Machine Translated by Google

Jurnal Internasional dari

Ilmu Molekuler

Artikel Artikel

Pembersihan Radikal Bebas dan Antioksidan Seluler Pembersihan Radikal Bebas dan Antioksidan Seluler

Sifat Astaxanthin Sifat Astaxanthin

1
Janina Dosis 1, Seiichi
, Seichi Matsugo 2,
Matsugo 2, Haruka Yokokawa 2
2, Yutaro Koshida 2, Shigetoshi
, Okazaki 3, Janina2 Dosis Haruka Yokokawa Yutaro
Koshida 1
,
, Shigetoshi Okazaki3
1 Eggersdorfer 4, Gerald Rimbach41 dan
Gerald Rimbach 1,*
Ulrike Seidel dan
Ulrike Seidel 1, , Manfred
Manfred tuba Esatbeyoglu
Eggersdorfer, Tuba Esatbeyoglu 1,*

Diterima:
2015; 12 Oktober
Diterima: 2015;
8 Januari Diterima:
2016; 8 Januari
Diterbitkan: 2016; Diterbitkan:
14 Januari 2016 Januari 2016 Diterima: 12 Oktober
Editor Akademik: Esra Capanoglu Editor Akademik: Esra Capanoglu

11 Institut Nutrisi Manusia

Universitas dan Ilmu Pangan, Universitas
Kiel, Hermann-Rodewald-Straße Kiel, Hermann-Rodewald-Straße
6, D-24118 6, Institut Nutrisi
Kiel, Jerman; dosis@foodsci.uni-kiel.de (JD);Manusia dan Ilmu Pangan,
seidel@foodsci.uni-kiel.de
(AS); D-24118 Kiel, Jerman; dosis@foodsci.uni-kiel.de (JD); seidel@foodsci.uni-kiel.de (AS); rimbach@foodsci.uni-kiel.de (GR)
rimbach@foodsci.uni-kiel.de (GR)
22 Sekolah Sistem Alam, Universitas Kanazawa, Kakuma-machi, Kanazawa 920-1192, Jepang; Sekolah Sistem Alam, Universitas

Kanazawa, Kakuma-machi, Kanazawa

koshi04015087@gmail.com 920-1192, Jepang; matsugoh@se.kanazawa-u.ac.jp
(YK) s-matsugoh@se.kanazawa-u.ac.jp (SM); haruside8133@gmail.com
(SM); haruside8133@gmail.com (HY);
(HY); koshi04015087@gmail.com (YK)
3 Pusat Penelitian Fotonik Medis, Fakultas Kedokteran Universitas Hamamatsu, Handamachi 1-20-1, 3 Pusat Penelitian Fotonik Medis, Fakultas Kedokteran Universitas Hamamatsu, Handamachi 1-20-1,

Higashi-ku, Hamamatsu, Shizuoka 431-3192, Jepang; okazaki@hama-med.ac.jp Higashi-ku, Hamamatsu, Shizuoka 431-3192, Jepang; okazaki@hama-

4med.ac.jp 4 DSM Nutritional Products, PO Box 2676, 4002 Basel, Swiss; manfred.eggersdorfer@dsm.com Produk Gizi DSM, PO Box 2676, 4002 Basel, Swiss; manfred.eggersdorfer@dsm.com *

Korespondensi: esatbeyoglu@foodsci.uni-kiel.de; Tel.: +49-431-880-5333 * Korespondensi: esatbeyoglu@foodsci.uni-kiel.de; Telp: +49-431-880-5333

Abstrak: Astaxanthin merupakan zat pewarna yang digunakan sebagai feed additive dalam nutrisi akuakultur. Abstrak: Astaxanthin merupakan zat pewarna yang digunakan sebagai feed additive dalam nutrisi akuakultur.

Baru-baru ini, manfaat kesehatan potensial dari astaxanthin telah dibahas yang mungkin sebagian terkait Baru-baru ini, manfaat kesehatan potensial dari astaxanthin telah dibahas yang

mungkin sebagian terkait dengan pemulungan radikal bebas dan sifat antioksidannya. Resonansi spin elektron kami (ESR) untuk pemulungan radikal bebas dan sifat antioksidannya.

Data electron spin resonance (ESR) dan dan spin trapping kami menunjukkan bahwa astaxanthin sintetik adalah pemulung radikal bebas yang kuat dalam data penjebak spin

menunjukkan bahwa astaxanthin sintetik adalah pemulung radikal bebas yang kuat dalam hal diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH) dan bebas galvinoxyl radikal. Selanjutnya astaxanthin

diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH) dan radikal bebas galvinoxyl. Selain itu, oksigen singlet yang dipadamkan secara dependen dosis astaxanthin ditentukan dengan penghitungan foton.

Selain oksigen singlet yang dipadamkan dengan dosis bebas yang ditentukan dengan penghitungan foton. Selain sifat scavenging radikal bebas dan quenching oksigen singlet,

astaxanthin menginduksi sifat scavenging radikal antioksidan dan quenching oksigen singlet, astaxanthin menginduksi enzim antioksidan paroxoanase-1, meningkatkan konsentrasi

glutathione dan mencegah enzim peroksidasi lipid paroxoanase-1, meningkatkan konsentrasi glutathione dan mencegah peroksidasi lipid di dalam hepatosit yang dikultur. Hasil saat ini

menunjukkan bahwa, di luar sifat pewarnaannya, hepatosit kultur sintetik. Hasil saat ini menunjukkan bahwa, di luar sifat pewarnaannya, astaxanthin sintetik menunjukkan pembersihan

radikal bebas, pendinginan oksigen singlet, dan aktivitas antioksidan . yang mungkin dapat secara positif mempengaruhi kesehatan hewan dan manusia.

Kata kunci: astaxanthin; pemulungan radikal bebas; antioksidan; spektroskopi resonansi spin elektron Kata kunci: astaxanthin; pemulungan radikal bebas; antioksidan; spektroskopi resonansi spin elektron

1.
1. Pendahuluan
Pendahuluan
adalah
Astaxanthin
Astaxanthin
1) adalah (3,31 -dihydroxy-ÿ,ÿ
karotenoid (3,3ÿ-dihydroxy-ÿ,ÿÿ-carotene-4,4ÿ-
xanthophyll1[1]
-carotene-4,41
dan
yang
salmon. -dione,
secaraxantofil
alami dione,
untukuntuk
terdapat struktur
karotenoid
padastruktur
[1] kimianya
alga,
yang kimianya
krill,
secara lihat
trout, Gambar
lihatterdapat
alami
udang Gambar
1)
karang,
pada alga, krill, trout, udang karang, dan salmon.
Astaxanthin banyak digunakan dalam nutrisi akuakultur sebagai zat pewarna [2]. Selain pewarnaannya,
Astaxanthin
mempengaruhibanyak
astaxanthin juga digunakan
status
dapat dalam
kekebalan
mempengaruhi nutrisi
statusakuakultur
dan reproduksi [3,4]. sebagai
kekebalan zat pewarna
dan reproduksi [3,4].[2]. Selainastaxanthin
properti, sifat pewarnaannya,
juga dapat

Gambar 1. Struktur kimia astaxanthin.

Gambar
astaxanthin.
1. Struktur kimia
Astaxanthin memiliki dua pusat kiral pada posisi 3 dan 3 '. Astaxanthin stereoisomer -3S,3Sÿ- adalah Astaxanthin yang memiliki dua pusat kiral pada posisi 3 dan 3'. Astaxanthin stereoisomer -3S,3S1 - adalah bentuk

utama yang ditemukan pada salmon liar [5]. Sebagian besar astaxanthin yang digunakan dalam nutrisi akuakultur dihasilkan dari salmon liar [5]. Sebagian besar astaxanthin yang digunakan dalam nutrisi akuakultur diproduksi secara

sintetik yang menghasilkan tiga stereoisomer berbeda, termasuk 3S, 3ÿS; 3R, 3ÿS; dan 3R, 3ÿR [1]. yang menghasilkan tiga stereoisomer yang berbeda, termasuk 3S, 3 1S; 3R, 3 1S; dan 3R, 3 1R [1]. Pada tahun 1981, Widmer et al. [6]

Pada tahun 1981, Widmer et al. [6] mensintesis astaxanthin dari educt 6-oxo-isophorone

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103; doi:10.3390/ijms17010103 Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103; doi:10.3390/ijms17010103
www.mdpi.com/journal/ijms www.mdpi.com/journal/ijms
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 2 dari 14

mensintesis astaxanthin dari educt 6-oxo-isophorone (3,5,5-trimethyl-2-cyclohexene-1,4-dione) 2melalui

dari 13
a
Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103
sintesis tujuh langkah. Melalui reaksi Wittig dari dua ekuivalen garam C15-fosfonium dengan C10-
dialdehida, astaxanthin diperoleh
sikloheksena-1,4-dion) melaluidengan
sintesishasil hingga
tujuh 50%Selama
langkah. hasil [6].reaksi
(3,5,5-trimetil-2-
Wittig dari dua ekuivalen
garam C15-fosfonium
Astaxanthin juga memiliki dengan C10-dialdehida,
aplikasi yang signifikan astaxanthin
dalam industri diperoleh dengan menghasilkan
nutraceutical [7]. Berbagai
kesehatan
katarak,
penyakit
nutraceutical
telah hingga
kardiovaskular
dikaitkan hasil
[7]. Berbagai
dengan 50%
dan pencegahan[6]. manfaat,
Astaxanthin
konsumsi katarak, termasuk
astaxanthin
juga memiliki penyakit
telahkesehatan
dikaitkan kardiovaskular
aplikasi[3,8-10].
dengan
yang signifikan
Meskipun
manfaat, dan
dalampencegahan
termasuk
telah industri
konsumsidan disarankan
astaxanthin bahwa
sifat pengatur
[3,8-10]. manfaat
gendimediasikesehatan
[14,15], Meskipun potensial
oleh pemulungan dari
telah disarankan astaxanthin,
radikal bebas
bahwa setidaknya
[11],
manfaat
antioksidan sebagian,
kesehatan[12,13],
potensial
oleh
sistematis
astaxanthin
antioksidan
menilai
aktivitas
setara
Selanjutnya,
masing. dari
radikal
trolox) astaxanthin,
dekolorisasi
Selanjutnya,
pemulungan
langka.
setara
bebas
telah
dekolorisasi
[17],
ditentukan
(kekuatan
[11],
trolox)
dan
radikal
radikal
radikal
Dalamsetidaknya
antioksidan
[17],
FRAP
bebas
oleh
antioksidan sebagian,
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
bebas
penelitian
dan(kekuatan
tes
dari
ORAC
[12,13],
astaxanthin
ORAC
radikal
sebelumnya,
pereduksi
(kapasitaspenelitian
antioksidan
dan
(kapasitas sistematis
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
telah
sifat
besi)
absorbansi
pengaturan
ditentukan
aktivitas
pereduksi
penyerapan
[16],
(DPPH)TEAC
pemulungan
oleh
radikal
gen
besi)
dapatmasih
radikal
(kapasitas
Dalam
FRAP
[16], langka.
oksigen)
digunakan
oksigen)
(DPPH)
TEAC
radikal
[14,15],
studi dimediasi
antioksidan
[18]
sebelumnya,
(kapasitas
bebas
dapat
untuk
[18]
studi
masing-
.
digunakan untuk menilai radikal bebas. aktivitas antioksidan, dengan mempertimbangkan
bahwa alkohol sebagai pelarut dapat menyebabkan overestimasi aktivitas pemulungan radikal
antioksidan, dengan mempertimbangkan bahwa alkohol sebagai pelarut dapat
menyebabkan
bebasnya
seperti
mendasari, aktivitas
[19-21].
yang reagen, pemulungan
dijelaskan
Literaturpanjang
uji
dalam radikalyang
antioksidan
gelombang,
perkiraan bebasnya
yang
pH,
berbeda,
dll. [19-21].
berlebihan
Sistem
berbedaSistem
yang
dari uji antioksidan
aktivitas
dalam
disarankan
halpemulungan
metodologi
, seperti yang
yang berbeda,
radikal
yang
dijelaskan dalam literatur, berbeda dalam hal metodologi yang mendasari, reagen, bahwa
kombinasi berbagai pengujian harus digunakan. dalam menilai aktivitas antioksidan in vitro [22].
panjang gelombang, pH, dll Disarankan bahwa kombinasi dari berbagai tes harus digunakan
dalam
elektron
yang ditetapkan
agak(ESR)menilai
tidak Selain
menggabungkan
sebagai
langsung metode
metode
ini, reaksi yang
yang
aktivitas agak
spektroskopi
kuat tidakpenilaian
antioksidan
untuk langsung
resonansi
in vitro ini,
[22].spektroskopi
langsung
spin elektron
dengan
radikal
(ESR)
spin resonansi
bebas
trapping
[23].
Selain
Oleh spin
telah
metode
karena
itu, dalam
dikombinasikan
dari astaxanthin. penelitian
langsung menentukan
dengan ini,
reaksi radikal kami
spinaktivitas
trappingmenerapkan
bebaspemulungan
[23].
telah Oleh ESR,
ditetapkan
karena serta
radikalsebagai
itu, metode
bebas
dalammetode
dan penghitungan
penelitian
pendinginan
yang ini,
kuatkami foton,
oksigen
untuk untuk
menerapkan
penilaian
singlet
bebasESR,
dan serta
astaxanthin metode
pendinginan penghitungan
dalam hepatosit
oksigen yang foton,
singlet untuk
dikultur.
Selanjutnya, menentukan
astaxanthin.
kami mempelajari aktivitas pemulungan
aktivitas radikal
antioksidan seluler

mekanisme
Kami enzimatik
menjawab
pertahanan
Selanjutnya,
pertanyaan,
kultur,
kami
jika
termasuk
dan
mempelajari
sejauh
paraoxoanase-1.
mana
aktivitas
astaxanthin
antioksidan
Selanjutnya,
dapatseluler
menginduksi
kami astaxanthin
menentukan
antioksidan
dalam
hepatosit
glutathione
menginduksi
termasuk glutathione seluler.
paraoxoanase-1.
tingkat enzimatik Kami menjawab
adalahSelanjutnya,
mekanisme
sebagai responspertanyaan,
pertahanan
kami menentukan
terhadap jika
antioksidandan
pengobatansejauh
antioksidan
endogen mana
astaxanthin,
sitosol astaxanthin
yangseluler
paling
karena
yang dapat
penting,
secara
terpusat terlibat dalam pensinyalan redoks dan respons stres. tingkat glutathione sebagai
respons
antioksidan
keseluruhan,
redoks
terhadap
sitosolik
dan respons
pengobatan
naskah
endogen
stres.
ini bertujuan
radikal
astaxanthin,
bebas
untuk
karena
yang
memberikan
secara
glutathione
terpusat
informasi
adalah
terlibat
yang
yangdalam
komprehensif
paling
pensinyalan
pentingdalam
. Secara
hal

pemulungan, antioksidan,
Secara keseluruhan, dan sifat
naskah pengubah
ini bertujuan pensinyalan
untuk sel dari yang
memberikan informasi astaxanthin.
komprehensif dalam hal gratis
pemulungan radikal, antioksidan, dan sifat pengubah pensinyalan sel dari astaxanthin.
2. Hasil dan Pembahasan
2. Hasil dan
Pembahasan Kami menerapkan ESR dan spin trapping untuk mengukur secara langsung
scavenging
secara pemulung
DPPH langsung yangradikal
ketergantungan
aktivitas bebas
tergantung
DPPH
scavengingKami
(Gambar
dosis menerapkan
radikal
(Gambar
2A)bebas
dan2A) ESR
aktivitas
dari
dan dan spin
astaxanthin.
radikal
galvinoxyltrapping
bebas untuk
Astaxanthin
dari
galvinoxyl mengukur
astaxanthin.
dosis-
(Gambar
Astaxanthin
2B).
Namun,
radikal astaxanthin
ditampilkan). tidak mengais radikal bebas anion superoksida (data (Gambar
bebas. Namun, astaxanthin tidak mengais radikal bebas anion superoksida tidak 2B)
Dengan demikian,
menghasilkan superoksidaastaxanthin tidak
(data tidak menghambat
ditampilkan). xanthine
Dengan oxidase,
demikian, yang
astaxanthin tidak
menghambat
Ketika oksigen
fotonAktivitas
oksigen
oksigen
diamati. xanthine
singlet
(Gambar
pendinginan
Aktivitas
2C). oxidase,
direlaksasi
pendinginan
oksigen yang
ke
Ketika oksigen
singlet menghasilkan
keadaan
oksigen dasar,
astaxanthin
singlet
tunggal radikal
radikal
direlaksasi
sebagai
astaxanthin
ke bebas
bebas
fungsi
keadaan anion
anion
sebagai
dari emisi
dasar,(Gambar
superoksida
spektrum
emisi 2C).
emisifungsi,
foton
diamati.
konsentrasi, dan kurva peluruhan diberikan pada Gambar 2D. Seperti yang ditunjukkan pada
Gambar 2D, astaxanthin dari spektrum emisi, konsentrasi, dan kurva peluruhan diberikan pada
Gambar 2D. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2D, oksigen singlet yang dipadamkan
secara dependen dengan
oleh penghitungan
dipadamkan dosis
foton.seperti
dosisyang ditentukan
astaxanthin yang dengan penghitungan
bergantung foton.
pada dosis oksigen singlet
sebagaimana yang
ditentukan

140 DPPH radikal

SEBUAH Kontrol

120 25

50
100
100

80 150
Intensitas
kontrol)
sinyal
ESR
(%

200
60
250
40
300

20 400

500
0
600
0,00
300 4000,03
5000,05
600 0,10
750 0,15 0,20 0,25 0,30 0,40 0,50 0,60 0,75 Kontrol 25 50 100 150 200 250
750
Astaxanthin [µM]
Astaxanthin [µM]

Gambar 2. Lanjutan.
Gambar 2. Lanjutan.
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 3 dari 14

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 3 dari 13

140 Radikal galvinoksil

B Kontrol

120
5

100
10

80 25

60
Intensitas
kontrol)
sinyal
ESR
(%

50

40 100

20 150

0 200
0
Kontrol 0,005 5 0,01 10 0,025 0,05 25 50 0,1
100 0,15 150 0,2
200 0,25 250

250
Astaxanthin [µM]
Astaxanthin [µM]
100
C 90

80

70

60

50

40
Penghambatan
oksidase
xanthine
[%]

30

20

10

0
0 0,12 0,24 0,49 0,98 1,95 3,91 7,81 16 31 62,5 125 0 108 432 866 1731 3463

Alopurinol Astaxanthin
[µM] [µM]
2
35x103
D Astaxanthin Astaxanthin
0M 0M
30 1000 5,4*10-7M
5,4*10-7M 8
7 1,1*10-6M
1,1*10-6M
6
25 2,1*10-6M
2,1*10-6M 5
4,2*10-6M
4,2*10-6M 4
8,1*10-6M
Intensitas
satuan]
[arb. 20 8,1*10-6M
Intensitas
satuan]
[arb.

2
15

10 100
8
7

5 5

3
0

1100 1150 1200 1250 1300 1350 1400 0 20 40 60 80

Panjang gelombang [nm] Waktu [detik x 106 ]

Gambar 2. Efek scavenging astaxanthin pada radikal DPPH (A), radikal galvinoxyl
Campuran
(B), xanthinereaksi
Gambar
(B), inhibisi mengandung
2. Efek
xanthine oxidase penghambatan
scavenging oksidase
(C), dan astaxanthin
quenching (C),radikal
pada
oksigen dan pendinginan
singletDPPH
(D). (SEBUAH)oksigengalvinoxyl
(A), radikal singlet
(D). (A) Campuran reaksi mengandung 500 µM 500 µM DPPH dan konsentrasi astaxanthin
yang diberikan. Semua nilai adalah rata-rata + SD (percobaan DPPH dan konsentrasi
astaxanthin yang diberikan. Semua nilai adalah rata-rata + SD (percobaan dilakukan dalam
dalam
nilai rangkap
Perubahan
rata-rata
rangkap tiga); (B)
+ tiga);
SD Berbagai
Perubahan
(tiga
(B) percobaan
Berbagai konsentrasi
intensitaskonsentrasi
independen astaxanthin
sinyal radikal
astaxanthin
dilakukan dicampur
ditunjukkan
dalam
dicampur dengan
dirangkap
sisi
dengan
kanan 500
tiga); ÿM
gambar.
500(C)
µMgalvinoxyl.
Campuran
galvinoxyl.
Semua
reaksi
nilai percobaan
Campuran yang
adalahreaksi mengandung
rata-rata
independen
mengandung
+ SD (tiga intensitas
astaxanthin
konsentrasi sinyal
xantin oksidase
yang radikal
xantin
diberikan
5 U/mL ditunjukkan
5 U/mL. dilakukan
dalam di
Allopurinol
buffer sisi
dalam kanan
kalium
digunakan
rangkap gambar.
fosfatsebagai
tiga);
50 mM Semua
(C)dan
50 kontrol positif.
mM dan konsentrasi
Eksperimen Semua nilai
independenastaxanthin adalah rata-rata
yang diberikan.
Allopurinol dilakukan + SD (tiga oksidase dalam buffer kalium
dalam rangkap tiga); ( D ) Aktivitas pendinginan fosfat
oksigen
percobaan
oksigen
astaxanthin),
10ÿ6,
dan singlet
waktu
2,1 singlet
independen
panjang digunakan
×astaxanthin
(kanan).
10ÿ6, gelombang
4,2
dilakukan
Emisi sebagai
×sebagai
10ÿ6,
foto kontrol
astaxanthin
(kiri),
dan
ditentukan
fungsi
8,1
dan × positif.
konsentrasi
kompleks
10ÿ6
sebagai
oleh diSemua
Mfoton fungsi
setelah ˆnilai
astaxanthin),
rangkap rata-rata
(5,4 konsentrasi
iradiasi
10'7
tiga);2,1
panjang
(D)
laser
ˆ 10'6 +gelombang
SD
Aktivitas
(5,4pada
×
dan (tiga
10ÿ7,
532
pendinginan
8,1 nm
1,1
ˆ 10'6
(kiri),
× M
dengan adanya sampel uji. Dua waktu independen (kanan). Emisi foto ditentukan oleh
kompleks foton setelah iradiasi laser pada 532 nm dalam percobaan yang dilakukan dalam
rangkap1,1 dua.
ˆ 10keberadaan
ÿ6, sampel uji. Dua percobaan independen dilakukan dalam rangkap
dua. , , 4,2 ˆ 10 ÿ6,

Dalam studi kultur sel kami, astaxanthin tidak menunjukkan sitotoksisitas yang signifikan dalam
studi
Huh7,
hinggakultur seldikami,
PON1-Huh7,
20 ÿM Huh7,astaxanthin
dan PON1-Huh7,tidak
HepG2 seperti menunjukkan
danyang
HepG2 sitotoksisitas
dirangkum
seperti yang yang signifikan
dalamdirangkum
Gambar 3.dalam
TritonX dalam
Gambar konsentrasi
digunakan
3. hingga 20konsentrasi
sebagai ÿM
TritonX
di
digunakan sebagai kontrol untuk menginduksi sitotoksisitas sebagaimana ditentukan oleh uji merah netral. kontrol
untuk menginduksi sitotoksisitas sebagaimana ditentukan oleh uji merah netral.
Machine Translated by Google

Mol.
Int.
J. Sains.
J.Mol. 2016,
Sains. 2016, 17, 103Int.
17, 103 4 dari 14 4
dari 13 4 dari 13

120 140 120

120 140 120

100 120 100

100 120 100
100
80 100 80
80 80
80
80
kendali)
kendali)
(%
(%
kendali)
kendali)
(%
(%
kendali)
kendali)
kendali)
kendali)
(%
(%
(%
(%

60 60
60 60
Viabilitas
Viabilitas
Huh7
Huh7
sel
sel

60
Viabilitas
Viabilitas
HepG2
HepG2
sel
sel

viabilitas
viabilitas
viabilitas
viabilitas
PON1-
PON1-
PON1-
Huh7
PON1-
Huh7
Huh7
Huh7
sel
sel
sel
sel
60
40 40
40 40 40
40
20 20 20
20 20 20

0 0 0
0 0 0
THF Triton X 20 µM THF Triton THF Triton X 20 µM THF Triton THF Triton X 20 µM THF Triton
X 20 µM X 20 µM X 20 µM

Gambar 3. Efek astaxanthin pada viabilitas sel pada sel Huh7, PON1-Huh7, dan HepG2 setelah 24 jam Gambar 3. Efek astaxanthin pada viabilitas sel pada sel Huh7, PON1-Huh7, dan HepG2 setelah 24 jam Gambar 3. Efek astaxanthin pada viabilitas sel dalam sel Huh7, PON1-Huh7, dan HepG2 setelah inkubasi 24 jam. Data

rata-rata + SD dari setidaknya dua percobaan yang dilakukan dalam rangkap tiga. inkubasi. Data rata-rata + SD dari setidaknya dua percobaan yang dilakukan dalam rangkap tiga. inkubasi. Data rata-rata + SD dari setidaknya dua percobaan yang dilakukan dalam rangkap tiga.

Suplementasi sel PON1-Huh7 yang dikultur dengan 20 ÿM astaxanthin sintetik menghasilkan Suplementasi sel PON1-Huh7 yang dikultur dengan 20 µM astaxanthin sintetik menghasilkan Suplementasi sel PON1-Huh7 yang dikultur dengan 20 ÿM astaxanthin sintetik menghasilkan

induksi moderat paraoxoanse-1 (PON1) (Gambar 4A). Selanjutnya, astaxanthin sintetik merupakan induksi moderat paraoxoanse-1 (PON1) (Gambar 4A). Selanjutnya, induksi moderat astaxanthin sintetik paraoxoanse-1 (PON1) (Gambar 4A). Selain itu, dosis astaxanthin sintetik secara dependen

meningkatkan kadar glutathione seluler (GSH) dalam sel HepG2 (Gambar 4B). Level glutathione seluler (GSH) yang bergantung dosis meningkat dalam sel HepG2 (Gambar 4B). Peningkatan kadar glutathione seluler (GSH) yang tergantung dosis dalam sel HepG2 (Gambar 4B). Peningkatan GSH

seluler tidak disertai dengan peningkatan transaktivasi Nrf2 seperti terlihat pada GSH seluler tidak disertai dengan peningkatan transaktivasi Nrf2 seperti terlihat pada Gambar 4C. peningkatan GSH seluler tidak disertai dengan peningkatan transaktivasi Nrf2 seperti yang ditunjukkan pada Gambar

4C. Curcumin dan resveratrol masing-masing digunakan sebagai kontrol positif. Curcumin dan resveratrol masing-masing digunakan sebagai kontrol positif. Gambar 4C. Curcumin dan resveratrol masing-masing digunakan sebagai kontrol positif.

SEBUAH B
B C
SEBUAH
C
160 *** ***
550
3500 160 550
3500
140 *** *** 450
3000 140 450
3000
120 350
2500 120 350
2500
100
100 40
2000 40
2000
protein]
protein]
luc/
luc/
[f-
[f-

80 Transaktivasi
Nrf2
Transaktivasi
kunang/
kunang-
renilla]
[rasio
Nrf2
kunang/
kunang-
renilla]
[rasio

80
1500 30
30
Transaktivasi
PON1

1500 *
Glutathione
HepG2]
HepG2]
[µmoL/
[µmoL/
1*106
1*106
sel
sel

60
* 60
1000 20
1000 40 20
40
500 20 10
500 20 10

0 0 0
0 0 0
THF 20 20 THF 5 25 THF 20 20
THF 11 20 20 THF 11 5 25 THF 11 20 20
Astaxanthin Kur Astaxanthin Res Astaxanthin Kur
Astaxanthin Kurs Astaxanthin Res Astaxanthin Kur
[µM] [µM] [µM] [µM] [µM] [µM] [µM] [µM]
[µM] [µM] [µM] [µM]

Gambar 4. Efek astaxanthin pada transaktivasi paraoxonase-1 (PON1) (A), glutathione seluler Gambar 4. Efek astaxanthin pada
transaktivasi paraoxonase-1 (PON1) (A), glutathione seluler Gambar 4. Efek astaxanthin pada transaktivasi tingkat paraoxonase-1

(PON1) (A), glutathione seluler (GSH) (B) dan transaktivasi Nrf2 (C) dalam hepatosit yang dikultur. ( A ) Sel PON1-Huh7 adalah (GSH)
level (B) dan transaktivasi Nrf2 (C) dalam hepatosit yang dikultur. ( A ) Sel PON1-Huh7 adalah (GSH) level (B) dan transaktivasi Nrf2 (C)
dalam hepatosit yang dikultur. ( A ) Sel PON1-Huh7 diunggulkan dengan kepadatan 0,15 ˆ 106 sel / sumur ke dalam 24 pelat sumur dan
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ÿC. Sel diunggulkan dengan kepadatan 0,15 × 106 sel/sumur ke dalam 24 pelat sumur dan
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 °C. Sel diunggulkan dengan kepadatan 0,15 × 106 sel/sumur ke dalam 24 pelat sumur dan
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 °C. Sel diperlakukan dengan 1 dan 20 ÿM astaxanthin. Transaktivasi PON1 diukur setelah 48

jam diobati dengan astaxanthin 1 dan 20 µM. Transaktivasi PON1 diukur setelah inkubasi 48 jam dari perlakuan dengan 1 dan 20 ÿM
astaxanthin. Transaktivasi PON1 diukur setelah 48 jam inkubasi sel dengan astaxanthin sintetik. Curcumin (Curc; 20 ÿM) digunakan
sebagai
dalam
dan 24sel
astaxanthin
ke dalam positif
diinkubasi
5 ÿM pelat dandengan
astaxanthin
sintetik.
selama
sumur kontrol astaxanthin
Curcumin
dan
dan
24 jam.
diinkubasi
diinkubasi
24 sumur;
(Curc; ( sintetik.
Sel diperlakukan
untuk
selama
20 BÿM)
) Sel Curcumin
tambahan
digunakan
24HepG2
dengan
jam (Curc;
jam.tambahan.
Kontrol
25
diunggulkan
sebagai
1ÿM)
dansel 20 µM)
digunakan
5Resveratrol
;ÿM
sel
(B digunakan
dengan
astaxanthin
positif
) Sel
sebagai
HepG2
yang sebagai
kepadatan
(Res; 15kontrol
diunggulkan
dan
kontrol
diinkubasi
diunggulkan
diinkubasi
0,positif;
×selama
dengan
106 positif;
dengan
untuk
( C sel
) Sel
24 (B)Sel
kepadatan
tambahan
/ sumur HepG2
kepadatan
jam.
Huh7 ke ˆinkubasi
diunggulkan
diperlakukan
0,15
diperlakukan
dalam
0, 15 106
pelat
× 106 selsumur
dengan
sel/sumur
dengan
24
dengan
dengan
/ sumur
ke
11
kepadatan
106
sumur 0,
Transaktivasi
kepadatan
diinkubasi
inkubasi
seldan
/ sumur
sel
24 15
selama ˆ 106
diinkubasi
dengan
Nrf2
jam.
ke sel
diukur
24
dalam /pada
sumur
Resveratrol
1selama
jam
dansetelah
2420
pelat
24
ÿM 24
(Res;
suhu
jam
24 jam.
diukur
sumur
jam
pada
37 Resveratrol
25 ÿC.
setelah
ÿM)
inkubasi
dan
suhu
Sel
digunakan
diinkubasi
37 (Res;
ditransfusikan
24
sel°C.
jam
dengan
Sel 25
inkubasi
sebagai
selama ÿM) digunakan
ditransfusikan
1 selama
dan
24
kontrol
seljam
20
dengan
ÿM
24
pada
positif;
selama
jam. sebagai
201suhu
ÿM)
dan
Nrf2
( C24 ° kontrol
digunakan
20
37
) transaktivasi
Sel
jam.
ÿMC.
Huh7 positif;
astaxanthin.
Transaktivasi
Selsebagai (Curcumin
diunggulkan C
ditransfeksi )menjadi
Sel
0,15 kontrol
× Nrf2
106 Huh7
dengan
sel/sumur
diukur
positif.
(Curc;
24 diunggulkan
kepadatan
setelah
Semua
pelat
ke
24dalam
jam.
24
sumur
nilai
jam dengan
0, adalah
24
15dan
pelat
×
rata-rata
sel+4B).
SEM (dua percobaan independen astaxanthin.
rata-rata
Curcumin
+<0,001;
SEM (Curc;
astaxanthin.
20 ÿM)Curcumin
digunakan
* * ***
antara
tiga), perbedaan
yang ditambah
(Gambar yang ditambah
signifikan
ANOVA
astaxanthin
LSDdiindikasikan
secara statistik
diindikasikan
(Gambar 4A)sebagai
antara
sebagai
dan p sel
p<0,05,
tiga),
Dunnett-Tkontrol
<0,05, ***
perbedaan
p p<0,001;
THF
(Gambar danpositif.
dilakukan
signifikan
4B).astaxanthin
selLSD ANOVA
Semua
dalam
secara
diindikasikan
kontrol (dua
THF nilai
satu
sebagai
satu p(Curc;
rangkap
statistik
arah sebagai
percobaan
adalah
arah <0,05,
dan 20
(Gambar
tiga),
antara ÿM)
kontrol
* rata-rata +digunakan
independen ***positif.
pperbedaan
sel(dua
4A)SEM
percobaan
dan
<0,001;
yang Semua
sebagai
dilakukan
signifikan
sel
dilakukan
ditambah kontrol
Dunnett-T nilai
kontrol
independen
dalam
secara
dalam
THF
astaxanthin
satu adalah
dan
rangkap
arah statistik
rangkap
sel
ANOVA LSD (Gambar
dan Dunnett-T (Gambar4A)
4B).

Selain
ligase, itu, levelkatalitik)
subunit mRNA dari danGclc (glutamat-sistein
lainnya. ligase,
Selain itu, level mRNA subunit katalitik)
dari Gclc dan lainnya . ligase,
(glutamat-sistein Selain subunit
itu, levelkatalitik)
mRNA dari dan Gclc (glutamat-sistein
gen target Nrf2 lainnya ,
termasuk
oxygenase Gsta (glutathione
1), Gpx (glutathione
dehydrogenase1), Nqo1
[quinone] S-transferase
peroxidase),
(NAD(P)H
1), Sod1 alpha
dehydrogenase
gen
(superoxide 1),
target Nrf2, Gpx
Hmxo1
[quinone]
termasuk (glutathione
(heme
1),Gsta
Sod1 peroxidase),
oxygenase
(glutathione
(superoxide
1), Nqo1 gen target
S-transferase
dismutase),
(NAD(P)H Nrf2,
Hmxo1
alpha termasuk
dehydrogenase
1),
(heme Gsta (glutathione
Gpx (glutathione
oxygenase
[quinone]1) S-transferase
peroxidase),
1),
, Nqo1
Sod1(NAD(P)H
(superoxidealpha
Hmxo1 (hemedan
Sod2,
(Tabel tidak
signifikan mengalami perubahan signifikan karena terhadap perlakuan astaxanthin (Tabel 1) , dismutase), dan Sod2,
1). karena astaxant pengobatan hin (Tabel 1). dismutase), dan Sod2, tidak berubah secara signifikan karena pengobatan astaxanthin tidak berubah secara
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 Int. 5 dari 14

J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 5 dari 13

Tabel 1. Ekspresi gen target-Nrf2 dalam sel Huh7 yang diberi perlakuan astaxanthin (sel kontrol THF diatur ke Tabel 1. Ekspresi gen target Nrf2 dalam sel Huh7 yang diberi perlakuan astaxanthin (sel kontrol THF ditetapkan menjadi

1.0). menjadi 1.0).

Astaxanthin [µM] Astaxanthin

Gen
Gen
[µM] 1 20 1 20

Gclc 0,91 ± 0,08 1,03 ± 0,26 Gclc 0,91

ÿ 0,08 1,03 0,99
ÿ 0,26 GstaGsta
± 0,18 1,01 0,99
± 0,15
ÿ 0,18
1,01 ÿ 0,15
gpx1 1,34 ± 0,84 ÿ ÿ1 ÿ 0,85 ÿ1 ÿ 1
0,85
eherÿ 0,95
1 0,82 0,95
0,95 eher
0,95 0,95
0,95 eher
0,95 0,95
0,95 0,95
0,95
1,39 ÿ 0,54 Sod2 1,35 ± 0,18 1,39 ±0,18
0,95 0,95
0,95
0,95
0,95
0,95
0,95
0,95
0,9
1,35
0,95
. Sod2
ÿ0,95
0,54

Sel HepG2 ditekankan dengan kumena hidroperoksida/hemin untuk memicu peroksidasi lipid. Sel HepG2 ditekankan dengan kumena hidroperoksida/hemin untuk memicu peroksidasi lipid.

Kami
BODIPYmenerapkan
uji BODIPY uji BODIPY
menunjukkan
untuk menentukan untuk
perubahan menentukan
peroksidasi
fluoresensi
lipid peroksidasi
setelah
dalam lipid
mengikuti
hepatosit dalamsetelah
hepatosit
pengobatan
HepG2 HepG2Probe
astaxanthin.
pengobatankami . Kami menerapkan
astaxanthin.
BODIPY menunjukkan
Probe
perubahan fluoresensi setelah interaksi dengan gugus peroksil. Di bawah kondisi yang diselidiki, suplementasi
interaksi
Di bawahsel
kondisi
HepG2 yang
dengan
diselidiki,
kelompok
suplementasi
peroksil.sel HepG2 dengan astaxanthin 10 dan 20 µM secara signifikan
menurunkan
menurunkan peroksidasi
peroksidasi lipid
lipid dalam
dalam sel
sel HepG2
HepG2 (Gambar
(Gambar 5).
5). dengan 10 dan 20 ÿM astaxanthin secara signifikan

0,7

0,6
**
0,5

0,4
(Sapi+Merah)
Sapi/

0,3

0,2

0,1

0,0
Kontrol 10 20

Astaxanthin [µM]

Gambar 5. Dampak astaxanthin pada kemampuan sel HepG2 manusia untuk mencegah
mencegah
kumena Gambar
diunggulkan peroksidasi
pada5.kepadatan
Dampak
lipid yang
astaxanthin
peroksidasi
distimulasi
pada
lipidkumena
yang
kemampuan
distimulasi
hidroperoksida/hemin.
selhidroperoksida
HepG2 manusia Sel-sel
/ hemin.
untuk
HepG2Sel-sel
HepG2 diunggulkan dengan kepadatan 0,1 ˆ 106 0,1 × 106 sel/sumur ke dalam piring 96-sumur
sumur
(10
hemin
kultur
konsentrasi
dan
astaxanthin
BODIPY
(8
Secara
mM)/hemin
dan
diinkubasi
sel
(8
dan
bersamaan,
20
selama
ÿM)
saja.
diinkubasi
µM)
perlakuan
(10
selama
(8
Secara
selama
selama
dan
30
µM)menit
tingkat
201
selama
(data
bersamaan,
24
jam.
ÿM)
24jam.
dan
jam
basal
selama
30
tidak
124
kemudian
Sel
tambahan.
jam.
menit
jam.
peroksidasi
ditampilkan)
diperlakukan
tingkat
24
Sel
dan
Sel
jam
kontrol
dipaparkan
diperlakukan
kemudian
Sel
basal
tambahan.
lipid
dibilas
dan
adalah
dengan
lipid
dinilai
kontrol.
dipaparkan
dengan
diobati
dan
Sel
Sel
dengan
dua
peroksidasi
diisi
dibilas
kontrol
Lipid
dengan
sel
kumena
dengan
dua
dengan
/untuk
dan
sumur
diperlakukan
konsentrasi
media
dinilai
hidroperoksida
diisi
C11-BODIPY
setiap
kumena
kedengan
untuk
kultur
dalam
konsentrasi
dengan
konsentrasi
hidroperoksida
setiap
sel
piring
astaxanthin
untuk
saja.
(8 mM)/
media
96C11-
perlakuan (data tidak ditampilkan) dan kontrol.

(teroksidasi)
Peroksidasi
dan merah (teroksidasi
lipid
dan ditentukan
jumlah+hijau
tidak
dengan
dan
teroksidasi)
merah
peroksidasi
memeriksa
(teroksidasi
ditentukan
rasio
+ tidak
hijau
dengan
teroksidasi)
(teroksidasi)
memeriksa
-teroksidasi)
dan
rasio
jumlah
hijauhijau
menggunakan
dua
pembaca
percobaan
independen
pelat pembaca
dilakukan pelat
fluorometrik.
dilakukan
dalam fluorometrik.
dalam
rangkap
Data rangkap
rata-rata
dua. **+Data
dua.
pSD berarti
<0,01,
**dari + SD
p <0,01,
setidaknya
Game Gamedaridua
ANOVA setidaknya
ANOVA
satu satuemisi
percobaan menggunakan
arah–Howell.
arah–Howell.
independen

Dalam penelitian ini, kami mengamati aktivitas pemulungan radikal bebas yang bergantung pada dosis. Dalam penelitian ini, kami mengamati aktivitas pemulungan radikal bebas yang bergantung pada

dosis dari astaxanthin astaxanthin dalam hal DPPH dan radikal bebas galvinoxyl sebagaimana ditentukan oleh ESR dan spin trapping. dalam hal radikal bebas DPPH dan galvinoxyl sebagaimana ditentukan oleh

ESR dan spin trapping. ESR terkini Data ESR terkini mengenai aktivitas penangkal radikal bebas astaxanthin dalam hal DPPH data bebas mengenai aktivitas penangkalan radikal bebas astaxanthin dalam

kaitannya dengan DPPH radikal bebas berada pada radikal sesuai dengan data literatur [24,25], dimana berbeda sistem uji fotometri sejalan dengan data literatur [24,25], di mana sistem uji fotometri yang berbeda

diterapkan, misalnya, DPPH, diterapkan, misalnya, DPPH, daya antioksidan pereduksi besi dan pemulungan radikal hidroksil. besi mengurangi kekuatan antioksidan dan hidroksil pemulungan radikal.

Aktivitas penangkal radikal bebas astaxanthin diduga dimediasi oleh elektron Aktivitas penangkal radikal bebas astaxanthin diduga dimediasi oleh transfer

elektron, transfer, pembentukan adisi radikal dan transfer atom hidrogen [26]. Pendinginan oksigen singlet dari formasi adduct radikal dan transfer atom hidrogen [26].

Pendinginan oksigen singlet dari karotenoid, karotenoid, termasuk astaxanthin dimediasi oleh transfer energi antara singlet elektrofilik termasuk astaxanthin dimediasi

oleh transfer energi antara oksigen singlet elektrofilik dan oksigen dan tulang punggung poliena. Secara umum, aktivitas pendinginan oksigen singlet dari karotenoid

tulang punggung poliena. Secara umum, aktivitas quenching oksigen singlet dari karotenoid meningkat seiring dengan bertambahnya panjang konjugasi [27]. Selain itu,

data BODIPY kami menunjukkan bahwa dengan bertambahnya panjang konjugasi [27]. Selain itu, data BODIPY kami menunjukkan bahwa astaxanthin astaxanthin secara

signifikan mencegah peroksidasi lipid. Pencegahan peroksidasi lipid karena secara signifikan mencegah peroksidasi lipid. Pencegahan peroksidasi lipid karena astaxanthin

mungkin astaxanthin dapat meningkatkan kualitas sensorik dan umur simpan ikan yang memerlukan penyelidikan lebih lanjut. Namun perlu diperhatikan bahwa konsentrasi astaxanthin, as
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 6 dari 14

meningkatkan kualitas sensorik dan umur simpan ikan yang memerlukan penyelidikan lebih lanjut. Namun, perlu
diperhatikan bahwa konsentrasi astaxanthin, seperti yang diberikan dalam pengujian kultur sel kita, mungkin lebih
tinggi daripada konsentrasi astaxanthin dalam plasma ikan [28].
Kami tidak mengamati adanya penghambatan xantin oksidase sebagai respons terhadap pengobatan astaxanthin.
Jadi, tidak seperti antioksidan lain termasuk flavonoid [29,30], astaxanthin tampaknya tidak memediasi
aktivitas antioksidan melalui penghambatan xanthine oksidase.
Untuk studi sel kami, astaxanthin dilarutkan dalam tetrahydrofuran (THF). Kami menggunakan THF karena
sebelumnya telah ditunjukkan oleh kelompok kami sebagai non-sitotoksik terhadap sel HepG2 [31]. Selanjutnya,
astaxanthin terlarut dalam THF menunjukkan stabilitas yang sesuai dalam media kultur sel [31] dan secara efektif
diambil oleh sel kultur HepG2 dan HT29 [31,32].
Data kultur sel saat ini dengan jelas menunjukkan bahwa astaxanthin sintetik tidak hanya berfungsi
sebagai pemulung radikal bebas, tetapi juga sebagai induktor mekanisme pertahanan antioksidan seluler,
termasuk PON1 dan glutathione tereduksi. PON1 adalah enzim hati yang mencegah dan/atau menunda
oksidasi LDL [33]. Dengan demikian, pencegahan peroksidasi lipid plasma pada manusia akibat astaxanthin,
seperti yang dilaporkan oleh Barlic dan rekan kerja [34], mungkin sebagian dimediasi oleh induksi paraoxonase-1.
Baru-baru ini, telah ditunjukkan bahwa PON1 juga menetralkan stres oksidatif yang diinduksi oleh merkuri klorida,
sehingga menawarkan strategi yang menguntungkan melawan toksisitas HgCl2 [35] yang mungkin menjadi
perhatian khusus untuk nutrisi ikan. Kami juga menentukan aktivitas seluler astaxanthin alami yang diisolasi dari
Haematococcus pluvialis (data tidak ditampilkan). Yang penting, astaxanthin sumber alami tidak menunjukkan
bioaktivitas yang unggul di salah satu sistem pengujian kami seperti yang juga dinyatakan oleh orang lain [36].
Dalam hal PON1, transaktivasi hanya terjadi sebagai respons terhadap astaxanthin sintetik.
Dosis astaxanthin sintetik secara dependen meningkatkan kadar GSH seluler dalam sel HepG2 yang sejalan
dengan temuan oleh Saw dan rekan kerja yang menemukan induksi GSH seluler karena asam lemak astaxanthin
dan omega-3 [13]. Menariknya, dalam penelitian kami peningkatan GSH seluler dalam sel HepG2, bagaimanapun,
tidak disertai dengan peningkatan transaktivasi Nrf2. Selanjutnya, Gclc, enzim pembatas laju sintesis GSH, tidak
diinduksi oleh astaxanthin. Selain itu, level stabil dari gen target Nrf2 lainnya, termasuk Gsta, Gpx, Hmxo, Nqo1,
Sod1, dan Sod2 tidak diinduksi sebagai respons terhadap pengobatan astaxanthin. Dengan demikian, disarankan
bahwa peningkatan GSH seluler karena astaxanthin tidak dimediasi oleh jalur transduksi sinyal yang bergantung
pada Nrf2. Perlu disebutkan bahwa sintesis GSH tidak hanya diatur oleh Nrf2, tetapi juga oleh faktor transkripsi
lainnya, termasuk aktivator protein 1 (AP-1) [37,38], spesifisitas protein 1 (Sp1) [39,40], respirasi nuklir faktor 1
(Nrf1) [41,42], dan penambah rantai cahaya faktor kappa nuklir sel B teraktivasi (NFÿB) [42,43].

Berdasarkan data saat ini, disarankan bahwa peningkatan konsentrasi GSH mungkin merupakan tanda tingkat
stres oksidatif yang lebih rendah akibat pengobatan astaxanthin.

3. Bagian Eksperimen

3.1. Radical Scavenging Diukur dengan Electron Spin Resonance Spectroscopy (ESR)

Pengukuran ESR dilakukan dengan menggunakan monitor radikal bebas JEOL JES-FR30EX (JEOL
Ltd., Akishima, Jepang). Kondisi pengukuran adalah sebagai berikut: medan magnet, 337,394 ÿ 7,5 mT; daya,
4 mW; waktu sapuan, 1 menit; lebar sapuan, 7,5; modulasi, 100 kHz, 0,32 mT; amplitudo, 400; dan konstanta
waktu, 0,3 detik. Intensitas sinyal dibandingkan berdasarkan rasio terhadap penanda magnetik Mn2+ dan
diwakili oleh rasio tinggi relatif. Spektra ESR diukur tiga kali.
Persiapan larutan stok astaxanthin. Astaxanthin (DSM, Kaiseraugst, Swiss) dilarutkan dalam 21,8%
tetrahydrofuran (THF) (Wako Chemicals, Osaka, Jepang) dan etanol 78,2% (Nacalai Tesque, Kyoto, Jepang).
Konsentrasi aktual astaxanthin ditentukan dengan mengencerkan larutan stok dengan THF menggunakan koefisien
molar astaxanthin ( 69.600 M´1 ¨ cm´1 pada 477 nm) [44]. Berdasarkan nilai ini, larutan stok astaxanthin ditentukan
sebanyak 30,56 mM. Larutan stok astaxanthin selanjutnya diencerkan dengan tert-butil alkohol/THF (89,3:10,7, v/
v).
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 7 dari 14

Eksperimen pemulungan radikal DPPH. Ke campuran reaksi yang mengandung 80 µL air suling, 20 µL
500 µM DPPH (dalam metanol; Nacalai Tesque, Kyoto, Jepang) dan 100 µL astaxanthin (0, 50, 100, 200, 300,
400, 500, 600, 800, 1000 , 1200, dan 1500 µM) ditambahkan dan diaduk selama beberapa detik. alkohol tert-
Butil (mengandung 10,7% THF) digunakan sebagai kontrol. Setelah 1 menit inkubasi spektrum ESR diukur.
Eksperimen pemulungan radikal Galvinoxyl. Ke campuran reaksi yang mengandung 80 µL air suling, 20
µL 500 µM galvinoksil (dalam metanol; Nacalai Tesque, Kyoto, Jepang) dan 100 µL astaxanthin (0, 10, 20, 50,
100, 200, 300, 400, 500 µM) ditambahkan dan diaduk selama beberapa detik. alkohol tert-Butil (mengandung
10,7% THF) digunakan sebagai kontrol. Setelah 1 menit inkubasi spektrum ESR diukur.
Eksperimen pemulungan radikal superoksida. Ke campuran reaksi 30 µL 5 mM hipoksantin
(dilarutkan dalam NaOH dan kemudian diencerkan dengan PBS (pH 7,4)), 40 µL 4 M 5,5-dimetil-1-
pirolina N-oksida (DMPO), 25 µL air ultra murni , dan 10 µL astaxanthin (0, 1, 7.5, 15 mM) ditambahkan
ke 5 µL 1 U/mL xanthine oxidase dalam larutan buffer PBS 200 mM (pH 7.4). Setelah 1 menit inkubasi
pada 25 ÿC spektrum ESR diukur. Tiga percobaan independen dilakukan dalam rangkap tiga.

3.2. Penghambatan Xanthine Oksidase

Penghambatan xantin oksidase diukur menurut Bräunlich et al. 2013 [45] dengan beberapa modifikasi.
Larutan enzim yang terdiri dari 400 µL xantin oksidase (5 U/mL) dalam 7,6 mL 50 mM penyangga kalium fosfat
(pH = 7,5) disiapkan segera sebelum digunakan. Seratus lima puluh mikroliter larutan enzim yang disiapkan
ditambahkan ke setiap sumur dari 96 sumur mikrotiterplate.
Astaxanthin (4 g/L dalam THF) diencerkan secara serial dalam sumur (faktor pengenceran 2). THF digunakan
sebagai sampel kosong. Allopurinol (500 ÿM; Sigma, Darmstadt, Jerman) berfungsi sebagai kontrol positif dan
diencerkan secara serial di dalam sumur (faktor pengenceran 2). Substrat hipoksantin (40 µg/mL; dilarutkan
dalam NaOH dan kemudian dalam air suling) disiapkan setiap hari dan 80 µL disuntikkan pada siklus 10.
Penyerapan diukur pada 290 nm (pembaca pelat mikro Tecan infinite 200Pro, Crailsheim, Jerman) selama
110 siklus («150 dtk) pada 28 ÿC. Setidaknya tiga percobaan independen dilakukan dalam rangkap tiga.

3.3. Eksperimen Pendinginan Spektra Emisi Inframerah Dekat 1O2 oleh Astaxanthin

Aktivitas pemulungan oksigen singlet dari astaxanthin ditentukan dengan penghitungan foton
menurut Shimizu et al. (2010) [46] dengan beberapa modifikasi.
Sepuluh milimolar astaxanthin disiapkan dalam THF/ethanol (20/80; v/v). Setelah menyiapkan 10 mM astaxanthin,
1 mM astaxanthin disiapkan dalam THF/etanol (10,7/89,3; v/v). Konsentrasi akhir astaxanthin dikonfirmasi dengan
mengukur larutan 2 mL etanol dan 80 µL larutan astaxanthin (1 mM) dengan spektrometer UV–Vis (Hitachi, Tokyo,
Jepang) menggunakan koefisien molar astaxanthin ( 69.600 M´1 ¨ cm´ 1 pada ÿ = 477 nm).

Pembentukan 1O2 secara langsung diukur dengan pendaran inframerah-dekat pada sekitar 1270
nm dari 1O2 yang dinonaktifkan yang sesuai dengan transisi 1O2 ( 1ÿg)–3O2 ( 3ÿg ´). Emisi dari 1O2
diukur menggunakan peralatan berdasarkan peralatan yang tersedia secara komersial dan ditingkatkan
untuk deteksi sensitivitas tinggi (Sistem NIR-PII, Hamamatsu Photonics KK, Hamamatsu, Jepang).
Pulsa eksitasi diperoleh dengan menggunakan laser pewarna (CL-EGC USHO Optical Systems Co.,
Ltd., Osaka, Jepang) yang dieksitasi oleh Laser Nd-YAG (NL 240/TH EKSPLA Lithuania). Panjang
gelombang eksitasi adalah 530 nm, lebar pulsa dan intensitas masing-masing sekitar 7 ns dan 17
mW, dan tingkat pengulangan adalah 500 Hz. Emisi 1O2 dipantau menggunakan intensifier gambar
berpagar inframerah (NIR-PII, Hamamatsu Photonics) setelah melewati polikromator (250 is, Chromex
Inc., Albuquerque, NM, USA). Pengukuran dimulai pada 1 µs setelah penerapan pulsa eksitasi dan
waktu pemaparan adalah 50 µs. Sinyal diakumulasikan dengan deteksi berulang (500 Hz, 10 detik).
Peluruhan emisi terdeteksi oleh sistem NIR-PII (Hamamatsu Photonics) setelah melewati filter
bandpass (1270 nm) dan direkam oleh skalar multichannel (NanoHarp 250, PicoQuant GmbH, Berlin,
Jerman). Waktu pengukuran ditetapkan pada 16 ns/bin untuk ca. 260 µs dan diakumulasikan selama
2 menit pada 500 Hz. Studi larutan terdiri dari 2 mL 5 µM Rose Bengal (dalam etanol) sebagai fotosensitizer.
Pendinginan peluruhan oksigen singlet diperiksa dengan menambahkan 109 µM astaxanthin sebagai berikut:
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 8 dari 14

penambahan 10 µL, 10 µL (20 µL akhir), 20 µL (40 µL akhir), 40 µL (80 µL akhir), dan 80 µL (160 µL akhir).
Kurva peluruhan dan laju reaksi astaxanthin dihitung menggunakan kurva peluruhan dan rasio pendinginan dari
percobaan rangkap.

3.4. Budaya sel

Sel karsinoma seluler hati Huh7 manusia (Institut Kultur Sel Terapan, Munich, Jerman) dibudidayakan
dalam media Eagle's Dulbecco yang dimodifikasi dengan glukosa tinggi (4,5 g/L), dengan natrium piruvat, L-
glutamin, dan 3,7 g/L NaHCO3 ditambah dengan 10% (v/v) serum janin sapi (FBS), penisilin 100 U/mL dan
streptomisin 100 µg/mL (semua PAN-Biotech, Aidenbach, Jerman) pada suhu 37 ÿC dalam pengaturan CO2
5%. Sel PON1-Huh7, sel Huh7 ditransfeksi secara stabil dengan fragmen 1009 bp [´1013, ´4] dari promotor
PON1 manusia (disediakan oleh X. Coumoul dan R. Barouki, INSERM UMR-S, Paris, Prancis [47] Sel PON1-
Huh7 dikultur dalam DMEM glukosa tinggi (4,5 g/L) (tanpa L-glutamin) ditambah dengan 10% FBS yang
dilemahkan oleh panas, glutamin 2 mmol/L, penisilin 100 U/mL, streptomisin 100 µg/mL , dan 100 µg/mL G418
sulfat (PAN-Biotech, Aidenbach, Jerman) dalam atmosfer yang dilembabkan dengan 5% CO2 pada suhu 37
ÿC. Sel karsinoma hepatoselular HepG2 Manusia (Institut Budaya Sel Terapan , Munich, Jerman) dikultur
dalam RPMI 1640 (dengan L-glutamin dan 2,0 g/L NaHCO3; PAN-Biotech, Aidenbach, Jerman) yang
mengandung 10% FBS, 100 U/mL penisilin dan 100 µg/mL streptomisin dalam inkubator (95% udara, 5%
CO2) pada suhu 37 ÿC.
Setidaknya dua percobaan independen dilakukan dalam rangkap tiga. Semua percobaan kultur sel dilakukan pada
konsentrasi astaxanthin non-sitotoksik.

3.5. Uji Viabilitas Sel Merah Netral

Sel PON1-Huh7, Huh7, dan HepG2 diunggulkan dengan kepadatan 1,5 ˆ 105 sel per sumur dalam pelat
24 sumur. Sel diperlakukan dengan 1–20 ÿM astaxanthin selama 48 (PON1-Huh7) atau 24 jam (Huh7, HepG2).
Setelah itu, media kultur diganti dengan larutan merah netral (50 µg/mL, disiapkan dalam media kultur sel ) dan
diinkubasi selama 2 jam pada suhu 37 ÿC. Sel diekstraksi dengan etanol: air: asam asetat glasial (50:49:1, v/v/v;
asam asetat glasial dibeli dari Carl Roth, Karlsruhe, Jerman) dan diinkubasi pada suhu kamar selama 15 menit dengan
pengocokan terus menerus. Absorbansi diukur pada 540 nm dalam pembaca pelat (Labsystems iEMS Reader,
Helsinki, Finlandia). Setidaknya dua percobaan independen dilakukan dalam rangkap tiga.

3.6. Aktivitas Paraoksonase

Sel PON1-Huh7 diunggulkan dengan kepadatan 0,15 ˆ 106 sel per sumur dalam pelat 24 sumur
dan diinkubasi selama 24 jam. Selanjutnya, sel diperlakukan dengan 1 dan 20 µM sintetik (DSM,
Kaiseraugst, Swiss) versus astaxanthin berbasis alga (BioAstin, Cyanotech Corporation, Kailua-Kona, HI, USA).
Curcumin (20 µM) berfungsi sebagai kontrol positif. Setelah 48 jam inkubasi, sel dicuci dengan PBS dan dilisiskan
dengan reagen lisis kultur sel (1:5, v/v; Promega, Mannheim, Jerman). Aktivitas Luciferase (Sistem Uji Luciferase;
Promega, Mannheim, Jerman) diukur dengan pembacaan pendaran (pembaca pelat mikro Tak Terbatas 200, Tecan,
Crailsheim, Jerman). Hasil dinormalisasi menjadi kandungan protein total , ditentukan dengan uji BCA (Pierce, Bonn,
Jerman) sesuai dengan instruksi pabriknya. Setidaknya dua percobaan independen dilakukan dalam rangkap tiga.

3.7. Uji Glutathione

Sel HepG2 (0,15 ˆ 106 sel/sumur) diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ÿC. Sel diperlakukan masing-masing
dengan 1 dan 5 µM astaxanthin dan diinkubasi selama 24 jam tambahan. Pengukuran glutathione dilakukan menurut
Esatbeyoglu et al. (2014) [48] dan Vandeputte et al. (1994) [49].
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 9 dari 14

3.8. Transaktivasi Nrf2

Sel Huh7 (0,15 ˆ 106 sel per sumur) diinkubasi dalam pelat 24 sumur selama 24 jam. Sel ditransfusikan secara
transien dengan pare_GIGPx_Luc menurut Wagner et al. (2010) [50]. Setelah 24 jam transfeksi, sel diinkubasi dengan 1
dan 20 µM astaxanthin selama 24 jam lebih lanjut. Curcumin (20 µM) berfungsi sebagai kontrol positif. Lisis sel dan
pengukuran transaktivasi Nrf2 dilakukan seperti yang dilaporkan sebelumnya [50]. Setidaknya dua percobaan independen
dilakukan dalam rangkap tiga.

3.9. Isolasi RNA dan qRT-PCR

Sel dipanen dengan TriFAST (VWR International GmbH, Erlangen, Jerman) dan RNA diisolasi
sesuai dengan protokol pabrikan. Konsentrasi dan kualitas RNA ditentukan menggunakan spektrofotometer
NanoDrop ND-2000 (VWR International GmbH, Erlangen, Jerman). Aliquot sampel RNA disimpan pada
suhu ´80 ÿC hingga analisis PCR. tingkat ekspresi mRNA glutathione peroksidase 1 (Gpx1), superoksida
dismutase 1, larut (Sod1), superoksida dismutase 2, mitokondria (Sod2), heme oksigenase 1 (Ho-1),
NAD(P)H dehidrogenase [kuinon] 1, ( Nqo1), glutamat-sistein ligase, subunit katalitik (Gclc), glutathione
S-transferase alpha 1 (Gsta), dan gliseraldehida-3-fosfat dehidrogenase (Gapdh) ditentukan menggunakan
primer spesifik target. Perangkat lunak Input Primer3 versi 0.4.0 digunakan untuk desain primer (//
bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/primer3/). Urutan primer digambarkan pada Tabel 2. Primer dibeli dari Eurofins
MWG (Ebersberg, Jerman). qRT-PCR dilakukan sebagai prosedur satu langkah menggunakan
SensiFAST™ SYBR No-ROX One-Step Kit (Bioline, Luckenwalde, Jerman) dengan deteksi SYBR Green
pada pengendara sepeda Rotorgene 6000 (Corbett Life Science, Sydney, Australia). Perhitungan hasil
dilakukan dengan kurva standar eksternal. Tingkat transkripsi gen target dinormalisasi oleh transkripsi
Gapdh yang berfungsi sebagai gen housekeeping dalam analisis qRT-PCR.

3.10. Peroksidasi Lipid Ditentukan oleh BODIPY Assay

C11-BODIPY (581/591) (Teknologi kehidupan, Darmstadt, Jerman) pewarna fluoresen berfungsi

sebagai sensor peroksidasi lipid. C11-BODIPY adalah analog asam lemak lipofilik yang bergabung ke
dalam biomembran dan mengubah sifat fluoresennya dari status tereduksi (ÿex = 540 nm/ÿem = 595 nm)
menjadi teroksidasi (ÿex = 480 nm/ÿem = 520 nm). Indeks oksidasi BODIPY yang disesuaikan dihitung
sebagai berikut:
Indeks yang Disesuaikan “ EmOx{pEmOx ` EmRedq (1)

Sel HepG2 (kepadatan 0,15 ˆ 106 sel per sumur dalam pelat 24 sumur dan diinkubasi selama 24
jam) diinkubasi dengan astaxanthin 10 dan 20 µM selama 24 jam. Sel diperlakukan dengan 10 ÿM C11-
BODIPY (581/591) dalam medium tanpa FBS selama 30 menit. BODIPY dihilangkan dan sel ditekankan
dengan 80 µM cumene hydroperoxide/80 nM hemin dalam PBS selama 1 jam. Setelah itu, PBS
disegarkan dan fluoresensi diukur dalam sel yang melekat.

3.11. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak SPSS versi 23.0 (SPSS Inc., Munich, Jerman).
Semua data kultur sel diuji untuk distribusi normal (Kolmogorow–Smirnow). ANOVA satu arah diterapkan.
Dalam kasus varians homogen, uji post hoc LSD dan Dunnett-T dan, dalam kasus varians heterogen, uji
post hoc Games–Howell dilakukan untuk menguji perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol
dan kelompok uji. Semua data dinyatakan sebagai rata-rata + SD atau SEM.
Signifikansi diterima pada p <0,05.
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 10 dari 14

Tabel 2. Urutan nukleotida dan suhu anil primer yang digunakan dalam analisis qRT-PCR dalam sel Huh7 yang dikultur.

Gen Gen-ID Keterangan Primer, Maju (51–31 ) Primer, Balik (51–31 ) Anil (ÿC)

Gpx1 2876 glutathione peroksidase 1 ACACCCAGATGAACGAGCTG CCGGACGTACTTGAGGGAAT 58

Barel1 6647 superoksida dismutase 1, superoksida GGGGAAGCATTAAGGACTG CAACATGCCTCTCTTCATCC 55
Sod2 6648 dismutase 2 larut, mitokondria heme GCACTAGCAGCATGTTGAGC GATCTGCGCGTTGATGTG 55
Hmox1 3162 oksigenase 1 CCA GGC AGA GAA TGC TGA GT GTA GAC AGG GGC GAA GAC TG 59
No.1 1728 NAD(P)H dehydrogenase [kuinon] 1 ligase CTG ATC GTA CTG GCT CAC TC GAA CAG ACT CGG CAG GAT AC 58
Gclc 2729 glutamat-sistein, subunit katalitik glutation S- TTT GGT CAG GGA GTT TCC AG TGA ACA GGC CAT GTC AAC TG 59
Gst 2938 transferase alfa 1 gliseraldehida-3-fosfat CGTATGTCCACCTGAGGAAA GCCAACAAGGTAGTCTTGTCC 60
Gapdh 2597 dehidrogenase CAATGACCCCTTCATTGACC GATCTCGCTCCTGGAAGATG 58
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 11 dari 14

4. Kesimpulan

Secara kolektif, data kami menunjukkan bahwa, di luar sifat pewarnaannya, astaxanthin sintetik menunjukkan pemulungan radikal
bebas, pendinginan oksigen, dan aktivitas antioksidan yang penting. Aktivitas pemulungan radikal bebas langsung dari astaxanthin
ditentukan oleh ESR dan spin trapping dan aktivitas pendinginan oksigennya dengan penghitungan foton. Aktivitas antioksidan seluler
astaxanthin diperiksa dalam berbagai bioassay (misalnya, transaktivasi PON1, kadar GSH seluler, transaktivasi Nrf2 dan ekspresi gen
targetnya, peroksidasi lipid) dalam garis sel yang dikultur. Karena kami bekerja dengan garis sel, temuan kami masing-masing tidak
dapat digeneralisasi ke sel primer dan model hewan, dan oleh karena itu harus diverifikasi dalam model in vivo yang sesuai di masa
mendatang. Selain itu, akan menarik untuk menguji apakah ada interaksi sinergis antara astaxanthin dan lipid lainnya (misalnya, vitamin
E) dan antioksidan yang larut dalam air (misalnya, asam askorbat, flavonoid) dalam hal aktivitas pemulungan radikal bebas, antioksidan
dan pengaturan gen. .

Ucapan Terima Kasih: Kami berterima kasih kepada Christoph Plieth (Pusat Biokimia dan Biologi Molekuler, Universitas
Kiel) untuk menyediakan pembaca pelat mikro (Tecan infinite 200Pro, Crailsheim, Jerman) dan untuk diskusi yang bermanfaat.
Kami juga berterima kasih kepada Vivien Schmuck atas bantuan teknis yang sangat baik.

Kontribusi Penulis: Janina Dose, Gerald Rimbach, dan Tuba Esatbeyoglu merancang studi dan menulis manuskrip.
Seiichi Matsugo, Haruka Yokokawa, dan Yutaro Koshida melakukan eksperimen spektroskopi resonansi spin elektron.
Shigetoshi Okazaki melakukan eksperimen aktivitas pendinginan oksigen singlet.
Ulrike Seidel melakukan uji BODIPY. Semua percobaan lainnya dilakukan oleh Janina Dose dan Tuba Esatbeyoglu. Semua
penulis membaca, mengedit, dan memberikan umpan balik untuk naskah akhir.
Benturan Kepentingan: Manfred Eggersdorfer adalah karyawan DSM.

Referensi

1. Ambati, RR; Phang, SM; Ravi, S.; Aswathanarayana, RG Astaxanthin: Sumber, ekstraksi, stabilitas, aktivitas biologis,
dan aplikasi komersialnya—Sebuah tinjauan. Mar. Narkoba 2014, 12, 128–152. [Referensi Silang]
[PubMed]
2. Jiao, G.; Hui, JPM; Burton, IW; Thibault, M.-H.; Pelletier, C.; Boudreau, J.; Tchoukanova, N.; Subramanian, B.; Djaoed,
Y.; Ewart, S.; et al. Karakterisasi minyak udang dari Pandalus borealis dengan kromatografi cair kinerja tinggi dan
spektrometri massa resolusi tinggi. Mar. Narkoba 2015, 13, 3849–3876. [Referensi Silang] [PubMed]

3. Higuera-Ciapara, I.; Félix-Valenzuela, L.; Goycoolea, FM Astaxanthin: Tinjauan kimia dan aplikasinya. Kritik. Pendeta Sci
Makanan. Nutr. 2006, 46, 185–196. [Referensi Silang] [PubMed]
4. Otton, R.; Marin, DP; Bolin, AP; de Cássia Santos Macedo, R.; Campoio, TR; Fineto, C.; Guerra, BA; Leite, JR; Barros,
MP; Mattei, R. Gabungan minyak ikan dan suplementasi astaxanthin memodulasi fungsi limfosit tikus. eur. J.Nutr.
2012, 51, 707–718. [Referensi Silang] [PubMed]
5. Megdal, PA; Kerajinan, NA; Handelman, GJ Metode yang disederhanakan untuk membedakan budidaya (Salmo
salar) dari salmon liar: Rasio asam lemak versus isomer kiral astaxanthin. Lipid 2009, 44, 569–576. [Referensi Silang]
[PubMed]
6. Widmer, E.; Zell, R.; Broger, EA; Crameri, Y.; Wagner, HP; Dinkel, J.; Schlageter, M.; Lukáÿc, T.
Metode teknis untuk sintesis karotenoid dan senyawa terkait dari 6-oxo-isophorone. II Konsep baru
untuk sintesis (3RS, 3´RS)-astaxanthin. Helv.Chim. Acta 1981, 64, 2436-2446. (Dalam Bahasa Inggris).
[Referensi Silang]

7. Guerin, M.; Huntley, SAYA; Olaizola, M. Haematococcus astaxanthin: Aplikasi untuk kesehatan manusia dan
nutrisi. Tren Bioteknol. 2003, 21, 210–216. [Referensi Silang]
8. Fassett, RG; Coombes, JS Astaxanthin: Agen terapi potensial pada penyakit kardiovaskular. Mar. Narkoba 2011, 9,
447–465. [Referensi Silang] [PubMed]
9. Hashimoto, H.; Arai, K.; Hayashi, S.; Okamoto, H.; Takahashi, J.; Chikuda, M.; Obara, Y. Efek astaxanthin pada
antioksidan pada aqueous humor manusia. J.Clin. Biokimia. Nutr. 2013, 53, 1–7. [Referensi Silang] [PubMed]
10. Fassett, RG; Healy, H.; Pengemudi, R.; Robertson, IK; Geraghty, DP; Sharman, JE; Coombes, JS Astaxanthin vs
plasebo pada kekakuan arteri, stres oksidatif dan pembengkakan pada pasien transplantasi ginjal (Xanthin): Uji coba
terkontrol secara acak. BMC Nefrol. 2008, 9, 17. [Referensi Silang] [PubMed]
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 12 dari 14

11. Rodrigues, E.; Mariutti, LRB; Mercadante, AZ Kapasitas pemulungan karotenoid laut terhadap spesies oksigen
dan nitrogen reaktif dalam sistem peniru membran. Mar. Narkoba 2012, 10, 1784–1798. [Referensi Silang]
[PubMed]

12. Rao, AR; Sarada, R.; Shylaja, MD; Ravishankar, GA Evaluasi aktivitas hepatoprotektif dan antioksidan astaxanthin dan ester astaxanthin dari
mikroalga-Haematococcus pluvialis. J. Ilmu Pangan. Technol.
2015, 52, 6703–6710. [Referensi Silang] [PubMed]

13. Gergaji, CLL; Yang, AY; Guo, Y.; Kong, ANT Astaxanthin dan asam lemak omega-3 secara individu dan kombinasi melindungi dari stres oksidatif
melalui jalur Nrf2-ARE. Makanan Kimia. Toksikol. 2013, 62, 869–875.
[Referensi Silang] [PubMed]

14. Kavitha, K.; Kowshik, J.; Kishore, TKK; Baba, AB; Nagini, S. Astaxanthin menghambat jalur pensinyalan
NF-ÿB dan Wnt/ÿ-catenin melalui inaktivasi Erk/MAPK dan PI3K/Akt untuk menginduksi apoptosis
intrinsik pada model hamster kanker mulut. Biochim. Biofisika. UU 2013, 1830, 4433–4444 . [Referensi Silang]
[PubMed]
15. Lee, S.-J.; Bai, S.-K.; Daun bawang.; Namkoong, S.; Dan, H.-J.; Ha, K.-S.; Han, J.-A.; Yim, S.-V.; Chang, K.; Kwon, Y.-G.; et al. Astaxanthin
menghambat produksi oksida nitrat dan ekspresi gen inflamasi dengan menekan aktivasi NF-ÿB yang bergantung pada IÿB kinase. Mol. Sel
2003, 16, 97–105. [PubMed]
16. Polotow, TG; Vardaris, CV; Mihaliuc, AR; Goncalves, MS; Pereira, B.; Ganini, D.; Suplementasi Barros, MP Astaxanthin menunda kelelahan fisik
dan mencegah ketidakseimbangan redoks dalam plasma dan otot soleus tikus Wistar. Nutrisi 2014, 6, 5819–5838. [Referensi Silang] [PubMed]

17. Regnier, P.; Bastias , J. ; Rodriguez-Ruiz, V.; Tuan-Tuan Rumah Tangga, N.; Kuda, C.; Sisilia, D.; Sumber, A.; Walikota, M.; Crepin , M. ;
Letourneur, D.; et al. Astaxanthin dari Haematococcus pluvialis mencegah stres oksidatif pada sel endotel manusia tanpa toksisitas. Merusak.
Narkoba 2015, 13, 2857–2874. [Referensi Silang] [PubMed]
18. Sueishi, Y.; Ishikawa, M.; Yoshioka, D.; Endoh, N.; Oowada, S.; Shimmei, M.; Fujii, H.; Kotake, Y. Kapasitas penyerapan radikal oksigen (ORAC)
dari flavonoid yang dilarutkan dengan siklodekstrin, resveratrol dan astaxanthin yang diukur dengan metode ORAC-EPR. J.Clin. Biokimia.
Nutr. 2012, 50, 127–132. [Referensi Silang] [PubMed]

19. Litwinienko, G.; Ingold, KU Efek pelarut abnormal pada abstraksi atom hidrogen. 1. Reaksi fenol dengan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (dpph*) dalam
alkohol. J.Org. kimia 2003, 68, 3433–3438.
[Referensi Silang] [PubMed]

20. Litwinienko, G.; Ingold, KU Efek pelarut abnormal pada abstraksi atom hidrogen. 2. Resolusi kontroversi antioksidan kurkumin. Peran transfer
elektron kehilangan proton berurutan. J.Org. kimia 2004, 69, 5888–5896. [Referensi Silang] [PubMed]

21. Litwinienko, G.; Ingold, KU Pelarut berpengaruh pada laju dan mekanisme reaksi fenol dengan bebas
radikal. Rek. kimia Res. 2007, 40, 222–230. [Referensi Silang] [PubMed]

22. Aruoma, OI Pertimbangan metodologi untuk mengkarakterisasi aksi antioksidan potensial dari bioaktif
komponen dalam makanan nabati. Mutat. Res. 2003, 523–524, 9–20. [Referensi Silang]
23. Rimbach, G.; Höhler, D.; Fischer, A.; Roy, S.; Virgili, F.; Pallauf, J.; Packer, L. Metode untuk menilai radikal bebas dan stres oksidatif dalam
sistem biologis. Lengkungan. Tierrnahr. 1999, 52, 203–222. [Referensi Silang] [PubMed]
24. Dong, S.; Huang, Y.; Zhang, R.; Wang, S.; Liu, Y. Empat metode perbandingan yang berbeda untuk ekstraksi astaxanthin dari ganggang hijau
Haematococcus pluvialis. Sains. Dunia J. 2014, 2014, 694305. [Referensi Silang] [PubMed]
25. Yuan, C.; Du, L.; Jin, Z.; Xu, X. Stabilitas penyimpanan dan aktivitas antioksidan kompleks astaxanthin dengan hidroksipropil-ÿ-siklodekstrin.
Karbohidrat. Polim. 2013, 91, 385–389. [Referensi Silang] [PubMed]
26. Zhang, J.; Matahari, Z.; Matahari, P.; Chen, T.; Chen, F. Karotenoid mikroalga: Efek menguntungkan dan potensi pada manusia
kesehatan. Fungsi Makanan. 2014, 5, 413–425. [Referensi Silang] [PubMed]

27. Paus, TBR; Pinus, VD; lakukan Nascimento, ESP; Santos, WG; Burtoloso, ACB; Skibsted, LH; Cardoso, DR
Astaxanthin diferulate sebagai antioksidan bifungsional. Radikal bebas. Res. 2015, 49, 102–111. [Referensi Silang] [PubMed]
28. Ytrestøyl, T.; Bjerkeng, B. Pemberian astaxanthin intraperitoneal dan makanan pada ikan trout pelangi (Oncorhynchus mykiss)—Penyerapan
plasma dan distribusi jaringan isomer E/Z geometris. Komp. Biokimia.
Fisik. B 2007, 147, 250–259. [Referensi Silang] [PubMed]
`
29. Mladÿenka, P.; Zatloukalová, L.; Filipsky, T.; Hrdina, R. Efek kardiovaskular flavonoid tidak disebabkan
hanya dengan aktivitas antioksidan langsung. Radikal bebas. Biol. Kedokteran 2010, 49, 963–975. [Referensi Silang] [PubMed]
30. Moini, H.; Guo, Q.; Penghambatan Packer, L. Xanthine oxidase dan xanthine dehydrogenase oleh ekstrak kulit kayu pinus maritim Prancis yang
kaya procyanidin, pycnogenol: Efek pengikatan protein. Lanjut Exp.
Dengan. Biol. 2002, 505, 141–149. [PubMed]
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 13 dari 14

31. Boesch-Saadatmandi, C.; Rimbach, G.; Jungblut, A.; Frank, J. Perbandingan tetrahydrofuran, serum anak sapi janin, dan Tween 40 untuk
pengiriman astaxanthin dan canthaxanthin ke sel HepG2. Sitoteknologi 2011, 63, 89–97. [Referensi Silang] [PubMed]

32. Briviba, K.; Bornemann, R.; Lemmer, U. Visualisasi lokalisasi astaxanthin dalam sel adenokarsinoma usus besar manusia HT29 dengan

menggabungkan resonansi confocal Raman dan mikrospektroskopi fluoresensi. Mol. Nutr.

Makanan Res. 2006, 50, 991–995. [Referensi Silang] [PubMed]

33. Schrader, C.; Rimbach, G. Penentu status paraoxonase 1: Gen, obat-obatan dan nutrisi.
Kur. Kedokteran kimia 2011, 18, 5624–5643. [Referensi Silang] [PubMed]

34. Baralic, I.; Djordjevic, B.; Dikic, N.; Kotur-Stevuljevic, J.; Spasik, S.; Jelic-Ivanovic, Z.; Radivojevic, N.; Andjelkovic, M.; Pejic, S. Pengaruh
suplementasi astaxanthin pada aktivitas paraoxonase 1 dan status stres oksidatif pada pemain sepak bola muda. Phytother. Res. 2013, 27,
1536–1542. [Referensi Silang] [PubMed]
35. Rao, AR; Sindhuja, HN; Dharmesh, SM; Sankar, KU; Sarada, R.; Ravishankar, GA Efektif menghambat kanker kulit, tirosinase, dan sifat
antioksidan oleh astaxanthin dan ester astaxanthin dari ganggang hijau Haematococcus pluvialis. J.Agri. Makanan Kimia. 2013, 61, 3842–
3851. [Referensi Silang] [PubMed]
36. Capelli, B.; Bagchi, D.; Cysewski, GR Astaxanthin sintetik secara signifikan lebih rendah daripada astaxanthin berbasis alga sebagai antioksidan
dan mungkin tidak cocok sebagai suplemen nutraceutical manusia. Nutrafoods 2014, 12, 145–152.
[Referensi Silang]

37. Morales, A.; García-Ruiz, C.; Miranda, M.; Marí, M.; Colell, A.; Ardite, E.; Fernández-Checa, JC Faktor nekrosis tumor meningkatkan glutathione

hepatoseluler melalui regulasi transkripsi rantai subunit berat sintetase ÿ-glutamylcysteine. J.Biol. kimia 1997, 272, 30371–30379. [Referensi
Silang] [PubMed]
38. Morales, A.; Miranda, M.; Sanchez-Reyes, A.; Colell, A.; Biete, A.; Fernández-Checa, JC Regulasi
transkripsi dari rantai subunit berat ÿ-glutamylcysteine synthetase dengan radiasi pengion. FEB Lett.
1998, 427, 15–20. [Referensi Silang]

39. Moffat, GJ; McLaren, AW; Wolf, aktivasi transkripsi yang dimediasi CR Sp1 dari promotor glutathione S-transferase kelas Pi manusia. J.Biol.
kimia 1996, 271, 1054–1060. [Referensi Silang] [PubMed]
40. Kamu, Q.; Zhang, X.; Huang, B.; Zhu, Y.; Chen, X. Astaxanthin menekan kerusakan oksidatif yang diinduksi MPP+ dalam sel PC12 melalui jalur
pensinyalan Sp1/NR1. Mar. Narkoba 2013, 11, 1019–1034. [Referensi Silang] [PubMed]
41. Myhrstad, MC; Husberg, C.; Murphy, P.; Nordstrom, O.; Blomhoff, R.; Moskaug, JO; Kolstø, AB
Overekspresi TCF11/Nrf1 meningkatkan level glutathione intraseluler dan dapat mentransaktivasi
promotor subunit berat ÿ-glutamylcysteine synthetase (GCS). Biochim. Biofisika. Acta 2001, 1517, 212–219.
[Referensi Silang]

42. Yang, H.; Magilnick, N.; Lee, C.; Kalmaz, D.; Ou, X.; Chan, JY; Lu, SC Nrf1 dan Nrf2 mengatur transkripsi subunit katalitik glutamat-sistein ligase
tikus secara tidak langsung melalui NF-ÿB dan AP-1. Mol. Sel. Biol. 2005, 25, 5933–5946. [Referensi Silang] [PubMed]

43. Kurozumi, R.; Kojima, S. Peningkatan glutathione intraseluler oleh NO tingkat rendah yang dimediasi oleh faktor transkripsi NF-ÿB dalam sel
RAW 264.7. Biochim. Biofisika. Acta 2005, 1744, 58–67. [Referensi Silang] [PubMed]
44. Lababpour, A.; Lee, C.-G. Pengukuran simultan klorofil dan astaxanthin dalam sel Haematococcus pluvialis dengan spektrofotometri ultraviolet-
terlihat orde pertama. J. Biosci. Bioeng. 2006, 101, 104–110. [Referensi Silang] [PubMed]

45. Bräunlich, M.; Slimestad, R.; Wangensteen, H.; Brede, C.; Malterud, KE; Barsett, H. Ekstrak, antosianin dan prosianidin dari Aronia melanocarpa
sebagai pemulung radikal dan penghambat enzim. Nutrisi 2013, 5, 663–678. [Referensi Silang] [PubMed]

46. Shimizu, T.; Nakanishi, Y.; Nakahara, M.; Wada, N.; Moro-oka, Y. Radikal pada efek struktur aktivitas antioksidan katekolamin terhadap oksigen

singlet dan spesies oksigen reaktif lainnya secara in vitro. J.Clin.

Biokimia. Nutr. 2010, 47, 181–190. [Referensi Silang] [PubMed]

47. Boesch-Saadatmandi, C.; Egert, S.; Schrader, C.; Coumuul, X.; Barouki, R.; Müller, MJ; Wolffram, S.; Rimbach, G. Pengaruh quercetin pada
studi aktivitas paraoxonase 1 pada sel kultur, tikus dan manusia.
J. Physiol. Pharmacol. 2010, 61, 99–105. [PubMed]
48. Esatbeyoglu, T.; Wagner, AE; Motafakkerazad, R.; Nakajima , Y. ; Matsugo, S.; Rimbach, G. Pemulungan radikal bebas dan aktivitas antioksidan
betanin: Studi spektroskopi spinresonansi elektron dan studi dalam sel kultur. Makanan Kimia. Toksikol. Wahyu 2014, 73, 119–126. [Referensi
Silang] [PubMed]
Machine Translated by Google

Int. J.Mol. Sains. 2016, 17, 103 14 dari 14

49. Vandeputte, C.; Guizon, I.; Genestie-Denis, I.; Vannier, B.; Lorenzon, G. Uji lempeng mikrotiter untuk kandungan
glutathione total dan glutathione disulfida dalam sel yang dikultur/terisolasi: Studi kinerja protokol miniatur baru.
Bio Sel. Toksikol. 1994, 10, 415–421. [Referensi Silang] [PubMed]
50. Wagner, AE; Ernst, saya.; Iori, R.; Desel, C.; Rimbach, G. Sulforaphane tetapi bukan askorbigen, indole-3-carbinole
dan asam askorbat mengaktifkan faktor transkripsi Nrf2 dan menginduksi fase-2 dan enzim antioksidan dalam
keratinosit manusia dalam kultur. Exp. Dermatol. 2010, 19, 137–144. [Referensi Silang] [PubMed]

© 2016 oleh penulis; pemegang lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan berdasarkan syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons
by Attribution (CC-BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).