METODA PENGUKURAN DAN ANALISIS

PROSES AGROINDUSTRI

SPECTROPHOTOMETRY

DENI SUBARA
• Apa itu Spektroskopi UV / Vis
• Prinsip pengukuran
• Transmisi & absorbansi
• Hukum bir lambert
• Spektroskopi UV / Vis dalam kimia analitik
• Desain spektrofotometer
• Aplikasi
• Tips untuk pengukuran yang akurat dan tepat
 Apa itu Spektroskopi UV / Vis?
• UV = ultraviolet

• Vis = terlihat

• Spektroskopi = interaksi radiasi dan materi

Bagaimana kita melihat warna?
Panjang gelombang
Panjang gelombang
Panjang gelombang
Panjang gelombang
PRINSIP PENGUKURAN
PRINSIP
PRINSIP BEKERJA
KOSONG

1. Pelarut (udara / alkohol) di masukan kedalam kuvet yang cocok

dengan alat, trasparan dan tidak menyerap cahaya.
2. Sinar (sumber cahaya) yang dipancarkan melewati dengan
penuh kuvet dan pelarut.
3. Intensitas dari cahaya yang ditransmit-kan pada berbagai panjang
gelombang kemudian di ukur oleh detektor dan di simpan oleh
recorder
PRINSIP BEKERJA
Penentuan Sampel
1. Sampel di larutkan dengan pelarut (pelarut) dan dimasukan
kedalam kuvet
2. Cahaya yang dikeluarkan dari sumbernya kemudian melewati
kuvet yang terlah terisi sampel
3. Ketika melalui kuvet beberapa gelombang cahaya
diserap oleh molekul sampel.
4. Cahaya yang lepas (lewat) diukur oleh detektor
5. Intensitas cahaya pada berbagai gelombang panjang dihitung dengan
perbandingan perbandingan transmitan sample dan blank. Rasio ini
kemudian di simpan oleh rekorder.
TRANSMITANSI & PENYERAPAN
TRANSMITANSI DAN PENYERAPAN

T (%) = •
•0

A = - catatan ( T)
TRANSMITANSI DAN PENYERAPAN
HUKUM LAMBERT-BEER
Hukum Lambert-Beer

A = ε. CD
1. Konsentrasi sampel (c) adalah mol / L
atau g / ml
2. Panjang kuvet (d) adalah cm
3. Koefisien (ɛ; epsilon) adalah konstanta
spesifik untuk sample yang menyatakan
berapa sample yang terserap pada

c=• panjang gelombang tertentu (L / (cm *

ε. d mol) atau
mL / (cm * g)
Hukum Lambert-Beer

0,3 <A <2,5

Keterbatasan

1. Sampel yang memiliki konsentrasi tinggi

• gunakan 0.01M sebagai konsentrasi tertinggi
2. Sampel yang memiliki kandungan Garam tinggi
• larutkan sampel untuk pengenceran
3. Interaksi antara molekul menyebabkan linearitas, terutama untuk
sampel yang konsentrasi tinggi atau adanya ikatan hidrogen

4. Indek reflaktif yang berubah karena konsentrasi tinggi

5. Perubahan equilibirium karena reaksi kimia
Spektroskopi UV / Vis dalam kimia analitik
Kenapa Mengukur UV / Vis Spectrum

1. UV / Vis spektrummenunjukan keberadaan sampel.

Bahkan bisa dikatakan spesifik. Exp kemurnian solven
dapat dicek dengan UV / Vis
2. Puncak absorbsi dapat digunakan untuk menentukan
konsentrasi dari sampel yang diukur.
Kenapa Mengukur UV / Vis Spectrum

3. UV / Vis dapat diaplikasikan dibanyak segmen seperti industri

makanan, pengujian air, farmasi, kimia dan bioteknologi.

4. Posisi puncak dari spectrummenginformasikan struktur molekul

dari sample, cth C = O absorp pada puncak tertentu.
5. UV / Vis dapat menghitung properti fisik dari sampel
seperti menghitung protein titik leleh.
6. Dapat memberikan informasi mikroskopik dari molekul sample, cth
spectrum akan melebar jika terjadi pengotor.
Analisis kualitatif
Menganalisa • Murni / tidak murni

• Kemurnian DNA dan RNA

• asam lemak jenuh vs asam lemak tak jenuh hadir dalam minyak zaitun
Analisis kualitatif
Analisis kuantitatif
Analisis Kuantitatif: Garis Kalibrasi
Desain Spektrofotometer
Komponen Spektrofotometer
1. Sumber cahaya: xenon atau tungsten / deuterium
2. Tempat sampel (kuvet): borosilikat, akrilik atau quarz
3. Elemen dispersi: prisma quarz
4. Detektor
Cuvette
1. Petak, tabung
2. Kuvet gelas untuk Visible spectrum (400-700nm)
3. Kuvet Quarz untuk spektrum UV (100-400nm)
4. NaCl dan KBr kristal untuk spektrum IR
5. Harus bersih bebas dari pengotor
Komponen Spektrofotometer
1. Spektrofotometer Pemindaian

2. Spektrofotometer Array
Jalur Optik
1. Konfigurasi Balok Tunggal

2. Konfigurasi Double-Beam
Spektroskopi UV / Vis volume mikro
Aplikasi Spektroskopi UV / Vis
Pengukuran konsentrasi
1. Siapkan sampel
2. Buatlah rangkaian larutan standar dengan konsentrasi yang diketahui

3. Atur spektro ke penyerapan cahaya maksimum alfa

4. Ukur serapan yang tidak diketahui, dan dari plot standar,
baca konsentrasi terkait
Deteksi Kotoran
Penentuan Struktur Organik

• Dari lokasi puncak dan kombinasi puncak dapat menentukan

struktur molekul organik.
Kinetika Kimia
• Reaksi suatu senyawa dapat ditentukan karena senyawa yang
bereaksi akan mengubah kinetik.

• Perubahan absorbansi karena reaksi akan dapat diukur.

Penentuan Fungsional Grup Senyawa
Penentuan Berat Molekuler
TIPS
Kuvet

1. Selalu gunakan kuvet yang sama untuk pengukuran blank dan

sampel
2. Selalu bersihkan kuvet sebelum pemakaian
3. Gunakan quarz untuk spektrum UV
4. Simpan kuvet di tempat yang aman dengan arah yang sama
setiap penyimpanan
Pelarut
1. Pilih pelarut yang transparan yang tidak menyerap cahaya
2. Perhatikan rentang absorbansi pelarut
3. Perhatikan batas bawah absorbansi pelarut
Pelarut
4. Perhatikan interaksi antara molekul dan pelarut, molekul polar
berinterkasi dengan pelarut polar.
Konsentrasi Sampel
1. kalimat serapan (absorbansi) yang besar (> 2.5 AU) dan serapan
yang kecil (<0.3 AU) yang mengakibatkan tidak linier.
2. Gunakan pelarut yang tidak berinteraksi.

3. Gunakan analit yang memiliki konsentrasi rendah.

Pemilihan Panjang Gelombang

1. Gunakan panjang gelombang (lambda max) atau puncak.

Analisis Campuran

1. Campuran dapat diukur, karena berbeda komponen akan

berbeda lambda max.
2. Lakukan pengukuran secara individual.
KESIMPULAN
TERIMA KASIH