Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

Daftar isi tersedia di SainsLangsung

Toksikologi Reproduksi

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/reprotox

Ulasan

Kebutuhan regulasi dan kegiatan untuk mengatasi sistem retinoid dalam

konteks gangguan endokrin: Sudut pandang Eropa
Elise GrignardSebuah,*, Helen Håkanssonb,1, Sharon MunnSebuah,1
Sebuah Komisi Eropa, Pusat Penelitian Gabungan (JRC), Italia
b Institut Kedokteran Lingkungan (IMM), Karolinska Institutet, Swedia

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Gangguan endokrin terus menjadi masalah yang sangat memprihatinkan, dan menjadi subjek kegiatan intensif di
Asam retinoat tingkat publik, politik, peraturan, dan akademik. Saat ini, pedoman uji regulasi (TG) yang tersedia yang relevan
Keluarga reseptor asam retinoat (RARs, RXRs) dengan identifikasi pengganggu endokrin sebagian besar terbatas pada jalur estrogen, androgen, tiroid, dan
Vitamin A
steroidogenesis (EATS). Dengan demikian, ada peningkatan minat dan kebutuhan untuk mengembangkan metode
Pengganggu endokrin
pengujian, biomarker, dan Adverse Outcome Pathways (AOPs), untuk identifikasi dan evaluasi pengganggu
Toksikologi Regulasi Jalur Hasil yang
endokrin selain jalur EATS. Kegiatan yang berfokus pada sistem retinoid telah diprakarsai bersama oleh Badan
Merugikan (AOP)
Kimia Swedia dan Komisi Eropa. Sistem retinoid terlibat dalam proses kehidupan mendasar dan telah dijelaskan,
dalam pekerjaan sebelumnya di OECD,
gangguan yang bisa populasi. berkontribusi pada peningkatan insiden gangguan tertentu pada manusia dan satwa liar

1. Gangguan endokrin – menjadi perhatian utama
Gangguan endokrin adalah masalah yang sangat memprihatinkan
sehubungan dengan penilaian keamanan bahan kimia yang diproduksi, dan telah
menjadi subjek kegiatan intensif di seluruh bidang publik, politik, peraturan, dan
akademik di tingkat global selama beberapa dekade.
Pengetahuan tentang gangguan endokrin telah meningkat pesat sejak tahun
1990-an sebagai hasil dari banyak peraturan serta kegiatan penelitian, termasuk
lebih dari 50 proyek penelitian kolaboratif multinasional yang didanai oleh Komisi
Eropa (EC) saja. Banyak publikasi penelitian yang dihasilkan dan laporan lain yang
tersedia saat ini menunjukkan hubungan antara paparan berbagai bahan kimia
dan efek kesehatan manusia atau lingkungan, yang dapat dikaitkan dengan
gangguan sistem endokrin. Laporan pusat termasuk Penilaian Global IPCS
tentang Negara-of-the-Science of Endocrine Disruptors [1], pembaruannya,
laporan ahli UNEP/WHO tentang State of the Science of Endocrine Disrupting
Chemicals – 2012 [2], laporan WHO tentang Kemungkinan
efek awal perkembangan pengganggu endokrin pada kesehatan anak [3], dan
laporan EC tentang penilaian mutakhir pengganggu endokrin [4]. Termasuk
dalam laporan IPCS/WHO tahun 2002 adalah definisi yang disepakati secara
umum dari suatu zat dengan sifat mengganggu endokrin (Gambar 1).
Organisasi untuk Kerjasama Ekonomi dan Pembangunan (OECD) membentuk
kelompok penasehat pada pengujian dan penilaian pengganggu endokrin (EDTA
AG) sudah di akhir 1990-an. Kegiatan prioritas tinggi pada gangguan endokrin
dimulai untuk merevisi pedoman uji (TG) yang ada dengan titik akhir baru dan
untuk meningkatkan atau mengembangkan metode penyaringan dan pengujian
baru dengan fokus pada koordinasi internasional dan harmonisasi pendekatan
karakterisasi bahaya. Pada periode yang sama, EC mengeluarkan Community
Strategy for Endocrine Disrupters tahun 1999 (COM (1999) 706) [5]. Untuk
mengurangi kekhawatiran publik tentang pengganggu endokrin, Strategi
Komunitas bertujuan untuk mengidentifikasi masalah, penyebab dan
konsekuensinya, dan untuk mengidentifikasi tindakan kebijakan yang tepat
berdasarkan prinsip kehati-hatian untuk

Singkatan: AOP, Jalur Hasil Merugikan; CF, kerangka konseptual; DRP, makalah ulasan terperinci; MAKAN, estrogen, androgen, tiroid, steroidogenesis; Komisi Eropa,
Komisi Eropa; ECHA, Badan Kimia Eropa; EDTA AG, Kelompok Penasihat Pengujian dan Penilaian Pengganggu Endokrin; EFSA, Otoritas Keamanan Pangan Eropa; UE, Uni
Eropa; GD, Dokumen Bimbingan; IATA, Pendekatan Terpadu untuk Pengujian dan Penilaian; IPCS, Program Internasional tentang Keamanan Kimia; MoA, Modus Aksi;
REACH, Registrasi, Evaluasi, Otorisasi dan Pembatasan Bahan Kimia; TG, Pedoman Tes; UNEP, Program Lingkungan Perserikatan Bangsa-Bangsa; EPA AS, Badan
Perlindungan Lingkungan Amerika Serikat
⁎ Penulis yang sesuai di: Komisi Eropa, Direktorat Jenderal Pusat Penelitian Gabungan, Direktorat F - Kesehatan, Konsumen dan Bahan Referensi, Via E. Fermi, 2749,

I-21027, Ispra, VA, Italia.

Alamat email: Elise.GRIGNARD@ec.europa.eu (E. Grignard), helen.hakansson@ki.se (H. Håkansson), Sharon.munn@ec.europa.eu (S. Mun).
1 Kontribusi yang setara.

https://doi.org/10.1016/j.reprotox.2020.03.002
Diterima 2 Desember 2019; Diterima dalam bentuk revisi 2 Maret 2020; Diterima 6 Maret 2020
Tersedia online 20 Maret 2020
0890-6238/ © 2020 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier Inc. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://
creativecommons.org/licenses/BY/4.0/).
E. Grignard, dkk. Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

Gambar 1. Definisi IPCS/WHO dari pengganggu endokrin (IPCS/WHO 2002).

merespon dengan cepat dan efektif. Evaluasi ulang baru-baru ini pada November
2018 dari strategi EC menghasilkan kerangka kerja Uni Eropa (UE) tentang
gangguan endokrin (COM(2018)734) [6], yang bertujuan meminimalkan paparan
zat dengan sifat mengganggu endokrin, memberikan perhatian khusus pada
tahap kehidupan yang penting, mempercepat pengembangan penelitian untuk
pengambilan keputusan yang efektif dan berwawasan ke depan, dan
mempromosikan dialog aktif dengan semua pemangku kepentingan.
2. Status regulasi saat ini untuk pengganggu endokrin di Eropa
Dalam kerangka Strategi Komunitas, UE telah memperbarui badan hukumnya
untuk meningkatkan perlindungan manusia dan lingkungan terhadap zat dengan
sifat pengganggu endokrin. Undang-undang UE saat ini termasuk yang paling
protektif di dunia dan beberapa undang-undang Eropa terkait dengan
manajemen risiko bahan kimia yang dipasarkan, yaitu undang-undang tentang
bahan kimia secara umum (REACH), produk perlindungan tanaman, biosida,
peralatan medis, dan air (kerangka air direktif), berisi ketentuan khusus untuk
pengganggu endokrin (Tabel 1). Perundang-undangan lain tidak menetapkan
ketentuan khusus, melainkan subjek zat dengan sifat mengganggu endokrin
untuk tindakan pengaturan kasus per kasus atas dasar
persyaratan umum peraturan perundang-undangan. Pada bulan September
2017, EC menerbitkan kriteria ilmiah untuk penentuan sifat pengganggu endokrin
untuk produk biosidal (EU; 2017/2100 [7]), dan pada bulan April 2018 untuk
produk perlindungan tanaman (EU; 2018/605 [8]). Kriteria diilustrasikan dalam (
Gambar 2.), dan perluasan kriteria ini ke undang-undang lainnya sedang
dipertimbangkan.
Dokumen Panduan (GD) untuk melengkapi kriteria yang disusun bersama
oleh European Chemicals Agency (ECHA) dan European Food Safety Authority
(EFSA), didukung oleh Joint Research Center (JRC), diterbitkan pada Juni 2018 [9]
dan menargetkan pelamar (produsen pestisida dan biosida) dan penilai dari
otoritas regulasi untuk membantu mengidentifikasi pengganggu endokrin. GD UE
ini menjelaskan cara mengumpulkan, mengevaluasi, dan mempertimbangkan
semua informasi yang relevan untuk penilaian, pelaksanaan analisis mode
tindakan (MoA), dan penerapan pendekatan bobot bukti (WoE). Mengenai
pengujian peraturan dan identifikasi titik akhir yang relevan untuk gangguan
endokrin, GD UE terutama mengacu pada GD OECD 150 [10] pada evaluasi bahan
kimia untuk gangguan endokrin menggunakan TG OECD standar. Lebih lanjut,
panduan diberikan tentang bagaimana bukti untuk “kesulitan” dan “aktivitas
endokrin” dapat diperoleh dengan menerapkan Kerangka Konseptual (CF) OECD
untuk Pengujian dan Penilaian Endokrin

Tabel 1
Undang-undang Eropa terkait dengan manajemen risiko bahan kimia yang dipasarkan – Bagian dari undang-undang, yang berisi ketentuan khusus untuk pengganggu endokrin.

Peraturan Referensi Komentar

Peraturan REACHCH
Peraturan Produk Biosidal
Peraturan tentang Perlindungan Tumbuhan
Produk
Peraturan tentang Alat Kesehatan
EC No 1907/2006 Zat-zat berikut ini dapat dimasukkan dalam Lampiran XIV sesuai dengan prosedur yang ditetapkan dalam Pasal 58:
[45] […]zat - seperti yang memiliki sifat mengganggu endokrin atau yang memiliki sifat persisten, bioakumulatif dan toksik
atau sifat sangat persisten dan sangat bioakumulatif, yang tidak memenuhi kriteria poin
(d) atau (e) — yang ada bukti ilmiah tentang kemungkinan efek serius terhadap kesehatan manusia atau lingkungan
yang menimbulkan tingkat kekhawatiran yang setara dengan zat [CMR, PBT, vPvB] lainnya […] dan yang diidentifikasi
berdasarkan kasus per kasus sesuai dengan prosedur yang ditetapkan dalam Pasal 59.
UE No 528/2012 … zat aktif berikut tidak boleh disetujui:
[46] (d) zat aktif yang, [...] dianggap memiliki sifat mengganggu endokrin yang dapat menyebabkan efek buruk pada
manusia atau yang diidentifikasi sesuai dengan Pasal 57(f) dan 59(1) Regulasi (EC) No 1907/ 2006 memiliki sifat
mengganggu endokrin;
EC No 1107/2009 Zat aktif, lebih aman atau sinergis hanya akan disetujui jika, berdasarkan penilaian Komunitas atau pedoman pengujian yang
[47] disepakati secara internasional [...], tidak dianggap memiliki sifat mengganggu endokrin yang dapat menyebabkan efek buruk
pada manusia/ non-target organisme, kecuali paparan […] terhadap zat aktif tersebut, […] dalam produk perlindungan tanaman, di
bawah kondisi penggunaan yang diusulkan, dapat diabaikan
UE 2017/745 [48] Perangkat, atau bagiannya atau bahan yang digunakan di dalamnya yang:
- bersifat invasif dan bersentuhan langsung dengan tubuh manusia,
— (kembali) memberikan obat-obatan, cairan tubuh atau zat lain, termasuk gas, ke/dari tubuh, atau
— mengangkut atau menyimpan obat-obatan, cairan tubuh atau zat tersebut, termasuk gas, untuk diberikan (kembali) ke tubuh,
hanya boleh mengandung zat-zat berikut dalam konsentrasi di atas 0,1 % berat menurut berat (b/b) jika dibenarkan
menurut Bagian 10.4.2: […]

(b) zat yang memiliki sifat mengganggu endokrin yang ada bukti ilmiah kemungkinan efek serius terhadap kesehatan
manusia dan yang diidentifikasi sesuai dengan prosedur yang ditetapkan dalam Pasal 59 Regulasi (EC) No 1907/2006
Parlemen Eropa dan Dewan (2) atau, setelah tindakan yang didelegasikan telah diadopsi oleh Komisi sesuai dengan
sub-paragraf pertama Pasal 5(3) Peraturan (UE) No 528/2012 Parlemen dan Dewan Eropa (3), sesuai dengan kriteria
yang relevan dengan kesehatan manusia di antara kriteria yang ditetapkan di dalamnya.

Arahan Kerangka Air 2000/60/EC [49] Daftar indikatif polutan utama

4. Zat dan preparat, atau produk penguraiannya, yang telah terbukti memiliki sifat karsinogenik atau mutagenik atau
sifat yang dapat mempengaruhi steroidogenik, tiroid, reproduksi atau fungsi terkait endokrin lainnya di atau melalui
lingkungan perairan.

251
E. Grignard, dkk.
Gambar 2. Kriteria ilmiah untuk penentuan sifat pengganggu endokrin di bawah Peraturan Biocidal (EU; 2017/2100) dan Plant Protection Products (EU; 2018/605)
sebagaimana ditetapkan oleh Komisi Eropa. Kriteria tersebut didasarkan pada definisi IPCS/WHO tentang pengganggu endokrin dan menyatakan bahwa “suatu zat harus
dianggap memiliki sifat pengganggu endokrin yang dapat menyebabkan efek buruk pada manusia/atau organisme non-target jika, […] zat yang memenuhi semua
kriteria berikut, kecuali ada bukti yang menunjukkan bahwa efek samping yang diidentifikasi tidak relevan terhadap manusia/pada tingkat (sub)populasi untuk organisme
non-target.
(1) menunjukkan pengaruh yang merugikan pada organisme yang utuh atau keturunannya/pada organisme bukan target, yaitu perubahan morfologi, fisiologi, pertumbuhan,
perkembangan, reproduksi, atau masa hidup organisme, sistem, atau (sub) populasi. yang mengakibatkan penurunan kapasitas fungsional, penurunan kapasitas untuk
mengkompensasi stres tambahan atau peningkatan kerentanan terhadap pengaruh lain;
(2) memiliki cara kerja endokrin, yaitu mengubah fungsi sistem endokrin;
(3) efek sampingnya adalah konsekuensi dari cara kerja endokrin.
Pengganggu. GD 150 menyajikan semua metode pengujian yang tersedia, sedang
dikembangkan atau diusulkan, untuk penilaian pengganggu endokrin, memberi
nasihat tentang interpretasi hasil tes dari metode standar tersebut dan
merekomendasikan langkah potensial berikutnya dalam membangun bukti untuk
mengevaluasi bahan kimia dalam konteks peraturan . Sebagian besar tes ini,
meskipun awalnya tidak, dikembangkan untuk evaluasi gangguan endokrin,
termasuk titik akhir yang relevan. Ini termasuk CF untuk Pengujian dan Penilaian
Pengganggu Endokrin, yang diatur di sekitar lima tingkat organisasi biologis dan
jenis informasi yang diberikan (Meja 2). Dalam revisi GD 150 2018, pertimbangan
kemungkinan efek melalui jalur asam retinoat, dan respons apikal terhadap
gangguan hormon remaja dan modalitas ecdysteroid pada arthropoda
diperkenalkan. Namun, diakui bahwa belum ada TG OECD dengan titik akhir
mekanistik spesifik yang memungkinkan identifikasi bahan kimia yang bekerja
pada modalitas ini. Yang penting, EU GD untuk identifikasi pengganggu endokrin
menyatakan bahwa ketika menilai bukti mengenai potensi suatu zat untuk
gangguan endokrin, semua informasi yang relevan harus dipertimbangkan, yaitu
bukti yang dievaluasi tidak boleh dibatasi pada data yang dihasilkan menurut TG.
3. Alat yang tersedia untuk mendukung regulasi pengganggu endokrin
Sejauh ini, fokus ilmiah utama dari TG pengatur yang relevan dengan deteksi
dan evaluasi zat dengan sifat mengganggu endokrin sebagian besar terbatas
pada modalitas estrogenik, androgenik, tiroid, dan steroidogenesis (EATS). TG
pertama yang dikembangkan dengan tujuan mempelajari efek pada sistem
endokrin adalah:in vivo pengujian yang menyediakan data tentang mekanisme/
jalur yang dipilih, yaitu:
Uji uterotrofik (TG 440 [11]) didukung oleh OECD pada tahun 2007, serta uji
Hershberger (TG 441 [12]), itu Uji Metamorfosis Amfibi (TG 231 [13]), itu Uji
Reproduksi Jangka Pendek Ikan (TG 229 [14]) dan 21 hari uji ikan (TG 230 [15])
disahkan pada tahun 2009. Modalitas endokrin yang diselidiki oleh Pedoman Tes
tercantum dalam
Tabel 3.
Secara paralel, yang pertama in vitro uji untuk mempelajari potensi
estrogenik bahan kimia, yaitu Reseptor Estrogen Manusia yang Ditransfusikan
Secara Stabil-α Uji Aktivasi Transkripsi untuk Deteksi Aktivitas Agonis Estrogen-
Bahan Kimia (TG 455 [16]) juga diadopsi pada tahun 2009. Baru-baru ini, beberapa
TG yang sudah ada sebelumnya diperbarui untuk memasukkan titik akhir yang
relevan dengan EATS seperti pembaruan pada Juni 2018 dari TG 408 untuk
Studi toksisitas oral 90 hari dosis berulang pada hewan pengerat [17] untuk
memasukkan titik akhir terkait tiroid, dan pembaruan TG 414 untuk Studi toksisitas
perkembangan prenatal pada tikus [18] untuk memasukkan pengukuran jarak
anogenital pada janin dan hormon tiroid di bendungan. Pembaruan terbaru ini
menyoroti fakta bahwa pekerjaan masih berlangsung dalam kaitannya dengan
pengembangan lebih lanjut dan memperbarui TG yang ada untuk dapat secara efektif
mengidentifikasi zat yang bertindak melalui modalitas EATS. Contoh lain dari
252
Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258
kegiatan yang sedang berlangsung berkaitan dengan upaya untuk menggabungkan
arus in vitro menguji sistem dengan yang memetabolisme, dan dengan demikian
mempertimbangkan dampak potensial metabolit zat uji pada hasil pengujian.
Secara paralel, telah diakui bahwa beberapa TG juga dapat
menginformasikan modalitas endokrin lainnya, seperti yang terkait dengan
gangguan hormon juvenil, ecdysone, dan asam retinoat, meskipun tidak ada TG
yang memiliki titik akhir mekanistik spesifik yang akan diagnostik untuk modalitas
ini. Perlu dicatat bahwa titik akhir yang berbeda diselidiki di TG memberikan
berbagai jenis bukti. Misalnya, bukti langsung untuk kesulitan di tingkat
organisme secara keseluruhan hanya dapat diperoleh dariin vivo tes, yaitu tingkat
4-5 dari CF OECD, sedangkan bukti aktivitas endokrin dapat diperoleh dari in vitro
dan in vivo pengujian, serta dengan menggunakan dalam silikon alat untuk
memodelkan aktivitas. Salah satu contoh yang terakhir disediakan oleh model
Reseptor Estrogen ToxCast, di mana hasil dari:
in vitro tes diintegrasikan ke dalam model komputasi untuk menyimpulkan
aktivitas estrogenik [19]. Beberapa titik akhir diselidikidalam hidup, karena sifat
efek dan pengetahuan yang ada, juga dapat menginformasikan modalitas
endokrin tertentu. Misalnya, hipospadia disertai dengan penurunan jarak
anogenital dan retensi puting pada tikus jantan akan menjadi indikasi aktivitas
anti-androgenik.20]. TG OECD yang dapat digunakan untuk mengevaluasi zat
untuk sifat endokrinnya dan modalitas endokrin yang diselidiki disajikan dalam:
Tabel 3.
4. Gangguan endokrin di luar EATS
EDTA AG dari OECD pada tahun 2012 menerbitkan Makalah Tinjauan
Terperinci (DRP 178 [21]) tentang keadaan sains pada novel in vitro dan in vivo
metode penyaringan dan pengujian dan titik akhir untuk mengevaluasi
pengganggu endokrin, yang mengevaluasi peluang untuk memperluas strategi
penyaringan dan pengujian untuk gangguan endokrin. Fokusnya adalah pada
kemungkinan untuk mengembangkan metode pengujian dan biomarker efek
molekuler untuk skrining toksisitas dan studi pemantauan, yang juga dapat
memberikan informasi MoA untuk titik akhir kritis dalam TG yang ada. Penekanan
DRP 178 adalah pada jalur di luar EATS, yang keduanya (i) bukti signifikan
kerentanan terhadap gangguan oleh konsentrasi lingkungan bahan kimia dengan
potensi hasil yang merugikan ada dan (ii) tes untuk mendeteksi gangguan
endokrin cukup dikembangkan - terbuka untuk standarisasi dan validasi protokol.
Tabel 4.
Jalur pensinyalan asam retinoat adalah salah satu dari tujuh jalur yang
dianggap oleh DRP 178 rentan terhadap gangguan endokrin lingkungan dan
yang titik akhir yang relevan dapat diukur baik melalui pengembangan TG OECD
baru atau dengan adaptasi TG yang ada. Jalur pensinyalan ini memiliki
keterlibatan luas dalam proses kehidupan mendasar, termasuk peran penting
dalam mengatur reproduksi, perkembangan embriofetal, serta homeostasis lipid
dalam tubuh.
E. Grignard, dkk. Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

Meja 2
Kerangka Konseptual (CF) OECD untuk Pengujian dan Penilaian Pengganggu Endokrin didirikan dan diatur di sekitar lima tingkat organisasi biologis
dan jenis informasi.

Toksikologi Mamalia dan Non Mamalia

Tingkat 1 Sifat fisik & kimia, misalnya, reaktivitas MW, volatilitas,

Data yang Ada dan Informasi Non-Uji biodegradabilitas.
Semua data toksikologi (eko) yang tersedia dari tes standar atau non-standar.

Baca seluruh, kategori kimia, QSAR, dan lainnya dalam silikon prediksi, dan prediksi
model ADME.
Level 2 Afinitas pengikatan reseptor estrogen atau androgen (OECD TG 493).
In vitro tes yang menyediakan data tentang mekanisme / jalur endokrin yang dipilih Transaktivasi reseptor estrogen (OECD TG 455 & TG 457). Uji
(Metode mamalia dan non mamalia) transaktivasi androgen (OECD TG 458).
Steroidogenesis in vitro (OECD TG 456).
Uji proliferasi sel MCF-7 (ER semut/agonis).
Pemeriksaan lain yang sesuai.

Toksikologi Mamalia dan Non Mamalia Toksikologi Mamalia dan Non Mamalia

Tingkat 3 Uji uterotrofik (OECD TG 440). Uji
in vivo tes yang menyediakan data tentang mekanisme / Hershberger (OECD TG 441).
jalur endokrin yang dipilih
Tingkat 4 Studi 28 hari dosis berulang (OECD TG 407). Studi
in vivo tes yang menyediakan data tentang efek buruk pada titik akhir yang dosis berulang 90 hari (OECD TG 408). Studi
relevan dengan endokrin toksisitas reproduksi generasi pertama (OECD TG
415).
Uji pubertas pria (lihat GD 150, Bab C4.3).
Uji pubertas wanita (lihat GD 150, Bab C4.4).
Uji skrining endokrin pria dewasa yang utuh
(lihat GD 150, Bab Lampiran 2.5).
Studi toksisitas perkembangan prenatal (OECD
TG 414).
Studi toksisitas dan karsinogenisitas kronis
(OECD TG 451-3).
Tes skrining reproduksi (OECD TG 421).
Gabungan uji skrining 28 hari/reproduksi (OECD
TG 422).
Neurotoksisitas perkembangan (OECD TG 426).
Tingkat 5 Studi toksisitas reproduksi satu generasi yang
in vivo tes memberikan data yang lebih komprehensif tentang efek buruk pada diperluas (OECD TG 443).
titik akhir yang relevan dengan endokrin selama bagian yang lebih luas dari Studi toksisitas reproduksi 2-Generasi (OECD
siklus hidup organisme. TG 416).
Uji sinyal tiroid embrio Xenopus (Bila/jika TG tersedia).
Uji metamorfosis amfibi (OECD TG 231). Uji Skrining
Reproduksi Ikan (OECD TG 229). Uji Penyaringan Ikan
(OECD TG 230).
Layar stickleback wanita androgenisasi (OECD). Tes
perkembangan seksual ikan (OECD TG 234).
Uji Siklus Hidup Parsial Reproduksi Ikan (bila/Jika TG
Tersedia).
Uji Pertumbuhan & Perkembangan Amfibi Larva
(OECD TG 241).
Uji Reproduksi Burung (OECD TG 206).
Uji Siklus Hidup Sebagian Moluska (OECD TG 242 & TG
243).
Uji Toksisitas Chironomid (TG 218 & TG 219). Uji
Reproduksi Daphnia (dengan induksi pria) (OECD TG
211).
Uji Reproduksi Cacing Tanah (OECD TG 222). Uji
Reproduksi Enchytraeid (OECD TG 220). Uji Toksisitas
Lumbriculus Air Sedimen Menggunakan Sedimen
Berduri (OECD TG 225).
Uji reproduksi tungau predator di tanah (OECD TG
226).
Uji Reproduksi Collembola di Tanah (OECD TG 232). FLCTT
(Uji Toksisitas Siklus Hidup Ikan) (bila TG tersedia).
Medaka Extended One Generation Reproduction
Toxicity Study Test (OECD TG 240).
Uji toksisitas reproduksi unggas generasi ke-2 (bila TG
tersedia).
Tes Toksisitas Siklus Hidup Mysid (bila TG tersedia). Uji
Reproduksi dan Pengembangan Copepod (bila TG tersedia).

Uji Toksisitas Siklus Hidup Chironomid Air Sedimen (OECD

TG 233);
Mollusc Full Lifecycle Assays (bila TG tersedia). Daphnia
Multigeneration Assay (jika TG tersedia).

https://www.oecd.org/env/ehs/testing/oecdworkrelatedtoendocrinedisrupters.htm.
Level 1 mengacu pada data yang ada, dan informasi non-tes yang ada atau baru, termasuk sifat fisika-kimia atau prediksi in silico. Level 2 menyajikanin vitro
tes yang menyediakan data tentang mekanisme/jalur endokrin yang dipilih. Daftar level 3-5in vivo pengujian, yang mencakup toksikologi mamalia dan non-mamalia. Tes
di level 3 dirancang untuk memberikan informasi tentang mekanisme/jalur endokrin yang dipilih, sedangkan tes level 4 dan 5 memberikan data tentang efek samping.
pada titik akhir yang relevan dengan endokrin.

mamalia. DRP 178 juga menyoroti bahwa reseptor asam retinoat, RARs dan RXRs,
dapat self-dimerise, atau, dalam kasus RXRs, dapat dimerise dengan reseptor
nuklir lain seperti TR (thyroid hormone receptor), PPAR (peroxisome proliferator
diaktifkan reseptor), LXR (reseptor X hati), FXR (reseptor farnesoid X) atau VDR
(reseptor vitamin D) yang menghasilkan cross-talk hormonal, yang harus
dipertimbangkan sebagai elemen kunci perhatian ketika menyelidiki gangguan
endokrin. RXR juga dimerisasi dengan reseptor penginderaan xenobiotik CAR
(reseptor androstan konstitutif) dan PXR (reseptor X hamil). Pengetahuan saat ini
dengan jelas menggambarkan bahwa sistem retinoid memang merupakan sistem
endokrin, dengan asam retinoat sebagaidi tempat ligan reseptor disintesis
dengan intrakrin serta aktivitas hormonal [22]. Selanjutnya,
ada mesin metabolisme yang kompleks untuk mengontrol penyerapan,
transformasi, dan distribusi keseluruhan bentuk makanan vitamin A2, yaitu
terutama ester retinil dan -karoten, serta untuk mengontrol proses transformasi
sumber vitamin A makanan menjadi molekul asam retinoat sinyal pada skala
spasial dan temporal [24]. Metabolik vitamin A/mesin retinoid secara ketat
mengontrol retinoat ekstra dan intraseluler
2 Zat aktif vitamin A adalah senyawa yang secara kualitatif menunjukkan
aktivitas biologis retinol. Istilah retinoid di sisi lain, mencakup analog alami dan
sintetik dari retinol dengan atau tanpa aktivitas biologis.23].

253
E. Grignard, dkk. Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

Tabel 3
Modalitas endokrin diselidiki dalam Pedoman Tes OECD (berdasarkan OECD GD 150).

Pengujian kadar logam tingkat CF Titik akhir yang diselidiki menginformasikan tentang modalitas*

E SEBUAH S T JH ec R

OECD TG 455 (2016): PBTG untuk Transaktivasi yang Ditransfusikan Secara Stabil Tes In Vitro untuk Mendeteksi Estrogen 2 X
Agonis dan Antagonis Reseptor
OECD TG 456 (2011): Uji Steroidogenesis H295R 2 X
OECD TG 458 (2016): Uji Aktivasi Transkripsi Reseptor Androgen Manusia yang Ditransfusikan Secara Stabil untuk 2 X
Deteksi Aktivitas Androgenik Agonis dan Antagonis Bahan Kimia
OECD TG 493 (2015): PBTG untuk Reseptor Estrogen Rekombinan Manusia (hrER) In Vitro Assays to Detector 2 X
Bahan Kimia dengan Afinitas Pengikatan ER
OECD TG 229 (2012): Uji Reproduksi Jangka Pendek Ikan OECD TG 3 X X X
230 (2009): Uji Ikan 21 Hari 3 X X X
OECD TG 231 (2009): Uji Metamorfosis Amfibi 3 X
OECD TG 248 (2019): Xenopus Eleutheroembryonic Thyroid Assay (XETA) OECD TG 3 X
440 (2007): Uterotrophic Bioassay pada Hewan Pengerat 3 3 X
OECD TG 441 (2009): Hershberger Bioassay pada Tikus 3 X X
OECD TG 206 (1984): Uji Reproduksi Burung 4
OECD TG 210 (2013): Uji Toksisitas Tahap Kehidupan Awal Ikan 4 X
OECD TG 211 (2012): Uji Reproduksi Daphnia (dengan induksi pria) OECD TG 4 X X
218–219 (2004): Uji Toksisitas Chironomid 4 X X
OECD TG 234 (2011): Tes Perkembangan Seksual Ikan 4 X X X X
OECD TG 241 (2015): Uji Pertumbuhan dan Perkembangan Amfibi Larva OECD TG 4 X X X X
242 (2016): Tes Reproduksi Potamopyrgus antipodarum OECD TG 243 (2016): Tes 4 X
Reproduksi Lymnaea stagnalis 4 X
OECD TG 407 (2008): Studi Toksisitas Oral 28-Hari Dosis Berulang pada Hewan 4 X X X X X
Pengerat OECD TG 408 (2018): Studi Toksisitas Oral Dosis Berulang 90-Hari 4 X X X X X
TG 409 (1998): Dosis Berulang Studi Toksisitas Mulut 90 Hari pada Non-tikus OECD 4 X X X X X
TG 410 (1981): Dosis Berulang Toksisitas Kulit: Studi 21/28 Hari OECD TG 411 4 X X X X
(1981): Toksisitas Kulit Subkronis: 90 Hari Studi OECD TG 412 (2018): Studi 4 X X X X X
Toksisitas Penghirupan 28 Hari (Subakut) OECD TG 413 (2018): Toksisitas 4 X X X X X
Penghirupan Subkronis: Studi 90 Hari OECD TG 414 (2018): Studi Toksisitas 4 X X X X X
Perkembangan Prenatal 4 X X X X X
OECD TG 421 dan 422 (2016): (Studi Toksisitas Dosis Berulang Gabungan dengan) Reproduksi/ 4 X X X X X
Tes Penyaringan Toksisitas Perkembangan
OECD TG 426 (2007): Studi Neurotoksisitas Perkembangan 4 X X X X X
OECD TG 451-3 (2018): Gabungan Studi Toksisitas/Karsinogenisitas Kronis OECD TG 4 X X X X X
233 (2010): Uji Toksisitas Siklus Hidup Chironomid Air Sedimen 5 X X
OECD TG 240 (2015): Studi Toksisitas Reproduksi Satu-Generasi Medaka OECD TG 416 (2001): 5 X X X X
Studi Toksisitas Reproduksi Dua-Generasi 5 X X X X X
OECD TG 443 (2018): Studi Toksisitas Reproduksi Satu Generasi yang Diperpanjang 5 X X X X X

Singkatan modalitas: E; estrogen, A; androgen, T; tiroid, S; steroidogenesis, JH; hormon remaja, Ec; ekdison, R; modalitas terkait retinoid.
* beberapa titik akhir hanya opsional.

konsentrasi asam, gradien spasial dan temporal dari konsentrasi tersebut selama
perjalanan hidup, serta penyerapan keseluruhan, penyimpanan, dan
pengangkutan berbagai bentuk kimia vitamin A di dalam dan di antara sel dan
jaringan pada vertebrata [24,25]; serta invertebrata [25]. Pada tingkat transkripsi,
ada bukti untuk kontrol langsung dari 27 gen [26] oleh heterodimer RAR-RXR
ligan asam retinoat, sementara, untuk 100 gen tambahan, bukti kuat masih
kurang [26]. Lebih lanjut, lebih dari 100 gen tampaknya diatur secara tidak
langsung oleh kompleks asam retinoat dengan heterodimer RAR/RXR, yaitu
secara independen dari elemen respons asam retinoat (RARE) pada DNA.
5. Jalan ke depan dalam identifikasi dan pengujian pengganggu
retinoid
Adopsi pandangan yang lebih luas pada sistem endokrin, seperti yang
disajikan dalam DRP 178, merupakan kemajuan konseptual dan ilmiah utama
untuk mekanistik serta toksikologi regulasi. Kerangka kerja Adverse Outcome
Pathway (AOP) (OECD GD 184 [27]) adalah kemajuan konseptual lain untuk
mendukung pembangunan dan pengorganisasian pengetahuan dalam
toksikologi endokrin dan seterusnya (seperti yang juga ditekankan dalam DRP
178). AOP adalah konstruksi analitik yang menggambarkan rantai berurutan dari
peristiwa yang terkait secara kausal di berbagai tingkat organisasi biologis yang
dapat menyebabkan hasil kesehatan yang merugikan atau efek ekotoksikologi
dari relevansi peraturan.
AOP(s) dapat digunakan untuk membantu mengidentifikasi zat, yang bertindak
melalui mode aksi mengganggu endokrin (retinoid). Mereka dapat digunakan di dalam
konteks regulasi identifikasi pengganggu endokrin dengan menghubungkan efek
atau hasil yang merugikan dengan gangguan spesifik pada sistem endokrin.
Pengembangan AOP juga dapat membantu mengidentifikasi kesenjangan
pengetahuan, di mana diperlukan lebih banyak penelitian. Jaringan AOP atau AOP yang
mapan juga dapat digunakan untuk menunjukkan relevansi mekanistik dari metode
pengujian untuk mendukung pengembangannya menuju penggunaan regulasi. Contoh
jaringan AOP terkait dengan tabung saraf dan defek aksial, dan celah langit-langit,
masing-masing dalam kaitannya dengan pensinyalan asam retinoat telah dipublikasikan
baru-baru ini [28,29]. AOP ini menunjukkan pada tingkat molekuler, seluler, jaringan,
dan organ bahwa aktivasi RAR yang tidak tepat (memediasi respons reseptor nuklir
terhadap asam retinoat), serta penghambatan CYP 26 (terlibat dalam mendegradasi
asam retinoat) atau Raldh (terlibat dalam sintesis asam retinoat). sising asam retinoat
dari prekursor retinalnya) dapat mengubah metabolisme seluler dan/atau distribusi
spatiotemporal asam retinoat, yang pada gilirannya dapat mengakibatkan efek
kerangka ireversibel, seperti celah langit-langit, serta cacat jantung atau anggota tubuh [
28,29].
Peristiwa kunci awal AOP, menyajikan bukti di tingkat molekuler atau seluler,
umumnya didasarkan pada model bebas hewani, seperti in vitro atau dalam
silikon sistem. Hubungan antara setiap peristiwa kunci (yang disebut hubungan
respons-respons), termasuk besarnya perubahan dalam satu peristiwa kunci yang
diperlukan untuk memicu peristiwa penting berikutnya, dapat menginformasikan
hasil yang merugikan potensial. Kemampuan untuk menerjemahkan gangguan
pada tingkat molekuler dan selulerin vitro untuk kemungkinan hasil di tingkat
organisme secara keseluruhan masih memiliki banyak ketidakpastian. Namun
demikian, ketika pengetahuan terus berkembang dan ketika cukup

254
E. Grignard, dkk. Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

Tabel 4 kesenjangan pengetahuan yang besar, khususnya untuk spesies invertebrata,

Jalur endokrin dan tes terkait dipertimbangkan dalam DRP 178. jelas bahwa ada kesamaan organisasi dan fungsional dari masing-masing sistem

Jalur sinyal Assay

retinoid di seluruh taksa sampai ke nenek moyang terakhir dari semua bilateria.
Dalam konteks ini, kemungkinan identifikasi peristiwa kunci yang relevan dengan
HPA • Uji reseptor glukokortikoid (in vitro) sistem retinoid yang dilestarikan dalam konteks AOP memiliki potensi besar
Pelepasan ACTH (in vivo)
untuk membantu mengurangi kebutuhan pengujian hewan dengan
• • Sintesis steroid adrenal (in vitro, in vivo)
• Respon stres (in vivo) Pengembangan
memungkinkan ekstrapolasi pengetahuan lintas spesies.
Sejalan dengan pengakuan OECD akan kebutuhan untuk memperluas
HPG • pengujian diperlukan cakupan penelitian dan pengujian peraturan di luar modalitas EATS untuk
gangguan endokrin, pada tahun 2015 EC menyelenggarakan survei ahli berjudul
Somatotropik •• Tingkat IGF-1 (in vivo)
Pertumbuhan (in vivo)
"Identifying gaps in available test methods for evaluation of endokrin disrupters" [
30] untuk mengumpulkan masukan tentang isu-isu utama yang akan digunakan
Retinoid • Uji reporter RXR (in vitro) sebagai dasar untuk diskusi lebih lanjut pada lokakarya ahli lanjutan pada tahun
Uji reporter RAR (in vitro) 2017 tentang “Menetapkan prioritas untuk pengembangan lebih lanjut dan
• • Uji reporter AhR (in vitro)
•
validasi metode pengujian untuk mengevaluasi gangguan endokrin” [31]. Empat
Diferensiasi adiposit (in vitro)

• Akumulasi lipid (in vivo)

puluh ahli dari lima belas negara, termasuk para ahli dari Komite Ilmiah dan

• Kadar retinoid serum (in vivo) Kelompok Kerja Pengganggu Endokrin EFSA, Kelompok Ahli Pengganggu
Endokrin ECHA dan Komite Penilaian Risiko (RAC), anggota Kelompok Kerja
HPT • Wartawan TR (in vitro) Koordinator Nasional OECD TG pro - gramme (WNT), dan ahli tambahan di bidang
Proliferasi sel (in vitro)
endokrinologi, diundang untuk berpartisipasi dalam survei. Para ahli diminta
• • Peroksidase tiroid (in vitro)
• Penyerapan iodida (in vitro) untuk membuat peringkat penyakit/gangguan terkait endokrin sehubungan
dengan kebutuhan untuk mengembangkan metode pengujian baru untuk lebih
Vitamin D • Pengembangan uji diperlukan mengidentifikasi potensi kontribusi bahan kimia lingkungan terhadap terjadinya
penyakit/gangguan, sambil mempertimbangkan tingkat kekhawatiran penyakit/
PPAR • Reporter transaktivasi (in vitro)
Diferensiasi adiposit (in vitro) gangguan ini. seperti tingkat keparahan dampak pada kualitas hidup dan

• • Proliferasi peroksisom (in vivo)

• Akumulasi lipid (in vivo)
Tes yang terdaftar berada pada tingkat perkembangan yang berbeda. (http://
www.oecd.org/officialdocuments/publicdisplaydocumentpdf/?cote= env/jm/
mono(2012)23&doclanguage=en).
jumlah AOPs akan dikembangkan, dapat dibayangkan bahwa hasil yang
merugikan dapat diprediksi, dari pengetahuan tentang jalur endokrin terganggu
tanpa perlu percobaan hewan laboratorium, yang sesuai dengan tujuan Arahan
Eropa 2010/63 tentang perlindungan hewan yang digunakan untuk tujuan ilmiah.
Pendekatan AOP, dengan demikian, memberikan kesempatan untuk mengikuti
prinsip 3R (penggantian, pengurangan dan penyempurnaan) juga untuk penilaian
regulasi gangguan endokrin. Sudah diketahui dengan baik bahwa sistem retinoid
adalah evolusioner yang dilestarikan [25], dan meskipun sudah ada
meningkatnya prevalensi dalam populasi (Tabel 5SEBUAH). Sangat menarik untuk
dicatat bahwa gangguan peringkat kedua dan ketiga melibatkan modalitas non-
EATS, dan lebih khusus lagi bahwa gangguan sinyal asam retinoat dapat terlibat
dalam gangguan metabolisme (peringkat kedua). Para ahli juga diminta untuk
menentukan peringkat kebutuhan metode pengujian baru atau titik akhir baru
untuk ditambahkan ke TG OECD yang ada untuk mencakup jalur tambahan.
Kriteria yang dipertimbangkan untuk menentukan prioritas metode/titik akhir
adalah, dalam urutan menurun: relevansi dengan penyakit/gangguan dan tahap
kehidupan/jendela pajanan; spesies dan target molekuler; kesejahteraan hewan;
dan biaya. Balasan dari para ahli mengenai jalur pensinyalan asam retinoat
disajikan dalamTabel 5B. Selama lokakarya tindak lanjut [31], peserta diminta
untuk memberi peringkat penyakit/gangguan terkait endokrin yang menjadi
perhatian tertinggi, dengan mempertimbangkan tingkat keparahannya,
keterkaitan dengan mode tindakan endokrin, insiden, biaya, dampak sosial,
dampak pada orang yang lebih muda, kesehatan ekosistem, keanekaragaman
hayati, biaya dalam hal jasa ekosistem (misalnya penyerbuk), ketahanan dan
keamanan pangan, dan pengusulan, serta pengutamaan

Tabel 5
Hasil dari survei ahli tentang (A) identifikasi kesenjangan dalam tes yang tersedia metode untuk evaluasi pengganggu endokrin berdasarkan penyakit/gangguan
perhatian, dan (B) proposal untuk mengisi celah pengujian dan titik akhir dengan fokus pada sistem Retinoid [30].

5A. Pemeringkatan penyakit/gangguan sehubungan dengan tingkat kekhawatiran (misalnya keparahan dampak pada kualitas hidup dan peningkatan prevalensi dalam populasi) pada manusia dan kebutuhan untuk berkembang
metode untuk memprediksi Peringkat

perkembangannya* Penyakit/gangguan

1 Gangguan terkait tiroid/perkembangan saraf

2 Gangguan metabolisme
3 Gangguan terkait sistem kekebalan tubuh

5B. Prioritas metode pengujian baru atau titik akhir baru untuk pengujian yang ada untuk mencakup jalur pensinyalan asam retinoat

Pangkat Metode pengujian/Titik Akhir Komentar

Rata-rata – tinggi Transaktivasi RAR/RXR Titik akhir yang relevan

Rata-rata dengan retinoid di in vivo TGs IATA untuk sumbu
asam retinoat
penambahan berat badan, massa jaringan adiposa, akumulasi lipid, pengukuran tingkat retinoid- bukan penanda khusus untuk pensinyalan RAR/RXR
Rendah aktivitas EROD in vivo
Ekspresi Cyp1A dari mRNA atau protein in vivo
Transaktivasi AhR

* Peringkat adalah dari perhatian tertinggi (1) ke bawah (10) di seluruh survei. Peringkat 1 adalah area di mana metode harus dikembangkan dengan prioritas tertinggi.
RAR: Retinoic acid receptor, RXR: retinoid X receptor, TG: Test Guideline, IATA: Integrated Approaches to Testing and Assessment, EROD: Ethoxyresorufin-O-deethylase,
AhR: Aryl hydrocarbon receptor.

255
E. Grignard, dkk. Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258

metode dan titik akhir untuk mengisi celah pengujian yang terkait dengan
penyakit/gangguan ini. Penetapan prioritas didasarkan pada pendekatan
berjenjang dengan mempertimbangkan relevansi regulasi, seperti modus
tindakan dan kesulitan, kemudian kelayakan praktis, biaya, dan kesejahteraan
hewan. Pandangan para ahli di lokakarya, yang dirangkum dalamTabel 6,
menyoroti sistem retinoid dalam kaitannya dengan gangguan yang sangat
diprioritaskan dari disfungsi metabolisme dan malformasi tulang pada manusia,
dan gangguan dengan pertumbuhan dan perkembangan pada spesies
lingkungan (Tabel 6SEBUAH). Berbagai retinoid-relevanin vitro pengujian
disarankan untuk pengembangan lebih lanjut, sementara mengakui bahwa
beberapa telah dikembangkan dan digunakan sebagai bagian dari program EPA
ToxCast AS, dan beberapa yang relevan dengan retinoid. in vivo pengukuran yang
diusulkan (Tabel 6B).
6. Sistem retinoid di tingkat OECD
Semakin banyak laporan dan artikel dalam literatur yang diterbitkan
menggambarkan cakupan luas dari keterlibatan sistem retinoid dalam proses dan
fungsi fisiologis mendasar selama perkembangan embriofetal dan selama
perjalanan hidup selama evolusi invertebrata dan vertebrata (diulas dalam [24,32–
37]). Selain itu, literatur juga menunjukkan bahwa berbagai kategori bahan kimia,
sendiri atau dalam kombinasi, dapat mengganggu sistem retinoid pada hewan
percobaan dan model sel pada dosis paparan, yang relevan untuk situasi paparan
manusia dan satwa liar (ditinjau dalam [21,38–44]). Banyak laporan menunjukkan,
dalam beberapa spesies, bahwa konsentrasi retinoid dalam jaringan serta tingkat
peredaran darah dipengaruhi oleh berbagai kelas bahan kimia, termasuk
pestisida organoklorin, dioksin, PCB, penghambat api bromin, dan organometal.
Laporan lain menunjukkan bahwa gangguan sistem retinoid dapat terjadi melalui
peristiwa molekuler yang berbeda, dan lebih jauh lagi, dapat memiliki dampak
fungsional pada banyak organ.41,43]. Misalnya, celah langit-langit dapat diinduksi
oleh triazol (insektisida organoklorin antijamur) melalui aktivasi RAR yang
dimediasi CYP 26, sedangkan celah langit-langit diinduksi oleh dioksin (insektisida
lingkungan).
Tabel 6
Hasil lokakarya EC tentang Menetapkan prioritas untuk pengembangan lebih lanjut dan
validasi metode pengujian dan pendekatan pengujian untuk mengevaluasi pengganggu
endokrin [31] sehubungan dengan sistem retinoid dalam hal (A) keterlibatannya dalam
penyakit/gangguan dan (B) metode pengujian/titik akhir yang tersedia.
6A. Prioritas penyakit, gangguan dan hasil yang merugikan terkait dengan gangguan
endokrin dengan perhatian tertinggi dan keterlibatan retinoid yang diakui
sistem.
Pangkat Perhatian Penyakit/gangguan Sistem retinoid
keterlibatan
kontaminan) adalah peristiwa yang dimediasi AhR, yang juga kemungkinan
melibatkan sistem retinoid [29,42]. Demikian juga, neurotoksisitas perkembangan
dapat diinduksi oleh gangguan sistem retinoid, misalnya dengan penghambatan
CYP26 oleh triazole, atau penghambatan histone deacetylase oleh asam valproat,
dalam kedua kasus yang mengarah pada perubahan sinyal asam retinoat.42].
Terlepas dari bukti yang berkembang ini, masih ada kekurangan TG pengatur,
yang secara khusus menangkap gangguan sistem retinoid sehubungan dengan
gangguan endokrin serta dalam toksikologi pengaturan secara umum. Oleh
karena itu, dengan membangun prioritas dari DRP 178, dan basis pengetahuan
yang berkembang lebih lanjut tentang sistem retinoid, sebuah proyek untuk
menganalisis kebutuhan dan manfaat dari menggabungkan sistem retinoid ke
dalam program OECD TG dimasukkan dalam rencana kerja OECD di
2015.
Cakupan luas dari keterlibatan sistem retinoid dalam proses kehidupan
mendasar memotivasi proyek untuk mengeksplorasi, dalam literatur yang ada,
jika dan bagaimana beragam jenis toksisitas dan hasil kesehatan selama
perjalanan hidup mungkin terkait dengan perubahan sistem retinoid. Tujuan dari
proyek ini adalah untuk memetakan pengetahuan yang ada secara rinci dan
untuk mengidentifikasi kesenjangan pengetahuan, dengan tujuan untuk
memberikan DRP pada sistem retinoid dalam biologi dan toksikologi untuk
digunakan sebagai titik awal untuk pengembangan skrining dan pengujian.
metode dalam program TG OECD dan untuk mendukung pengembangan AOP
yang relevan dengan sistem retinoid. Proyek sistem retinoid diusulkan dan
diprakarsai oleh Badan Kimia Swedia dan Komisi Eropa (sebagai co-lead).
Awalnya, konsultasi dengan perwakilan luas ilmuwan regulasi dan akademik
berlangsung selama 2016–2017 untuk merinci ruang lingkup DRP dan untuk
mengembangkan draf pertama yang disusun seputar tinjauan menyeluruh
biologi retinoid dan biokimia secara umum, serta evolusi konservasi sistem
retinoid (gen dan jalur) di seluruh filum, dan perbandingan lintas spesies fungsi
retinoid. Draf tersebut menggambarkan peluang untuk pengukuran kuantitatif
berbagai bentuk retinoid kimia dalam jaringan berbeda yang kemudian dapat
diterapkan secara luas ke TG baru dan yang sudah ada, dan mempertimbangkan
peran sistem retinoid dalam pembentukan dan fungsi organ menggunakan
pengetahuan yang berasal dari eksperimen hewan, manusia dan studi
epidemiologi satwa liar, serta studi kesehatan dan penyakit masyarakat. Draf
pertama juga menggambarkan kebutuhan untuk mengumpulkan bukti tentang
kemampuan bahan kimia untuk berinteraksi dan berdampak pada fungsi normal
sistem retinoid di berbagai organ, mengingat keterlibatan luas sistem retinoid
dalam proses biologis. Mengikuti langkah proyek pertama ini, rancangan-DRP
sedang dikembangkan lebih lanjut oleh Badan Kimia Swedia (KemI) dan melalui
kontrak khusus yang diselenggarakan oleh OECD dan didanai oleh Direktorat
Jenderal Lingkungan Komisi Eropa. DRP terakhir akan mencakup bab tentang
reproduksi pria dan wanita, gangguan perkembangan saraf, serta malformasi
tulang dan kraniofasial. Makalah Kerja Nordik tentang reproduksi pria dan wanita
akan mendahului publikasi DRP OECD.

Tinggi Kesehatan manusia Perkembangan saraf /

Tiroid Kepentingan regulasi dalam pekerjaan DRP pada sistem retinoid oleh negara-
Tinggi Reproduksi wanita
negara anggota OECD mendorong jurnal Elsevier Reproductive Toxicology untuk
Tinggi Disfungsi metabolisme Iya
memulai Edisi Khusus berjudul Sistem Retinoid dalam Biologi dan Toksikologi.
Moderat Malformasi (seperti Iya
cacat kraniofasial, celah langit- Submisi diundang dari penelitian asli, ulasan saat ini, komentar, laporan kasus
langit) dan informasi lainnya, untuk memberikan komunitas ilmiah umum dengan
informasi mutakhir tentang sistem retinoid dalam konteks peraturan dari
Tinggi Lingkungan Kesehatan reproduksi
gangguan endokrin. Diharapkan bahwa penerbitan gabungan Kertas Kerja
Tinggi Kesehatan Pertumbuhan dan Perkembangan Ya
Nordik, DRP OECD, dan edisi khusus pendukung akan merangsang upaya

6B. Prioritas metode tes baru atau titik akhir baru untuk ditambahkan ke tes yang ada di
kolaboratif yang berkelanjutan antara sektor regulasi dan akademik untuk
untuk menutupi jalur pensinyalan asam retinoat mengatasi masalah publik dan politik tentang keamanan bahan kimia dan peran
sistem retinoid. bermain di sifat kompleks gangguan endokrin.
Metode pengujian/Titik Akhir

In vitro * Transaktivasi RAR/RXR

Aktivitas Cyp 26
in vivo kadar asam retinoat serum dan hati 7. Kesimpulan

* Perlu dicatat bahwa beberapa in vitro tes pensinyalan retinoid sudah

telah dikembangkan dan digunakan untuk menyaring banyak bahan kimia sebagai Keputusan untuk menyelidiki dan menganalisis kebutuhan dan manfaat
bagian dari Program ToxCast EPA AS (https://cfpub.epa.gov/si/ menggabungkan sistem retinoid ke dalam program OECD TG untuk gangguan
si_public_record_report.cfm? dirEntryId=336407). endokrin melalui sistem retinoid DRP dibangun berdasarkan

256
E. Grignard, dkk.
prioritas dari DRP 178, dan didukung oleh negara-negara anggota OECD. Aspek
penting di balik keputusan tersebut termasuk cakupan luas dari keterlibatan
sistem retinoid dalam proses dan fungsi fisiologis mendasar selama
perkembangan embriofetal dan selama perjalanan hidup selama evolusi
invertebrata dan vertebrata, serta kurangnya TG pengatur saat ini, yang secara
khusus menangkap gangguan sistem retinoid dalam gangguan endokrin.
Hasil yang diharapkan dari DRP sistem retinoid, termasuk identifikasi peristiwa kunci
yang relevan dengan sistem retinoid untuk lebih mengembangkan kerangka kerja AOP,
dan perluasan AOP dan TG yang ada yang menggabungkan aspek jalur retinoid. Pada
gilirannya diharapkan bahwa AOP dan TG yang relevan dengan sistem retinoid akan
membantu membangun hubungan sebab akibat antara kejadian awal molekuler dan
hasil yang merugikan; membantu mengembangkan metode pengujian dan biomarker
yang relevan dengan peraturan; membantu mengurangi kebutuhan pengujian hewan
(prinsip 3R) dengan mengizinkan ekstrapolasi lintas taksa; membantu mengidentifikasi
kesenjangan yang relevan dengan peraturan dalam pengetahuan sistem retinoid; dan
membantu memfokuskan sumber daya yang tersedia pada kesenjangan yang
diprioritaskan.
Pernyataan Kepentingan Bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan keuangan yang
bersaing atau hubungan pribadi yang tampaknya dapat mempengaruhi pekerjaan yang
dilaporkan dalam makalah ini.
Ucapan Terima Kasih
Proyek sistem OECD Retinoid diusulkan dan diprakarsai oleh Swedish
Chemicals Agency dan European Commission (co-lead). Kontrak oleh Komisi
Eropa (ENV.A.3/FRA/2014/
0029) dan Grup Bahan Kimia Nordik (NKG 2016-023; NKG 2017-
003) penting untuk inisiasi publikasi dan dengan mendukung penyusunan DRP
awal dan memfasilitasi partisipasi luas pada tiga Lokakarya/Pertemuan Kelompok
Pakar Ilmiah awal proyek terkait, yang diadakan di Brussel selama periode April
2016- Februari 20173 .
3 Kontribusi untuk memulai proyek OECD Retinoid 4:97 selama periode 2016
−2017, termasuk pimpinan proyek, pekerjaan kontrak, partisipasi negara
anggota, dan partisipasi oleh pakar ilmiah eksternal sebagai berikut: Co-lead:
Swedish Chemicals Agency (KemI) : Yvonne Andersson, Henrik Appelgren,
Margareta Halin Lejonklou, Ing-Marie Olsson Ressner. Komisi Eropa: Elise
Grignard, Peter Korytar, Sharon Munn, Maiken Rasmussen. Pekerjaan kontrak
yang dilakukan berdasarkan permintaan layanan Komisi Eropa 2 'Mendukung
pengembangan Makalah Tinjauan Terperinci OECD tentang Kerangka Kontrak
Sistem Retinoid' ENV.A.3/FRA/2014/0029 tentang penerapan strategi Komunitas
tentang Pengganggu Endokrin: Alice Baynes, Edwin Routledge, Brunel University
London, Inggris Raya, dan Sofie Christiansen, Ulla Hass, Institut Pangan Nasional,
Universitas Teknik Denmark, Denmark. Pekerjaan kontrak yang dilakukan
berdasarkan kontrak Nordic Chemicals Group (NKG 2016−023; NKG 2017−003):
Helen Håkansson, Institut Kedokteran Lingkungan, Institut Karolinska, Stockholm,
Swedia Lokakarya/partisipasi kelompok Pakar Ilmiah oleh negara-negara Anggota
dan pakar ilmiah eksternal: Prancis: Norbert Ghyselinck, Manuel Mark, Institut
Genetika dan Biologi Molekuler dan Seluler (IGBMC). Finlandia: Tuula Heinonen,
Universitas Tampere, Raimo Pohjanvirta, Universitas Helsinki, Matti Viluksela,
Universitas Finlandia Timur dan Institut Nasional Kesehatan dan Kesejahteraan.
Italia: Francesca Di Renzo, Elena Menegola, Universitas Milan. Jepang: Taisen
Iguchi, Institut Nasional untuk Biologi Dasar Okazaki. Spanyol: Javier Esteban,
Ismael Sánchez Pérez, Universitas Elche Miguel Hernandez. Swedia: Pauliina
Damdimopoulou, Astrud Tuck, Institut Swetox/ Karolinska & Rumah Sakit
Universitas Karolinska, Allan Sirsjö, Universitas Örebro. Belanda: Aldert Piersma,
Yvonne Staal, Universitas Utrecht dan Institut Nasional untuk Kesehatan
Masyarakat dan Lingkungan (RIVM). Britania Raya:
Miriam Jacobs, Kesehatan Masyarakat Inggris Amerika Serikat: Nancy Baker,
Thomas Knudsen, Badan Perlindungan Lingkungan Amerika Serikat.
257
Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258
Referensi
[1] Program Internasional tentang Keamanan Kimia, Penilaian Global terhadap Negara
Pengganggu Endokrin, (2002) hlm. 180.
[2] WHO UNEP, State of the Science of Endocrine Disrupting Chemicals - 2012, (2012)
hal. 289.
[3] WHO, Kemungkinan Efek Awal Perkembangan Pengganggu Endokrin pada Kesehatan
Anak, (2012).
[4] A. Kortenkamp, O. Martin, M. Faust, R. Evans, R. McKinlay, F. Orton, E. Rosivatz, Penilaian
Seni Pengganggu Endokrin, (2011).
[5] Komisi Eropa, Strategi Komunitas untuk Pengganggu Endokrin COM (1999)
706, (1999) https://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=
COM:1999:0706:FIN:%20EN:PDF.
[6] Komisi Eropa, Menuju Kerangka Uni Eropa Komprehensif tentang Pengganggu Endokrin
COM (2018) 734, (2018) https://ec.europa.eu/transparency/ regdoc/rep/1/2018/EN/
COM-2018-734-F1-EN-MAIN-PART-1.PDF.
[7] Komisi Eropa, Peraturan Delegasi Komisi (UE) 2017/2100 Menetapkan Kriteria Ilmiah untuk
Penentuan Sifat Pengganggu Endokrin Berdasarkan Peraturan (UE) No 528/2012 Parlemen
dan Dewan Eropa,
(2017) https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/PDF/?uri=
CELEX:32017R2100&from=EN.
[8] Komisi Eropa, Peraturan Komisi (UE) 2018/605 Mengamandemen Lampiran II Peraturan (EC)
No 1107/2009 dengan Menetapkan Kriteria Ilmiah untuk Penentuan Sifat Pengganggu
Endokrin, (2018) https://eur-lex.europa. eu/legal-content/EN/TXT/PDF/?
uri=CELEX:32018R0605&from=EN.
[9] Badan Kimia Eropa, Otoritas Keamanan Makanan Eropa, Pusat Penelitian Gabungan,
Panduan untuk identifikasi pengganggu endokrin dalam konteks Peraturan (UE) No
528/2012 dan (EC) No 1107/2009, EFSA J. 16 (6 ) (2018),
https://doi.org/10.2903/j.efsa.2018.5311.
[10] Organization for Economic Co-operation and Development, Revised Guidance Document 150
on Standardized Test Guidelines for Evaluating Chemicals for Endocrine Disruption, OECD
Series on Testing and Assessment, Paris, 2018, https://doi.org/10.1787/97892643047441-
en.
[11] Organization for Economic Co-operation and Development, Uterotrophic Bioassay in
Rodents: a Short-term Screening Test for Oestrogenic Properties, OECD Guidelines for the
Testing of Chemicals, Paris, 2007, https://doi.org/10.1787/ 9789264067417-en.
[12] Organization for Economic Co-operation and Development, Hershberger Bioassay in Rats: A
Short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties, OECD Guidelines for the
Testing of Chemicals, Paris, 2009, https://doi.org/10.1787/ 9789264076334-en.
[13] Organisasi untuk Kerjasama dan Pengembangan Ekonomi, Uji Metamorfosis Amfibi,
Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia, Paris, 2009,
https://doi.org/10.1787/9789264076242-en.
[14] Organisasi untuk Kerjasama dan Pengembangan Ekonomi, Uji Reproduksi Jangka Pendek
Ikan, Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia, Paris, 2012,
https://doi.org/10.1787/9789264185265-en.
[15] Organization for Economic Co-operation and Development, 21-day Fish Assay: A Short-Term
Screen for Oestrogenic and Androgenic Activity, and Aromatase Inhibition, OECD
Guidelines for the Testing of Chemicals, Paris, 2009, https://doi. org/
10.1787/9789264076228-id.
[16] Organisasi untuk Kerjasama dan Pengembangan Ekonomi, Pedoman Tes Berbasis Kinerja
untuk Transaktivasi yang Ditransfusikan Secara Stabil Tes In Vitro untuk Mendeteksi
Agonis dan Antagonis Reseptor Estrogen, Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia,
Paris, 2016, https://doi.org/10.1787/9789264265295-en.
[17] Organisasi untuk Kerjasama dan Pengembangan Ekonomi, Studi Toksisitas Oral 90-hari
Dosis Berulang pada Hewan Pengerat, Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia,
Paris, 2018, https://doi.org/10.1787/9789264070707-en.
[18] Organisasi untuk Kerjasama dan Pengembangan Ekonomi, Studi Toksisitas Perkembangan
Prenatal, Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia, Paris, 2018, https://doi.org/
10.1787/9789264070820-en.
[19] P. Browne, RS Judson, WM Casey, NC Kleinstreuer, RS Thomas, Bahan kimia penapisan untuk
bioaktivitas reseptor estrogen menggunakan model komputasi, Environ. Sci. teknologi. 49
(14) (2015) 8804–8814.
[20] CL Schwartz, S. Christiansen, AM Vinggaard, M. Axelstad, U. Hass, T. Svingen, Jarak
anogenital sebagai penanda toksikologi atau klinis untuk aksi androgen janin dan risiko
gangguan reproduksi, Arch. racun. 93 (2) (2019) 253–272.
[21] Organization for Economic Co-operation and Development, Detil Review Paper on the State
of the Science on Novel In Vitro and In Vivo Screening and Testing Methods and Endpoints
for Evaluating Endocrine Disruptors, OECD Series on Testing and Assessment, Paris, 2012,
https://doi.org/10.1787/9789264221352-en.
[22] J. Reichrath, C. Lehmann B Fau - Carlberg, J. Carlberg C Fau - Varani, CC Varani J Fau -
Zouboulis, CC Zouboulis, Vitamin sebagai hormon, Horm. Meta Res. 39 (2)
(2020) 71–84, https://doi.org/10.1055/s-2007-958715.
[23] Nomenklatur retinoid: rekomendasi 1981. Komisi Bersama IUPAC-IUB untuk Nomenklatur
Biokimia (JCBN), Arch. Biokimia. Biofis. 224 (2) (1983) 728–731.
[24] R. Blomhoff, HK Blomhoff, Tinjauan metabolisme dan fungsi retinoid, J. Neurobiol. 66 (7)
(2006) 606–630.
[25] A. Andre, R. Ruivo, M. Gesto, LF Castro, MM Santos, Metabolisme retinoid pada invertebrata:
ketika evolusi bertemu dengan gangguan endokrin, Gen. Comp. Endokrinol. 208 (2014)
134–145.
[26] JE Balmer, R. Blomhoff, Regulasi ekspresi gen oleh asam retinoat, J. Lipid Res. 43 (11) (2002)
1773–1808.
[27] Organisasi untuk Kerjasama Ekonomi dan Pembangunan, Revisi Panduan
E. Grignard, dkk.
Dokumen tentang Mengembangkan dan Menilai Jalur Hasil yang Merugikan, Paris, (2017)
http://www.oecd.org/officialdocuments/publicdisplaydocumentpdf/?cote=env/jm/
mono(2013)6&doclanguage=en.
[28] EC Tonk, JL Pennings, AH Piersma, Kerangka kerja jalur hasil yang merugikan untuk tabung
saraf dan defek aksial yang dimediasi oleh modulasi homeostasis asam retinoat, Reprod.
racun. 55 (2015) 104–113.
[29] NC Baker, NS Sipes, J. Franzosa, DG Belair, BD Abbott, RS Judson,
TB Knudsen, Karakterisasi toksikan celah langit-langit menggunakan data ToxCast,
struktur kimia, dan literatur biomedis, Birth Defects Res. 112 (1) (2020) 19–39.
[30] S. Bopp, M. Nepelska, M. Halder, S. Munn, Survei Ahli tentang Identifikasi Kesenjangan
dalam Metode Pengujian yang Tersedia untuk Evaluasi Pengganggu Endokrin, (2017),
https://doi.org/10.2760/844100.
[31] Risk & Policy Analysts Ltd, Wca Environment., Menetapkan Prioritas untuk Pengembangan
Lebih Lanjut dan Validasi Metode Pengujian dan Pendekatan Pengujian untuk Mengevaluasi
Pengganggu Endokrin, (2018), https://doi.org/10.2779/21828.
[32] S. Bar-El Dadon, R. Reifen, Vitamin A dan epigenom, Crit. Pdt. Ilmu Pangan. nutrisi 57 (11)
(2017) 2404–2411.
[33] G. Duester, Sintesis dan pensinyalan asam retinoat selama organogenesis awal, Sel 134 (6)
(2008) 921–931.
[34] RM Evans, DJ Mangelsdorf, Reseptor nuklir, RXR, dan big bang, Sel 157
(1) (2014) 255–266.
[35] M. Mark, NB Ghyselinck, P. Chambon, Fungsi reseptor asam retinoat selama perkembangan
embrionik, Nucl. Terima. Sinyal. 7 (2009) e002.
[36] M. Rhinn, P. Dolle, Pensinyalan asam retinoat selama pengembangan, Pengembangan 139
(5) (2012) 843–858.
[37] M. Theodosiou, V. Laudet, M. Schubert, Dari wortel ke klinik: ikhtisar jalur pensinyalan asam
retinoat, Sel. mol. Ilmu Kehidupan. 67 (9) (2010) 1423–1445.
[38] European Centre for Ecotoxicology and Oxicology of Chemicals, Membangun Ontologi
Toksisitas Perkembangan Prenatal, (2016) http://www.ecetoc.org/wp-content/
258
Toksikologi Reproduksi 93 (2020) 250–258
uploads/2016/07/SR19-Building-a-Prenatal-Developmental-Toxicity-Ontology.pdf.
[39] KA Murphy, L. Quadro, LA White, Persimpangan antara reseptor aril hidrokarbon (AhR)- dan
jalur pensinyalan asam retinoat, Vitam. Hormat. 75 (2007) 33–67.
[40] CB Nilsson, H. Hakansson, Sistem pensinyalan retinoid-target dalam toksisitas dioksin, Crit.
Pdt. Toksikol. 32 (3) (2002) 211–232.
[41] J. Novak, M. Benisek, K. Hilscherova, Gangguan transportasi retinoid, metabolisme dan
sinyal oleh polutan lingkungan, Environ. Int. 34 (6) (2008) 898–913.
[42] AH Piersma, EV Hessel, YC Staal, Asam retinoat dalam toksikologi perkembangan:
teratogen, morfogen dan biomarker, Reprod. racun. 72 (2017) 53–61.
[43] IO Shmarakov, Interaksi retinoid-xenobiotik: ying dan yang, Hepatobiliary Surg.
nutrisi 4 (4) (2015) 243–267.
[44] MH Zile, Vitamin A homeostasis terancam oleh polusi lingkungan, Proc. Soc. Eks. Biol. Med.
201 (2) (1992) 141-153.
[45] Komisi Eropa, Peraturan (EC) No 1907/2006 Tentang Registrasi, Evaluasi, Otorisasi dan
Pembatasan Bahan Kimia (REACH),
(2006) http://data.europa.eu/eli/reg/2006/1907/oj.
[46] Komisi Eropa, Peraturan (UE) No 528/2012 Tentang Penyediaan di Pasar dan Penggunaan
Produk Biosida, (2012) http://data.europa. eu/eli/reg/2012/528/oj.
[47] Komisi Eropa, Peraturan (EC) No 1107/2009 Tentang Penempatan Produk Perlindungan
Tanaman di Pasar, (2009) http://data.europa.eu/eli/reg/ 2009/1107/oj.
[48] Komisi Eropa, Regulasi (EU) 2017/745 tentang Alat Kesehatan, (2017)
http://data.europa.eu/eli/reg/2017/745/oj.
[49] Komisi Eropa, Arahan 2000/60/EC Menetapkan Kerangka Aksi Masyarakat di Bidang
Kebijakan Air, (2000) http://data.europa.eu/eli/ dir/2000/60/oj.