Sejarah artikel: Patologi forensik sering kegunaan osteobiografi, yang melibatkan biologis profil berbasis di Sebuah
Diterima 3 Juni 2014 penentuan usia, se x, con stitusi, patholo gical st ates dan o ada anom sekutu (sobat eopatho logy )
Diterima dalam bentuk revisi 1 Juni 2015
subjek untuk tujuan identifikasi. Dalam makalah ini, protein dianalisis pada sisa-sisa tulang. Sebanyak 45 tulang
Diterima 12 November 2015 Tersedia
panjang dari 45 mayat berbeda (29 laki-laki, 16 perempuan) dengan usia rata-rata 66,31 tahun (SD = 19,48, kisaran
online 24 November 2015
20–97) digunakan untuk mencari biomarker patologis yang terkait erat dengan beberapa penyakit. Tulang-tulang
itu diambil dari ceruk semen di sebuah pemakaman di Murcia (tenggara Spanyol), tempat mereka dibaringkan
Kata kunci:
antara 18 dan 45 tahun (waktu rata-rata 25,84 tahun, SD = 8,91). Setelah dilakukan ekstraksi spesifik menggunakan
Antropologi forensik
buffer Tris-Urea, diukur menggunakan HPLC / MS / MS. Hasil kami menunjukkan bahwa protein yang dihasilkan
Identifikasi
Protein dari penyakit tumor dan patogen bakteri dan virus dapat dideteksi dan
Tulang tetap diidentifikasi dalam profil tetap, menjadikannya penanda biologis patologis yang berguna untuk pembangunan
Biomarker patologis biologis rangka.
2015 Elsevier Ireland Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
1. pengantar penanda seperti OC dan C-terminal cross-laps (CTX) untuk Virus human
immunodefisiensi (HIV) [5], tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) 5b sebagai
Tujuan utama dariforensik patologi adalah studi tentang manusia penanda serum metastasis tulang pada kanker payudara manusia [6] dan P1NP
tetap, khususnya sisa-sisa kerangka, dan identifikasi mereka. Di dan CTx untuk kanker prostat [7]; dan Fms-like tirosin kinase 3 (fl t3) untuk
kasus terakhir ini, profil biologis dibangun berdasarkan penentuan usia, jenis leukemia amiloid akut[8], diantara yang lain. Selain itu, penelitian telah dibuat
kelamin, ras, perawakan, patologi dan anomali lainnya (paleopatologi), tentang protein agen infeksius, sepertiMoraxella catarrhalis dan Giardia
menciptakan, dengan kata lain, osteobio- intestinalis ATCC 50581 di heces anak-anak [9,10] atau dari
graphy itu mungkin dari digunakan dalam kasus manusia tak dikenal
sisa [1]. Photorhabdus asymbiotica dalam darah dan jaringan pasien yang terkena [11].
Berbeda patologi dapat menghasilkan perubahan pada struktur
dan komposisi tulang, sehingga informasi apa pun dalam hal ini mungkin penting Penanda penyakit postmortem untuk virus Hepatitis C dan HIV dipelajari oleh
untuk memastikan adanya penyakit tersebut. Selain itu, perubahan yang terkait Cattaneo et al. [12] melalui deteksi antigen, sedangkan penelitian terbaru oleh
dengan trauma, defisiensi nutrisi, atau patologi lain (bakteri, virus, tumor, dll.) Bona et al. [13] menunjukkan kemungkinan mendeteksi penanda tumor.
Dapat bertahan di tulang.[2,3]. Misalnya, protein annexin A10, protein mirip BCL-2, calgizzarin, HSP beta-6, Rho
GAPactivating protein 7, transferin dan vimentin dapat menunjukkan adanya
Beberapa protein telah disebutkan sebagai penanda kemungkinan patologi osteosarkoma dalam jaringan tulang pada sisa-sisa kerangka tumor yang berusia
dalam sampel biologis pasien, termasuk Propeptida Nitrogen Tipe 1 Procollagen hingga 2000 tahun.
(P1NP), osteokalsin (OC) dan b
isomer tipe I kolagen C-telopeptida (b CTX), semua biokimia Cattaneo [1] menyarankan bahwa tubuh menjadi kerangka setelah sekitar
spidol daritulang pergantian untuk hipertiroidisme [4], dan tulang lima tahun dan bahwa perubahan histologis dari tulang yang dipadatkan dimulai
sekitar waktu yang sama. Bahan yang dipilih untuk studi dalam kasus kami adalah
jaringan tulang tulang panjang yang dipadatkan,
yang merupakan bahan tahan postmortem, tulang paha dalam
* Penulis korespondensi di: Departemen Hukum dan Forensik Kedokteran, Regional penawaran paling khusus tingkat konservasi yang baik bersifat untuk molekuler
Kampus Keunggulan Internasional '' Campus Mare Nostrum '', Fakultas Kedokteran, Universitas
analisis dan bisa individual [14].
Murcia, E-30100 Murcia, Spanyol. Telp .: +34868 887018; faks: +34868 884338.
Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis kemungkinan terjadinya
Alamat email: mdperez@um.es (MD Pérez-Cárceles). karakterisasi itu protein menyajikan di itu tulang matriks, menggunakan
http://dx.doi.org/10.1016/j.forsciint.2015.11.009
0379-0738 / 2015 Elsevier Ireland Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
C. Pérez-Martı́nez dkk. / Ilmu Forensik Internasional 258 (2016) 68–73 69
teknik analitik yang memberikan informasi tentang patologis dari kantor pendaftaran pemakaman dan kemudian diperiksa sesuai dengan
anteseden subjek secara real time. dokumen catatan sipil. Mayat, yang seluruhnya
kerangka, dikubur sedemikian rupa sehingga sisa-sisa tulang tersebut tidak
2. Bahan dan metode bersentuhan dengan tanah. Akibatnya, proses-proses yang terjadi biasanya
setelah penguburan termasuk faktor kimiawi tanah itu menyebabkan
2.1. Sampel tulang transformasi dari matriks mineral tulang dicatat minimal.
Mempertimbangkan bahwa tulang itu teridentifikasi dan
total
SEBUAH dari45 panjang tulang (33 tulang paha dan 12 Tibias) dari diautentikasi menggunakan data yang sangat andal, kami tidak menggunakan apa saja
45 mayat berbeda (29 laki-laki, 16 perempuan) dengan a usia rata-rata standar referensi tulang, meskipun standar internal digunakan untuk memeriksa
66,31 tahun (SD = 19,48, kisaran 20–97) digunakan (T mampu 1). Itu keandalan dan ketepatan analisis.
tulang diambil dari relung semen di pemakaman di Murcia, sebuah kota di
tenggara Spanyol, daerah dengan indeks curah hujan yang sangat rendah. Musim Untuk 45 mayat yang digunakan dalam penelitian, 29 (64,4%) riwayat klinis
dinginnya hangat dengan suhu berkisar antara 5 dan 198C, saat musim panas tersedia, dimana 14 (48,3%) mencerminkan catatan medis patologi yang terkait
panas dengan suhu berkisar antara 22 dan 40 8C. Pemakaman terletak di daerah dengan protein yang diidentifikasi. Dalam kasus yang tersisa, informasi yang
yang kering dan di atas tanah yang kaya akan kapur dan gypsum. Tulang-tulang tidak mencukupi tersedia untuk menguatkan patologi yang dijelaskan dengan
itu telah diletakkan di relung untuk waktu yang didokumentasikan antara 18 dan protein yang diidentifikasi dalam
45 tahun (waktu rata-rata 25,84 tahun, SD = 8,91). Tanggal kematian diperoleh studi ini patologi utama itu termasuk dalam (n = 6), klinis
sejarah adalah HIV (n = 8), kanker (n = 3) leukemia lateral (n = 2),
anemia dan keberadaan bakteri sclerosis 2 (n = 2),
meskipun amyotrophic dan virus lainnya tidak
Tabel 1 termasuk, dan ada patologi pada saat kematian itu
Jumlah sampel, usia subjek dan interval postmortem. tidak teridentifikasi (herpes, parvovirus, dll.).
2.5. Kriteria dan identifikasi pemilihan peptida tulang manusia, dalam kasus kami interval postmortem tidak melebihi 100 tahun
[21].
Interpretasi spektrum peptida MS/MS menggunakan algoritma seperti Studi terbaru yang kami temukan dalam literatur yang berhubungan dengan
SpectrumMill mengarah pada identifikasi protein dalam campuran. Hasil awal penanda patologi pada sisa-sisa tulang mengacu pada tulang yang berusia 2000
juga diautovalidasi menggunakan parameter berikut untuk mode '' protein details tahun. [13]. Referensi lain ditemukan untuk penggunaan biomarker untuk
'': SPI> 70% untuk kecocokan dengan skor> 8 untuk +1,> 7 untuk +2, dan> 9 untuk mendeteksi proses patologis dalam sampel biologis yang berbeda dari pasien,
+3; SPI> 90% untuk skor> 6 pada +1. Langkah autovalidasi kedua dilakukan dalam termasuk serum[22–24], darah
mode ''peptida'' menggunakan kriteria skor >13 dan SPI >70%. Selain itu, kedua [11,25], plasma [26], cairan serebrospinal [27], kulit, bisul dan abses [11], heces
langkah autovalidasi membutuhkan skor maju-mundur> 1 untuk [9,10] dan sel manusia in vitro [28].
Perkembangan proteomik memungkinkan untuk menganalisis penanda
+ 1 dan +2 dan> 2 untuk +3 peptida. Peptida yang divalidasi digunakan untuk biokimia yang terkait dengan proses patologis, yang mungkin berguna untuk
mengidentifikasi satu set protein dari mana file hasil dibuat. Pencarian putaran membangun profil patologis orang dan, dalam beberapa kasus, untuk memberi
kedua dengan spektrum peptida yang tidak divalidasi dilakukan terhadap bobot pada kesimpulan yang dicapai dalam studi forensik.
himpunan protein dalam file hasil ini, menggunakan pencarian noenzim (tidak
dibatasi) untuk mengidentifikasi kemungkinan fragmen peptida non-spesifik atau Untuk 45 individu yang dianalisis dalam penelitian ini, kami memperoleh 2
semitriptik. Semua database cocok di atas penanda Parvovirus B19 manusia dalam satu sampel (2,2% dari total) dan 1
skor ambang batas 3 dirangkum dan dilaporkan (Meja 2) penanda Parain flu virus 5, Virus pernapasan manusia syncytial, Manusia
[17]. Pada perkiraan tingkat identifikasi positif palsu, total 73 protein dari <5%, a adenovirus 7d dalam satu sampel (2,2%), yang tidak ada referensi yang
diidentifikasi dalam penelitian kami. ditemukan dalam matriks biologis lainnya. Sebaliknya, kami menemukan 30
penandaVirus herpes manusia 5 (HHV-5) di 38 dari 45 sampel tulang yang
3. Hasil dianalisis (84,4%). Penelitian lain mengacu pada keberadaan HHV-5 dalam serum
pasien hemofagositosis (familial atau sekunder akibat infeksi termasuk virus)
Bagian berikut menjelaskan hasil yang diperoleh setelah analisis yang kuat, di
dif mana agen infeksi dan patologis [23] atau dengan rheumatoid arthritis [24] dan masuk transplantasi ginjal
adalah diklasifikasikan dan itu persentase darikasus adalah dihitung sebagai Sebuah pasien [22]. Di itu kasus dariManusia herpes virus 6 (HHV-6),
fungsi dari wh ole n banyak sam p les stu meninggal . 13 penanda itu ditemukan pada 14 sampel (31,1%), sedangkan referensi
Penanda patologi virus yang ditemukan dalam penelitian ini adalah ma inl y ada dalam darah perifer pasien seropositif
biomolekul yang penting untuk replikasi dan struktur virus dalam sel manusia. [25]. Untuk Virus herpes manusia 1 (HHV-1) kami menemukan 2 patogenisitas
Penanda bakteri yang ditemukan adalah protein yang terlibat dalam interaksi spidol dalam 2 sampel (4,4%), penanda yang sama telah terjadi pada
molekuler antar sel[18] dan dalam metabolisme bakteri [19,20]. diidentifikasi di serebrospinal cairan pasien dengan meningo-
radang otak [27]. Protein gp120 dariVirus human immunodefisiensi 1 terdeteksi di
Agen infeksi yang ditemukan dalam sampel yang dianalisis (Tabel 3) 8 sampel yang dianalisis (17,8%). Protein yang sama sebelumnya diidentifikasi
itu Virus herpes manusia 1, 5 dan 6; Virus human immunodefisiensi 1; Parain flu dalam plasma[26], dan kehadirannya telah dikaitkan dengan berbagai patologi
virus 5; Virus pernapasan manusia; Adenovirus manusia 7d; Parvovirus B19 terkait
manusia; Moraxella catarrhalis; Giardia dengan HIV, berinteraksi dengan beberapa sel jenis sel yang tidak terinfeksi [29],
intestinalis ATCC 50581; Fotorhabdus asimbiotika; Staphylococcus dendritik [30] dan neuron [31] dan menginduksi pembentukan s
warneri L37603; Staphylococcus epidermidis NIH05001; Staphylosubsp. aureus dari sel moco dan metaplasia inmucosa dan hiperplasia secara normal
coccus aureus TCH60; Sphingobacterium spiritivorum sel epitel bronkial manusia (NHBE) [32]. Satu penanda untuk
ATCC 33861 dan Salmonella enterica subsp. Enterica serovar.dll Moraxella catarrhalis dan Giardia intestinalis ATCC 50581 ditemukan
Enteritidis str. 576709.Analisis data teridentifikasi Manusia di 7 (15,6%) dan 3 (6,7%) sampel, masing-masing. Keduanya oleh itu
immunodefisiensi virus 1 sebagai agen hadir di itu terhebat sebelumnya diisolasi Sulikowzka dkk.[9] dan Newman dkk.
jumlah sampel. Indikator manusia dari diagnosa spidol ditemukan itu [10] di heces of anak-anak dalam studi epidemiologi. Infeksi
berbagai jenis kaleng cer dan a naemia ( Tabel 4). disebabkan oleh Staphylococcus dan Salmonella menyebar secara hematogen
dan mencapai rongga artikular, di mana menyebabkan peradangan
4. Diskusi tion, hancurkan tulang rawan artikular dan, akibatnya, genus jaringan
[33]. Kami mendeteksi 1 4 penanda itu tulang Staphylococcus di
Pekerjaan ini difokuskan pada identifikasi kemungkinan patologi dan sampel (8,9%) dan sampel 1 penanda dari Salmonella enterica jadi satu
biomarker penyakit. Studi kami memilih sekelompok sampel di mana tidak ada (2,2%).
faktor lingkungan atau konstitusional yang cukup penting untuk menyesuaikan Salah satu penanda Photorhabdus asymbiotica, sebelumnya teridentifikasi
proses pasca-kematian. Tulangnya dalam darah, kulit, bisul, dan abses pasien yang terinfeksi [11], diidentifikasi
datang dari relung pemakaman begitu bahwa kondisi interaksi pelestarian dengan dalam satu sampel (2,2%), dan, terakhir, dalam kelompok penanda agen infeksi,
itu homogen dan itu lingkungan bertentangan dengan studi kami menemukan satu penanda Sphingobacterium spiritivorum ATCC 33861
minimal. Apa aku s lebih, arkeologi dalam satu sampel (2,2%), penanda yang sebelumnya diisolasi dalam in vitro studi
yang melibatkan pasien leukemia myeloid HL-60 [28].
Meja 2
Dalam 13 dari 45 sampel yang dianalisis, kami menemukan protein yang
Validasi peptida melalui kriteria kepercayaan di Mill's Spectrum (Kapp et al., 2005).
terkait dengan penyakit karsinogenik seperti leukemia, kanker payudara,
Skor peptida SPI% Penafsiran Keyakinan
osteosarcoma, neuroblastoma, karsinoma, anemia Fanconi, dan sklerosis. Protein
> 10 > 70 Tinggi mungkin valid Luar biasa ini diidentifikasi sebagai skionkogen, protein tumor D54 isoform a, limfoma sel B /
8–10 > 70 Mungkin valid Baik leukemia 11A, leukemia myeloid / limfoid 2, protein kerentanan tipe 2 kanker
5–8 > 70 Pertimbangan kembali, Moderat
payudara, protein osteosarkoma B1 responsif PTH, penekan neuroblastoma dari
validasi secara manual
<5 > 70 Rendah atau tanpa Biasa-biasa saja
tumorigenisitas 1 isoform1, sel skuamosa antigen karsinoma yang dikenali oleh
fragmentasi sel-T 3, protein kelompok J anemia Fanconi, protein kelompok I anemia Fanconi,
<5 <70 Tidak dialokasikan Miskin protein kelompok A anemia Fanconi dan kandidat daerah kromosom sklerosis
berkas ion yang signifikan
lateral amiotrofik 2
arus
C. Pérez-Martı́nez dkk. / Ilmu Forensik Internasional 258 (2016) 68–73 71
Tabel 3
Agen infeksius, penanda patologis bakteri dan virus pada manusia, kasus (%) dan sampel yang memiliki penanda telah terdeteksi.
Agen penular Penanda patologis bakteri dan virus Kasus (%) Sampel
Virus herpes manusia 5 Kemasan DNA protein tegument UL25 Protein 1 (2,2%) 13
tegument besar 4 (8,9%) 1, 12, 27, 45
Amplop glikoprotein US27 2 (4,4%) 5, 9
Amplop glikoprotein B Amplop 1 (2,2%) 20
glikoprotein L Tegument protein 1 (2,2%) 1
UL25 1 (2,2%) 12
Protein tegument UL51 1 (2,2%) 17
Protein tegument UL88 1 (2,2%) 3
Protein tegument IRS1 1 (2,2%) 3
Protein tegument US22 1 (2,2%) 4
Protein tegument pp71 1 (2,2%) 33
Protein tegument pp150 1 (2,2%) 38
Protein membran US20 2 (4,4%) 14
Protein membran US30 2 (4,4%) 28
Protein terpotong UL140 1 (2,2%) 35
Protein UL29 1 (2,2%) 42
Protein UL148C 1 (2,2%) 14
Protein UL135 1 (2,2%) 16
Protein UL49 1 (2,2%) 28
Protein UL87 1 (2,2%) 39
Protein UL27 2 (4,4%) 33, 45
Fosfotransferase, subunit ribonukleotida 1 (2,2%) 27
reduktase parsial 1 prosestivitas DNA 1 (2,2%) 39
polimerase subunit Protein RL5A 2 (4,4%) 22, 33
1 (2,2%) 24
Deoxyuridine triphosphatase 1 (2,2%) 1
Protein UL34 1 (2,2%) 1
Deoxyribonuclease 1 (2,2%) 4
Subunit katalitik DNA polimerase 1 (2,2%) 1
Subunit helikase-primase helikase 1 (2,2%) 3
Human immunodefisiensi virus 1 Glikoprotein amplop 8 (17,8%) 6, 11, 14, 27, 28, 29, 3 35
Virus flu burung 5 Fosfoprotein 1 (2,2%)
Human adenovirus virus pernapasan Glikoprotein 1 (2,2%) 13
manusia 7d Serat 1 (2,2%) 12
gen 11 protein isoform 1 dan 4, yang masing-masing teridentifikasi dalam satu Itu hasil dariitu studi sekarang Menyarankan bahwa biomarker dari
sampel (2,2%). Penanda tumor terkait dengan osteosarcoma, seperti protein tertentu patologi manusia dan protein terkait dengan perbedaan
annexin A10, protein mirip BCL-2, calgizzarin, HSP beta- agen infeksius dapat diidentifikasi dalam sampel tulang kortikal pada subjek
6, Rho GAP-activating protein 7, transferin, dan vimentin, diidentifikasi pada sisa- dengan usia yang berbeda dan pada waktu postmortem yang berbeda. Seperti
sisa kerangka oleh Bona et al. [13]. yang dikemukakan oleh Lindahl[34], ini karena selnya
72 C. Pérez-Martı́nez dkk. / Ilmu Forensik Internasional 258 (2016) 68–73
Tabel 4
Penanda diagnosis manusia, kasus (%) dan sampel di mana penanda telah terdeteksi.
komponen diadsorpsi dalam fraksi anorganik tulang, [10] RD Newman, SR Moore, AA Lima, JP Nataro, RL Guerrant, CL Sears, A
studi longitudinal infeksi Giardia lamblia pada anak-anak timur laut Brasil, Trop. Med. Int.
terutama dibentuk oleh hidroksiapatit, yang lebih melimpah di Kesehatan 6 (2001) 624–634.
tulang kortikal daripada di medullar. Juga, secara metode yang diusulkan aku s [11] J. Gerrard, N. Bidang air, R. Vohra, Infeksi manusia dengan Photorhabdus asymbiotica:
ekonomi dapat diterima (25 euro per sampel) tentang (i) patogen bakteri yang muncul, Microbes Infect. 6 (2004) 229–237.
[12] C. Cattaneo, PA Nuttall, DC Molendini, M. Pellegrinelli, M. Grandi, RJ Sokol, Prevalensi HIV
biaya bahan, (ii) waktu pemrosesan dan (iii) tenaga kerja yang terlibat.
dan penanda hepatitis di antara populasi mayat di Milan, J. Clin. Pathol. 52 (1999) 267–270.
dendritik yang diturunkan dari sel, J. Hematother. Res sel induk. 11 (2002) [33] JO Ross, Artritis septik, Infeksi. Dis. Clin. North Am. 19 (2005) 799–817.
monosit 829-847. [34] T. Lindahl, Ketidakstabilan dan pembusukan struktur primer DNA, Alam 362
[31] MP Mattson, NJ Haughey, A. 12 Nath, kematian sel pada HIV demensia, Perbedaan Kematian Sel. (1993) 709–715.
(2005) 893–904. [35] M. Schultz, H. Parzinger, DV Posdnjakov, TA Chikisheva, TH Schmidt-Schultz, Kasus
[32] S. Gundavarapu, NC Mishra, SP Singh, RJ Langley, AI Saeed, CA FeghaliBostwick, JM metastasis kanker prostat tertua yang diketahui didiagnosis pada kerangka Raja Skit
McIntosh, J. Hutt, R. Hegde, S. Buch, ML Sopori, HIV gp120 menginduksi pembentukan berusia 2700 tahun dari Arzhan (Siberia, Rusia), Int. J. Kanker 121
lendir dalam sel epitel bronkial manusia melalui CXCR4 /SebuahReseptor asetilkolin 7- (2007) 2591–2595.
nikotinat, PLoS ONE 8 (2013) e77160.