksi dengan LC-MS
konvensional. Penggunaan 14C b-lapachone (24) telah memungkinkan mempelajari profil
metabolik, dan menentukan alasan kegagalan deteksi dalam darah menggunakan metode
analitik konvensional. Menggunakan LC-MS digabungkan ke sistem penghitungan radioisotop
yang dimilikinya telah menunjukkan bahwa b-lapachone (24) secara luas dimetabolisme dalam
darah lengkap dalam kondisi in vitro dan bahwa aktivitas enzimatik terletak di sel darah merah.
Dengan menentukan persentase radioaktivitas yang ada di pelet protein yang dibuat dari
seluruh darah yang dibubuhi 14C b-lapachone, telah terbukti bahwa ikatan protein kovalen dari
b-lapachone dan / atau metabolitnya merupakan kontributor kecil dalam kegagalan deteksi pada
darah (Miao et al. 2008).
Pelabelan 14C juga telah digunakan untuk studi biosintesis Koenzim Q (7) dalam sel HepG2.
Oleh karena itu, senyawa berlabel dapat berguna untuk diagnosis pasien dengan defisiensi
dalam biosintesis Koenzim Q (7). Metode ini melibatkan inkubasi sel dengan prekursor
radioaktif 4-hydroxy- [U-14C] benzoat selama 24 jam diikuti dengan prosedur ekstraksi yang
berbeda termasuk: 1) ekstraksi lipid alkohol-heksana, 2) ekstraksi lipid alkohol-heksan dari
asam trikloroasetat (TCA) bahan tidak larut, dan 3) Kelarutan NaOH dari (TCA) bahan tidak
larut. Analisis HPLC bersama dengan kuantifikasi radioaktivitas dengan penghitungan kilau
telah menunjukkan 1) konversi total 4-hidroksi- [U-14C] benzoat menjadi CoQ, dan 2)
radioaktivitas tinggi yang diamati dengan solubilisasi alkali langsung dari bahan yang tidak
larut TCA tanpa perlu lipid ekstraksi (Cordoba-Pedregosa Mdel et al.2005).
Selain pentingnya mereka dalam memberikan pemahaman yang lebih baik tentang disposisi
senyawa, metode radiolabeling juga dapat digunakan dengan tujuan menemukan radiofarmasi
yang menjanjikan dalam kedokteran nuklir. Potensi penggunaan 17AAG berlabel yodium (22,
R: NHCH 2 CHCH 2), [131 I] Iodo-17-AAG, sebagai target untuk pencitraan tumor atau
sebagai agen pengobatan telah diselidiki (Daozhen et al. 2007). Penelitian menunjukkan
bahwa distribusi molekul berlabel pada tikus konsisten dengan distribusi biologis yang tidak
berlabel.

Kesimpulan dan prospek masa depan

Kuinon adalah kelas molekul penting yang mengandung efek fisiologis dan terapi.
Mereka memiliki dua sifat yang menentukan aktivitas biologis mereka; Yang pertama adalah
kemampuan mereka untuk mengalami pengurangan satu atau dua elektron dan yang kedua
adalah kemampuan mereka untuk mengalami serangan nukleofilik. Dalam banyak kasus,
aktivitas kuinon / penentuan nasib metabolik sulit untuk diisolasi dan dideteksi dari matriks
biologis yang bermasalah. Untungnya, masalah-masalah ini dapat diatasi dan pemahaman
yang lebih baik tentang aktivitas kuinon dan potensi penggunaan akan lebih mudah tersedia
dengan kemajuan berkelanjutan dalam metode analitik yang tersedia bersama dengan
kemungkinan menggunakan senyawa berlabel.
Metode analitik untuk mendeteksi kuinon

Berbagai metode analisis telah dilaporkan untuk penentuan kuinon dalam tanaman,
sediaan farmasi, serta dalam sampel biologis. Kromatografi gas (GC) (Raspotnig et al. 2010 ;
Zuo et al. ; Zuo et al. ; Zuo et al. ; Zuo et al. ; Zuo et al. ; Zuo et al. 2008 ), Raman microscopy
(Beattie et al. ), Raman microscopy (Beattie et al. ), Raman microscopy (Beattie et al. ), Raman
microscopy (Beattie et al. ), Raman microscopy (Beattie et al. ), Raman microscopy (Beattie et
al. 2007 ), kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) (Sakunphueak dan Panichayupakaranant
2010 ; Xue et al. 2008 ), dan spektrometri massa (MS) (Zhao et al. 2010 telah digunakan untuk
identifikasi dan kuantifikasi kuinon. Pencarian literatur yang luas menunjukkan bahwa di antara
metode, HPLC atau HPLC / MS adalah metode yang paling sering digunakan. Terlepas dari
kenyataan bahwa banyak metode telah digunakan, identifikasi dan kuantifikasi kuinon masih
menantang. Upaya untuk menetapkan prosedur yang efisien, akurat dan tepat untuk kuantifikasi
mereka sedang berlangsung.

Prosedur pembersihan sampel untuk kuinon biasanya dilakukan menggunakan ekstraksi

fase padat (SPE), ekstraksi cair-cair (LLE) atau presipitasi protein. Pengendapan protein
menggunakan metanol, etanol, dan asetonitril biasanya digunakan untuk mengganggu ikatan
protein dan menghilangkan gangguan dari sampel biologis. SPE, selain penggunaannya sebagai
metode pembersihan, dilakukan untuk memusatkan sampel. Kartrid C18 dan Oasis HLB adalah
yang paling umum digunakan selama persiapan sampel (Azharuddin et al. 2007 ; Karpinska et al.
2006 ; Vainchtein et al. 2008 ).
 Metode deteksi seperti UV (Fahmy et al. 2004 ; Ojha et al. 2009 ; Qian et al. Qian et al.
Qian et al. Qian et al. Qian et al. Qian et al. Qian et al. 2008 ; Song et al. ; Song et al. ; Song et
al. ; Song et al. ; Song et al. ; Song et al. ; Song et al. 2010 ; Xue et al. ; Xue et al. ; Xue et al. ;
Xue et al. ; Xue et al. ; Xue et al. ; Xue et al. 2008 ), chemiluminescence (CL) (Ahmed et al.
2007 ; Ahmed et al. 2009 ), dan fluoresensi (Azharuddin et al. 2007 ), telah digabungkan dengan
metode HPLC. Beberapa kuinon dapat dideteksi oleh chemiluminescence karena kemampuannya
untuk menghasilkan hidrogen peroksida dan fluorofor ketika mengalami iradiasi UV, sebuah
properti yang memungkinkan penentuan dengan mencampurkan dengan aryloxalate melalui
reaksi periloksoksalat chemiluminescence (PO-CL) (Ahmed et al. 2007 ). Juga pengurangan
bahan kimia pasca kolom untuk mendeteksi bentuk kuinon tereduksi menggunakan kolom
tereduksi katalis dan fase gerak metanol-etanol sebagai reduktor telah digunakan (Azharuddin et
al. 2007 ).

Kromatografi gas juga dapat digunakan untuk mendeteksi berbagai kuinon. Sampel
sering memerlukan derivatisasi dengan TIDAK –Bis (trimetilsilil) trifloroasetamid)? 1% TMCS
(trimethylchlorosilane) (El Sohly et al. 2004 ); mereka sering dipisahkan menggunakan kolom
berbasis dimethylpolysiloxane dan silika (El Sohly et al. 2004 ; Zuo et al. 2008 ).

Spektrometri massa, dalam mode ionisasi negatif atau positif, sering digabungkan dengan
GC atau HPLC untuk identifikasi kuinon. Analisis massa yang berbeda digunakan, tergantung
pada struktur senyawa yang diteliti, terutama ionisasi electrospray (ESI) dan ionisasi kimia
tekanan atmosferik. (APCI) instrumen seperti instrumen triple-quadrupole dan trap ion yang
memungkinkan pengukuran spektrometri massa tandem (MS / MS).

Ada variasi besar dalam batas kuantifikasi (LOQ) yang dilaporkan untuk berbagai
kuinon, karena LOQ berkisar dari 0,067 hingga 6.070 ng / ml dengan metode HPLC, sementara
mereka dapat berkisar dari 0,5 hingga 600 ng / ml dengan metode GC. Data ini menunjukkan
bahwa, walaupun semua senyawa adalah kuinon, sifat aktual dan sifat kimianya bervariasi, dan
kemampuan analisisnya bergantung pada struktur kimiawi senyawa tersebut, tetapi juga pada
metode analitik yang digunakan.

Meskipun jarang digunakan, mikroskop Raman telah diterapkan untuk identifikasi dan
lokalisasi vitamin E (9) dan senyawa lipofilik terkait dalam sampel biologis kompleks. Analisis
non-destruktif ini memungkinkan diskriminasi antara tokoferol dan spesimen oksidasi yang
berbeda serta visualisasi interaksi protein-lemak. Sebagai teknik pencitraan, mikroskop Raman
dapat membantu mengidentifikasi fungsi biologis alfa tokoferol terutama, berkaitan dengan
distribusi intraseluler dan nasib metabolisme (Beattie et al. 2007 ). Ringkasan berbagai metode
analitik yang digunakan untuk mendeteksi kuinon dalam berbagai matriks disajikan pada Tabel 1
. Untuk setiap metode disajikan ringkasan berikut ini: senyawa yang dianalisis, matriks,
pembersihan sampel, pemisahan, deteksi, dan batas kuantifikasi minimum.

Deteksi kuinon berlabel dalam sampel biologis

Di mana pun metode analitik konvensional untuk mempelajari kuinon dalam sampel
biologis telah gagal dalam pendeteksiannya, pendekatan lain seperti penggunaan senyawa
berlabel radiolabeled atau berlabel isotopically telah diadopsi.

Senyawa pelacak apakah isotopik atau radioaktif adalah alat yang berguna untuk
mengukur dan memahami metabolisme dan disposisi molekul dan obat endogen. Ini berlaku
untuk senyawa yang tidak stabil atau perlu dideteksi pada konsentrasi rendah.

Mempelajari kuinon adalah tantangan karena reaktivitasnya yang tinggi sebagai molekul
siklus redoks yang cepat serta potensi mereka untuk mengikat gugus hidroksil, tiol, dan amina.
Oleh karena itu, merancang radiolabeled atau molekul quinone berlabel isotopically dapat
meningkatkan deteksi mereka. Beberapa penelitian menggunakan kuinon berlabel telah
dilakukan sejauh ini dan sangat berperan dalam mengklarifikasi nasib metabolik dan / atau cara
kerja mereka. Masalah keamanan khususnya, karena aplikasi in vivo membatasi penggunaan
pelacak radioaktif; Akibatnya, upaya diarahkan pada penggunaan isotop stabil yang merupakan
bentuk non-radioaktif dari unsur-unsur yang secara alami terjadi di lingkungan dan aman untuk
penelitian pada manusia. Isotop-isotop ini dapat dipisahkan dan dikuantifikasi dengan
spektrometri massa yang memungkinkan juga menentukan secara simultan pelacak dan
penelusuran rasio molar.

Kesimpulan dan prospek masa depan

Kuinon adalah kelas molekul penting yang mengandung efek fisiologis dan terapi. Mereka
memiliki dua sifat yang menentukan aktivitas biologis mereka; Yang pertama adalah
kemampuan mereka untuk mengalami pengurangan satu atau dua elektron dan yang kedua
adalah kemampuan mereka untuk mengalami serangan nukleofilik. Dalam banyak kasus,
aktivitas kuinon / penentuan nasib metabolik sulit untuk diisolasi dan dideteksi dari matriks
biologis yang bermasalah. Untungnya, masalah-masalah ini dapat diatasi dan pemahaman yang
lebih baik tentang aktivitas kuinon dan potensi penggunaan akan lebih mudah tersedia dengan
kemajuan berkelanjutan dalam metode analitik yang tersedia bersama dengan kemungkinan
menggunakan senyawa berlabel.