See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/280054379

Aktivitas antioksidan senyawa stilben terprenilasi dari tumbuhan kacang kayu

(Cajanus cajan (L.) Millsp.)

Conference Paper · August 2014

CITATIONS READS

0 1,878

1 author:

Taslim Ersam
Institut Teknologi Sepuluh Nopember
90 PUBLICATIONS   598 CITATIONS   

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

The exploration of chemicals constituent from tropical rains forrest and bioactivities agents View project

Theodore Y K Lulan View project

All content following this page was uploaded by Taslim Ersam on 15 July 2015.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

Prosiding Seminar Nasional Pascasarjana XIV – ITS
ISBN 978-602-96565-7-2

Aktivitas antioksidan senyawa stilben terprenilasi dari tumbuhan

kacang kayu (Cajanus cajan (L.) Millsp.)
Dini Nur Fauzia, Taslim Ersam
Dini Nur Fauzia*, Taslim Ersam**
* Mahasiswa Pascasarjana Kimia, F-MIPA, ITS, Surabaya, Indonesia
** Pascasarjana Kimia, F-MIPA, ITS, Surabaya, Indonesia
paktichem@gmail.com
Abstrak

Pemanfaatan antioksidan alami dalam bidang kesehatan dan pengawetan bahan pangan
relatif lebih aman dibandingkan antioksidan sintetik yang ternyata banyak menimbulkan
efek samping yang merugikan bagi kesehatan manusia. Tumbuhan dari famili Fabaceae
dikenal sebagai sumber senyawa fenolat dengan berbagai macam bioaktivitas. Oleh karena
itu, upaya penemuan bahan-bahan antioksidan alami sangat penting dilakukan. Pada
penelitian ini, pemisahan senyawa dilakukan dengan ekstraksi dan kombinasi teknik
kromatografi. Struktur molekul senyawa tersebut ditetapkan berdasarkan spektrum UV, IR,
1
H-NMR dan 13C-NMR dan dengan membandingkan data yang sama dengan senyawa yang
telah dilaporkan sebelumnya. Senyawa turunan stilben terprenilasi yaitu Asam 3-hidroksi-
4-prenil-5-metoksistilben (1) telah diisolasi dari ekstrak metanol tumbuhan kacang kayu
Cajanus cajan (L.) Millsp. (fabaceae). Berdasarkan pengujian antioksidan yang telah
dilakukan menggunakan radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) diketahui bahwa
senyawa (1) bersifat aktif sebagai antioksidan dengan nilai IC50 413,67 µg/ml.

Kata kunci: Cajanus cajan (L.) Millsp., antioksidan, fabaceae, stilben terprenilasi, 2,2-
difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)

Abstract

Natural antioxidants are considered important nutraceuticals on account of their many

health benefits and they are widely used in the food industry. Family fabaceae so far
examined were reported to contain phenolic compounds which have also been suggested
responsible for its biological and pharmacological activities. Isolation of compound was
achieved by a combination of extraction and chromatograpic technique while the structures
of the compound was determined based on UV, IR, 1H-NMR and 13C-NMR spectra and
by comparing with the previously reported data Phrenylated stilbene derivatives, namely 3-
hydroxy-4-prenyl-5-metoxystilbene acid (1) had been isolated from methanol extract
areial part of kacang kayu Cajanus cajan (L.) Millsp. (fabaceae) and present studies were
evaluated for its in vitro antioxidant activity using 2,2-diphenyl-1-picryhydrazyl (DPPH)
radical-scavenging have IC50 413,67 µg/ml.

Keywords: Cajanus cajan (L.) Millsp., antioksidan, fabaceae, prenylated stilbene, 2,2-
diphenyl-1-picryhydrazyl (DPPH)

1. Pendahuluan mencegah terjadinya reaksi oksidasi radikal

Aktivitas antioksidan dalam bidang
kesehatan merupakan indikator terhadap material
kimiawi yang dapat dimanfaatkan sebagai
penyediaan obat untuk penyakit degeneratif,
seperti antikanker, antidiabetes, antiobesitas,
antitumor dan lain-lain. Penyakit ini merupakan
penyakit yang dalam istilah medis digunakan
untuk menjelaskan suatu penyakit yang muncul
akibat proses kemunduran fungsi sel tubuh yaitu
dari keadaan normal menjadi lebih buruk. Salah
satu penyebab terbesar penyakit degeneratif
adalah radikal bebas (Tapan, 2005). Untuk
mencegah akibat peristiwa radikal bebas maka
dibutuhkan suatu zat yang dapat menunda atau
bebas, yang dikenal dengan antioksidan (Tapan,
2005).
Secara umum senyawa-senyawa
turunan fenolat bersifat sebagai antioksidan.
Antioksidan adalah senyawa kimia yang mampu
menghambat dan mengatasi berbagai penyakit
kronis yang diakibatkan oleh radikal bebas
(Amarowicz, et al., 2000). Pemanfaatan
antioksidan alami dalam bidang kesehatan dan
pengawetan bahan pangan relatif lebih aman
dibandingkan antioksidan sintetik yang ternyata
banyak menimbulkan efek samping yang
merugikan bagi kesehatan manusia. Oleh karena

142 Program Pascasarjana Institut Teknologi Sepuluh Nopember


itu, upaya penemuan bahan-bahan antioksidan
alami sangat penting dilakukan. Menurut Pratt &
Hudson (1990), senyawa antioksidan alami
tumbuhan umumnya ditemukan sebagai senyawa
fenolik atau polifenolik yang dapat berupa
golongan flavonoid, turunan asam sinamat,
kumarin, tokoferol, dan asam-asam organik
polifungsional.
Salah satu tumbuhan tingkat tinggi yang
terdapat di hutan tropika Indonesia yang
mempunyai potensi sebagai sumber bahan kimia
bioaktif adalah famili Fabaceae. Masyarakat
mengenal famili ini sebagai suku polong-
polongan yang merupakan tanaman pangan dan
telah dibudidayakan sebagai komoditi bahan
pangan. Tumbuhan dari famili Fabaceae dikenal
sebagai sumber senyawa fenolat dengan berbagai
macam bioaktivitas, seperti antioksidan,
antijamur, antikanker, antibakteri dan antimalaria
(Wink, 2013). Salah satu spesies Cajanus yang
masih belum banyak diteliti kandungan kimiawi
dan bioaktivitasnya terutama di Indonesia yaitu
Cajanus cajan (L.) Millsp. (kacang kayu/kacang
gude). Dari kajian kimiawi beberapa senyawa
yang pernah dilaporkan dari tumbuhan ini adalah
senyawa flavon dan calkon seperti likocalkon (2)
dan 2',6'-dihidroksi-4-metoksi calkon
(cajacalkon) (3) (Ajaiyeoba, et al., 2005),
pinostrobin (4) dan longistilins A dan C (Ashidi
et al., 2010) serta senyawa stilben.
OH
2'
HO 4
' OH
6'
OMe
OH
O 2.3 Isolasi dan Identifikasi Senyawa
2 3
6'
MeO 8
O 2
6 3
2
' vakum (KCV) dengan eluen n-heksana : etil
5 asetat yang ditingkatkan kepolarannya (5-100%)
OH O
4 Fraksinasi dilakukan lebih lanjut
Salah satu parameter yang digunakan
untuk menentukan aktivitas antioksidan adalah
nilai IC50 (Inhibition Concentration) yaitu
konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat
menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter
radikal atau konsentrasi suatu zat antioksidan
yang memberikan % penghambatan 50%. Zat
yang mempunyai aktivitas antioksidan tinggi
akan mempunyai harga EC50 atau IC50 yang
rendah (Brand-Williams, 1995). berdasarkan
prinsip bahwa senyawa aktif dapat meredam
puncak absorbansi radikal DPPH.
Program Pascasarjana, Institut Teknologi Sepuluh Nopember
Prosiding Seminar Nasional Pascasarjana XIV – ITS
ISBN 978-602-96565-7-2
2. Metodologi
2.1 Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini
yaitu seperangkat alat gelas (gelas beker, gelas
ukur, gelas vial kecil, gelas vial besar,
erlenmeyer, labu bundar, dan corong kaca),
bejana maserasi, chamber KLT, kaca arloji, pipet
tetes, pipet kapiler, pinset, spatula, cawan
porselen, cawan petri, hot plate, penyaring
Buchner, pompa vakum, rotary vacuum
evaporator, neraca analitik, timbangan digital,
seperangkat alat kromatografi cair vakum
(KCV), seperangkat alat kromatografi kolom
grafitasi (KKG), seperangkat alat kromatografi
lapis tipis (KLT), plat tetes, pipa kapiler, Fisher
John Melting Point Apparatus, botol semprot,
spektrofotometer UV, spektrofotometer IR,
lampu UV 254 dan 366 nm, dan spektrometer
1
H-NMR dan 13C-NMR.
Bahan yang akan digunakan untuk isolasi
senyawa terdiri dari tumbuhan Cajanus cajan
(L.) Millsp., pelarut organik seperti n-heksana,
metilen klorida, kloroform, etil asetat, aseton,
metanol, aquades, etanol, kapas steril,
aluminium foil, kertas saring Whatman 40, silica
gel 60 (35-70 mesh) untuk kromatografi kolom,
plat silica gel Merck 60 F254 0,25 mm ukuran 20
x 20 cm dengan aluminium sebagai fasa diam,
plat silica gel Merck 60 F254 0,5 ukuran 20 x 20
cm dengan kaca sebagai penyangga fasa diam,
pereaksi penampak noda serium sulfat, larutan
OMe
FeCl3 1% dalam metanol, HCl pekat, natrium
6 4 hidroksida, aluminium klorida, natrium asetat,
2
asam borat, larutan buffer asetat, L-ascorbic
acid, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH).
O
Serbuk halus tumbuhan C. cajan (L.)
Millsp. (2,25 kg) dimaserasi dengan metanol
4
' selama 3 x 24 jam. Ekstrak metanol pekat (2x40
gram) difraksinasi dengan kromatografi cair
menghasilkan 10 fraksi gabungan (A-J).
terhadap fraksi E dengan kromatografi cair
vakum dengan eluen n-heksana : etil asetat yang
ditingkatkan kepolarannya (2-20%)
menghasilkan 7 fraksi gabungan (E6-E7).
Selanjutnya endapan yang terdapat pada fraksi E5
disaring kemudian dimurnikan dengan
rekristalisasi menghasilkan senyawa 1.
Untuk mengetahui kemurnian senyawa
hasil isolasi dilakukan uji KLT tiga eluen yang
berbeda kepolarannya dan pengukuran titik leleh.
Kemudian dilanjutkan dengan analisis
spektroskopi yang meliputi UV – Vis, IR, 1H-
NMR dan 13C-NMR.
143
Prosiding Seminar Nasional Pascasarjana XIV – ITS
ISBN 978-602-96565-7-2

δH 1,685 (3H,s), δH 5.214 (1H,t , J = 6,8 Hz dan

2.4 Penentuan aktivitas antioksidan J = 7.6 Hz), δH 3.377 (2H, d, J = 6,8 Hz) dan
Satu mL larutan sampel senyawa 1 proton dari gugus metoksi pada: δH 3.951
dengan konsentrasi yang bervariasi dimasukkan (3H,s). Sinyal proton yang highly dishielded
ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 3 mL pada δH 11,533 ppm dan pergeseran kimia
larutan DPPH 0.004% (b/v) dalam metanol. karbon pada 175,446 ppm yang membuktikan
Campuran dikocok kuat dan diinkubasi pada adanya gugus hidroksi terkhelat dengan gugus
suhu 37°C selama 30 menit lalu diukur karbonil yang berasal dari gugus asam
absorbansnya menggunakan spektrofotometer karboksilat. Sinyal karbon singlet pada 175,446
UV-tampak pada λmaks 515.5 nm. Asam ppm menunjukkan daerah khas karbonil yang
askorbat digunakan sebagai kontrol positif. Nilai dapat memperkuat data serapan IR pada bilangan
konsentrasi penghambat 50% (IC50) dihitung gelombang 1631,67 cm-1. Berdasarkan data-data
menggunakan persamaan regresi linear hubungan tersebut, maka dihipotesiskan bahwa senyawa 1
antara konsentrasi dan % inhibisi. memiliki kerangka dasar stilben dan subtituen
berupa prenil, metoksi, hidroksi, dan karboksil.
3. Hasil dan Pembahasan Data 1H dan 13C NMR yang diperoleh
Berdasarkan serangkaian proses pada senyawa 1 memiliki kemiripan dengan data
fraksinasi yang telah dilakukan terhadap ekstrak senyawa Asam cajanin stilben yang ditemukan
metanol berhasil diperoleh senyawa fenolik dari kulit polong kacang kayu asal India (Green,
golongan stilben dengan nama Asam 3-hidroksi- et. al., 2003).
4-prenil-5-metoksistilben (1). Senyawa ini
diperoleh sebagai kristal jarum berwarna hijau Tabel 1. Data pergeseran 1H dan 13C NMR senyawa 1
pucat dengan titik leleh 177-178o C. No.
δH δC
Analisa UV 203,40 nm, 255,80 nm, dan Karbon
307,40 nm menunjukkan bahwa di dalam
1 141,8
senyawa terjadi transisi elektron dari π-π* dan n-
-π*. Adanya gugus hidroksi pada 3080,11 cm-1, 2 102,9
serapan pada daerah 1631,67 cm-1 menunjukkan 3 162,2
sistem karbonil yang terkhelat subtitusi berupa
4 116,7
karboksil dan serapan pada 1600,81, 1562,23,
dan 1440,73 cm-1 menunjukkan adanya ikatan π 5 162,4
terkonjugasi (adanya sistem aromatik atau C=C). 6 δH 6,66 (1H, s) 103,2
Adanya dua sinyal proton yang membentuk
α δH 7,84 (1H, d, J = 16Hz) 130,4
sistem AB pada data 1H-NMR dengan konstanta
kopling yang besar mengindikasikan adanya β δH 6,83 (1H, d, J = 16Hz) 130,7
struktur geometri trans dari ikatan rangkap dua. 1' 137,2
Jenis senyawa fenolat yang memiliki ciri khas 2', 6' δH 7,53 (2H, d, J = 8Hz) 126,7
tersebut hanya berasal dari golongan calkon dan
stilben. Namun dilihat dari pola intensitas pita 3', 5' δH 7,38 (2H, d, J = 7,6Hz) 128,7
pada spektra UV, dapat dipastikan bahwa 4'
senyawa 1 memiliki kerangka dasar stilben 1" δH 3,37 (2H, d, J = 6,8Hz) 22,1
Berdasarkan spektra NMR
2" δH 5,21 (1H, t, J = 7,6 & 6,8Hz) 121,9
membuktikan bahwa senyawa 1 adalah stilben.
Adanya dua sinyal proton yang membentuk 3" 132
sistem AB pada pergeseran δH 6,832 dan δH 4" δH 1,79 (3H, s) 17,8
7,843 (1H, d, J = 16 Hz). Konstanta kopling 5" δH 1,68 (3H, s) 25,8
yang besar ini mengindikasikan adanya struktur
C-OMe δH 3,95 (3H, s) 55,7
geometri trans dari ikatan rangkap dua. Sinyal
proton aromatik dengan sistem aa'bb' pada C=O 175,4
pergeseran δH 7,531 (2H, d, J = 8Hz) dan δH 3-OH δH 11,53 (1H, s)
7,386 (2H, d, J = 7,6 Hz) juga teramati pada
senyawa ini. Satu sinyal proton singlet pada δH
6,660 ppm menunjukkan adanya proton aromatik
Untuk memastikan letak subtituen maka
terisolasi yang tidak dipengaruhi proton lainnya
dilakukan pengukuran NMR 2 dimensi. Korelasi
yang menegaskan bahwa salah satu cincin
HMBC untuk mengetahui korelasi jarak jauh
aromatik senyawa 1 merupakan aromatik
antara proton dan karbon tetangga.
pentasubtitusi. Sedangkan cincin yang lain
tersubtitusi oleh gugus hidroksi pada posisi para.
Sekelompok sinyal yang sesuai untuk
rantai prenil pada pergeseran δH 1,794 (3H,s),

144 Program Pascasarjana Institut Teknologi Sepuluh Nopember

 Prosiding Seminar Nasional Pascasarjana XIV – ITS
ISBN 978-602-96565-7-2

H
H OH O
7. Pustaka
3
Ajaiyeoba, E.O., Ogbole O.O., Abiodun O.O.,
Ashidi J.S., Houghton P.J., Wright
2

H H H
4

H H
A 1
1'
2'
H C.W. (2005). In vitro antiplasmodial
MeO 5

6
B
3'
and Cytotoxicity Activities of 6 Plants
H H
H
6'
OH
from the Southwest Nigerian
Ethnomedicine. J Nat Rem 5(1), 1-6.
4'

5'

Amarowicz, R., Naczk, M., and Shahidi, F.,

H

Gambar 1. Korelasi HMBC senyawa 1 2000, Antioxidant activity of Crude

Berdasarkan data-data tersebut, maka struktur
senyawa 1 diberi nama Asam 3-hidroksi-4-
prenil-5-metoksistilben. Senyawa 1 juga telah
dibandingkan dengan literatur (Green, et. al.,
2003).
Uji keaktifan peredaman radikal bebas
DPPH senyawa hasil isolasi dilakukan pada
konsentrasi 62,5 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500
ppm dan 1000 ppm. Pengukuran pada
spektrofotometer UV-Vis dilakukan setelah 30
menit penambahan cuplikan. Hasil pengukuran
dan penghitungan % peredaman DPPH senyawa
1 IC50 413,67 µg/ml. Berdasarkan data tersebut
di atas, terlihat bahwa senyawa 1 memiliki
keaktifan antioksidan. Suatu senyawa dikatakan
memiliki keaktifan antioksidan apabila harga
IC50 < 1000 µg/ml.
5. Kesimpulan
Senyawa turunan stilben terprenilasi yaitu Asam
3-hidroksi-4-prenil-5-metoksistilben (1) telah
berhasil diisolasi dari ekstrak metanol tumbuhan
kacang kayu (Cajanus cajan (L.) Millsp.)
anggota famili fabaceae. Berdasarkan pengujian
antioksidan yang telah dilakukan diketahui
bahwa senyawa (1) bersifat aktif sebagai
antioksidan dengan nilai IC50 413,67 µg/ml.
OH
3
2
4
A 1
Tannins of canola and Rapeseed Hulls,
JAOCS, 77, p. 957–961
Ashidi, J. S., Houghtona P.J., Hylandsa P.J., T.
Efferthc. (2010). Ethnobotanical survey
and cytotoxicity testing of plants of
South-western. Journal of
Ethnopharmacology 128, 501–512.
Brand-Williams, W., Cuvelier, M.E. and Berset,
C., (1995), Use Of A Free Radical
Method To Evaluate Antioxidant
Activity, Lebensmittel-Wissenschaft
And-Technologie/Food Science And
Technology 28,p. 25-30
Green, P. W., Philip C. Stevenson, Monique S. J.
Simmonds and Hari C. Sharma, (2003).
Phenolic Compounds on The Pod-
Surface of Pigeonpea, Cajanus cajan,
Mediate Feeding Behaviour of
Helicoverpa armigera Larvae. Journal
of Chemical Ecology, Vol. 29.
Kristanti, A. N., Aminah, N. S., Tanjung, M., &
Kurniadi, B. (2008). FITOKIMIA.
Surabaya: Airlangga University Press.
Pratt, D.E. & Hudson, B.J.F, (1990). Natural
Antioxidants not Exploited Comercially. In
Food Antioxidants. Hudson B. J. F. (Ed).
London: Elsevier Applied Science.
Tapan, Erik, (2005). Kanker, Antioksidan &
O
Terapi Komplementer. Jakarta: PT Elex
OH
2'
Media Komputindo
1'

MeO 5
6
3'
B
6'
4' OH
Wink, M. (2013). Evolution of Secondary
5'
Metabolites in Legumes (Fabaceae). South
1
African Journal of Botany 00956, 12.
6. Ucapan Terimakasih
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Zhang, Xiao-Li, Yu-Shan Guo, Chun-Hua Wang,
Dit.Litabmas Dikti atas dana penelitian unggulan Guo-Qiang Li, Jiao-Jiao Xu, Hau Yin
perguruan tinggi, analis SATREPS di Tropical Chung, Wen-Cai Ye, Yao-Lan Li , Guo-Cai
Disease Diagnosis Center Universitas Airlangga Wang (2014). Phenolic compounds from
atas bantuan analisa menggunakan spektrometer Origanum vulgare and their antioxidant and
NMR dan analis di Laboratorium Biofarmaka antiviral activities. Food Chemistry 152 p.
IPB atas bantuan analisa antioksidan. 300–306.

Program Pascasarjana, Institut Teknologi Sepuluh Nopember 145

View publication stats