Judul Pemeriksaan LDL Direct dan Indirect metode spektrofotometri

B. Tujuan
1. LDL direct Uji estimasi LDL, kolesterol dalam sampel serum atau plasma dengan menggunakan
metode Spektrofotometri.
2. LDL indirect Menentukan kolesterol LDL secara in vitro metode CHOD-PAP dengan sistem fotometri.

C. Prinsip
1. LDL direct Ester kolesterol (bagian dari LDL) CEH kolesterol + asam lemak Kolesterol + O2 (bagian dari
LDL) CHOD H2O2 + Kolesterol H2O2 + Kromogen POD Pewarna merah + H2O
2. LDL indirect Low Density Lipoprotein (LDL) diendapkan dengan menambahkan heparin. High Density
Lipoprotein (HDL) dan Very Low Density Lipoprotein (VLDL) akan tetap berada dalam supernatan setelah
sentifugasi dan diukur secara enzimatis dengan metode CHOD-PAP. Konsentrasi kolesterol LDL dihitung
sebagai selisih kolesterol total dan kolesterol dalam supernatan.

D. Dasar Teori Profil lipid adalah unsur-unsur lemak dalam plasma yang terdiri dari kolestrol, trigliserida,
fosfolipid, dan asam lemak bebas.

Tiga unsur pertama berkaitan dengan protein tertentu (Apoprotein) membentuk lipoprotein yang terdiri
dari kilomikron, VLDL (Very low density lipoprotein), LDL (low density lipoprotein), dan HDL (high density
lipoprotein), masing-masing mempunyai unsur lemak dengan kandungan yang berbeda. Ikatan ini
memungkinkan asam lemak dapat larut dalam darah dan kemudian dikirim keseluruh tubuh. (Kee JL,
2008) Low density lipoprotein (LDL) merupakan lipoprotein yang mengangkut kolestrol terbesar untuk
disebarkan ke seluruh jaringan tubuh dan pembuluh nadi. LDL berukuran kecil sehingga mudah masuk
ke pembuluh darah, terutama jika dinding tersebut rusak karena beberapa faktor resiko, seperti usia,
kebiasaan merokok,hipertensi atau faktor keturunan. LDL disebut kolestrol jahat karena efeknya yang
mudah melekat pada dinding pembuluh darah sehingga dapat menyebabkan penumpukan dan
penyempitan pembuluh darah (aterosklerosis). Hal ini dapat meningkatkan resiko penyakit jantung.
Kadar LDL di dalam darah sangat tergantung dari lemak yang masuk. Semakin banyak lemak yang masuk
semakin menumpuk LDL. Hal ini disebabkan LDL merupakan lemak jenuh yang tidak mudah larut
(Wiryowidagdo, 2002). LDL mempunyai densitas 1.019–1.063, diameter 9-15 nm dan mengandung
cholestryl esters, apo B-100. Fungsi LDL adalah untuk membawa trigliserida dan endogen dari hati ke
jaringan. LDL mengandung paling banyak kolestrol dari semua lipoprotein, dan merupakan pengirim
kolestrol utama dalam darah, sel hati memproduksi kolestrol dalam tubuh, kemudian disebarkan oleh
sistem tubuh LDL, kolestrol dalam darah ke jaringan-jaringan tubuh (Soeharto, 2004). Metode
pemeriksaan LDL Kolestrol dapat dibagi menjadi dua, yaitu metode direct dan indirect, pemeriksaannya
sebagai berikut :
1. Metode Direct (Secara Langsung) 

Metode Presipitasi Metode presipitasi langsung dengan cara mempresipitasikan LDL-Kolestrol dengan
polyvinyl sulfat atau heparin pada PH rendah. Kadar LDL-Kolestrol dihitung sebagai selisih dari total
kolestrol dan kadar yang terdapat pada supernatant. Prinsip metode ini adalah LDL diendapkan dan
setelah disentrifugasi HDL dan VLDL ada di supernatant. LDL dapat dihitung dari perbedan kolestrol
supernatant dan serum total. Metode presipitasi jauh lebih tidak terpengaruh oleh peningkatan kadar
trigliserida bila dibandingkan dengan perhitungan fridewald. Metode presipitasi tetap dapat melakukan
pemeriksaan walaupun kadar trigliserida tinggi. Metode presipitasi juga dapat langsung memeriksa
kadar LDL Kolestrol tanpa memerlukan pemeriksaan kolestrol, trigliserida, dan HDL kolestrol (Sun, dkk,
2005). Salah satu kelebihan metode presipitasi dibandingkan perhitungan fridewald adalah
kemampuannya untuk memeriksa LDL kolestrol dalam spesimen non puasa karena kilomikron dapat di
eliminasi oleh reagen. Harus dicatat bahwa semua perbandingan metode pemeriksaan LDL Kolestrol
saat ini masih menggunakan spesimen puasa (Putra, 2012).

2. Metode Indirect (Secara Tidak Langsung) 

Metode Formula Fridewald LDL kolestrol = Kolestrol Total - Trigliserida - HDL 5 Validasi suatu formula
oleh fridewald telah menghasilkan penggunaan suatu nilai LDL-Kolestrol yang telah dihitung. Prosedur
ini konsentrasi total, trigliserida, dan HDL-Kolestrol terlebih dahulu diukur dan kemudian konsentrasi
LDL-Kolestrol dihitung. Formula tersebut tergantung pada asumsi bahwa VLDL-C terdapat dalam
konsentrasi yang sama dengan seperlima konsentrasi trigliserida. Kadar total kolestrol, HDL dan
trigliserida dalam darah dapat diketahui dengan tes laboratorium setelah pasien puasa
sekurangkurangnya 10 jam dan sebaiknya 12 jam. Kadar total kolestrol, HDL dan trigliserida umumnya
diukur secara fotometri, sedangkan metode yang digunakan untuk total kolestrol adalah CHOD-PAP,
HDL menggunakan metode presipitasi dan trigliserida metodenya GPO-PAP, adapun LDL ditentukan
secara tidak langsung yakni destinasi memakai rumus yang disusun oleh Fridewald,Levy dan fredrickson
(Soeharto, 2004). Pemeriksaan LDL dengan berkembangnya waktu diperkenalkan suatu metode baru
dalam menentukan kadar LDL kolestrol yaitu metode direk (presipitasi), yang dikembangkan dari
pemeriksaan LDL indirek (fridewald). Kelamahan cara indirek (fridewald) yaitu, bila kilomikron meninggi,
kesalahan menghitung menjadi besar. Pemeriksaan laboratorium rumus fridewald tidak dapat
digunakan bila kadar trigliserida >400 mg/dl. Metode formula fridewald banyak digunakan, dimana
kolestrol trigliserida dan HDL Kolestrol diukur, kemudian LDL Kolestrol dihitung dengan menggunakan
rumus fridewald (Murat, dkk, 2008).

E. Prosedur a. Metode Indirect Pra Analitik : 

Prosedur Persiapan Pasien

1. Berikan arahan pada pasien untuk melakukan puasa 12 jam. Sebaiknya di mulai dari jam 7 atau 8
malam. Selama puasa pasien diperbolehkan meminum air putih dan tidak boleh melakukan aktivitas
berat selama puasa.


Prosedu rPengambilan Darah Vena

1. Pasang tourniquet kira-kira 10 cm di atas lipat siku, lakukan perabaan pada area vena untuk
memastikan posisi vena.
2. Didesinfeksi area yang akan di tusuk dengan menggunakan kapas alcohol 70% dan biarkan kering
dengan sendirinya. Bila sudah didesinfeksi jangan disentuh area yang sudah dibersihkan.
3. Tusuk bagian vena dengan posisi lubang jarum menghadap ke atas kurang lebih 30˚.
4. Apabila darah sudah terlihat pada indicator, tarik tangkai spuit hingga darah penuh masuk ke dalam
spuit, buka pembendung kemudian tangan pasien di beri plaster.
5. Darah yang didapat pada spuit di pindahkan ke dalam tabung vacutainer.

Prosedur Analitik :

1. Mengumpulkan 3 sampai 5 mL sampel darah vena dalam tabung specimen darah.

2. Kemudian, lakukan sentrifuge pada sampel untuk mendapatkan serum atau plasma

3. Diamkan reagen dan specimen pada suhu kamar

4. Lalu, melakukan prosedur pemeriksaan kolesterol total, trigliserida dan kolesterol – HDL, hasil
pemeriksaan kolesterol total, trigliserida dan kolesterol HDL digunakan untuk menetapkan kolesterol
LDL Pasca Analitik : 1. Lakukan perhitungan dengan rumus : Kolesterol LDL = (kolesterol total) –
(kolesterol HDL) – (Trigliserida ) 5

b. Metode Direct 1. Pra Analitik

a) Persiapan Pasien Untuk pemeriksaan kolesterol LDL, pasien disarankan berpuasa terlebih dahulu
selama 12 jam.
b) Persiapan sampel Sampel yang digunakan adalah sampel darah vena.
1) Memasang tourniquet tiga jari di atas lipat siku, melakukan palpasi untuk memastikan posisi vena.

2) Melakukan desinfeksi area yang akan di tusuk dengan kapas alcohol 70% dan biarkan kering dengan
sendirinya. Bila sudah didesinfeksi jangan disentuh area yang sudah dibersihkan.

3) Menusuk bagian vena dengan posisi lubang jarum menghadap ke atas dan sudut kemiringan kurang
lebih 30˚.

4) Apabila darah sudah terlihat pada indicator, menarik tangkai spuit hingga darah penuh masuk ke
dalam spuit, buka pembendung kemudian tangan pasien di beri plaster. Membendung vena tidak boleh
lebih dari satu menit.

5) Darah yang didapat pada spuit di pindahkan ke dalam tabung vacutainer.

2. Analitik

a) Mengumpulkan 3 sampai 5 mL sampel darah vena dalam tabung centrifuge.

b) Kemudian, melakukan sentrifuge pada sampel untuk mendapatkan serum atau plasma.

c) Selanjutnya, membuat larutan sebaai berikut : Kalibrator Test Reagen 1 600 µl 600 µl Kalibrator 5 µl
Sampel 5 µl

d) Inkubasi petama, yaitu membuat reagen dan sampel/kalibrator sesuai dengan tabel di atas, kemudian
inkubasi selama 5 menit pada suhu 37 °C.

e) Selanjutnya membuat larutan sebagai berikut : Reagen 2

200 µl

F. Hasil

Perhitungan LDL Precipitant (Indirect)

200 µl

cholesterol ∈supernatant =

0,219 × 200 mg/dL 0,697 = 62,840 mg/dL

LDL Cholesterol

= 200 – 62,840 = 137,159 mg/dL

Perhitungan LDL Direct Abs standar = 0,121 nm Factor = 1009,1 Abs sampel = 0,093 nm Conc. on Vial
label 122,4 mg/dL

LDL Cholesterol=

0,093 ×122,4 [mg/dL] 0,121 = 94,076 mg/dL


Nilai nornal LDL direct Normal

160 mg/dL (>4,1 mmol/L)

Nilai normal indirect LDL Kolesterol = 160mg/dL mengindikasikan resiko penyakit jantung.

G. Pembahasan

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, hasil pemeriksaan LDLKolesterol secara indirect
menunjukan angka 137,159 mg/dL, sedangkan hasil pemeriksaan LDL-Kolesterol secara direct
menunjukan angka 94,076 mg/dL. Nilai normal LDL Kolesterol secara indirect = 160mg/dL
mengindikasikan resiko penyakit jantung, sedangkan untuk LDL koleatrol secara direct nilai normalnya
400 mg/dL. Sedangkan pengukuran kadar LDL-Kolesterol secara direk sering juga digunakan karena
merupakan metode yang akurat, dapat langsung dilakukan, tanpa memeriksa kolestrol total, trigliserida
dan kolesterol HDL Hanya saja kelemahan di metode ini yaitu reagen yang digunakan cukup mahal dan
waktu yang dibutuhkan lebih lama, sekitar 10 – 30 menit, bila dibandingkan dengan rumus Friedewald.
Pengukuran kadar kolesterol LDL dengan rumus Friedewald memerlukan tiga parameter yaitu kolesterol
HDL, kolesterol total dan trigliserida. Kesalahan pada setiap pengukuran ketiga lipoprotein tersebut
dapat menyebabkan kesalahan estimasi dan perbedaan hasil dengan metode direk.

H. Kesimpulan Low density lipoprotein (LDL) merupakan lipoprotein yang mengangkut kolestrol terbesar
untuk disebarkan ke seluruh jaringan tubuh dan pembuluh nadi.Pada pemerikaan ini LDL ini terdapat
dua cara yaitu direct dan indirect dengan menggunakan metode spektrofotometri.Dari pemeriksaan ini
didapatkan hasil LDLKolesterol secara indirect menunjukan angka 137,159 mg/dL, sedangkan hasil
pemeriksaan LDL-Kolesterol secara direct menunjukan angka 94,076 mg/dL.Kadar kolestrol dari
pemeriksaan LDL indirect termasuk resiko tinggi batas atas, sedangakn untuk LDL secara direct termasuk
normal karena nilai normal LDL Kolesterol secara

indirect = 160mg/dL mengindikasikan resiko penyakit jantung, sedangkan untuk LDL koleatrol secara
direct nilai normalnya