LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DASAR

“PEMURNIAN DAN PENGENALAN KOLONI”

Disusun Oleh:

Nama : Meyza Yoanda Mujevi

NPM : E1G020040
Prodi : Teknologi Industri Pertanian
Hari/Jam : Jum’at/08.00
Dosen : 1. Ir. Hasanuddin, M. Sc
2. Tuti Tutuarima, S.TP, M. Si
Ko-Ass : Siti Fatimah (E1G018045)

LABORATORIUM TEKNOLOGI PERTANIAN

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS BENGKULU
2021
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikrobiologi merupakan suatu cabang ilmu biologi yang mempelajari tentang
mikroorganisme dan interaksi mereka dengan organisme lain dan lingkungannya.
Mikroorganisme terdapat di segala macam lingkungan sebagai bagian dari ekosistem alam.
Sebagian dari mikroorganisme itu adalah produsen, sebagian konsumen pertama dan sebagian
lagi konsumen kedua dan ke tiga. Mikroorganisme dapat ditemukan di daerah kutub, di
daerah tropik, dalam air, dalam tanah, dalam debu di udara, pada tumbuhan, tubuh hewan dan
manusia.
Populasi mikroba dialam sekitar kita sangat besar dan komplek. Beragam spesies
mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran
pencernaan, dan kulit. Sebagai contoh, sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu
mikroorganisme. Oleh karena itu, pentingnya praktikum pada kegiatan kali ini dimaksudkan
agar praktikan dapat memahami dan mengenal pemurnian koloni dalam kehidupan yang lebih
kompleks.

1.2 Tujuan
1.2.1 Mahasiswa mampu melakukan pemurnian mikroba.
1.2.2 Mahasiswa dapat mengenal perbedaan bentuk koloni jamur dan bakteri.
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

Di alam populasi mikroba tidak terpisah sendiri menurut jenisnya, tetapi terdiri dari
campuran berbagai jenis. Di dalam mikroba dari berbagai habitat dapat diisolasi dan
dimurnikan menjadi biakan murni yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologi,
sifat fisiologi, biokimiawi dan dapat diidentifikasi jenisnya. Pemurnian mikroba umumnya
dilakukan dengan memindahkan mikroba dari biakan campuran ke media tumbuh yang baru
(Tim Penyusun, 2017).
Pemisahan dan pemurnian merupakan suatu cara yang dilakukan untuk memisahkan
atau memurnikan suatu senyawa atau sekelompok senyawa yang mempunyai susunan kimia
yang berkaitan dari suatu bahan, baik dalam skala laboratorium maupun skala industri. Pada
prinsipnya, pemisahan dilakukan  untuk memisahkan dua zat atau lebih yang saling
bercampur, sedangkan pemurnian dilakukan untuk mendapatkan zat murni dari suatu zat yang
telah tercemar oleh zat lain. Pemisahan dan pemurnian campuran memiliki manfaat yang
sangat penting dalam ilmu kimia, industri maupun dalam kehidupan sehari-hari, dalam
banyak kasus kita dapat menggunakan material tanpa pemurnian, baik material itu dari alam
(misalnya minyak tanah) atau yang disintesis di laboratorium. Pemisahan atau pemurnian
dengan metode tertentu perlu dilakukan. Demikian pula dalam pekerjaan di laboratorim
maupun dalam proes industi banyak yang melibatkan pemisahan dan pemurnian (Nurhaetul,
dkk., 2016).
Koloni mikroorganisme memiliki karakter masing-masing, tergantung dari jenis
mikroorganismenya. Beragam tipe mikroorganime akan menghasilkan tampilan koloni yang
beragam pula. Karakteristik koloni yang menggambarkan morfologi suatu koloni
mikroorganime dapat berupa bentuk, ukuran, pigmentasi, dll. Hasil identifikasi morfologi
koloni dapat digunakan sebagai teknik menentukan jenis dari mikroorganime yang diisolasi.
Koloni bakteri dan jamur memiliki beragam karakteristik dan terkadang justru terlihat tidak
umum, namun demikian ada beberapa dasar teknik identifikasi yang dapat dilakukan untuk
semua jenis koloni (Tim Penyusun, 2021).
Bakteri adalah salah satu golongan organisme prokariotik (tidak memiliki selubung
inti). Bakteri sebagai makhluk hidup tentu memiliki informasi genetik berupa DNA, tapi tidak
terlokalisasi dalam tempat khusus (nukleus) dan tidak ada membran inti. Bentuk DNA bakteri
adalah sirkuler, panjang dan biasa disebut nukleoid. Pada DNA bakteri tidak mempunyai
intron dan hanya tersusun atas akson saja. Bakteri juga memiliki DNA ekstra kromosomal
yang tergabung menjadi plasmid yang berbentuk kecil dan sirkuler ( Jawetz, 2004).
 Biakan murni bakteri adalah biakan yang terdiri atas satu spesies bakteri yang
ditumbuhkan dalam medium buatan.  Medium buatan tersebut berfungsi sebagai medium
pertumbuhan. Pada medium ini bakteri dapat tumbuh dan berkembang biak. Bahan dasar yang
digunakan untuk medium pertumbuhan ini adalah agar-agar. Untuk bakteri heterotrof,
medium dilengkapi dengan air, molekul makanan (misal gula) sumber nitrogen dan mineral.
Untuk hasil yang lebih baik agar bakteri tumbuh, alat dan bahan yang digunakan disterilkan
terlebih dahulu terdiri dari campuran berbagai macam sel (Jurkani, 2014).
Cendawan bukanlah tumbuhan atau hewan. Cendawan tidak memiliki klorofil seperti
tumbuhan sehingga tidak dapat melakukan fotosintesis dan menyimpan karbohidratnya dalam
bentuk glikogen bukan pati seperti pada tumbuhan. Cendawan mempunyai struktur somatik
bersel satu atau banyak (multiseluler), kebanyakan berupa hifa dengan komponen utama
dinding selnya ialah zat kitin, serta berkembang biak secara seksual dan aseksual dengan
membentuk spora. Dalam definisi ini, cendawan mencakup jamur, kapang, dan khamir. Jamur
(mushroom) ialah cendawan yang tubuh buahnyaberukuran besar dan sebaliknya kapang
(moulds) ialah cendawan yang berukuran renik. Khamir (yeast) ialah cendawan bersel tunggal
(Jurkani, 2014).
Bagian penting tubuh jamur adalah suatu struktur berbentuk tabung menyerupai
seuntai benang panjang, ada yang tidak bersekat dan ada yang bersekat. Hifa dapat tumbuh
bercabang-cabang sehingga membentuk jaring- jaring, bentuk ini dinamakan miselium. Pada
satu koloni jamur ada hifa yang menjalar dan ada hifa yang menegak. Biasanya hifa yang
menegak ini menghasilkan alat-alat pembiak yang disebut spora, sedangkan hifa yang
menjalar berfungsi untuk menyerap nutrien dari substrat dan menyangga alat-alat reproduksi.
Hifa yang menjalar disebut hifa vegetatif dan hifa yang tegak disebut hifa fertil. Pertumbuhan
hifa berlangsung terus-menerus di bagian apikal,sehingga panjangnya tidak dapat ditentukan
secara pasti. Diameter hifa umumnya berkisar 3-30 µm. Jenis jamur yang berbeda memiliki
diameter hifa yang berbeda pula dan ukuran diameter itu dapat dipengaruhi oleh keadaan
lingkungan (Watkinson, 1994).
 BAB III
METODOLOGI

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat
1. Erlenmeyer 5. Autoclave
2. Cawan petri 6. Jarum ose
3. Tabung reaksi 7. Inkubator.
4. Hot plate/waterbath

3.1.2 Bahan
1. Media agar 4. Kapang
2. Aquades 5. Bakteri
3. Biakan campuran khamir

3.2 Prosedur Kerja

3.2.1 Media Cawan
1. Medium kultur NA dan PDA dipanaskan dalam waterbath sampai mencair.
2. Siapkan 4 buah cawan petri.
3. Dua cawan petri diisi dengan NA yang sudah mencair masing-masing 12-15 ml.
Dan dua lainnya diisi dengan PDA. Langkah ini dilakukan di atas nyala Bunsen dalam
laminar.
4. Cawan petri yang telah berisi medium (PDA dan NA) dibiarkan dalam laminar
hingga medium membeku.
5. Ambilkan jarum ose dan pijarkan. Gunakan jarum ose yang sudah dingin untuk
mengambil koloni mikroorganisme.
6. Sentuhkan jarum ose pada permukaan agar biakan campuran. Medium NA
digunakan untuk biakan bakteri dan medium PDA untuk biakan jamur (fungi).
7. Buatlah goresan T dan goresan sinambung pada masing-masing cawan. Untuk
satu cawan, cukup satu kali pengambilan biakan campurannya. Sewaktu
menggores, ose dibiarkan meluncur di atas permukaan lempengan agar. Agar
yang luka akan mengganggu pertumbuhan mikroorganisme sehingga sulit
diperoleh koloni terpisah.
8. Gunakan tutup cawan untuk melindungi permukaan agar selama penggoresan.
9. Jangan lupa memberi label pada masing-masing cawan petri.
 10. Inkubasikan cawan-cawan tersebut dalam posisi terbalik pada suhu kamar selama
3x24 jam.
11. Setiap harinya, amati kenampakan koloni, bentuk koloni, warna koloni,
permukaan koloni dan tepi koloni. Gambarkan.
12. Ketika pengamatan, tutup cawan jangan dibuka.

3.2.2 Media Agar Miring

1. Medium kultur NA dan PDA dipanaskan dalam waterbath sampai mencair.
2. Siapkan 4 buah tabung reaksi.
3. Dua tabung reaksi diisi dengan NA yang sudah mencair masing-masing 12-15 ml.
Dan dua lainnya diisi dengan PDA dan tutup kembali. Langkah ini dilakukan di
atas nyala bunsen dalam laminar.
4. Tabung reaksi yang telah berisi medium (PDA dan NA) dibiarkan pada posisi
miring dalam laminar hingga medium membeku.
5. Ambilkan jarum ose dan pijarkan. Gunakan jarum ose yang sudah dingin untuk
mengambil koloni mikroorganisme.
6. Sentuhkan jarum ose pada permukaan agar biakan campuran. Medium NA
digunakan untuk biakan bakteri dan medium PDA untuk biakan jamur (fungi).
7. Buka tutup tabung media agar miring, lalu mulut tabung didekatkan pada api
bunsen. Sentuhkan jarum ose pada permukaan agar. Buatlah goresan zigzag dan
garis lurus pada masing-masing tabung. Upayakan untuk tidak melukai
permukaan media agar.
8. Dekatkan mulut tabung pada api bunsen dan segera tutup kembali.
9. Inkubasikan tabung media tersebut pada suhu kamar selama 3 x 24 jam.
10. Setiap harinya, amati kenampakan koloni, bentuk koloni, warna koloni,
permukaan koloni dan tepi koloni. Gambarkan.
11. Ketika pengamatan, tutup tabung reaksi jangan dibuka.

3.2.3 Media Agar Tegak

1. Medium kultur NA dipanaskan dalam waterbath sampai mencair.
2. Siapkan 2 buah tabung reaksi.
3. Isi tabung reaksi dengan NA yang sudah mencair masing-masing 12-15 ml
kemudian tutup kembali. Langkah ini dilakukan di atas nyala bunsen dalam
laminar.
4. Tabung reaksi yang telah berisi medium dibiarkan pada posisi tegak dalam
laminar hingga medium membeku.
5. Ambil jarum tusuk (ent/needle) dan pijarkan. Gunakan jarum yang sudah dingin
untuk mengambil koloni bakteri.
6. Buka tutup tabung media agar tegak, lalu mulut tabung didekatkan pada api
bunsen. Tusukkan jarum needle yang berisi koloni bakteri pada agar tegak.
7. Dekatkan mulut tabung pada api bunsen dan segera tutup kembali.
8. Inkubasikan tabung media tersebut pada suhu kamar selama 3 x 24 jam.
9. Setiap harinya, amati kenampakan koloni, bentuk koloni, warna koloni,
permukaan koloni dan tepi koloni. Gambarkan.
10. Ketika pengamatan, tutup tabung reaksi jangan dibuka.
 BAB IV
HASIL PENGAMATAN

BAHAN DISKUSI
1. Jelaskan bentuk-bentuk koloni pada media yang berbeda..? Jelaskan perbedaan masing
masingnya.
2. Ceritakan jenis-jenis koloni mikroorganisme yang berhasil di isolasi dari masing-masing
sampel.
JAWABAN
1. Perbedaan masing-masing bentuk koloni pada media yang berbeda :
a. Cilcular adalah koloni pada media membentuk bola atau lingkaran.
b. Irregular adalah koloni pada media membentuk brntukan tidak teratur.
c. Spindle adalah koloni pada media membentuk memanjang seperti garis atau berkaki
panjang dan kurus.
d. Filament adalah koloni pada media membentuk seperti benda padat menjadi cair
sehingga membentuk seperti serat pada benang.
e. Rizhoid adalah bentuk pada media membentuk struktur yang mirip dengan akar.
2. Mikroorganisme dari berbagai habitat dapat diisolasi dan dimurnikan menjadi biakan
murni yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologi, sifat fisiologi,
biokimiawi dan dapat diidentifikasi jenisnya.. Beragam tipe mikroorganime akan
menghasilkan tampilan koloni yang beragam pula. Karakteristik koloni yang
menggambarkan morfologi suatu koloni mikroorganime dapat berupa bentuk, ukuran,
pigmentasi, dll. Hasil identifikasi morfologi koloni dapat digunakan sebagai teknik
menentukan jenis dari mikroorganime yang diisolasi. Koloni bakteri dan jamur memiliki
beragam karakteristik dan terkadang justru terlihat tidak umum, namun demikian ada
beberapa dasar teknik identifikasi yang dapat dilakukan untuk semua jenis koloni, yaitu :
a. Ukuran : dapat berupa pinpoint/punctiform (titik), small (kecil), moderate (sedang),
large (besar) dsb.
b. Bentuk : bentuk koloni yang muncul berupa sirkular, filament dsb.
c. Elevasi : tampilan elevasi yang terbentuk berupa datar, timbul dsb.
d. Tepian (Margin) : berupa lekukan, ombak, licin, tak beraturan dsb.
e. Permukaan : permukaan koloni berupa kerutan (wrinkled), halus, berkontur dsb
f. Opacity : diamati berdasarkan jumlah cahaya yang melewati koloni, seperti
transparan, buram (opaque), hampir transparan dengan sedikit distorsi (translucent),
warna berubah ketika terkena cahaya (iridescent)
g. Chromogenesis (pigmentasi atau warna permukaan) : pada mikroorganisme
kromogenik sering memproduksi pigmen intraseluler, beberapa jenis lain
memproduksi pigmen ekstraseluler yang dapat terlarut dalam media
 BAB V
PEMBAHASAN

Pemurnian merupakan cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu

dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Kultur murni ialah
kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal (Suriawiria,
2005). Prinsip dari teknik pemurnian ini adalah menggoreskan satu ose kultur pada media
agar padat. Ada beberapa cara untuk menggoreskan kultur pada agar cawan (Streak Plate),
yaitu :
a) Goresan sinambung
Goresan sinambung dilakukan dengan cara menyentuhkan inokulum loop pada koloni
dan gores secara kontinyu sampai setengah permukaan agar. Dengan tanpa memijarkan
jarum ose, cawan petri diputar 180o lanjutkan goresan sampai habis.
b) Goresan T
Goresan T merupakan teknik pemurnian koloni bakteri dengan cara membagi cawan petri
menjadi 3 bagian. Inokulasi daerah 1 dengan streak zigzag, selanjutnya memanaskan
jarum ose dan tunggu dingin, kemudian lanjutkan streak zigzag pada daerah 2 (streak
pada gambar). Cawan diputar untuk memperoleh goresan yang sempurna.
c) Goresan kuadran
Teknik goresan kuadran ini sama dengan goresan T, hanya lempengan agar dibagi
menjadi 4.

Morfologi koloni bakteri dapat sangat bermacam-macam atau bervariasi di antara spesies.
Indentifikasi morfologi koloni bakteri sering digunakan dalam identifikasi awal strain bakteri.
Morfologi bakteri dapat bervariasi antara strain dan dalam suatu spesies karena ekspresi gen
diferensial (Kurniawan, 2019). Menurut Cappucino and Sherman (1987) pada umumnya
bentuk koloni bakteri berbentuk circular, irregular, filamentous, rhizoid. Elevasi berbentuk
raised, convex, flat, umbonate, crateriform.
Karakterisasi morfologi bakteri dapat berupa pengamatan makroskopik dan pengamatan
mikroskopik. Pengamatan makroskopik dapat dilakukan pada medium NA miring dan
medium NA dalam cawan petri berupa bentuk morfologinya. Bentuk pertumbuhan goresan
garis tunggal di atas permukaan agar dikelompokkan menjadi echinulate (bersambungan,
seperti benang, dengan tepian tidak beraturan), filiform (bersambungan, seperti benang,
dengan tepian halus), effuse (pertumbuhan tipis dan menyebar), beaded (pertumbuhan koloni
terpisah), spreading (pertumbuhan tebal dan menyebar), plumose (pertumbuhan seperti
pohon), dan rhizoid (pertumbuhan seperti akar) (Dachniar 2012).
Penampakan makroskopik pada medium NA (Nutrient Agar) dalam cawan petri meliputi
pigmentasi, bentuk, tepian koloni, dan elevasi. Pigmentasi merupakan warna koloni. Bentuk
koloni dibagi menjadi circular (bulat), irregular (tidak beraturan), dan rhizoid (pertumbuhan
menyebar seperti akar). Tepian luar koloni meliputi entire (rata), lobate (berlekuk), undulate
(bergelombang), serrate (bergerigi), dan filamentous (tepi melebar seperti benang). Elevasi
merupakan derajat kenaikan pertumbuhan koloni di atas permukaan agar yang dikelompokkan
menjadi flat (Rata), raised (timbul), convex (cembung), dan unbonate (cembung bibagian
tengah lebih menonjol) (Dachniar 2012).

Penampakan morfologi koloni yang berbeda-beda ini mengindikasikan bahwa koloni

bakteri tersebut berasal dari spesies yang berbeda. Terdapatnya warna koloni bakteri
disebabkan karena bakteri menghasilkan zat warna atau disebut juga pigmen. Menurut (Salle,
1961) pigmen yang terdapat pada bakteri diantaranya adalah pigmen karotenoid, antosianin,
melanin, tripirilmethenes dan phenazin. Pigmen-pigmen ini akan menghasilkan warna yang
berbeda-beda. Pigmen karotenoid akan memberikan warna merah, oranye dan kuning.
Antosianin dapat menghasilkan warna merah dan biru, sedangkan pigmen melanin akan
memberikan warna coklat, hitam, oranye dan merah. Pigmen-pigmen tersebut merupakan
hasil dekomposisi asam amino tirosin oleh enzim tirosinase.
Mikroorganisme dari berbagai habitat dapat diisolasi dan dimurnikan menjadi biakan
murni yang terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari morfologi, sifat fisiologi, biokimiawi
dan dapat diidentifikasi jenisnya. Beragam tipe mikroorganime akan menghasilkan tampilan
koloni yang beragam pula. Karakteristik koloni yang menggambarkan morfologi suatu koloni
mikroorganime dapat berupa bentuk, ukuran, pigmentasi, dll. Hasil identifikasi morfologi
koloni dapat digunakan sebagai teknik menentukan jenis dari mikroorganime yang diisolasi.
Koloni bakteri dan jamur memiliki beragam karakteristik dan terkadang justru terlihat tidak
umum, namun demikian ada beberapa dasar teknik identifikasi yang dapat dilakukan untuk
semua jenis koloni.

Berdasarkan gambar diatas, koloni mempunyai ciri berbeda (seperti warna, bentuk
koloni, dan permukaan koloni), untuk mengetahui perbedaan cir-ciri tersebut masing-masing
koloni akan dimurnikan dengan cara di-streak ke medium NA padat dalam cawan petri, lalu
diinkubasi selama 2 x 24 jam. Teknik ini dilakukan secara berulang sampai diperoleh koloni
yang diindikasikan murni. Koloni murni yang didapat diinokulasikan pada medium agar
miring untuk mendapat isolat murni. Menurut Hadioetomo (1993) cara atau metode yang
dapat dilakukan untuk memperoleh mikroorganisme yang murni dari suatu biakan campuran
yaitu metode cawan gores, cawan tuang dan metode tuang.
 BAB VI
PENUTUP

6.1 Kesimpulan
6.1.1 Pemurnian merupakan cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu
dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Prinsip dari
teknik pemurnian mikroba ini adalah menggoreskan satu ose kultur pada media agar
padat.
6.1.2 Koloni mikroorganisme memiliki karakter masing-masing, tergantung dari jenis
mikroorganismenya. Koloni bakteri dan jamur memiliki beragam karakteristik dan
terkadang justru terlihat tidak umum, namun demikian ada beberapa dasar teknik
identifikasi yang dapat dilakukan untuk semua jenis koloni.

6.2 Saran
6.2.1 Sebaiknya praktikan membaca penuntun terlebih dahulu sebelum memulai praktikum,
sehingga praktikan dapat lebih paham mengenai tujuan dilaksanakannya praktikum.
6.2.2 Sebaiknya praktikan dapat membaca berbagai sumber acuan dalam membuat laporan
praktikum, sehingga praktikan dapat lebih menguasai materi praktikum yang
dilakukan.
 DAFTAR PUSTAKA

Carlile, M.J. Dan S.C. Watkinson. 1994. The Fungi. London: Academic Press Ltd.
Jawetz, Melnick, Danadelberg S. 2004. Mikrobiologi, Ed 23. Jakarta: Penerbit buku
kedokteran EGC.
Jurkani. 2014. Pemurnian (Laporan Praktikum Mikrobiologi). Banjar Baru: Fakultas
Pertanian Universitas Lambung Mangkurat.
Nurhaetul, Iva, Jamilah, Martini, Rina Wardani. 2016. Laporan Praktikum Pemurnian
Mikroorganisme. Tanah Laut: Politeknik Negeri Tanah Laut Pelaihari.
Tim Penyusun. 2017. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Jawa Timur: Fakultas Pertanian
Universitas Pembangunan Nasional “Veteran”.
Tim Penyusun. 2021. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Dasar. Bengkulu: Laboratorium
Teknologi Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Bengkulu.
Nurhaetul, Iva, Jamilah, Martini, Rina Wardani. 2016. Laporan Praktikum Pemurnian
Mikroorganisme. Tanah Laut: Politeknik Negeri Tanah Laut Pelaihari.