Electrochemiluminescence atau electrogenerated chemiluminescence (ECL) adalah fenomena di mana

emisi cahaya muncul dari reaksi transfer elektron berenergi tinggi antara spesies yang di-
electrogenerated, yang biasanya disertai dengan regenerasi spesi yang memancarkan. Berbagai macam
pemancar ECL telah digunakan, termasuk senyawa organik, kompleks organologam, dan bahan nano.
Dalam bab ini, siswa akan mengenal teknik ini, yang menggabungkan elektrokimia sebagai sumber
eksitasi dan spektrofotometri sebagai teknik deteksi dengan melakukan karakterisasi dari ECL
luminophore (tris kompleks (phenanthroline) ruthenium (II), [Ru ( Phen) 3] 2+) dan mempelajari
pengaruh medium pada sinyal analitik. Siswa akan mengoptimalkan parameter deteksi amperometri
multipuls, teknik yang sangat cocok untuk eksperimen jangka panjang.

Electrochemiluminescence

Label elektrokemiluminesen menghasilkan cahaya saat distimulasi oleh listrik di lingkungan kimia yang
sesuai. Reaksi ini dimasukkan ke dalam immunoassay kami untuk memberikan sinyal cahaya yang
digunakan untuk mengukur protein penting dan molekul biomedis lainnya.

Bagaimana cara kerja electrochemiluminescence?

1. Elektroda karbon pengikat tinggi di bagian bawah pelat mikro MULTI-ARRAY dan MULTI-SPOT
memungkinkan pemasangan reagen biologis dengan mudah (kapasitas pengikatan 10X lebih besar
daripada polistiren).

2. Pengujian MSD menggunakan label elektrokemiluminesen yang dikonjugasikan ke antibodi

pendeteksi. Labelnya disebut SULFO-TAG, dan memungkinkan deteksi ultra-sensitif.

3. Listrik dialirkan ke elektroda pelat dengan instrumen MSD yang menghasilkan emisi cahaya dengan
label SULFO-TAG. Intensitas cahaya kemudian diukur untuk mengukur analit dalam sampel.

Keuntungan dari Electrochemiluminescence:

- Sensitivitas tinggi: Beberapa siklus eksitasi dapat memperkuat sinyal untuk meningkatkan level cahaya.

- Rentang dinamis yang luas: Rentang dinamis yang luas dari sistem deteksi kami berarti tingkat ekspresi
tinggi dan rendah dapat diukur tanpa beberapa pengenceran sampel.

- Latar belakang rendah: Metode stimulasi (listrik) dipisahkan dari sinyal (cahaya) sehingga hanya label di
dekat permukaan elektroda yang dapat dideteksi.

- Mudah digunakan: Metode Immunoassay mirip dengan ELISA konvensional, tetapi lebih cepat.

- Fleksibilitas tinggi: Label stabil, non-radioaktif, dan mudah dikonjugasikan ke molekul biologis.
- Performa dan kualitas tak tertandingi: Electrochemiluminescence adalah sistem deteksi yang sangat
sukses yang mencapai data kualitas klinis dalam berbagai jenis sampel, termasuk supernatan sel, serum,
plasma, dan darah utuh.

(gambar)

Dalam immunoassay electrochemiluminescence (ECL), molekul electrochemiluminescence, seperti

ruthenium, digunakan sebagai label indikator dalam immunoassay kompetitif dan sandwich. Dalam
pengujian tersebut, rutenium (II) tris (bipiridil) mengalami reaksi elektrokemiluminesen (620 nm)
dengan tripropilamina pada permukaan elektroda. Dengan label ini, berbagai pengujian telah
dikembangkan dalam sel aliran, dengan manik-manik magnetik sebagai fase padat. Manik-manik
ditangkap di permukaan elektroda, dan label yang tidak terikat dicuci dari sel dengan buffer pencuci.
Label yang diikat ke manik mengalami reaksi elektrokemiluminesen, dan emisi cahaya diukur dengan
tabung pengganda fotomulti yang berdekatan.

ECL dapat digunakan untuk mendeteksi antigen seperti protein, senyawa kimia atau bahkan asam
nukleat teoritis. Dalam semua kasus, teknologi ECL menggunakan interaksi biotin-streptavidin untuk
mengikat manik paramagnetik ke kompleks immunoassay. Sistem biotin-streptavidin adalah interaksi
biologis non-kovalen terkuat yang diketahui.

(gambar)

Antibodi pertama diberi label dengan Biotin. Yang kedua diberi label dengan Ruthenium. Keduanya
sangat spesifik untuk situs pengikatan pada antigen target.

(gambar)

Dalam contoh ini, dua antibodi membentuk kompleks sandwich dengan antigen. Bergantung pada analit
target, prinsip immunoassay kompetitif dan jembatan juga dapat diterapkan.

(Gambar)
Selanjutnya, mikrobead yang dilapisi dengan Streptavidin dimasukkan ke dalam larutan. Streptavidin
membentuk ikatan yang kuat dengan Biotin. Kompleks immunoassay yang telah selesai sekarang siap
untuk dipindahkan ke sel pengukur.

(gambar)

Proses ECL bekerja, secara garis besar, sebagai berikut: Pasang Ruthenium dan mikrobead paramagnetik
ke analit target melalui antibodi yang sangat spesifik, gunakan medan magnet untuk menempelkan
mikrobead ke permukaan elektroda, gunakan ProCell untuk memisahkan mikro-partikel terikat dari zat
sisa bebas, berikan voltase untuk memulai reaksi antara Ruthenium dan TPA, yang memancarkan cahaya
dalam sinyal kontinyu, namun cepat, mengukur jumlah cahaya yang dipancarkan dengan
photomultiplier, sinyal yang terdeteksi setara dengan konsentrasi analit target.

Teknologi Electro Chemi Luminescence (ECL) lebih unggul dari teknologi chemiluminescence (CL) lainnya
dalam hal-hal berikut: Reaksi Terkendali, Presisi dan Sensitivitas, Volume Sampel Rendah, Rentang
Pengukuran Luas, dan Pengukuran Cepat. Reaksi terkontrol penting untuk deteksi yang akurat. Seperti
yang akan kita lihat, teknologi ECL menggunakan Pemisahan Bebas-Terikat dan Penerapan Tegangan,
bukan bahan kimia, untuk mengontrol reaksi chemiluminescent. Karena komponen yang digunakan
sangat stabil, reagen ECL memiliki stabilitas onboard yang lama, agar dapat menggunakan paket reagen
secara efisien, layanan yang lebih menghasilkan pendapatan bagi para dokternya. Manfaat kedua dari
teknologi ECL adalah Presisi dan Sensitivitas Tinggi. Tidak seperti teknologi CL lainnya, teknologi ECL
dapat secara konstan menghasilkan kembali sinyalnya dalam proses Amplifikasi Siklik. Teknologi ECL
dengan cepat menghasilkan sinyal yang stabil. Manfaat ketiga dari teknologi ECL adalah Volume Sampel
Rendah. Volume sampel yang rendah memiliki banyak manfaat yang menghasilkan persyaratan
pengujian untuk pasien, dokter, dan laboratorium, yang lebih mudah dikelola. Manfaat keempat dari
teknologi ECL adalah Rentang Pengukuran Luas, sehingga pelanggan tidak perlu mencairkan dan
menjalankan ulang sampel. Hal ini diterjemahkan ke dalam rangkaian manfaat: Lebih sedikit volume
sampel yang diperlukan dari pasien karena lebih sedikit tayangan ulang, Lebih sedikit pengujian yang
dijalankan untuk biaya yang lebih rendah, Lebih sedikit gangguan pada alur kerja penganalisis. Manfaat
ini menghasilkan Perputaran hasil yang lebih cepat ke dokter, Waktu penyelesaian keseluruhan yang
lebih cepat untuk semua sampel. Manfaat kelima dan terakhir dari teknologi ECL adalah Pengukuran
Cepat. Total waktu untuk pengujian diatur oleh waktu inkubasi dan waktu untuk mengukur.