C.

Metode Pemisahan dan Pemurnian Metabolit Sekunder Tumbuhan

Metode pemisahan dan pemurnian senyawa metabolit sekunder dari tumbuhan adalah teknik yang

telah mengalami perkembangan dalam beberapa tahun terakhir. Teknik modern ini menawarkan

kemampuan untuk menyejajarkan pengembangan dan ketersediaan banyak metode bioassay

canggih di satu sisi, dan menyediakan teknik isolasi, pemisahan, dan pemurnian yang tepat di sisi

lain. Tujuannya ketika mencari senyawa bioaktif adalah menemukan metode yang tepat yang dapat

menyaring bahan sumber untuk bioaktivitas seperti antioksidan, antibakteri, atau sitotoksisitas,

dikombinasikan dengan kesederhanaan, spesifisitas, dan kecepatan. Metode in vitro biasanya lebih

diinginkan daripada in vivo karena eksperimen hewan mahal, membutuhkan lebih banyak waktu,

dan rentan terhadap kontroversi etis. Ada beberapa faktor yang membuat tidak mungkin untuk

menemukan prosedur atau protokol akhir untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi molekul bioaktif

tertentu.Ini bisa disebabkan oleh berbagai bagian (jaringan) di sebuah pabrik, banyak yang akan

menghasilkan senyawa yang sangat berbeda, di samping struktur kimia yang beragam dan sifat

fisikokimia dari phytochemicals bioaktif. Baik pemilihan dan pengumpulan bahan tumbuhan

dianggap sebagai langkah utama untuk mengisolasi dan mencirikan phytochemical bioaktif. Langkah

selanjutnya melibatkan pengambilan informasi ethno-botani untuk membedakan molekul bioaktif

yang mungkin. Ekstrak kemudian dapat dibuat dengan berbagai pelarut untuk mengisolasi dan

memurnikan senyawa aktif yang bertanggungjawab untuk bioaktivitas.Teknik kromatografi kolom

dapat digunakan untuk isolasi dan pemurnian senyawa bioaktif. Instrumen yang dikembangkan

seperti High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) mempercepat proses pemurnian molekul

bioaktif. Berbagai jenis teknik spektroskopi seperti UV-visible, Infrared (IR), Nuclear Magnetic

Resonance (NMR), dan spektroskopi massa dapat mengidentifikasi senyawa yang telah

dimurnikan.Banyak molekul bioaktif telah diisolasi dan dimurnikan dengan menggunakan metode

Kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kolom. Metoe ini masih banyak digunakan karena

kenyamanan, ekonomi, dan ketersediaannya dalam berbagai fase stasioner. silika, alumina, selulosa,

dan poliamida paling banyak digunakan untuk memisahkan senyawa kimia tumbuhan.Bahan-bahan
tumbuhan mengandung sejumlah besar fitokimiakompleks, yang membuat pemisahan yang baik

menjadi sulit. Oleh karena itu, meningkatkan polaritas menggunakan beberapa fase seluler berguna

untuk pemisahan bernilai tinggi. Kromatografi lapis tipis selalu digunakan untuk menganalisis fraksi

senyawa dengan kromatografi kolom. Kromatografi kolom gel silika dan kromatografi lapis tipis (KLT)

telah digunakan untuk pemisahan molekul bioaktif dengan beberapa alat analisis.