MAKALAH BIOANALISIS

KROMATOGRAFI GAS – SPEKTROMETRI MASSA

(GAS CHROMATOGRAPHY –MASS SPECTROMETRY /GC-MS)

DAFTAR ISI
Cover
BAB I
Pendahuluan

BAB II
Tinjauan Pustaka
BAB III
Studi Kasus
BAB IV
Kesimpulan
DAFTAR PUSTAKA
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kromatografi adalah cara pemisahan campuran yang didasarkan atas

perbedaan distribusi dari komponen campuran tersebut diantaranya dua fase, yaitu

fase diam (stationary) dan fase bergerak (mobile). Fase diam dapat berupa zat padat

atau zat cair, sedangkan fase bergerak dapat berupa zat cair atau gas. Dalam

kromatografi fase bergerak dapat berupa gas atau zat cair dan fase diam dapat berupa zat

padat atau zat cair.

Kromatografi gas dapat juga dikatakan sebagai suatu teknik analisis yang

mencakup metoda pemisahan dan metoda penentuan baik secara kualitatif maupun

kuantitatif.Bentuk analisis lengkap ini merupakan keunggulan utama dari

kromatografi. Di dalam kromatografi di perlukan adanya dua fase yang tidak saling

menyampur,yaitu fasa diam dan fasa gerak. Fasa diamnya disini dapat berupa suatu

zat padat yang ditempatkan di dalam suatu kolom atau dapat juga berupa cairan

terserap (teradsorpsi) berupa lapisan yang tipis pada butirbutir halus suatu zat padat

pendukung (solid support material)yang di tempatkan di dalam kolom. Fase geraknya

dapat berupa gas (gas pembawa) atau cairan.

Efisiensi pemisahan ditentukan ditentukan dengan besarnya interaksi antara sampel

dan cairan, dengan menggunakan fase cair standar yang diketahui efektif untuk berbagai
senyawa. Pada prinsipnya pemisahan dalam GC adalah disebabkan oleh perbedaan dalam

kemampuan distribusi analit diantara fase gerak dan fase diam di dalam kolom pada

kecepatan dan waktu yang berbeda.

Kromatografi gas merupakan salah satu teknik kromatografi yang menggunakan

prinsip pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen-

komponen penyusunnya. Kromatografi gas biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu

senyawa yang terdapat pada campuran gas dan juga menentukan konsentrasi suatu senyawa

dalam fase gas. Metode ini merupakan salah satu pemisahan yang sekaligus dapat

menganalisis senyawasenyawa organik maupun anorganik yang bersifat termostabil dan

mudah menguap.

Berdasarkan bentuk fase diam yang digunakan, teknik kromatografi gas

digolongkan dalam dua golongan utama: Kromatografi padat-gas (gas-solid

chromatography) bila sebagai fase diam digunakan adsorben padat; dan kromatografi gas-

cair (gas-liquid chromatography) bila sebagai fase diam digunakan fase cair yang

dilapiskan pada penyangga inert atau sebagai lapisan tipis pada dinding kolom kapiler

Spektrometri massa adalah suatu metode untuk mendapatkan berat molekul dengan

cara mencari perbandingan massa terhadap muatan dari ion yang muatannya diketahui

dengan mengukur jari-jari orbit melingkarnya dalam medan magnetik seragam. Dalam

spektrometri massa, molekul-molekul organik ditembak dengan berkas elektron dan diubah

menjadi ion ion bermuatan positif bertenaga tinggi (ion-ion molekular atau ion-ion induk)

yang dapat pecah menjadi ion-ion yang lebih kecil (ion-ion pecahan atau ion-ion anak);
lepasnya electron dari molekul menghasilkan radikal kation dan proses ini dapat dinyatakan

sebagai M. Ion molekular M+ biasanya terurai menjadi sepasang pecahan/fragmen yang

dapat berupa radikal atau ion atau molekul yang kecil dan radikal kation

Penggunaan kromatografi gas dapat dipadukan dengan spektrometri massa. Paduan

keduanya dapat menghasilkan data yang lebih akurat dalam pengidentifikasian senyawa

yang dilengkapi dengan struktur molekulnya.

Kromatografi gas-spektrometri massa atau dikenal dengan GC-MS adalah metode

kombinasi antara kromatografi gas dan spektrometri massa yang bertujuan untuk

menganalisis berbagai senyawa dalam suatu sampel. Kromatografi gas dan spektometri

massa memiliki prinsip kerjanya masing-masing, namun keduanya dapat digabungkan

untukmengidentifikasi suatu senyawa baik baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

Kromatografi gas dan spektrometri massa dalam banyak hal memiliki banyak

kesamaan dalam tekniknya. Untuk kedua teknik tersebut, sampel yang dibutuhkan dalam

bentuk fase uap, dan keduanya juga sama-sama membutuhkan jumlah sampel yang sedikit

(umumnya kurang dari 1 ng). Disisi lain, kedua teknik tersebut memiliki perbedaan yang

cukup besar yakni pada kondisi operasinya. Senyawa yang terdapat pada kromatografi gas

adalah senyawa yang digunakan untuk sebagai gas pembawa dalam alat GC dengan

tekanan kurang lebih 760 torr, sedangkan spektometri massa beroperasi pada kondisi

vakum dengan kondisi tekanan 10-6 – 10-5 torr.

1.2 Rumusan masalah

 Apa alasan penggunanaan metode GC-MS dan KG dalam analisa ?

 Apa contoh aplikasi metode dan validasi metode GC-MS dan KG dalam analisa?

 Bagaimana analisa dengan metode GC-MS?

 Bagaimana analisa secara KG?

 Apa perbedaan analisa menggunakan metode GC-MS dan kromatografi gas?

 Manakah diantara metode GC-MS dan kromatografi gas yang lebih baik dalam

analisa?

1.3 TUJUAN

1. Untuk mempermudah proses belajar fisika kimia terutama Kromatografi

2. Untuk mengetahui cara pemisahan campuran bedasarkan metode kromatografi gas
3. Untuk memenuhi tugas kuliah Bioanalisis
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2. 1 Definisi Gas Chromatography Mass Spectrometry ( GC-MS )

Gas Chromatography Mass Spectrometry ( GC-MS ) atau kromatografi gas –

spektrometri massa merupakan metode kombinasi antara kromatografi gas dengan

spektrometri massa. Gas kromatografi biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu

senyawa yang terdapat pada campuran gas dan juga menentukan konsentrasi suatu senyawa

dalam fase gas. Spektroskopi massa adalah suatu metode untuk mendapatkan berat molekul

dengan cara mencari perbandingan massa terhadap muatan dari ion yang muatannya

diketahui dengan mengukur jari-jari orbit melingkarnya dalam medan magnetik seragam .

Tujuan dari kombinasi tersebut untuk menganalisis berbagai senyawa dalam suatu sampel.

GC-MS adalah metode pemisahan senyawa organik dengan menggunakan dua metode

analisis senyawa yaitu kromatografi gas ( GC ) untuk menganalisis jumlah senyawa secara

kuantitatif dan spektrometri massa ( MS ) untuk menganalisis struktur molekul senyawa

analit ( Pavia, 2006 ). GC dan MS memiliki kekurangan dan kelebihan masing – masing

sehingga dengan menggabungkan kedua teknik tersebut di harapkan mampu meningkatkan

kemampuan dalam menganalisis sampel dengan mengambil kelebihan masing – masing

teknik dan meminimalkan kekurangannya.

2.2 Metode analisis Gas Chromatography Mass Spectrometry ( GC-MS )

Metode analisis GC – MS dengan membaca spektra yang terdapat pada kedua

metode yang digabungkan tersebut. Pada spektra GC jika sampel mengandung banyak

senyawa maka akan dapat dilihat dari banyaknya puncak ( peak ) dalam spektra GC

tersebut. Dari data waktu retensi yang terdapat dalam literature dapat di ketahui senyawa

apa saja yang terdapat dalam sampel, kemudian selanjutnya senyawa yang di duga tersebut

di masukkan ke dalam instrument spectrometer massa ( Sastrohamidjojo, 2001 ).

2.3 Prinsip kerja Gas Chromatography Mass Spectrometry ( GC-MS )

Kromatografi gas (GC) merupakan jenis kromatografi yang digunakan dalam kimia

organik untuk pemisahan dan analisis. GC dapat digunakan untuk menguji kemurnian dari

bahan tertentu, atau memisahkan berbagai komponen dari campuran. Dalam beberapa

situasi, GC dapat membantu dalam mengidentifikasi sebuah senyawa kompleks. Dalam

kromatografi gas, fase yang bergerak (atau "mobile phase") adalah sebuah operator gas,

yang biasanya gas murni seperti helium atau yang tidak reactive seperti gas nitrogen.

Stationary atau fase diam merupakan tahap mikroskopis lapisan cair atau polimer yang

mendukung gas murni, di dalam bagian dari sistem pipa-pipa kaca atau logam yang disebut

kolom. Instrumen yang digunakan untuk melakukan kromatografi gas disebut gas

chromatograph (atau "aerograph", "gas pemisah").

Umumnya spektrum massa diperoleh dengan mengubah senyawa suatu sample

menjadi ion-ion yang bergerak cepat yang dipisahkan berdasarkan perbandingan massa

terhadap muatan. Spektroskopi massa mampu menghasilkan berkas ion dari suatu zat uji,

memilah ion tersebut menjadi spektum yang sesuai dengan perbandingan massa terhadap
muatan dan merekam kelimpahan relatif tiap jenis ion yang ada. Umumnya hanya ion

positif yang dipelajari karena ion negative yang dihasilkan dari sumber tumbukan

umumnya sedikit. Saat GC dikombinasikan dengan MS, akan didapatkan sebuah metode

analisis yang sangat bagus. Peneliti dapat menganalisis larutan organik, memasukkannya ke

dalam instrumen, memisahkannya menjadi komponen tinggal dan langsung

mengidentifikasi larutan tersebut. Selanjutnya, peneliti dapat menghitung analisa kuantitatif

dari masing-masing komponen. Untuk menghitung masing-masing metode dapat

divisualisasikan ke dalam grafik dua dimensi.

Pada metode analisis GC-MS (Gas Cromatografy Mass Spektroscopy) adalah

dengan membaca spektra yang terdapat pada kedua metode yang digabung tersebut. Pada

spectra GC jika terdapat bahwa dari sampel mengandung banyak senyawa, yaitu terlihat

dari banyaknya puncak (peak) dalam spektra GC tersebut. Berdasarkan data waktu retensi

yang sudah diketahui dari literatur, bisa diketahui senyawa apa saja yang ada dalam sampel.

Selanjutnya adalah dengan memasukkan senyawa yang diduga tersebut ke dalam instrumen

spektroskopi massa. Hal ini dapat dilakukan karena salah satu kegunaan dari kromatografi

gas adalah untuk memisahkan senyawa-senyawa dari suatu sampel. Setelah itu, didapat

hasil dari spektra spektroskopi massa pada grafik yang berbeda. Informasi yang diperoleh

dari kedua teknik ini yang digabung dalam instrumen GC-MS adalah tak lain hasil dari

masing-masing spektra. Untuk spektra GC, informasi terpenting yang didapat adalah waktu

retensi untuk tiap-tiap senyawa dalam sampel. Sedangkan untuk spektra MS, bisa diperoleh

informasi mengenai massa molekul relatif dari senyawa sampel tersebut.

 

Gambar 1. Skema Diagram GC-MS (Kumar, 2015)

2.4 Instrumentasi Gas Chromatography Mass Spectrometry ( GC-MS )
2.4.1.Instrumentasi Gas Kromatografi (Pavia, 2006)
1. Carrier Gas Supply

Gas pembawa (carrier gas) pada kromatografi gas sangatlah penting. Gas yang dapat

digunakan pada dasarnya haruslah inert, kering, dan bebas oksigen. Kondisi seperti ini

dibutuhkan karena gas pembawa ini dapat saja bereaksi dan dapat mempengaruhi gas yang

akan dipelajari atau diidentifikasi.

2. Injeksi Sampel

Sejumlah kecil sampel yang akan dianalisis diinjeksikan pada mesin menggunakan semprit

kecil. Jarum semprit menembus lempengan karet tebal (Lempengan karet ini disebut

septum) yang mana akan mengubah bentuknya kembali secara otomatis ketika semprit

ditarik keluar dari lempengan karet tersebut.

3. Kolom

Ada dua tipe utama kolom dalam kromatografi gas-cair. Tipe pertama, tube panjang dan

tipis berisi material padatan; Tipe kedua, lebih tipis dan memiliki fase diam yang berikatan

dengan pada bagian terdalam permukaannya. Ada tiga hal yang dapat berlangsung pada

molekul tertentu dalam campuran yang diinjeksikan pada kolom:

Molekul dapat berkondensasi pada fase diam.

Molekul dapat larut dalam cairan pada permukaan fase diam

Molekul dapat tetap pada fase gas

2.4.2 Instrumentasi Spekstroskopi Massa (Pavia, 2006)

1. Sumber Ion

Setelah melewati rangkaian gas kromatografi, sampel gas yang akan diuji dilanjutkan

melalui rangkaian spekstroskopi massa. Molekul-molekul yang melewati sumber ion ini

diserang oleh elektron, dan dipecah menjadi ionion positifnya. Tahap ini sangatlah penting

karena untuk melewati filter, partikel-partikel sampel haruslah bermuatan.

2. Filter

Selama ion melui rangkaian spekstroskopi massa, ion-ion ini melalui rangkaian

elektromagnetik yang menyaring ion berdasarkan perbedaan masa. Para ilmuwan

memisahkan komponen-komponen massa untuk kemudian dipilih yang mana yang boleh

melanjutkan yang mana yang tidak (prinsip penyaringan). Filter ini terus menyaring ion-ion

yang berasal dari sumber ion untuk kemudian diteruskan ke detektor.

3. Detektor

Ada beberapa tipe detektor yang biasa digunakan. Detektor ionisasi nyala ( FID ),

merupakan detektor yang umum dan lebih mudah untuk dijelaskan daripada detektor

alternatif lainnya.

Dalam mekanisme reaksi, pembakaran senyawa organik merupakan hal yang sangat

kompleks. Selama proses, sejumlah ion-ion dan elektron-elektron dihasilkan dalam nyala.

Kehadiran ion dan elektron dapat dideteksi. Seluruh detektor ditutup dalam oven yang

lebih panas dibanding dengan temperatur kolom. Hal itu menghentikan kondensasi dalam

detektor.
Hasil detektor akan direkam sebagai urutan puncak-puncak; setiap puncak mewakili satu

senyawa dalam campuran yang melalui detektor. Sepanjang anda mengontrol secara hati-

hati kondisi dalam kolom, anda dapat menggunakan waktu retensi untuk membantu

mengidentifikasi senyawa yang tampak-tentu saja anda atau seseorang lain telah

menganalisa senyawa murni dari berbagai senyawa pada kondisi yang sama.
 BAB III
STUDI KASUS

Jurnal 1

OPTIMALISASI DAN VALIDASI METODE GC – MS/MS UNTUK ANALISIS,

METIL SALISILAT DALAM SAMPEL RAMBUT DAN KULIT UNTUK
DIGUNAKAN DALAM STUDI DEKONTAMINASI RELAWAN MANUSIA
Thomas Jamesa,⁎, Samuel Collinsa, Richard Amlôtb, Tim Marczyloa
a Centre for Radiation, Chemicals and Environmental Hazards (CRCE), Public Health
England, Chilton OX11 0RQ, UK
b Emergency Response Department Science & Technology, Public Health England, Porton
Down, Salisbury, Wiltshire SP4 0JG, UK

1. Pengantar
Studi menggunakan relawan manusia di mana efektivitas intervensi dekontaminasi dapat
dinilai dengan menggunakan bahan kimia simulant yang meniru fisikokimia sifat bahan
kimia yang sangat beracun sementara sisa beracun pada dosis diterapkan .
Metil salisilat (MeS) adalah metil ester asam salisilat dan dengan rumus C6H4(OH)
(CO2CH3. Metil salisilat adalah senyawa alami diproduksi oleh beberapa spesies tanaman,
paling umum aromatic wintergreens.
Sampel kulit dapat dikumpulkan menggunakan perekat D-Squame disc. Setiap disc dapat
menghapus satu lapisan tipis dari Stratum korneum. Sampel seri D-Squame dapat
digunakan untuk menentukan tingkat penetrasi kimia melalui lapisan paling luar kulit.
Sampel rambut yang diambil dapat diaplikasikan pada Post simulant untuk menentukan
efektivitas dekontaminasi, atau pada beberapa titik waktu pasca-paparan untuk
mengevaluasi potensi kontaminasi off-gassing atau gigih. Sampel rambut kemudian
dihapus dari kepala peserta dan im-mersed dalam pelarut yang cocok untuk memulihkan
simulant dari permukaan rambut.
2. Bahan dan Metode
2.1 Reagen dan Bahan
 Metil salisilat (ReagentPlus, ≥ 99%) dan metil salicylate-D4 (98,6%) digunakan
sebagai baku internal
 HPLC Grade Diklorometana (DCM)
 Agen derivatising terdiri dari N, O-bis [trimethylsilyl] trifluoroacetamide (bstfa)
ditambah 1% trimethylchlorosilane (TMCS)
 Katalis derivatisasi piridina Nilai
 CP (grade 99,999%) helium digunakan sebagai gas pembawa
 CP (grade 99,999%) nitrogen digunakan benturan yang diinduksi disosiasi
 D-Squame disc dan disc aplikator untuk tempat sampel kulit
 Clear Screw Top Maximum Recovery vials (1.1 ml) dengan 9 mm silikon/krim putih
PTFE Septa ultra Low Bleed (ULB) screw caps yang digunakan untuk sampel GC
 Sampel manusia yang dikumpulkan dalam vial clear screw top round bottomed
headspace 10 ml (23 × 46 mm)
2.2 Pembuatan Larutan Baku
Sebuah 1 g/ml MeS dalam larutan DCM yang didinginkan dan kemudian
diencerkan dengan DCM untuk membuat larutan 20 μg/ml. Larutan diencerkan secara seri
untuk membuat rentang kalibrasi 0,5; 5; 50; 500 dan 5000 ng/ml, dan tiga quality control
(QC) standtandar 2,5; 250 dan 2500 ng/ml.
Baku Internal dibuat dengan cara yang sama dan kemudian volume campuran dari
Master derivatisasi disiapkan segera sebelum derivatisasi analisis. \
Untuk setiap 100 μL master campuran baku internal ini mengandung 950 μL
BSTFA/TMCS dan 950 μL piridin. Konsentrasi akhir baku internal dalam semua range
kalibrasi, QCs dan sampel adalah 25 ng/ml .
Semua solusi yang disimpan dalam botol disegel, dalam ruang gelap pada suhu
kamar dan didinginkan di atas es sebelum digunakan.
2.3 Pembuatan dari MeS Simulant
The simulant yang digunakan untuk studi dekontaminasi manusia yaitu 1:1
campuran ≥ 99% MeS dan minyak sayur (100% rapeseed minyak). Minyak telah
ditambahkan untuk meningkatkan konsistensi simulant.

2.4 Derivatisasi Standar/Sampel

20 μL dari larutan kalibrasi dan larutan QC dicampur dengan 20 μL campuran
Master baku internal-derivatisasi yang sebelumnya dipanaskan pada 55°C selama 30 menit.
Hal ini untuk memastikan derivatisasi penuh dari molekul target dalam semua sampel (data
tidak ditampilkan).
2.5 Instrumentasi
Analisis GC-MS/MS dilakukan dengan menggunakan AGILENT 7890B gas
Chromatograph yang sama dengan AGILENT 7010B Triple kuadrupol Mass Spectrometer.
Suntikan cairan (1 μL) dicapai dengan menggunakan PAL RTC 120 robot autosampler.
Suhu injektor diatur pada 225°C dan 870 μL AGILENT 5190 – 2295 UI mode Split liner
dengan filter glass wool diatur pada rasio terpisah 1:10 yang digunakan untuk semua
analisis. Kolom GC menggunakan AGILENT DB-5 MS ultra inert (15 m × 250 μm × 0,25
μm) kolom untuk pemisahan kromatografi diikuti oleh in-line phaseless kolom membatasi
AGILENT (2,5 m × 150 μm × 0 μm) melalui PNEUMATICS Control module AGILENT
(PCM) untuk memungkinkan untuk posting target elusi kolom backflush. Oven pada
awalnya diadakan di 70 ° c selama 1 menit kemudian merajam ke 250 ° c di 45 ° c/menit.
Pada 5 min (0,6 min posting MeS elusi di ~ 4,4 min) tekanan inlet berubah menjadi 2 psi
dan PCM meningkat menjadi 45 psi, membalikkan aliran helium melalui tanpa phaseless
Post-kolom.
2.6 Validasi
Metode ini divalidasi sesuai dengan akurasi, presisi, Sensitivity, Koefisien
penentuan, reproduktifitas dan pemulihan. Akurasi dan ketepatan ditentukan melalui
replikasi antara dan intra-hari analisis. Tiga standar, QC rendah (25 ng/ml), Med QC (250
ng/ml) dan QC tinggi (2500 ng/ml) yang disuntikkan ke GC-MS untuk analisis lima kali
per konsentrasi per hari selama tiga hari. Ketepatan dinyatakan sebagai persentase dari
deviasi standar relatif (% RSD) sementara akurasi diberikan sebagai kebenaran (persentase)
dari konsentrasi yang diharapkan.
Sensitivitas metode ditentukan oleh batas kuantifikasi (LOQ) dan batas deteksi
(LOD). LOQ didasarkan pada sinyal terukur terendah di atas 10 × kebisingan latar
belakang, dan LOD adalah sinyal terendah 3 × kebisingan latar belakang.Koefisien
penentuan (R2) dinilai menggunakan lima titik kurva kalibrasi di atas kisaran 0,5 ng/ml –
5000 ng/ml. kurva kalibrasi dibuat segar dan dijalankan secara duplikat dengan setiap
rangkaian sampel.
Reproduktifitas metode ditentukan dengan menganalisis sepuluh replika dari satu
sampel kulit yang diambil dari studi sukarelawan manusia. Sampel adalah lapisan kulit atas
diambil dari No-intervensi (kontrol) peserta. Reproduktifitas didasarkan pada% RSD waktu
retensi dan rasio Area puncak hingga standar internal.
2.7 Aplikasi untuk sampel Manusia
Relawan (n = 10) diberikan dosis 2 μL simulant pada tiga lokasi yang bebas dari
tubuh. Dosis diambil dengan pipet M10 ke lokasi yang telah ditandai. Setelah 30 menit,
enam cakram D-Squame telah diterapkan secara serial dan dikumpulkan dari setiap sisi.
Cakram berturut-turut ditempatkan ke dalam botol headspace OCAP terpisah yang
mengandung 10 ml DCM. Vial pertama berisi cakram 1 dan 2, vial kedua cakram 3 dan 4
dan vial ketiga cakram 5 dan 6. Cakram (1 dan 2) dari sebuah sisi aplikasi dapat
diasumsikan mengandung MeS yang belum tersedia secara biologis , sedangkan cakram
kedua dan ketiga (disc 3, 4, 5 dan 6) berisi MeS yang ditujukan untuk tersedia secara
biologis. Vial yang mengandung cakram 1 dan 2 diencerkan di DCM dengan faktor
pengenceran 50 untuk mengurangi konsentrasi di masukkan ke dalam kurva kalibrasi untuk
analisis.
Untuk aplikasi rambut, sampel rambut (n = 6) diambil dari dua kelompok, n = 3
sampel dari orang yang tidak diketahui paparan langsung ke MeS (kontrol), dan n = 3 staf
studi sukarelawan manusia berpotensi ex-berpose untuk uap MeS selama pelaksanaan studi
(staf studi). Sampel ini dipilih untuk mengidentifikasi Apakah metode ini dapat mendeteksi
endogen MeS yang mungkin telah ditransfer melalui aliran darah ke rambut dari sumber
seperti diet atau produk kosmetik dan membedakan sampel ini dari paparan tingkat rendah
dari melakukan percobaan MeS. Sampel rambut diambil dari kulit kepala di simpul
posterior kepala sesuai dengan pedoman masyarakat rambut pengujian untuk koleksi
sampel. Semua sampel diambil dari relawan dengan rambut panjang (minimal 25 cm) untuk
memberikan sampel massa yang lebih tinggi. Setiap sampel rambut kemudian dimaserasi
menggunakan T-25 ultra-Turrax disperser dan diekstrak lebih dari 72 h melalui pencelupan
di 10 ml DCM. Setelah maserasi dan ekstraksi, Sam-ples disentrifugasi di 7378 × g untuk
memisahkan rambut, minyak dan kotoran, dan sebuah alikuot (1 ml) supernatan telah
dihapus. Supernatan diangkut ke laboratorium dengan pendingin kondisi (4 ° C). Aliquots
(20 μl) dari masing-masing sampel kulit dan rambut diturunkan dengan cara yang sama
dengan standar kalibrasi dan QC
2.8 Pembahasan
2.8.1 Optimasi Metode
Cairan injeksi dipilih daripada headspace, yang digunakan dalam dekontaminasi
MeS sebelumnya diuji coba seperti sampel kulit dan rambut dari uji coba manusia
membutuhkan sampel tidak yang dibersihkan, dan relatif bersih. Ini akan mempercepat
analisis, dan dalam studi pendahuluan kami menemukan kromatografi menjadi
sangat baik ketika injeksi cair digunakan di atas headspace.
Setelah metode derivatisasi ditetapkan, oven GC disesuaikan untuk memastikan
perputaran sampel volume tinggi tanpa compromising intensitas dan resolusi puncak.
Dengan oven dengan cepat, MeS dan MeS D4 dielusi dalam 4,41 menit, berkontribusi pada
peningkatan yang nyata dalam runtime (7,6 mnt), memungkinkan untuk analisis 25 sampel
setiap 4 jam (termasuk kesetimbangan), peningkatan yang signifikan metode yang
dijelaskan sebelumnya; proyek ORCHIDS (sekitar 20 mnt / sampel tidak termasuk inkubasi
headspace) dan Spiandore et al. (18.75 mnt / sampel) . Inovasi hemat waktu tambahan
dan peningkatan ketahanan sistem adalah penggabungan a backflush kolom untuk
menghapus komponen titik didih tinggi sebelum mereka mencapai kolom analitis dan
karena itu menghindari kebutuhan akan tinggi.
Selain itu, perbaikan signifikan terhadap analisis MeS dibuat dibandingkan dengan metode
ORCHIDS karena kemampuan yang lebih besar dari spektrometer massa triple quadrupole.
Analisis dalam mode MRM memberi selektivitas dan spesifisitas lebih tinggi dibandingkan
dengan Pemantauan Ion Tunggal (SIM) mode.
2.9 Kesimpulan
Kesimpulannya, dalam mengembangkan dan mengoptimalkan metode analisis yang
cepat dan kuat untuk analisis MeS di rambut dan kulit menggunakanGC-MS/MS
Metode ini lebih akurat dan lebih tepat daripada studi pra-vious, dengan LOQ dan LOD
yang lebih rendah, pemulihan yang lebih tinggi, sen-sitivity yang lebih tinggi dan
throughput sampel yang lebih cepat. Novel menggunakan agen derivatising dengan katalis,
dan GC backflush dengan spektrometri massa tandem memungkinkan metode untuk
berhasil diterapkan pada sampel kulit dan rambut dari uji coba sukarela manusia
dekontaminasi. Metode berhasil terkuantifikasi MeS di beberapa lapisan Stratum korneum,
serta MeS diterapkan pada rambut, dan bisa membedakan antara rambut yang dikumpulkan
dari staf percobaan secara tidak langsung terkena MeS dan kontrol dengan tidak diketahui
paparan MeS. Metode ini dapat diterapkan untuk menghasilkan data yang kuat dalam studi
intervensi dekontaminasi memanfaatkan MeS sebagai simulant. Selain itu, kemampuan
untuk mendeteksi MeS di rambut individu in-langsung terkena MeS menunjukkan bahwa
rambut dapat digunakan untuk memantau paparan sekunder di responden pertama
mengambil bagian dalam latihan dan pelatihan yang decontami-bangsa massa.
Jurnal 2
DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A GC-MS METHOD FOR
THE DETECTION AND QUANTIFICATION OF CLOTIAPINE IN BLOOD AND
URINE SPECIMENS AND APPLICATION TO A POSTMORTEM CASE
Giulio Mannocchi, Flaminia Pantano, Roberta Tittarelli,Miriam Catanese,
Federica Umani Ronchi, and Francesco Paolo Busardò

1. Pendahuluan
Clotiapine adalah obat antipsychotic atypical dari golongan dibenzothiazepine yang
diperkenalkan di beberapa negara di Eropa pada tahun 1970 dan efisien untuk pengobatan
pasien Schizophrenia yang telah resisten. Terdapat sedikit sekali data tentang konsentrasi
terapeutik dan Toksik pada obat ini. Clotiapine memiliki Struktur kimia yang mirip dengan
clozapine. Mekanisme kerja dari neuroleptic ini adalah karena downregulasi dari reseptor
5HT2. Selain itu clotiapine juga memperlihatkan afinitas yang besar pada reseptor 5HT-3,6.
Hal ini menunjukkan bahwa clotiapine juga bekerja pada reseptor dopamine.
Pada beberapa literature, kemungkinan terjadi peningkatan resiko aritmia ventrikel dan
kematian jantung mendadak dilaporkan. Selain itu, Clotiapine dapat menyebabkan
kematian apabila berinteraksi dengan obat/zat lainnya seperti Clomipramine, alcohol,
Citalopram, dan Mirtazapine.
Investigasi toksikologi dalam menentukan penyebab kematian memainkan peran penting.
Pada kasus kematian yang tidak secara langsung dikaitkan dengan keracunan tapi
berhubungan dengan mekanisme farmakologi yang dapat berkontribusi dalam
pengembangan sndrom multifactorial yang kompleks , identifikasi obat yang terlibat
penting dlakukan untuk membantu dalam menentukan penyebab kematian.
Pada jurnal ini , sebuah metode untuk mendeteksi dan mengkuantifikasi Clotiapine pada
sampel darah dan urin telah dikembangkan dan di validasi secara penuh berdasarkan
guideline dari Peters et al. Metode ini juga kemudian diaplikasikan pada kasus postmortem.
Metode validasinya bekerja pada protein spiked pada sample darah dan urin. Sampel
diekstraksi dengan teknik ekstraksi cair –cair pada pH 8,5 menggunakan pelarut n-hexane /
dichloromethane dan dianalisis menggunakan GC-MS
2. Studi Kasus
Seorang laki laki berusia 45 tahun dengan tinggi badan 185 cm dan berat badan 95 kg telah
meninggal di tempat tdurnya d apartemen prbadnya. Keluarga hanya memberkan sedkt
nformas tentang gelagat kematiannya, tetapi anamnesa yang dilakukan postf mempunya
penyakt mental (sczophrena) telah dlaporkan. Autopsi dan analisa tokskologi penuh sedang
di lakukan.
Hasil autopsy
Pada pemeriksaan luar hanya menunjukkan pembengkakan perut yang luar biasa. Pada
pemeriksaan bagian dalam, menujukkan edema paru moderat dan adanya retensi urin yang
massif : kandung kemih mengandung 3,7 L urine. Ginjal ( berat 270 gr pada ginjal kanan
dan 260 gr pada ginjal kiri) tertandai sangat padat. Bukti patologi dengan kombinasi dengan
Schizophrenia bahwa mekanisme famakologi pada pasien schizophrenia dapat
menyebabkan retensi urin yang massif.
3. Metode Percobaan
Alat dan Sampel :
Sampel : darah tepi ( 15 ml ), Urine (40 ml ) dan isi lambung (40 ml) yang diambil selama
autopsy dan disimpan pada suhu -200C. Baku internal yang dipilih untuk uji kuantitatif
Clotiapine pada sampel biologi adalah methadone-d9. Standar referens untuk Clotiapine d
bel dar ALSACHM. Ethyl acetate, n-hexane, dichloromethane, air suling ultra murni dan
deionisasi.
Standar Preparasi :
Blangko sampel urin dan darah digunakan untuk mempersiapkan standar kurva kalibrasi,
diperoleh dengan fortifikasi dengan standar clotiapine yang bersertifikat pada rentang
konsentrasi dari 10 sampai 200 ng/ml. Ditambahkan 500 ng methadone-d9, pada tiap
sampel sebagai baku internal. Sampel yang digunakan untuk menentukan akurasi, presisi
dan pemulihan metode yang disiapkan diatas.
Prosedur ekstraksi :
Blanko urin dan sampel darah d ektraksi berdasarkan prosedur : Kedalam 1 ml pad tiap
sampel , tambahkan air deionisasi dan 500 ng methadone-d9. Sampel di ekstraksi pada pH
8,5 ( ditambahkan 50 mg buffer HCO3-/CO3--) dengan 4 ml larutan pengekstraksi (n-
hexane/dichloromethane (85/15 v/v)) yang telah diaduk selama 15 menit. Setelah d
sentrifugasi (4000 rpm,3 min) lapisan organic diuapkan sampai kering di bawah aliran gas
nitrogen. Residu dilarutkan dalam 50 µl ethyl acetate. Sampel Isi lambung di ekstraksi
berdasarkan prosedur yang telah disebutkan di atas.
4. Instrumentas dan kondisinya
Analisis dilakukan pada Instrument kromatografi gas Agilent HP 7028A GC berpasangan
dengan Agilent MSD 5975. Kolom kapilari yang digunakan adalah HP-5MS(17 m x 0,25
mm .D. dbungkus dengan lapsan flm 0,25µm). Konds GC sebaga berkut : temperature
kolom diprogram dari 1250C ke 2900C dengan penngkatan sebesar 100C per ment;
temperatur port njeks dan transfer lne berada pada suhu 2700C; Helum dgunakan sebaga
gas pembawa pada laju alran 1 ml per menit ; rasio pemisahan adalah 15 : 1. Alat analisa
massa dioperasikan dengan impact electron (70 eV) pada monitoring ion selectif (SiM).
Analisa kuantitatif dilakukan dengan perekaman ion m/z 209-244-343 untuk clotiapine dan
m/z 78-165-303 untuk methadone-d9.
5. Metode Validasi
Selektivitas di evaluasi dengan menganalisis matriks dari 6 jenis blanko ( darah dan urin
yang diambil dari proses autopsi) diproses dengan 1 sampel zero ( matriks blangko dengan
baku internal ), memferifikasi adanya gangguan sinyal. Model kalibrasi dipilih dengan
menganalisa 6 level konsentrasi mulai dari 10 ng/ml sampai 2000 ng/ml dan tiap level di
evaluasi dalam rangkap tiga dengan model linear. Akurasi dan presisi diperkirakan dari
analisis quality control sampel pada konsentrasi rendah ( mendekati batas rendah
kuantifikasi (LLOQ) dan konsentrais tinggi (2000 ng/mL) dalam lima rangkap pada tiap
level. Kriteria penerimaan untuk akurasi adalah berkisar antara ±15 % dari nilai nominal
( ±20% mendekati LLOQ), untuk presisi adalah berkisar antara ±15% dari standar deviasi
relative (20% mendekat LLOQ). LOD di tentukan dengan menganalisis protein spiked
pada sampel dengan penurunan level konsentrasi analit. Untuk LOD nilai dari rasio signal
to noise yang dipilih adalah sama atau lebih besar dari 3 (S/N >3). LLOQ ditentukan
dengan menganalisis sampel fortifikasi dengan penurunan level konsentrasi analit. Untuk
LLOQ nilai dari rasio signal to noise yang dipilih adalah sama atau lebih besar dari 10 (S/N
>10). Recovery dikalkulasi dengan menganalisis ekstrak protein spike sampel pada
konsentrasi tngg dan rendah yang berhubungan dengan kurva kalbrasi, dbandingkan dengan
sampel control.
6. Hasil
Hasil validasi. Metode di validasi dengan menginvestigasi parameter parameter berikut ini :
linearity, selectivitas, identifikasi LOD dan LLOQ, presisi, akurasi, dan recovery. Hasilnya
dapat dilihat pada tabel 1.

Table 1: Method validation parameters and data.

Accuracy (biasPrecision (RSD Recovery

Selectivity Linearity ( 2)%) %) LOD LLOQ (%)
Low High Low High Low High
No interference 1.2 3.9
Urine signals 0.9997 18 −0.6 14 3.2 ng/mL ng/mL 103 99
No interference 1.3 4.3
blood signals 0.9996 −18 −0.5 19 3.0 ng/mL ng/mL 93 95
Plot kalibrasi menunjukkan linearitas yang baik dengan koefisien determinan 0,9996 dan
0,9997 pada sampel darah dan urin.
7. Temuan toksikologi
Skrining toksikologi, dibentuk dengan teknik imunokimia, mengungkapkan tidak adanya
zat yang biasanya disalahgunakan. Asupan alkohol dikeluarkan dengan melakukan analisis
menggunakan HS-GC-FID. Skrining analsis menggunakan GC-MS dilakukan untuk
mengevaluasi keberadaan obat yang dapat menyebabkan retensi urin (berdasarkan data
anamnese) yang terbawa kedalam darah dan urin. Clotiapine ditemukan di kedua matriks.
Setelah itu, analisis toksikologis, menggunakan metode validasi yang dijelaskan disini
mengambil konsentrasi berikut: 1,32, 0,49, dan 1,85 g / mL pada darah tepi, urin, dan s
lambung. Tidak ada obat lain ataupun Alkohol yang terdeteksi dalam sampel biologis.
Mode pemindaian penuh kromatogram dan spektra massa serta mode SIM kromatogram,
mengindikasikan adanya clotiapine dan methadone-d9, yang diperoleh dari analisis sampel
darah, ditunjukkan dalam Gambar 3 dan 4, masing-masing. Pada Gambar 3, puncak dari
ion yang diekstraksi digunakan untuk analisa kualitatif dan kuantitatif clotiapine (terlihat.
Waktu retensi clotiapine juga ditunjukkan pada gambar yang sama di menit ke 8,755 menit.
Pada Gambar 4, kromatogram mode SIM dari analit yang tertarik ( m/z : 303 untuk
methadone-d9 dan m/z : 343 untuk clotapne) juga dberikan. Waktu retensi terekam untuk
metadon-d9 dan clotiapine adalah masing-masing 6,461 dan 8,762.
8. Diskusi Dan Kesimpulan
Metode GC-MS untuk deteksi dan kuantifikasi clotiapine dalam sampel darah dan urin
telah mengalami pengembangan, tervalidasi, dan sukses di aplikasikan ke sampel
sebenarnya. Penerapan metode pada kasus fatal yang melibatkan subjek yang berusa 45
tahun dengan schizoprenia memungkinkan untuk mengidentifikasi clotiapine pada
konsentrasi yang sangat tinggi dalam darah, urine, dan isi lambung. Adanya clotiapine pada
isi lambung menunjukkan adanya penggunaan oral. Karena karakteristik penenang yang
luar biasa pada zat ini, almarhum tidak mungkin berada dalam keadaan untuk menyadari
dan menghadapi gejalanya. Perhatian khusus direkomendasikan ketika merawat pasien
dengan retensi urin (terutama karena hipertrofi prostat). Lebih dari itu, tidak dianjurkan
untuk digunakan bersama antara agen antikolinergik dan clotiapine, sejak adanya informasi
yang terbaru dimana dapat menyebabkan efek berbahaya termasuk gangguan penglihatan,
sembelit, retensi urin, kemungknan peningkatan tekanan intraokular dan mulut kering.
Dosis lethal 50 (LD 50) setelah penggunaan oral pada mencit, tikus, dan babi adalah
masing masing 272, 480, dan 154 mg/kg. meskipun, efek terapeutk, efek toksik dan dosis
fatal pada manusia belum dtemukan secara baik. Konsentrasi clotiapine plasma ditemukan
pada 12 pasien yang diobati clotiapine dengan rentang 0,006 sampai 0,155 mg/L ( rata rata
0,046 mg/L) sementara terdapat konsentrasi clotiapine pada 7 kasus autopsi yang dlaporkan
dengan rentang 0,022 sampa 0,341 mg/L ( rata rata 0,123 mg/l). Meskipun begitu, pada
penelitan terakhir, clotiapine hanya berkontribusi dalam kasus kematian yang diakibatkan
oleh keracunan multidrug, belum ada kematian yang disebabkan oleh keracunan tunggal
clotiapine.
Pada kasus ini penyebab dari kematian berdasarkan autopsi dan penemuan tokskologi
dkaitkan dengan adanya postrenal cedera ginjal akut karena retensi urin ( 3.7 L urin pada
kantung kemih ).
Jurnal 3
KROMATOGRAFI GAS-SPEKTROMETRI MASS. PRINSIP DASAR,
INSTRUMENTASI, DAN APLIKASI PILIHAN UNTUK DETEKSI SENYAWA
ORGANIK
J. Sneddon, S. Masuram, dan J. C. Richert Departemen Kimia, Universitas Negeri
McNeese, Lake Charles, Louisiana

1. Pengantar
Tinjauan mini ini menjelaskan prinsip-prinsip dasar dan instrumentasi yang digunakan
untuk GC-MS. Ini tidak dimaksudkan sebagai tinjauan komprehensif GC-MS tetapi lebih,
memberikan pembaca dengan pengetahuan untuk memahami "cara kerjanya". Tujuan
utama dari tinjauan ini adalah untuk menyajikan tinjauan umum aplikasi GC-MS yang baru
dan dipilih, khususnya dalam penentuan senyawa organik yang mudah menguap dan semi-
volatil dalam analisis tanah dan bidang yang terkait erat dengan sedimen dan perairan
terkait.
2. Prinsip Dasar Dan Instrumentasi
Ketika dua teknik terpisah seperti kromatografi gas (GC) dan spektrometri massa (MS)
berhasil digabungkan untuk membentuk spektrometri kromatografi gas (GC-MS),
keuntungan menjadi jelas. GC dapat memisahkan banyak senyawa yang mudah menguap
dan semi-mudah menguap tetapi tidak selalu secara selektif mendeteksinya sedangkan MS
dapat secara selektif mendeteksi banyak senyawa tetapi tidak selalu memisahkannya.
Kekhawatiran awal untuk GC-MS adalah perbedaan signifikan dalam tekanan - gas GC
yang keluar dari sistem berada di sekitar satu atmosfer (760 torr) sedangkan MS beroperasi
pada ruang hampa sekitar 1025-1026 torr. Jika aliran gas GC rendah (beberapa ml / menit)
dan kecepatan pemompaan sistem vakum MS tinggi (beberapa ratus liter per detik) maka
semua cairan GS dapat dialirkan ke dalam MS. Ini adalah pendekatan yang paling banyak
diadopsi untuk kolom kapiler GC. Saat ini untuk kapiler GC-MS, kolom kapiler
dimasukkan langsung ke sumber ion. Ketika efluen (senyawa individu) terelusi dari GC,
mereka memasuki MS, biasanya dan yang paling umum adalah detektor ionisasi elektron.
Perangkap ion atau penerbangan waktu dapat digunakan untuk menghasilkan ion. Pada saat
ini, mereka dibombardir oleh aliran elektron yang menyebabkan mereka terfragmentasi.
Massa fragmen dibagi dengan muatan adalah rasio muatan massa (M / Z). Hampir selalu
muatannya adalah -1, dan rasio M / Z mewakili berat molekul fragmen. Sekelompok empat
elektromagnet, quadrupole, memfokuskan setiap fragmen melalui celah ke detektor.
Quadrupole ini diprogram oleh komputer untuk mengarahkan hanya fragmen tertentu.
Komputer memiliki quadrupole, yang menggilir fragmen-fragmen ini satu per satu
(memindai) sampai kisaran M / Z pulih. Ini menghasilkan spektrum massa yang merupakan
grafik intensitas sinyal (kelimpahan relatif) versus rasio M / Z (pada dasarnya berat
molekul). Setiap senyawa memiliki sidik jari yang unik dan perangkat lunak tersedia untuk
menyediakan perpustakaan spektrum untuk senyawa yang tidak diketahui. Baru-baru ini,
tiga dimensi GC-MS telah menjadi populer. Singkatnya, GC-MS adalah teknik yang ideal
untuk penentuan kualitatif dan kuantitatif senyawa organik yang mudah menguap dan semi-
volatil dalam berbagai macam sampel. Batas deteksi serendah sub-ng dimungkinkan.
Sampel harus dalam larutan untuk disuntikkan ke dalam GC. Ini bisa berupa pelarutan
dalam pelarut, biasanya diklorometana atau ekstraksi (dengan soxhlet, yang merupakan
metode kami yang paling banyak digunakan untuk mengekstraksi hidrokarbon dari tanah).
Instrumentasi lengkap tipe Bench termasuk komputer dan perangkat lunak untuk pencarian
perpustakaan tersedia untuk penelitian dan banyak digunakan dalam pengajaran dari sekitar
$ 50.000 (massa berkisar antara sekitar 200-700). Sistem yang lebih canggih yang
digunakan hampir secara eksklusif untuk biaya penelitian hingga $ 250.000 tetapi mampu
rentang massa dari sekitar 20 hingga beberapa ribu.
3. Aplikasi Terpilih Untuk Penentuan Senyawa Organik
Sampel dianalisis untuk total karbon organik dan sejumlah sifat kimia dan fisik lainnya
(Schnitzer et al. 2006). Tanah perawan dan hasil budidaya di situs No. 4 dipilih untuk
analisis yang lebih rinci oleh cross-polarization magic angle spinning (CP-MAS) 13C
NMR, Curie-pointpyrolysis-gas chromatograph-mass spectrometry (Cp-Py-GC-MS), dan
dengan spektrometri massa ionisasi pirolisis-lapangan (Py-FIMS). Penanaman jangka
panjang menghasilkan penurunan signifikan dalam jumlah total bahan organik tanah
(SOM), sebagaimana diwakili oleh total karbon organik tanah. Ada peningkatan yang
signifikan dalam aromatikitas dari SOM sebagai hasil dari penanaman jangka panjang
seperti yang ditunjukkan oleh spektroskopi CP-MAS 13C NMR. Hal ini terutama
disebabkan oleh hasil degradasi karbon alifatik yang ditingkatkan budidaya relatif terhadap
karbon aromatik. Senyawa organik yang diidentifikasi dalam spektrum Cp-Py-GC-MS dari
tanah utuh yang diolah di situs No. 4 terdiri dari n-alkana (mulai dari C11 hingga C22) dan
alkena (mulai dari C7: 1 hingga C21: 1), dengan tanah utuh yang lebih kaya di alkena
daripada tanah yang diolah. Komponen lain yang diidentifikasi adalah aromatik siklik,
carbo-siklik, aromatik yang mengandung N, heterosiklik N, benzena dan benzen
tersubstitusi, fenol dan fenol tersubstitusi, serta furan tersubstitusi. Senyawa-senyawa yang
diidentifikasi nampaknya berasal dari rantai panjang alifatik, lignin, polifenol, aromatik,
polisakarida, dan senyawa yang mengandung N di dua tanah. Sementara senyawa serupa
diidentifikasi oleh Py-FIMS di dua tanah, intensitas ion total (TII) dari tanah perawan
hampir 2,5 kali lebih tinggi dari tanah yang dibudidayakan. Hal ini menunjukkan bahwa
budidaya membuat bahan organik lebih tidak mudah menguap, baik dengan mendukung
pembentukan bahan organik dengan berat molekul lebih tinggi atau dengan
mempromosikan pembentukan kompleks bahan logam non-volatil. Spektra Py-FIMS
menunjukkan bahwa tanah utuh mengandung dimer lignin, lipid, sterol, dan n-C16 yang
relatif lebih banyak terhadap asam lemak n-C34 daripada tanah budidaya. Dengan
demikian, sebaliknya, tanah yang ditanami lebih kaya karbohidrat, fenol dan monomer
lignin, aromatik aromatik dan senyawa yang mengandung N, termasuk peptida, daripada
tanah perawan. Bahan organik tanah (SOM) dalam lima cakrawala tanah dari Arktik tundra
dan satu tanah dengan konfigurasi temperatelah dikumpulkan dan diuraikan menjadi fraksi
yang dapat diekstraksi (EF) dan fraksi yang tidak dapat diekstraksi (NEF) oleh alkali encer.
Metode fraksinasi klasik yang dimodifikasi diterapkan untuk mengkarakterisasi SOM di
EF; dan skema fraksinasi kimia basah, pemintalan sudut silang polarisasi silang (CP-MAS)
13C NMR, dan teknik pirolisis-gas kromatografi-spektrometri massa (Py-GC-MS)
digunakan untuk mengkarakterisasi SOM di NEF. Masing-masing metode ini memberikan
informasi tentang senyawa kimia SOM pada berbagai sudut. NEF terdiri dari sejumlah
besar SOM di tanah tundra Arktik ini dan memiliki potensi besar untuk memengaruhi
siklus karbon di ekosistem ini dengan pemanasan iklim. Hubungan antara kimia, biokimia,
dan karakteristik spektroskopi zat humat dan mineralogi tanah liat telah dipelajari.
Kompleks tanah liat-humik dipisahkan dari tanah Webster (Tipikal Endoaquoll super-
loamy, campuran, superaktif) dengan teknik sentrifugasi sonikasi-invasif. Sampel dianalisis
untuk mineralogi dengan XRD (difraksi sinar-X), komposisi kimia dengan spektroskopi
emisi optik plasma ditambah (ICP-OES), C dan N oleh termalpembakaran, kimia C oleh
benda padat 13C magic angle spinning-NMR spectroscopy (MAS-NMR), dan keduanya
GC dan GC-MS. Kelayakan dari berbagai prosedur pembersihan dipelajari untuk penentuan
hidrokarbon aromatik polisiklik (PAH) dalam sampel biota seperti tiram, kerang, dan hati
ikan. Setelah sampel diekstraksi — pada dasarnya dengan aseton dan dalam sistem
microwave — dan sebelum mereka dapat dianalisis dengan kromatografi gas-spektrometri
massa (GCMS), tiga pendekatan berbeda dipelajari untuk langkah pembersihan: ekstraksi
fase padat (SPE), saponi fi kasi dengan bantuan gelombang mikro (MAS), dan
kromatografi permeasi gel (GPC). Tujuan utama dari pekerjaan ini adalah untuk
memaksimalkan pemulihan PAH dan untuk meminimalkan keberadaan senyawa yang
mengganggu dalam ekstraksi terakhir. Dalam kasus SPE, kartrid Florisil 1, 2, dan 5 g, dan
kartrid silika 5 g dipelajari. Dalam hal ini, dan dengan tiram dan kerang, ekstraksi
berbantuan gelombang mikro, dan 5 g kartrid Florisil memberikan hasil yang baik. Selain
itu, konsentrasi yang diperoleh untuk Bahan Referensi Standar (SRM) NIST 2977 (jaringan
kerang) sesuai dengan nilai yang disertifikasi. Dalam kasus sapifikasi dengan bantuan
gelombang mikro, ekstraknya tidak sebersih yang diperoleh dengan 5 g Florisil dan fakta
ini menyebabkan terlalu tinggi konsentrasi PAH terberat. Akhirnya, ekstrak terbersih
diperoleh oleh GPC. Metode ini berhasil diterapkan pada kerang, tiram, dan hake hati, dan
hasil yang diperoleh untuk NIST 2977 (jaringan kerang) berada dalam interval kepercayaan
dari bahan referensi tersertifikasi untuk sebagian besar analit bersertifikat. Efek evolusi
termal pada komposisi dan struktur zat humat akuatik (AHS) dipanaskan pada suhu 100
hingga 5008C di hadapan helium diselidiki menggunakan analisis unsur, FTIR, keadaan
padat 13C CP-MAS NMR spektroskopi, dan spektrometri Py-GCMS. Hasil komposisi
unsur menunjukkan bahwa dengan peningkatan suhu pemanasan, ada peningkatan rasio H /
C atom dan penurunan rasio O / C atom di AHS. Hasil FTIR, solid state 13C CP / MAS
NMR, dan Py-GC-MS menunjukkan penurunan jumlah kelompok yang mengandung oksi,
diikuti dengan menghilangnya mereka berikutnya pada suhu yang lebih tinggi.
Pembentukan aromatik diamati dengan mengorbankan alifatik pada suhu yang lebih tinggi.
Studi ini telah memberikan sejumlah besar informasi tentang kehilangan massa, evolusi
struktural, dan tingkat kematangan ketika zat humik dipanaskan dengan meningkatnya
suhu, menunjukkan bahwa evolusi termal mungkin memainkan peran penting dalam
kontribusi AHS sebagai pendahulu dari batu bara seperti bahan organik. Dalam 10 tahun
terakhir, PETROBRAS telah mengalami tumpahan minyak yang signifikan dan Pusat
Penelitian PETROBRAS (Brasil) memainkan peran penting dalam program tanggap darurat
perusahaan dengan mengkarakterisasi tumpahan minyak, memantau ekosistem yang
terkena dampak, menentukan nasib minyak di lingkungan, dan selanjutnya, membantu
perusahaan menilai kerusakan lingkungan. Penggunaan metode analitik kimiawi yang
canggih (kromatografi gas- deteksi ionisasi api, pembersihan dan perangkap deteksi
kromatografi gas-foto-ionisasi, dan GC-MS) dalam beberapa studi tumpahan minyak Brasil
untuk menentukan fraksi dan hidrokarbon minyak bumi individu dalam matriks yang
berbeda, misalnya air, air tanah, sedimen, pasir, ikan, dan tumpahan minyak, dibahas. Studi
tumpahan meliputi pelepasan minyak mentah dan bahan bakar pada ekosistem darat dan
pesisir yang terkait dengan insiden di Teluk Guanabara (Rio de Janeiro), sungai Barigui dan
Iguassu (Parana), dan Saluran Sao Sebastiao (Sao Paulo). Hidrokarbon minyak bumi total,
nalkana, isoprenoid, campuran kompleks yang tidak terselesaikan, senyawa monoaromatik
yang mudah menguap (benzena, toluena, etilbenzena, dan xilena), induk dan hidrokarbon
aromatik poliklik aromatik (PAH) yang teralkilasi, dan terpanes dan dicirikan dengan
minyak untuk menentukan korelasi dengan minyak. dan sumber-sumber minyak lainnya
serta penilaian lingkungan. GC-MS digunakan untuk studi polusi di wilayah Slovenia.
Ekstraksi dengan metanol dalam HCl dan etilasi dengan Na-tetraethyl borate digunakan.
Akurasi dinilai menggunakan jaringan kerang standar. Analisis sedimen di daerah yang
tidak terpapar mengindikasikan rendahnya tingkat polusi dengan OTC sementara di marina
dan di galangan kapal, tingkat polusi yang moderat ditemukan. Analisis kerang
menunjukkan tingkat polusi yang lebih tinggi oleh tributlytin (TBT) dan produk
degradasinya di musim panas daripada di musim dingin. Diamati bahwa fenitin tidak
terdeteksi. Sebuah metode untuk mendeteksi senyawa berbasis benzofenon hadir dalam
sampel air, tanah, darah, dll. Dengan secara bersamaan bereaksi dengan trifloroasetamid
dan memperoleh turunan benzofenon, dijelaskan. Metode ini terdiri dari langkah-langkah
ekstraksi senyawa berbasis benzofenon yang ada dalam sampel dengan pelarut organik, dan
mereaksikan ekstrak ini dengan trifloroasetamida, untuk membuat turunan benzofenon
untuk kuantisasi berikutnya dan / atau kualitatif turunan benzofenon langsung oleh GC-MS.
Lebih disukai sampel dipilih dari kelompok yang terdiri dari air, tanah, dan darah; pelarut
organik dipilih dari kelompok yang terdiri dari di-etil eter, heksana, kloroform, etil asetat,
diklorometana, dan alkohol C1-C4 dengan berat molekul rendah; dan langkah pertama
dilakukan pada suhu 80-1008C selama 30 menit atau lebih. Sampel CH2Cl2 yang
diekstraksi dari limbah industri yang dikumpulkan dari GIDC Vapi dan GIDC Ankaleshwar
(Gujarat) dicatat untuk Infra-Red (IR) dan GC-MS. Beberapa senyawa organik ditemukan
termasuk pestisida organofosfor. Senyawa ini pada akhirnya mempengaruhi kualitas tanah
dan air tanah di daerah tersebut. Kopling langsung dari headspace sampler dengan
spektrometer massa diusulkan sebagai alat skrining untuk deteksi cepat polusi tanah oleh
hidrokarbon dari minyak bumi dan turunannya. Sampel dikenai proses pembuatan
headspace, tanpa perlakuan sebelumnya, dan volatil yang dihasilkan dimasukkan langsung
ke dalam spektrometer massa, dengan demikian memperoleh sidik jari dari sampel yang
dianalisis. Perlakuan sinyal yang sesuai dengan teknik kemometrik memungkinkan
karakterisasi tegas dari berbagai jenis sampel. Penggunaan kromatografi gas cepat dengan
detektor spektrometer massa yang digabungkan dengan sampler headspace memungkinkan
identifikasi hidrokarbon utama yang ada dalam mineral dan sampel tercemar organik;
interpretasi hasil yang diperoleh, dan menunjukkan potensi analitis kopling spektrometri
massa-ruang. Empat aplikasi terbaru dari pirolisis analitik dalam sains dan teknik
lingkungan dibahas. Dalam semua aplikasi, sampel dianalisis untuk memberikan informasi
tentang asal-usul bahan organik atau perubahan ke matriks organik. Dalam aplikasi
pertama, GC / MS dan deteksi ionisasi pirolisis-GC / api (FID) digunakan untuk
mengklasifikasikan asal bahan organik alami (NOM) yang terkubur di Antartika. Dalam
aplikasi kedua, pirolisis-GC-MS digunakan untuk membandingkan kekambuhan NOM
dengan biodegradasi. Dalam aplikasi ketiga, pirolisis-GC-FID digunakan untuk
membedakan secara kuantitatif antara NOM lipogenik dan polusi minyak bumi di tanah
yang sangat organik. Dalam aplikasi keempat, pirolisis-GC-MS digunakan untuk mencari
sidik jari bahan organik dalam sampel air untuk menggambarkan hubungan antara air
permukaan, air tanah, dan mata air di daerah aliran sungai yang kompleks. Dalam semua
aplikasi, manfaat analisis pirolisis masih ditemukan. Sebuah metode untuk menentukan
semua fenol, alkilfenol, dan klorofenol dalam bahan organik yang diekstraksi dari sedimen
dasar disajikan. Prosedur analitis terdiri dari ekstraksi dengan diklorometana dalam bidang
ultrasonik, pemisahan senyawa asam menggunakan ekstraksi asam-basa, dan penentuan
fenol dan klorofenol menggunakan GC-MS. Metode ini telah menunjukkan keberadaan
fenol, turunan alkilnya, dan klorofenol, yang terakhir dalam jumlah yang tidak signifikan.
Pengumpulan dan analisis polutan organik di kedalaman tanpa membawa tanah ke
permukaan dijelaskan. Probe thermal cone penetrometer (TECP) probe digunakan untuk
mengekstraksi organik semi-volatile yang terikat tanah, memindahkannya ke permukaan
untuk analisis GC-MS yang sangat cepat. Temuan menunjukkan bahwa bifenil
poliklorinasi, hidrokarbon aromatik polisiklik, pestisida terklorinasi, dan bahan peledak
dapat dikumpulkan dan dianalisis dalam 5 menit ketika kadar air tanah 20% dan dalam 15
menit ketika kadar air tanah 20-35%. Ketika TECP terhubung langsung ke GC-MS, TNT
dan empat prekursor sintetiknya ditentukan dalam 20 detik. Selain itu, 51 senyawa organik
yang mudah menguap terdeteksi oleh spektrometri massa membraninlet dalam waktu
sekitar 10 detik. Bahan organik diendus dari botol dan diidentifikasi menggunakan
perangkat lunak pendeteksi sidik jari. Algoritme menyediakan cara untuk menguraikan
spektrum massa kompleks yang memungkinkan real-time, deteksi hidung elektronik, dan
identifikasi oleh MS. Metode menggunakan sistem headspace-GC-MS untuk mendeteksi
senyawa organik yang mudah menguap di dalam air dijelaskan. Metode ini sesuai dengan
persyaratan kinerja untuk analisis air minum. Pengaturan dan parameter peralatan diberikan
bersama dengan daftar senyawa yang berhasil dideteksi. Suatu metode diusulkan untuk
penentuan senyawa organik jejak seperti PCB, dioksin, hormon, plastik bekas, bahan
peledak, agrokimia, dan obat-obatan . Perangkat ini terdiri dari spektrofotometer UV-Vis,
penyerap fase padat, dan detektor. Silika gel atau alumina digunakan sebagai adsorben
untuk mengumpulkan senyawa organik target. GC-MS, detektor penangkap elektron-GC,
atau detektor penangkap elektron-GC-MS digunakan untuk deteksi. Metode ini dapat
digunakan untuk memantau senyawa berbahaya dalam air alami dan air limbah. Sebuah
metode untuk pengumpulan sedimen sungai dan ekstraksi polutan mikroorganisme
selanjutnya disajikan. Konfigurasi aliran kontinu adalah metode yang efisien untuk
mengumpulkan endapan tersuspensi dan bed. Para penulis menyatakan bahwa itu terutama
berlaku untuk pengambilan sampel lingkungan polutan organik karena pemisahan langsung
dari tahap padat dan cairan. Suatu metode analitis dijelaskan untuk ekstraksi fluida
superkritis (SCP) dari berbagai polutan organik umum dari sedimen tersebut, termasuk
pestisida (mulai dari karakteristik kimia mulai dari herbisida triazin hidrofilik hingga
hidrofobik insektisida piretroid hidrofobik) dan hidrokarbon polyaromatik. Polutan
persisten (dioksin) dikumpulkan dengan pelarut (asetonitril dan aseton), konsentrasinya
ditentukan oleh fotometri serapan (240-320 nm), teradsorpsi (dengan silika gel) dan
leaching dengan pelarut non-polar, dan ditentukan oleh GC-MS Suatu metode untuk
penentuan PCB dan dioksin dalam limbah dan air pemrosesan diusulkan (Tsukahara et al.
2002). Senyawa diadsorpsi pada silika gel atau fase padat alumina diikuti oleh elusi dan
pengukuran kuantitatif dan kualitatif. Pelarut non-polar seperti n-heksana, metanol, etanol,
toluena, diklorometana, atau asetonitril digunakan untuk elusi. Analisis dilakukan dengan
menggunakan GC-MS atau GC ditambah dengan detektor penangkap elektron. Deteksi
hidrokarbon polyaromatik (PAH) dalam sampel tanah oleh GC-MS yang berasal dari rawa
yang dipulihkan di Sabine National Wildlife Refuge di Louisiana Barat Daya dipelajari
.Hidrokarbon diekstraksi dari tanah menggunakan variasi Metode EPA 3540 dan ditentukan
oleh GC-MS. Lima situs dipilih termasuk beberapa dikembangkan hampir 20 tahun yang
lalu. Tidak ada PAH yang ditemukan tetapi jejak sejumlah heksaklorobenzena dan
heksaklorobutadien ditemukan. Degradasi fotolitik dari pestisida tipe s-triazine yang sering
digunakan diselidiki. Sumber cahaya UV khusus yang tidak dapat diaplikasikan digunakan
untuk melakukan fotodegradasi. Proses degradasi diikuti oleh kromatografi lapis tipis
(KLT), teknik GC, dan GC-MS. Setelah iradiasi sampel, produk degradasi diisolasi dengan
kromatografi kolom SPE. Spektrometri massa EI digunakan untuk mengidentifikasi spesies
degradasi. Keempat dari berbagai jenis pestisida s-triazine yang dipelajari mengalami
dekomposisi fotolitik. Aspek kinetik dari fotodegradasi prometryn, terbutryn, simazine, dan
atrazineterungkap sepenuhnya, sementara dalam kasus prometryn dan terbutryn mekanisme
rinci transformasi fotolitik didirikan. Empat spesies degradasi terdeteksi, sebagai
konsekuensi dari dua cara paralel degradasi. Kedua pestisida menderita kehilangan
kelompok thio-metil sebelum pembelahan kelompok alkil. Deaminasi tidak terjadi dalam
kondisi yang diterapkan. Perilaku kinetik sehubungan dengan fotodegradasi menunjukkan
perbedaan yang signifikan ketika membandingkan dekomposisi pestisida tipe s-triazine:
prometryn terurai 10 kali lebih cepat daripada terbutryn.
4. Kesimpulan
GC-MS adalah teknik yang ideal untuk penentuan kualitatif dan kuantitatif senyawa
organik yang mudah menguap dan semi-volatil dalam berbagai macam sampel. GC dapat
memisahkan banyak senyawa yang mudah menguap dan semi-mudah menguap tetapi tidak
selalu secara selektif mendeteksinya sedangkan MS dapat secara selektif mendeteksi
banyak senyawa tetapi tidak selalu memisahkannya.
Pada penelitian ini berbagai senyawa organic ditentukan, pendekatan persiapan sampel dan
penggunaan GC-MS sebagai pelengkap teknik analitik lainnya seperti NMR.
Penggunaan kromatografi gas cepat dengan detektor spektrometer massa yang digabungkan
dengan sampler headspace memungkinkan identifikasi hidrokarbon utama yang ada dalam
mineral dan sampel tercemar organik; interpretasi hasil yang diperoleh, dan menunjukkan
potensi analitis kopling spektrometri massa-ruang.
 BAB IV
KESIMPULAN

GC-MS adalah metode pemisahan senyawa organik dengan menggunakan dua

metode analisis senyawa yaitu kromatografi gas ( GC ) untuk menganalisis jumlah senyawa
secara kuantitatif dan spektrometri massa ( MS ) untuk menganalisis struktur molekul
senyawa analit ( Pavia, 2006 ). Saat GC dikombinasikan dengan MS, akan didapatkan
sebuah metode analisis yang sangat bagus. Peneliti dapat menganalisis larutan organik,
memasukkannya ke dalam instrumen, memisahkannya menjadi komponen tunggal dan
langsung mengidentifikasi larutan tersebut.
Aplikasi penggunaan GC-MS salah satunya adalah penentuan kualitatif dan kuantitatif
senyawa organik yang mudah menguap dan semi-volatil dalam berbagai macam sampel (J.
Sneddon). GC dapat memisahkan banyak senyawa yang mudah menguap dan semi-mudah
menguap tetapi tidak selalu secara selektif mendeteksinya sedangkan MS dapat secara
selektif mendeteksi banyak senyawa tetapi tidak selalu memisahkannya. GC-MS
memungkinkan identifikasi hidrokarbon utama yang ada dalam mineral dan sampel
tercemar organik; interpretasi hasil yang diperoleh, dan menunjukkan potensi analitis
kopling spektrometri massa-ruang.
GC-MS juga digunakan untuk menentukan konsentrasi MeS di kulit dan rambut
sampel dari studi dekontaminasi relawan manusia. Metil salisilat memiliki sejarah panjang
digunakan sebagai agen perang kimia simulant untuk senyawa lipofilik volatile seperti
belerang mustard.
Metoda GC-MS juga dapat diaplikasikan pada kasus postmortem.. Skrining analsis
menggunakan GC-MS dilakukan untuk mengevaluasi keberadaan obat yang dapat
menyebabkan retensi urin (berdasarkan data anamnese) yang terbawa kedalam darah dan
urin. Clotiapine ditemukan di kedua matriks. Clotiapine adalah obat antipsychotic atypical
dari golongan dibenzothiazepine dimana kemungkinan terjadi peningkatan resiko aritmia
ventrikel dan kematian jantung mendadak pernah dilaporkan.
 DAFTAR PUSTAKA
J. Sneddon, S. Masuram, dan J. C. Richert. Louisiana. 2007. Gas Chromatography‐Mass
Spectrometry‐Basic Principles, Instrumentation and Selected Applications for Detection of
Organic Compounds. Department of Chemistry, McNeese State University, Lake Charles,
Louisiana

Giulio Mannocchi, dkk. 2015. Development And Validation Of A Gc-Ms Method For The
Detection And Quantification Of Clotiapine In Blood And Urine Specimens And
Application To A Postmortem Case. Department of Anatomical, Histological, Forensic and
Orthopaedic Sciences, Sapienza University of Rome, Rome, Italy

Thomas Jamesa,⁎, Samuel Collinsa, Richard Amlôtb, Tim Marczyloa. 2019. Optimisation
And Validation Of A GC–MS/MS Method For The Analysis Of Methyl Salicylate In Hair
And Skin Samples For Use In Human-Volunteer Decontamination Studies. Chemicals and
Environmental Hazards (CRCE), Public Health England, Chilton OX11 0RQ, UK