Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Internasional Neuropsikofarmakologi(2021) 24(10): 832–841

doi:10.1093/ijnp/pyab049
Publikasi Akses Lanjutan 19 Juli 2021 Artikel
Riset Reguler

Artikel Riset Reguler

Orkestrasi Aktivitas Populasi Neuron Dopamin di
Area Tegmental Ventral oleh Kafein: Perbandingan
Dengan Amfetamin
Ornella Valenti, Alice Zambon, Stefan Boehm
Divisi Neurofisiologi dan Neurofarmakologi, Pusat Fisiologi dan Farmakologi, Universitas Kedokteran Wina, Wina,
Austria (Dr Valenti, Ms Zambon, dan Dr Boehm).
Korespondensi: Assoc. Prof. Ornella Valenti, Schwarzspanierstrasse 17, 1090 Wina, Austria (ornella.valenti@meduniwien.ac.at).

Abstrak
Latar belakang:Di antara psikostimulan, ligan transporter dopamin amfetamin dan kokain menunjukkan potensi adiktif tertinggi; kafein
antagonis reseptor adenosin paling banyak dikonsumsi tetapi kurang adiktif. Tindakan psikostimulan amfetamin berkorelasi dengan
kemampuannya untuk mengatur aktivitas neuron dopamin tegmental ventral dengan perubahan kontras dalam penembakan setelah
pemberian tunggal vs berulang. Apakah kafein mungkin mengganggu aktivitas neuron dopamin masih sulit dipahami.

Metode:Aktivitas populasi neuron dopamin area tegmental ventral ditentukan oleh rekaman ekstraseluler unit tunggal dan diatur dalam
kaitannya dengan perilaku tikus dalam penggerak dan percobaan preferensi tempat yang dikondisikan, masing-masing. Hasil:Dosis
tunggal kafein mengurangi aktivitas populasi seperti halnya amfetamin dan antagonis A2A adenosin selektif KW-6002, tetapi bukan
antagonis A1 DPCPX. Pemberian berulang KW-6002 atau amfetamin menyebabkan preferensi tempat obat dan
untuk tidak berubah atau bahkan meningkatkan aktivitas populasi. Injeksi berulang kafein atau
DPCPX, sebaliknya, gagal ke menyebabkan preferensi tempat terkondisi dan terus berkurang
aktivitas populasi. Setelah pemberian obat berulang, paparan ulang amfetamin atau KW-6002, tetapi tidak kafein atau DPCPX, mampu
mengurangi aktivitas populasi.
Kesimpulan:Sensitisasi perilaku terhadap amfetamin dikaitkan dengan aktivasi terus-menerus neuron dopamin area tegmental ventral
melalui hippocampus ventral. Dengan demikian, peralihan dari pengurangan aktivitas populasi neuron dopamin yang dimediasi reseptor
A2A akut menjadi penekanan yang dimediasi reseptor A1 yang bertahan lama berkorelasi dengan toleransi daripada sensitisasi sebagai
respons terhadap asupan kafein berulang.

Kata kunci:Antagonis reseptor adenosin, amfetamin, kafein, psikostimulan, neuron dopamin VTA

Perkenalan
Psikostimulan menyebabkan hyperlocomotion, gairah, kewaspadaan,
perhatian, dan anoreksia (Wood et al., 2014). Di antara perwakilan yang
beragam seperti amfetamin, kokain, metilfenidat, dan kafein, kafein
paling banyak dikonsumsi karena terkandung dalam tumbuhan dan
dicerna melalui minuman yang dibuat darinya (Heckman et al., 2010).
Selain aktivasi psikomotor,
psikostimulan memiliki sifat penguat, dan kedua efek bergantung pada
peningkatan neurotransmisi dopaminergik (Fredholm et al., 1999;Ferre,
2016). Secara mekanis, obat-obat ini berikatan dengan transporter
dopamin (DA) dan menghambat reuptake dan/atau meningkatkan
transpor balik.Iversen, 2006) atau bertindak sebagai antagonis pada
reseptor adenosin A1 dan A2A, seperti halnya kafein (Fredholm et al.,

Diterima:17 Februari 2021;Diperbaiki:30 Juni 2021;Diterima:16 Juli 2021

© Penulis 2021. Diterbitkan oleh Oxford University Press atas nama CINP.
Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons (http://creativecommons. org/lisensi/
oleh/4.0/), yang mengizinkan penggunaan kembali, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya aslinya dikutip 832
dengan benar.
 Valenti et al. |833

Pernyataan Signifikansi
Pekerjaan ini mengungkapkan bahwa dosis tunggal kafein menekan aktivitas populasi neuron dopamin di area tegmental ventral (VTA)
melalui reseptor A2A dengan cara yang mirip dengan amfetamin. Dalam paradigma preferensi tempat yang dikondisikan obat, antagonisme
reseptor amfetamin dan A2A menyebabkan preferensi tempat terkait obat, sedangkan antagonisme reseptor kafein dan A1 gagal
melakukannya. Aktivitas populasi neuron dopamin VTA berkurang setelah pemberian kafein berulang atau antagonis A1 tetapi tidak berubah
atau bahkan ditingkatkan setelah aplikasi berulang antagonis A2A dan amfetamin. Karena aktivasi persisten aktivitas neuron dopamin VTA
berkorelasi dengan sensitisasi perilaku oleh amfetamin, peralihan dari pengurangan aktivitas populasi neuron dopamin yang dimediasi
reseptor A2A menjadi penekanan yang dimediasi reseptor A1 yang bertahan lama,

1999;Ferre, 2016). Namun, reseptor ini masing-masing membentuk
heteromer dengan reseptor DA, D1 dan D2, dan dengan demikian
kafein dapat mengganggu pensinyalan dopaminergik.Fuxe et al., 2010).
Selain itu, blokade reseptor adenosin presinaptik mempengaruhi
pelepasan DA (Ferre, 2008,2010).
Sistem motif DA yang merupakan kunci untuk tindakan
psikostimulan terdiri dari 2 bagian utama: neuron DA di substantia
nigra yang diproyeksikan ke striatum dorsal terlibat dalam pemilihan
tindakan dan perilaku motorik, sedangkan neuron DA di area
tegmental ventral (VTA) diproyeksikan ke nukleus. accumbens (NAcc)
dikaitkan dengan motivasi dan penguatan pembelajaran (Volkow et al.,
2017). Meskipun pemisahan antara 2 jalur ini kurang jelas dari yang
diasumsikan semula (Bijaksana, 2009), peran mereka dalam aksi
psikostimulan tampaknya terpisah. Untuk kafein, integrasi sinyal
melalui heteromer reseptor A2A-D2 di neuron striatal dipandang
sebagai elemen kunci dalam aktivitas psikostimulan.Ferre, 2016),
sementara plastisitas dalam pola penembakan neuron VTA DA tampak
menentukan aksi amfetamin (Rahmat, 2010a).
Neuron DA dalam VTA menyala baik dalam mode continuous tonic atau
burst-like phasic mode (Rahmat dan Bunney, 1984a,1984b;Rahmat et al.,
2007). Yang terakhir dipicu oleh rangsangan yang menonjol seperti isyarat
yang menguatkan atau tidak menyenangkan. Penembakan tonik
menyebabkan pelepasan DA tingkat rendah di NAcc, mengarah ke aktivasi
preferensial reseptor D2 berafinitas tinggi, dan menentukan gairah motivasi.
Penembakan phasic, sebaliknya, menghasilkan DA ekstraseluler yang cukup
tinggi untuk merangsang reseptor D1 berafinitas rendah di NAcc, dan ini
diasumsikan mendasari pengkondisian untuk penguat positif atau negatif.
Rahmat, 2010b;Volkow et al., 2017). Pola penembakan neuron VTA DA diatur
oleh proyeksi dari daerah otak lainnya. Peralihan dari pembakaran tonik ke
phasic, misalnya, bergantung pada dorongan glutamatergik dari
pedunculopontine tegmentum. Karena ini dimediasi oleh reseptor NMDA,
pergeseran ke ledakan hanya dapat terjadi pada potensial membran yang
terdepolarisasi seperti yang ditemukan pada neuron yang aktif secara
spontan. Oleh karena itu, semakin banyak neuron menampilkan
penembakan tonik, semakin banyak yang dapat melakukan ledakan (Loji dan
Rahmat, 2006). Proporsi neuron DA dengan potensi aksi spontan dikenal
sebagai "aktivitas populasi" (Rahmat, 2000). Yang terakhir dibatasi oleh
masukan GABAergik dari pallidum ventral (VP), yang, pada gilirannya, berada
di bawah kendali hippocampus ventral (vHPC) melalui NAcc (Floresco et al.,
2003).
Injeksi akut baik amfetamin (Loji dan Rahmat, 2008) atau kokain (
Loji dan Rahmat, 2005) mengurangi aktivitas populasi neuron VTA DA,
sedangkan pemberian amfetamin berulang diikuti dengan penarikan
menyebabkan peningkatan masing-masing (Loji dan Rahmat, 2008).
Perubahan aktivitas populasi VTA ini disejajarkan dengan perubahan
perilaku alat gerak (Loji dan Rahmat, 2008). Untuk kafein, efek
penghambatan pada frekuensi potensial aksi spontan di neuron VTA
DA telah dijelaskan (Stoner et al., 1988), tetapi masih belum diketahui
apakah psikostimulan ini dapat memengaruhi aktivitas populasi
dengan cara yang mirip dengan amfetamin dan kokain.
Dengan demikian, perubahan aktivitas populasi neuron VTA DA yang
disebabkan oleh kafein dan ligan reseptor adenosin selektif diselidiki
dan dibandingkan dengan amfetamin. Hasilnya mengungkapkan
perbedaan mencolok antara antagonis adenosin dan amfetamin.
Bahan dan metode
Bahan
Isoflurane (Forane) berasal dari AbbVie (Wina, Austria); Chicago Sky
Blue dari Alfa Aesar (Karlsruhe, Jerman); dan KW-6002 (istradefylline),
DPCPX (8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine), dan CGS21680 (4-[2-[[6-
Amino-9-(N-ethylβ-D-ribofuranuronamidosyl)-9H-purin -2-il]amino]etil]
benzena-propanoat asam hidroklorida) dari Tocris (Abingdon, UK). D-
Amphetamine sulfate, kafein, chloral hydrate, dan bahan kimia curah
berasal dari Sigma-Aldrich (Wina, Austria). Amfetamin dan kafein
dilarutkan dalam larutan garam 0,9%, dan KW-6002 serta DPCPX
dilarutkan dalam dimetil sulfoksida sebagai pembawa (1:30 dalam
larutan garam).
Hewan
Sebanyak 146 tikus dewasa (2-4 bulan) C57BL/6J jantan digunakan
dalam penelitian ini. Tikus dibesarkan di fasilitas kami dan ditempatkan
pada suhu 22 ° C dan kelembaban 47% dengan siklus 12 jam terang /
gelap (lampu menyala pada jam 7 pagi) dan akses ad libitum ke
makanan dan air. Eksperimen dilakukan sesuai dengan Arahan Eropa
saat ini untuk penggunaan hewan untuk tujuan ilmiah dan dengan
peraturan Universitas Kedokteran Wina dan pedoman TIBA di bawah
lisensi eksperimen hewan yang disetujui oleh Kementerian Sains
Austria (GZ 66.009/0382-WF/ V/3b/2017).
Preferensi Tempat Terkondisi (CPP) dan Aktivitas
Lokomotor
Pelatihan CPP dilakukan sesuai dengan protokol yang ditetapkan (
Cunningham et al., 2006;Steinkellner et al., 2014) dalam peralatan
komersial yang terdiri dari 4 kotak sejajar (MED Associates; produk #
MED-OFAS-MSU) ditambah 4 sisipan (MED Associates; produk #
ENV-512); setiap sisipan terbuat dari 2 ruang dengan lantai yang dapat
dibedakan (kisi vs batang). Prosedur penugasan subjek yang tidak bias
digunakan (Cunningham et al., 2006), dan perawatan obat diberikan
secara acak: saline (0,9% NaCl; N = 14), amfetamin (1,5 mg/kg; n = 14),
kafein (5 mg/kg; n = 13), KW-6002 (1,5 mg /kg; n = 14), atau DPCPX (4
mg/kg; n = 12). Dosis amfetamin yang sama telah dilaporkan
mempengaruhi aktivitas populasi neuron VTA DA (Loji dan Rahmat,
2008); dosis kafein ini dipilih karena dikenal untuk mempromosikan
penggerak serta CPP (Fredholm dkk, 1999). DPCPX dan KW-6002
digunakan pada dosis yang telah digunakan sebelumnya
 834|Jurnal Internasional Neuropsikofarmakologi, 2021
untuk secara selektif memblokir reseptor A1 dan A2A, masing-masing
(misalnya,El Yacoubi dkk., 2000;Gołembiowska et al., 2013).
Tikus diasuh satu rumah dan terbiasa dengan penanganan dan
transportasi selama 5 hingga 7 hari; semua manipulasi terjadi selama
siklus cahaya dan dimulai pada jam 8 pagi. Eksperimen terdiri dari
prakondisi (hari 0), pengkondisian (hari 1 hingga 6), dan fase uji (hari 7).
Setiap sesi berlangsung selama 30 menit. Selama prakondisi (pre-test),
mencit dipindahkan ke salah satu kotak dan dibiarkan menjelajahi
kedua bilik. Pada hari 1, tikus disuntik dengan obat atau saline yang
telah ditentukan sebelumnya dan ditempatkan di ruang khusus isyarat
yang telah ditentukan sebelumnya; akses ke kamar tetangga dicegah
oleh penghalang. Data yang direkam pada hari 1 digunakan untuk
analisis aktivitas alat gerak yang diinduksi obat (Gambar 2A). Pada hari
ke-2, tikus menerima kendaraan obat (dimetil sulfoksida 1:30 mL dalam
saline) atau saline dan ditempatkan di ruang masing-masing lainnya.
Protokol hari 1 dan 2 diulangi pada hari 3 sampai 6. Jadi, untuk tikus
yang ditugaskan untuk pengobatan obat (amfetamin, kafein, KW-6002,
atau DPCPX), 3 suntikan obat diselingi dengan 3 suntikan kendaraan,
sedangkan kelompok kontrol menerima saline dari hari 1 hingga hari 6.
Pada hari uji (hari 7), tidak ada tikus yang menerima suntikan apa pun,
penghalang dihilangkan, dan tikus bebas obat diizinkan menjelajahi
kedua kompartemen; preferensi tempat ditentukan dengan
menghitung waktu yang dihabiskan di masing-masing 2 kamar. Semua
sesi direkam menggunakan Perangkat Lunak Monitor Aktif dari paket
perangkat lunak MED-PC IV (MedAssociates) dan dianalisis secara
luring. Jarak yang ditempuh oleh tikus ditentukan oleh pemecah sinar.
Pembedahan, Rekaman Unit Tunggal Vivo, dan
Administrasi Obat
Rekaman ekstraseluler unit tunggal dilakukan seperti yang dijelaskan
sebelumnya, dengan sedikit modifikasi (Valenti dan Rahmat, 2010).
Tikus yang ditugaskan untuk protokol percobaan obat akut
dipindahkan ke ruang rekaman dan dibius pada hari percobaan yang
sama. Tikus CPP dibius dalam waktu 30 menit dari tes CPP (hari ke 7)
dan secara acak ditugaskan ke 1 protokol yang dijelaskan di bawah ini.
Anestesi diinduksi dengan isofluran 3%, diikuti dengan hidrat kloral 8%
(400 mg/kg; ip), yang juga digunakan untuk pemeliharaan (280 mg/kg;
ip). Subjek diamankan pada perangkat stereotactic (David Kopf
Instruments), detak jantung dipantau, dan suhu inti diatur oleh
bantalan pemanas (Harvard Apparatus). Koordinat daerah otak
dihitung menggunakan Mouse Brain Atlas (Franklin dan Paxinos, 2008).
Rekaman ekstraseluler dilakukan dari VTA (dari Bregma, dalam mm P:
3; L: 0,4). Dalam beberapa percobaan, kanula ditanamkan di dalam VP
(P: 0; L: 1.6; V: 3.8) atau NAcc (A: 1.6; L: 0.7; V: 3.5).
Pipet dibuat dari kapiler kaca borosilikat (kaca filamen berdiameter
luar 1,2 mm; Harvard Apparatus) dengan penarik vertikal (PE-22,
Narashige) dan diisi dengan 2% Chicago Sky Blue dalam 0,5M NaCl
(resistensi in situ 10– 15 MΩ). Elektroda diturunkan ke wilayah yang
diinginkan menggunakan mikromanipulator (S-IVM-1000, Scientifica)
dan perlahan-lahan dimajukan sampai ditemukan sel yang menembak
secara spontan (Gambar 1A1–2). Neuron diisolasi, dan aktivitas awal
dicatat hingga 5 menit (Gambar 1A3). Setelah pemberian obat,
elektroda dimajukan lebih jauh untuk mencapai ujung jalur pertama
(dari permukaan otak; VTA: 4–5 mm). Setelah itu, perekaman
dilanjutkan untuk 5 hingga 8 trek vertikal lainnya dalam pola yang telah
ditentukan sebelumnya melintasi sumbu horizontal dan vertikal (
Gambar 1A2). Sinyal diperkuat oleh pre-amplifier headstage,
dimasukkan ke amplifier universal ELC-03XS (1000× penguatan,
bandpass 100 hingga 4000 Hz; NPI Electronics), dan didigitalkan pada
20 kHz (Power1401 A/D board; CED).
Untuk efek sistemik, agen disuntikkan ip; kami menggunakan
kendaraan dan obat-obatan yang sama seperti yang digunakan selama
pelatihan CPP. Untuk mengidentifikasi tempat kerja, obat atau
tetrodotoxin diaplikasikan pada area otak tertentu menggunakan
kanula metalik (Plastics One; 31 GA). Yang terakhir dibiarkan setidaknya
10 menit setelah infus. Rekaman dimulai 30 menit setelah pemberian
obat.
Pengaturan filter terbuka (low pass, 30 Hz; high pass, 16 kHz; filter
DPA-2F, NPI Electronics) digunakan untuk memungkinkan klasifikasi
posthoc neuron yang tepat. Di akhir percobaan, tikus dibunuh dengan
dosis anestesi yang mematikan; bintik-bintik elektroda ditandai melalui
ejeksi elektroforesis Chicago Sky Blue (Fintronics Inc., USA). Posisi
elektroda dan kanula dikonfirmasi oleh histologi post-hoc (Gambar 1B–
C).
Klasifikasi Neuron DA, Analisis Data, dan
Statistik
Neuron DA diklasifikasikan berdasarkan kriteria yang mapan (Valenti
dan Rahmat, 2010;Ungless dan Grace, 2012). Mereka menunjukkan
potensial aksi bifasik dengan bentuk gelombang lebar (>2,2 ms),
sebuah "notch" pada fase naik, dan diucapkan setelah hiperpolarisasi (
Gambar 1A3, menyisipkan). Penembakan terjadi dalam 2 modalitas:
penembakan tidak teratur atau meledak (Rahmat dan Bunney, 1984a,
1984b;Valenti dan Rahmat, 2010). Analisis dilakukan dengan fungsi
bawaan di Spike2 (versi 7.01; CED) (Forro et al., 2013). Bentuk
gelombang lonjakan disortir ke dalam kelompok unit diduga dan
ditugaskan ke neuron individu berdasarkan awan vektor dan inspeksi
manual. Tiga parameter ditentukan: (1) aktivitas populasi sebagai
jumlah neuron yang aktif secara spontan per jalur elektroda; (2) laju
tembakan rata-rata; dan (3) persentase potensial aksi yang terjadi pada
pelepasan letupan; semburan seperti itu terdiri dari peristiwa dengan
> 2 lonjakan yang dimulai dengan interval antar lonjakan <80 mdtk dan berakhir
saat interval antar lonjakan melebihi 160 mdtk.
Perbedaan statistik dinilai menggunakan GraphPad atau MATLAB dan
dianggap signifikan padaP< 0,05; untuk kejelasan, kami hanya melaporkan
variasi dibandingkan dengan garam atau kafein. Untuk semua protokol
eksperimental, hasil yang diperoleh dengan injeksi saline tidak berbeda
secara signifikan satu sama lain atau dari hasil yang diperoleh setelah injeksi
kendaraan (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda
Bonferroni). Karena tidak satu pun dari protokol eksperimental yang
memberikan obat memberikan perubahan yang signifikan dalam laju
pembakaran atau persentase ledakan yang terjadi dibandingkan dengan
saline (ANOVA 1 arah diikuti oleh uji perbandingan berganda Bonferroni).
Untuk analisis distribusi laju, kurva interpolasi dirancang dengan
menggunakan fungsi bawaan Microsoft Excel. Secara singkat, dari nilai
numerik yang diperoleh dalam rekaman kami, beberapa persamaan
polinomial dihasilkan, dan 1 baris yang sesuai yang menggambarkan
data kami dengan baik dipilih; persamaan polinomial yang dipilih
ditunjukkan dalam legenda gambar.
Semua data dilaporkan sebagai rata-rata aritmatika ± SEM; N
menunjukkan jumlah tikus, n menunjukkan jumlah neuron. Perbedaan
antara beberapa kelompok dianalisis dengan ANOVA 1 arah atau 2 arah
diikuti dengan perbandingan berganda Bonferroni.
Hasil
Dosis Tunggal Kafein Mempengaruhi Aktivitas Populasi
Neuron VTA DA dengan Blokade Reseptor Adenosin A2A
dengan Cara yang Sama Seperti Amfetamin
Efek prototipe psikostimulan adalah hyperlocomotion (Wood et al.,
2014). Oleh karena itu, obat diuji untuk respon alat gerak terlebih
dahulu. Pemberian ip 5 mg/kg kafein atau
 Valenti et al. |835

Gambar 1.Rekaman ekstraseluler unit tunggal dari neuron dopamin area tegmental ventral dan analisis histologis post-hoc. ( A ) Ilustrasi skematis rekaman unit tunggal aktivitas populasi neuron VTA DA. (1) Mikroelektroda kaca diturunkan untuk mencapai tepi atas VTA dan kemudian perlahan-lahan maju sambil memindai neuron yang aktif secara spontan; lintasan elektroda dorsal ke ventral melalui VTA disebut

lintasan (dari permukaan, −4 hingga −5mm). (2) Atas: setelah menyelesaikan lintasan pertama, pengukuran VTA dilanjutkan untuk 5 hingga 8 lintasan lainnya dalam pola yang telah ditentukan. Bawah: pola aktivitas neuron VTA DA. Kira-kira 50% dari semua neuron VTA diam (abu-abu muda) dalam kondisi dasar; ketika aktif, neuron DA menunjukkan penembakan yang tidak teratur (hitam) atau ledakan yang

meledak (hitam dikelilingi oleh lingkaran abu-abu). (3) Jejak asli dari rekaman yang representatif dengan 2 peristiwa ledakan yang ditunjukkan. Inset menunjukkan bentuk gelombang potensial aksi yang diperbesar khas dari neuron DA yang ditandai dengan takik dan after-hyperpolarisasi yang menonjol, keduanya ditunjukkan oleh panah. (B) (1) Menunjukkan potongan koronal dari otak tikus dengan posisi

elektroda perekam yang ditandai dengan Chicago Sky Blue yang disuntikkan secara iontoforetik (ditunjukkan dengan panah); (2) gambar skematik dengan bintik-bintik yang menunjukkan posisi elektroda dalam percobaan yang representatif; nilai numerik di bagian bawah menunjukkan jarak posterior bagian dari bregma dalam mm. (C) Contoh penempatan kanula untuk aplikasi obat ke dalam pallidum ventral

(1a) dan nukleus accumbens (2); untuk VP, posisi kanula juga ditampilkan pada perbesaran yang lebih tinggi (1b). Bilah skala mencerminkan 500 Inset menunjukkan bentuk gelombang potensial aksi yang diperbesar khas dari neuron DA yang ditandai dengan takik dan after-hyperpolarisasi yang menonjol, keduanya ditunjukkan oleh panah. (B) (1) Menunjukkan potongan koronal dari otak tikus dengan posisi

elektroda perekam yang ditandai dengan Chicago Sky Blue yang disuntikkan secara iontoforesis (ditunjukkan dengan panah); (2) gambar skematik dengan bintik-bintik yang menunjukkan posisi elektroda dalam percobaan yang representatif; nilai numerik di bagian bawah menunjukkan jarak posterior bagian dari bregma dalam mm. (C) Contoh penempatan kanula untuk aplikasi obat ke dalam pallidum ventral

(1a) dan nukleus accumbens (2); untuk VP, posisi kanula juga ditampilkan pada perbesaran yang lebih tinggi (1b). Bilah skala mencerminkan 500 Inset menunjukkan bentuk gelombang potensial aksi yang diperbesar khas dari neuron DA yang ditandai dengan takik dan after-hyperpolarisasi yang menonjol, keduanya ditunjukkan oleh panah. (B) (1) Menunjukkan potongan koronal dari otak tikus dengan posisi

elektroda perekam yang ditandai dengan Chicago Sky Blue yang disuntikkan secara iontoforetik (ditunjukkan dengan panah); (2) gambar skematik dengan bintik-bintik yang menunjukkan posisi elektroda dalam percobaan yang representatif; nilai numerik di bagian bawah menunjukkan jarak posterior bagian dari bregma dalam mm. (C) Contoh penempatan kanula untuk aplikasi obat ke dalam pallidum ventral

(1a) dan nukleus accumbens (2); untuk VP, posisi kanula juga ditampilkan pada perbesaran yang lebih tinggi (1b). Bilah skala mencerminkan 500 (B) (1) Menunjukkan potongan koronal dari otak tikus dengan posisi elektroda perekam yang ditandai dengan Chicago Sky Blue yang disuntikkan secara iontoforetik (ditunjukkan dengan panah); (2) gambar skematik dengan bintik-bintik yang menunjukkan posisi

elektroda dalam percobaan yang representatif; nilai numerik di bagian bawah menunjukkan jarak posterior bagian dari bregma dalam mm. (C) Contoh penempatan kanula untuk aplikasi obat ke dalam pallidum ventral (1a) dan nukleus accumbens (2); untuk VP, posisi kanula juga ditampilkan pada perbesaran yang lebih tinggi (1b). Bilah skala mencerminkan 500 (B) (1) Menunjukkan potongan koronal dari otak

tikus dengan posisi elektroda perekam yang ditandai dengan Chicago Sky Blue yang disuntikkan secara iontoforesis (ditunjukkan dengan panah); (2) gambar skematik dengan bintik-bintik yang menunjukkan posisi elektroda dalam percobaan yang representatif; nilai numerik di bagian bawah menunjukkan jarak posterior bagian dari bregma dalam mm. (C) Contoh penempatan kanula untuk aplikasi obat ke dalam pallidum ventral (1a) dan nukleus accumbens

1,5 mg/kg antagonis reseptor A2A KW-6002 meningkatkan jarak yang tidak dengan 4 mg/kg DPCPX (Gambar 2A; ANOVA 1 arah diikuti oleh
ditempuh tikus dengan faktor 2 dibandingkan dengan salin. Efek Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F =7,69;
(4,44)
P< 0,0001).
serupa diamati dengan amfetamin 1,5 mg/kg, tetapi
 836|Jurnal Internasional Neuropsikofarmakologi, 2021

Efek alat gerak amfetamin telah berkorelasi dengan perubahan
aktivitas populasi neuron VTA DA (Rahmat, 2010b). Untuk
mengeksplorasi apakah tindakan ligan reseptor adenosin pada
penggerak mungkin terkait dengan perubahan aktivitas neuron
tersebut, kami melakukan rekaman unit tunggal in vivo (Gambar 1A–B).
Di bawah kondisi kontrol, rata-rata 1,1 ± 0,08 neuron VTA DA yang aktif
secara spontan ditemukan per jalur elektroda; neuron menunjukkan
laju pembakaran rata-rata 3,9 ± 0,7 Hz dengan 32,5 ± 5,3% potensial
aksi terjadi dalam semburan (n=39, N=5). Amfetamin menurunkan
aktivitas populasi (Gambar 2B), seperti yang diberitakan sebelumnya (
Loji dan Rahmat, 2008), dan efek setara terlihat dengan kafein dan
KW-6002. Untuk 3 agen ini, nilai aktivitas populasi tidak berbeda satu
sama lain. Sebaliknya, nilai aktivitas populasi adalah sama untuk salin,
antagonis reseptor A1 DPCPX, dan agonis A2A CGS21680 (Gambar 2B;
ANOVA 1 arah diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F
=20,56;P< 0,0001). Tak satu pun dari obat ini memengaruhi laju
pembakaran rata-rata(5,32)
(Gambar 2C; ANOVA 1 arah diikuti oleh Uji
Perbandingan Berganda Bonferroni,P= 0,2652) atau persentase neuron
yang ditembakkan dalam semburan (data tidak ditampilkan; ANOVA 1
arah diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda Bonferroni, P= 0,5218),
tetapi amfetamin mengubah distribusi laju pembakaran (Gambar 2D1)
seperti yang dijelaskan sebelumnya (Loji dan Rahmat, 2008); efek ini
tidak dimiliki oleh antagonis adenosin mana pun (Gambar 2D2–D3) baik
oleh agonis A2A CGS21680 (data tidak ditampilkan). Hasil ini
menunjukkan bahwa kafein mampu mengatur aktivitas populasi
neuron VTA DA melalui reseptor A2A dengan cara yang mirip, tetapi
tidak identik dengan amfetamin.
Mengingat bahwa tidak ada perawatan obat yang menghasilkan
perubahan signifikan dalam laju pembakaran dan aktivitas ledakan,
data ini telah dihilangkan dari bagian berikut.
Kafein dan Amfetamin Mengeksploitasi Sirkuit Neuronal
yang Berbeda untuk Mengontrol Neuron VTA DA
Sirkuit otak yang terlibat dalam efek amfetamin pada aktivitas neuron
VTA DA meliputi NAcc dan VP (Rahmat, 2010b), dan heteromer reseptor
A2A-D2 dari neuron striato-pallidal memediasi aksi psikostimulan
kafein (Ferre, 2016). Oleh karena itu, partisipasi VP dalam pengaturan
aktivitas populasi neuron DA diselidiki dengan inaktivasinya melalui
infus tetrodotoxin. Setelah itu, injeksi ip kafein atau KW-6002 gagal
mempengaruhi aktivitas populasi (Gambar 3A1). Amfetamin,
sebaliknya, terus menekan aktivitas neuron DA (Gambar 3A1; ANOVA 1
arah diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F =11,06;P
<.0001) dan untuk mengubah distribusi frekuensi penembakan (
Gambar 3A2). Oleh karena itu, tindakan amfetamin ini sama apakah VP
(4,27)
telah dinonaktifkan atau tidak.
Dari hasil ini, dapat disimpulkan bahwa kafein bekerja pada VP
untuk mengontrol neuron VTA DA. Untuk memastikan hal ini, obat-
obatan diterapkan langsung ke VP melalui infus kanula. Melalui jalur
ini, kafein dan KW-6002 menurunkan aktivitas populasi, sedangkan
amfetamin gagal melakukannya (Gambar 3B; ANOVA 1 arah diikuti oleh
P< 0,0001). Dengan
Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F =21,97;(4,25)
demikian, tanggapan terhadap kafein dan KW-6002 serupa setelah ip

Gambar 2.Efek pemberian akut kafein dan ligan reseptor adenosin selektif pada pergerakan dan aktivitas populasi neuron dopamin: perbandingan dengan amfetamin. (A) Aktivitas alat
gerak (jarak yang ditempuh dalam cm) sebagai respons terhadap pemberian amfetamin secara sistemik (AMPH; 1,5 mg/kg; N = 10), kafein (CAFF; 5 mg/kg; N = 9), KW-6002 (KW ; 1,5 mg/kg;
N = 10), DPCPX (4 mg/kg; N = 11), atau saline (SAL; N = 9). *P< .05, **P< .01, dan ***P< .001 vs garam. †P< .05 vs kafein (garis putus-putus) (ANOVA 1 arah mengikuti uji Perbandingan
Berganda Bonferroni; F = 7,69;P< .0001). (B) Aktivitas populasi neuron DA (neuron/jalur)
(4,44)
sebagai respons terhadap pemberian amfetamin secara sistemik (n = 27, N = 6), kafein (n = 28, N =
7), KW-6002 (n = 27, N = 7), DPCPX (n = 45, N = 7), CGS-21680 (CGS; 0.1mg/kg; n = 54, N = 6), dan saline (n = 39, N = 5), masing-masing. *****P< .0001 vs garam; ††††P< .001 vs kafein (garis
putus-putus) (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F = 20,56;P < 0,0001). (C) Tingkat pembakaran rata-rata (rata-rata FR) neuron DA sebagai respons
(5,32)

terhadap pemberian obat sistemik seperti pada B;P= .265 (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Bonferroni;P= .2652). ( D ) Distribusi laju pembakaran sebagai respons
terhadap pemberian akut amfetamin (1), kafein (2), dan KW-6002 (3), masing-masing. Sebagai perbandingan, distribusi laju pembakaran setelah injeksi saline dimasukkan dalam masing-
masing grafik ini. Persamaan polinomial, A-SAL: y = −0,0245x4+ 0,7607x3− 8,0082x2+ 29,262x - 1,0606; A-AMPH: y = −0,0084x6+ 0,3334x5− 5,097x4+ 37.217x3− 128,93x2+ 170,8x − 2E-08; A-CAFF:
y = −0,0142x4+ 0,5215x3− 6,4053x2+ 26,263x + 0,8312; A-KW: y = −0,0455x4+ 1,3131x3− 12,53x2+ 40,167x - 0,5974.
 Valenti et al. |837

Gambar 3.Peran nukleus accumbens dan ventral pallidum dalam efek akut kafein, ligan reseptor adenosin selektif, dan amfetamin pada aktivitas populasi neuron DA. (A) (1) Aktivitas
populasi neuron DA (neuron/jalur) sebagai respons terhadap pemberian amfetamin secara sistemik (AMPH; n = 19, N = 7), kafein (CAFF; n = 44, N = 6), KW-6002 (KW; n = 36, N = 5), DPCPX (n
= 49, N = 6), dan saline (SAL; n = 54, N = 6). Eksperimen dilakukan setelah inaktivasi VP dengan injeksi tetrodotoxin (TTX) (1μM). ***P< .001 vs garam; ††P< .01 vs kafein (garis putus-putus)
(ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F = 11,06;P< (4,27)

. 0001). (2) Distribusi laju pembakaran sebagai respons terhadap pemberian amfetamin atau garam secara sistemik (seperti pada A1) setelah inaktivasi VP oleh TTX. Persamaan polinomial,
A-SAL: y = −0,0023x5+ 0,0395x4+ 0,2336x3− 7.0686x2+ 31,375x - 0,1924; A-AMPH: y = −0,0032x6+ 0,1494x5− 2,6782x4+ 22,932x3− 93.648x2+ 147,06x − 3E-08. ( B ) Aktivitas populasi neuron DA
(neuron / jalur) sebagai respons terhadap infus kanula intrapallidal amfetamin (cn-AMPH; 10μM; n = 41, N = 5), kafein (cn-CAFF; 100μM; n = 25, N = 6), KW-6002 (cn-KW; 10μM; n = 26, N = 7),
DPCPX (cn- DPCPX; 1μM; n = 47, N = 6), dan saline (cn-SAL; n = 54, N = 6), masing-masing. ***P< .001 vs garam; †††P<
. 001 vs kafein (garis putus-putus) (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Tukey; F = 21,97;
(4,25)
P< .0001). (C) (1) Aktivitas populasi neuron DA (neuron/jalur) sebagai respons
terhadap infus kanula amfetamin (cn-AMPH; 10μM; n = 27, N = 6), kafein (cn-CAFF; 100μM; n = 43, N = 5), KW-6002 (cn-KW; 10μM; n = 51, N = 5), atau saline (cn-SAL; n = 39, N = 5) ke dalam
NAcc. **P< .01 vs garam; ††P< .01 vs kafein (garis putus-putus); (ANOVA 1 arah diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F = 13,23; P< .0001). (2) Distribusi laju pembakaran
(3,17)

sebagai respons terhadap infus kanula amfetamin atau saline ke dalam NAcc seperti pada C1. Persamaan polinomial, cn-SAL: y = y = −0,0009x6
+ 0,0417x5− 0,7813x4+ 7,1528x3− 32.278x2+ 59,889x − 4E-08; cn-AMPH: y = 0,0085x5− 0,2743x4+ 3,266x3− 17.661x2+ 39,913x - 0,1082.

dan administrasi intrapallidal. Karena amfetamin gagal memengaruhi
aktivitas VTA ketika diterapkan pada VP, psikostimulan dimasukkan ke
dalam NAcc estafet hulu yang diduga. Dengan demikian, amfetamin
mengurangi aktivitas populasi neuron VTA DA (Gambar 3C1; ANOVA 1
arah diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F =13,23;P
<.0001) tetapi tidak mengganggu
(3,17)
distribusi frekuensi tembakan (
Gambar 3C2). Sebaliknya, infus kafein atau KW-6002 ke dalam NAcc
gagal mempengaruhi aktivitas populasi (Gambar 3C1). Oleh karena itu,
kafein dan amfetamin menggunakan sirkuit berbeda untuk
mengontrol neuron VTA DA.
Paparan Kafein Berulang Mengungkap Efek Mediasi
Reseptor A1 pada Aktivitas Neuron VTA DA Yang
Berbeda Dari Amfetamin
Sirkuit NAcc-VP-VTA adalah bagian dari jaringan hadiah otak (Sesak dan
Grace, 2010). Oleh karena itu, ligan reseptor adenosin dibandingkan
dengan amfetamin sehubungan dengan sifat menguntungkan
menggunakan paradigma CPP, dan aktivitas populasi neuron VTA DA
dikuantifikasi dalam set tikus yang sama 30 menit setelahnya. Selama
pre-test, tidak ada perbedaan yang ditemukan di dalam dan di antara
perawatan obat yang ditugaskan (Gambar 4A1; ANOVA 2 arah
dilanjutkan dengan Uji Perbandingan Berganda Bonferroni;P= 0,3804).
Paparan berulang terhadap amfetamin dan KW-6002, tetapi bukan
kafein atau DPCPX, menyebabkan preferensi tempat terkait obat
seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan waktu yang dihabiskan di
ruang pasangan obat (Gambar 4A2; ANOVA 2 arah diikuti oleh Uji
Perbandingan Berganda Bonferroni; perlakuan:P< .0001, interaksi:P=
0,0303). Rekaman VTA selanjutnya mengungkapkan bahwa aplikasi
amfetamin berulang menyebabkan peningkatan aktivitas populasi
dibandingkan dengan hasil pada tikus yang disuntik dengan saline
sebagai gantinya (Gambar 4B1; ANOVA 1 arah diikuti oleh Uji
Perbandingan Berganda Bonferroni,P< 0,0001). Namun, paparan
berulang amfetamin tidak menghasilkan pergeseran distribusi
frekuensi pembakaran (Gambar 4B2) seperti yang diamati setelah
aplikasi obat tunggal (Gambar 2D1). Pada tikus yang berulang kali
terpapar KW-6002, aktivitas populasi tidak berbeda dengan kelompok
salin; sebaliknya, setelah pemberian berulang kafein atau DPCPX,
aktivitas populasi berkurang secara signifikan dibandingkan dengan
hasil yang diperoleh setelah injeksi saline (Gambar 4B1; ANOVA 1 arah
diikuti oleh Uji Perbandingan Berganda
(4,21)
Bonferroni; F = 30,78P< 0,0001).
Dengan demikian, setelah paparan dan penarikan obat berulang,
amfetamin dan kafein menimbulkan tanggapan yang berlawanan dan
yang terakhir tampaknya terkait dengan antagonisme reseptor A1.
 838|Jurnal Internasional Neuropsikofarmakologi, 2021

Gambar 4.Efek administrasi berulang kafein dan antagonis reseptor adenosin selektif dalam preferensi tempat terkondisi (CPP) dan aktivitas populasi neuron dopamin: perbandingan
dengan amfetamin. (A) Setelah 3 periode pengkondisian di ruang pasangan obat atau kendaraan (kendaraan), waktu yang dihabiskan di salah satu dari 2 periode ini selama periode uji 30
menit dinilai baik selama pra-tes (hari = 0; 1 ) dan uji CPP (hari ke-7; 2); hasilnya ditampilkan sebagai total waktu dalam menit yang dihabiskan di setiap ruang. Pengkondisian obat dilakukan
dengan injeksi ip (1) amfetamin (AMPH; 1,5 mg/kg; N = 14), (2) kafein (CAFF; 5 mg/kg; N = 13), (3) KW-6002 ( KW; 1,5 mg/kg; N = 14), dan (4) DPCPX (4mg/kg; N = 12), masing-masing. *P< .01
dan **P< .001 vs ruang kendaraan, masing-masing (ANOVA 2 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Bonferroni;P< .0001). (B) (1) Setelah pengujian untuk preferensi tempat,
aktivitas populasi neuron (neuron/jalur) DA dinilai pada hewan bebas obat yang sebelumnya dikondisikan dengan amfetamin (CPP-AMPH; n = 63, N = 6), kafein (CPP- CAFF; n = 21, N = 5),
KW-6002 (CPP-KW; n = 38, N = 5), DPCPX (CPP-DPCPX; n = 16, N = 5), dan saline (CPP-SAL; n = 36; N = 5), masing-masing. **P< .01 dan ***P< .001 vs garam, masing-masing; ††P< .01 dan ††††
P< .0001 vs kafein (garis putus-putus) (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji Perbandingan Berganda Bonferroni; F = 30,78;P< .0001). (2) Distribusi laju pembakaran setelah pengkondisian
dengan saline (CPP-SAL) atau amfetamin (CPP-AMPH);
(4,21)
persamaan polinomial, CPP-SAL: y = 0,0068x5− 0,2664x4+ 3,8332x3− 24.097x2+ 56,541x - 0,1798; CPP-AMPH: y = −0.009x4+ 0,3623x3−
4,6792x2+ 20,422x − 1,1885. ( C ) Aktivitas populasi neuron DA (neuron / jalur) sebagai respons terhadap tantangan tambahan obat (paparan ulang obat) pada tikus yang dilatih di bawah
protokol CPP. Tikus yang dibius menerima suntikan amfetamin ip (CPP+A-AMPH; n = 13, N = 6), kafein (CPP+A-CAFF; n = 52, N = 6), KW-6002 (CPP+A-KW; n = 24, N = 6), DPCPX (CPP+A-DPCPX;
n = 47, N = 5), dan salin (CPP+A-SAL; n = 38; N = 5). **P< .01 dan ***P< .001 vs garam, masing-masing; †††P< .001 vs kafein (garis putus-putus) (ANOVA 1 arah diikuti dengan uji
Perbandingan Berganda Bonferroni; F = 33,56;P< .0001).
(4,23)

Perubahan terus-menerus seperti itu setelah suntikan obat
berulang menimbulkan pertanyaan apakah respons terhadap paparan
ulang obat dapat diubah juga. Untuk memperjelas hal ini, tikus dilatih
sesuai dengan protokol CPP dan menerima dosis tambahan obat yang
sama sebelum rekaman VTA berikutnya. Dalam percobaan ini,
amfetamin dan KW-6002 mengurangi jumlah neuron yang aktif secara
spontan dibandingkan dengan saline. Setelah paparan ulang terhadap
kafein, sebaliknya, nilai aktivitas populasi tidak berbeda dari setelah
aplikasi saline, dan hasil yang setara diperoleh dengan DPCPX
antagonis A1 (Gambar 4C; ANOVA 1 arah diikuti oleh Uji Perbandingan
Berganda Bonferroni; F =33,56;P< 0,0001). Dengan demikian, paparan
kafein berulang kali mencegah efek selanjutnya dari antagonisme
(4,23)
reseptor adenosin A1.
Diskusi
Semua psikostimulan tampaknya membajak sistem DA untuk
memperoleh motivasi, penguatan, dan aktivasi perilaku (Schultz dan
Dickinson, 2000;Bijak, 2004;Nestler, 2005;Koob dan Volkow, 2010;Sesak
dan Grace, 2010). Bagi mereka yang bertindak melalui
transporter DA, telah ditunjukkan bahwa tindakan perilaku, seperti
hyperlocomotion, disejajarkan dengan perubahan aktivitas populasi
neuron VTA DA (Rahmat, 2000; Rahmat et al., 2007). Studi ini
menegaskan hasil ini untuk amfetamin dan mengungkapkan korelasi
serupa untuk kafein. Namun demikian, data kami mengungkap
perbedaan mencolok antara amfetamin dan kafein sehubungan
dengan tempat kerja obat.
Antagonisme Reseptor Kafein dan A2A Mengatur
Aktivitas Populasi Neuron VTA DA Melalui Tindakan
pada VP
Pemberian kafein sistemik akut meningkatkan daya gerak dan
mengurangi aktivitas populasi neuron VTA DA sampai pada tingkat
yang mirip dengan amfetamin. Efek ini kemungkinan besar dimediasi
oleh reseptor A2A, karena ditiru oleh KW-6002, tetapi tidak dengan
DPCPX. Diketahui bahwa kafein memberikan efek bifasik pada
pergerakan dengan peningkatan pada rendah hingga sedang (3–20
mg/kg) dan penghambatan pada dosis yang lebih tinggi (>30mg/kg).
Hyperlocomotion yang dipicu oleh <20 mg/kg kafein hilang dalam A2A

tikus knockout dan juga terlihat dengan antagonis reseptor A1/A2A
lainnya, sedangkan aksi penghambatannya ditiru oleh DPCPX (Griebel
et al., 1991;El Yacoubi dkk., 2000;Lindskog et al., 2002). Oleh karena itu,
hasil kami mengenai penggerak yang ditimbulkan oleh kafein atau
KW-6002 sepenuhnya sesuai dengan data sebelumnya. Dosis yang
sama dari antagonis adenosin ini mengurangi aktivitas populasi
neuron VTA DA tanpa perubahan frekuensi pembakaran rata-rata dan
pola ledakan ledakan. Dalam hal ini, tindakan kafein setara dengan
tindakan amfetamin. Namun demikian, ada 1 perbedaan yang jelas
karena distribusi frekuensi tembakan diubah oleh amfetamin, seperti
yang dilaporkan sebelumnya (Loji dan Rahmat, 2008), tetapi tidak
dengan kafein atau KW-6002. Ini adalah tanda pertama dari
mekanisme berbeda yang terlibat dalam modulasi aktivitas neuron VTA
DA oleh antagonisme reseptor adenosin A2A atau pembalikan reuptake
DA.
VP adalah bagian dari sirkuit otak yang mengatur aktivitas populasi
neuron VTA DA (Belujon dan Grace, 2017;Rahmat dan Gomes, 2019),
dan stimulasi perilaku oleh kafein melibatkan reseptor A2A yang
diekspresikan oleh neuron striato-pallidal (Ferre, 2016). Dalam
persetujuan dengan konsep ini, (1) inaktivasi VP menghapuskan
tindakan penghambatan kafein dan KW-6002 pada aktivitas populasi
VTA, dan (2) infus antagonis A2A ini langsung ke VP menimbulkan efek
yang setara dengan pemberian sistemik. Namun, efek amfetamin tidak
diubah oleh inaktivasi VP, dan infus amfetamin ke dalam VP tidak
mempengaruhi aktivitas populasi neuron VTA DA. Namun, infus
amfetamin ke dalam NAcc memang mengurangi aktivitas populasi.
Oleh karena itu, tindakan analog amfetamin dan kafein pada neuron
VTA DA terpisah satu sama lain pada tingkat VP. Ekspresi reseptor A2A
telah terdeteksi di neuropil VP dan terlokalisasi ke terminal saraf
GABAergik (Svenningsson et al., 1997;Rosin et al., 1998). Selanjutnya,
reseptor A2A ini diaktifkan oleh adenosin endogen, dan
perpindahannya oleh antagonis menyebabkan pengurangan pelepasan
GABA (Floran et al., 2005). Dengan demikian, kafein dapat diharapkan
untuk mengganggu dorongan penghambatan yang dikenakan oleh
neuron berduri medium NAcc pada neuron VP GABAergik, dan
disinhibisi berikutnya menghasilkan penurunan aktivitas populasi
neuron VTA DA. Untuk amfetamin, sebaliknya, proyeksi langsung dari
neuron NAcc ke VTA DA tampaknya relevan. Data mengenai perilaku
yang diinduksi kokain menawarkan penjelasan masing-masing:
penghambat reuptake DA ini dilaporkan memberikan efek pada
penggerak melalui proyeksi langsung neuron GABAergik NAcc ke
neuron VTA DA (Edwards et al., 2017).
Setelah Pemberian Kafein Berulang, Aktivitas Neuron
VTA DA Tertekan dan Efek Tambahan Antagonisme
Reseptor A1 Hilang
Pada tikus, pemberian amfetamin secara sistemik dengan dosis 1
sampai 2 mg/kg dapat menyebabkan CPP.Geuzaine et al., 2014;
Sukhanov et al., 2016;Wang et al., 2018). Kafein pada 5 mg/kg,
sebaliknya, gagal melakukannya (Muniz et al., 2017). Hasil yang setara
diperoleh dalam percobaan CPP ini. Selain itu, CPP diperoleh dengan
antagonis A2A KW-6002, tetapi tidak dengan antagonis A1 DPCPX, dan
ini sejalan dengan data sebelumnya tentang DPCPX dan antagonis A2A
selektif selain KW-6002 (Hsu et al., 2009).
Setelah percobaan CPP, tikus yang telah disuntik dengan
amfetamin menunjukkan peningkatan aktivitas populasi neuron VTA
DA, sedangkan tikus yang terpapar kafein telah mengurangi aktivitas
populasi. Hasil terakhir ditiru oleh DPCPX tetapi bukan KW-6002. Hasil
kami mengenai amfetamin sejalan dengan hasil sebelumnya yang
menunjukkan bahwa paparan kronis terhadap amfetamin diikuti
dengan penarikan menimbulkan perilaku.
Valenti et al. |839
sensitisasi dan peningkatan aktivitas populasi neuron DA (Loji dan
Rahmat, 2008). Untuk kafein, pemberian berulang menyebabkan
peralihan dari pembatasan aktivitas populasi neuron VTA DA melalui
reseptor A2A yang paling mungkin, seperti yang diamati setelah
aplikasi dosis tunggal, ke depresi berkelanjutan yang dimediasi oleh
reseptor A1 daripada reseptor A2A. Dalam percobaan perilaku, asupan
kafein kronis mengurangi aktivitas alat gerak tikus dan melemahkan
efek penghambatan aktivasi reseptor adenosin di atasnya (NikodijeviC
et al., 1993). Mungkin, efek penghambatan terus menerus pada
aktivitas populasi neuron VTA DA dan perilaku alat gerak setelah
paparan kafein berulang dapat dikaitkan dengan perubahan
konsentrasi adenosin plasma (Conlay et al., 1997) dan/atau
overekspresi A1, tetapi bukan A2A, reseptor adenosin di striatum
seperti yang diamati pada penelitian sebelumnya (Shi et al., 1994;Karcz-
Kubicha et al., 2003). Dalam konteks ini, harus disebutkan bahwa aksi
amfetamin pada neuron NAcc mungkin melibatkan aktivasi reseptor A1
presinaptik oleh adenosin yang berasal dari astrosit (Corkrum et al.,
2020).
Dalam model hewan depresi, seperti stres ringan kronis atau
ketidakberdayaan yang dipelajari, aktivitas populasi neuron VTA DA
telah ditemukan berkurang dan ditingkatkan sebagai respons terhadap
obat antidepresan seperti ketamin.Moore et al., 2001; Belujon dan
Grace, 2014). Oleh karena itu, berkurangnya aktivitas yang diamati
setelah pemberian kafein berulang dapat dilihat sebagai berkorelasi
dengan suasana hati yang tertekan, salah satu gejala penarikan kafein
pada manusia (Juliano dan Griffiths, 2004).
Ketika tikus kembali terpapar obat yang sama seperti yang
digunakan selama percobaan CPP, amfetamin dan KW-6002 mampu
mengurangi aktivitas populasi neuron VTA DA dibandingkan dengan
saline, tetapi kafein dan DPCPX gagal melakukannya. Hasil terakhir
sejalan dengan temuan yang menunjukkan bahwa pengobatan kafein
kronis mencegah modulasi selanjutnya dari pelepasan DA di NAcc oleh
A1, tetapi bukan antagonis A2A (Quarta et al., 2004), dan mengarah ke
toleransi terhadap efek perilaku dari A1, tetapi bukan pemblokir A2A (
Karcz-Kubicha et al., 2003). Selain itu, paparan kokain kronis telah
ditemukan melemahkan penghambatan pelepasan glutamat oleh
adenosin endogen yang bekerja pada reseptor A1 presinaptik.Manzoni
et al., 1998). Kurangnya efek antagonisme reseptor A1 setelah
habituasi terhadap kafein dapat dilihat sebagai korelasi toleransi kafein
pada manusia.Juliano dan Griffiths, 2004).
Reaplikasi amfetamin dan KW-6002 setelah sebelumnya paparan
berulang untuk obat yang sama, sebaliknya, menghasilkan penurunan
nilai aktivitas populasi neuron VTA DA. Oleh karena itu, tidak ada bukti
untuk pengembangan toleransi terhadap agen ini. Dengan demikian,
mengenai orkestrasi aktivitas populasi neuron VTA DA, transisi dari
paparan kafein akut tunggal ke pengulangan disertai dengan peralihan
dari antagonisme A2A ke A1 sebagai mekanisme yang tampaknya
mendominasi. Mungkin, peralihan ini mendasar sehubungan dengan
perbedaan masing-masing dalam aksi psikostimulan kronis dari kafein
dan amfetamin.
Secara bersama-sama, efek perilaku kafein dan amfetamin serta
tindakan pada neuron VTA DA sebanding setelah pemberian dosis
tunggal tetapi berbeda setelah paparan obat berulang, karena
kepekaan sistem DA terlihat dengan amfetamin, tetapi tidak dengan
kafein.
Terima kasih
Penulis berterima kasih kepada Dr Daniela D. Pollak untuk diskusi tentang
prosedur CPP. Kami berterima kasih kepada Gabriele Gaupmann, Christian
Schubert, dan Jarmila Uhrinova atas bantuan teknis yang sangat baik. Kami juga
 840|Jurnal Internasional Neuropsikofarmakologi, 2021
terima kasih Sandra Bolzer dan Orsolya Horvath atas bantuannya dalam
merawat hewan.
SB menerima dukungan dari proyek klaster antar universitas “Perancah
baru untuk obat antiepilepsi yang lebih baik” yang dibiayai oleh
Universitas Wina dan Universitas Kedokteran Wina.
Pernyataan Minat
Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan keuangan yang bersaing sehubungan
dengan karya ini.
Referensi
Belujon P, Grace AA (2014) Mengembalikan keseimbangan mood pada depresi
sion: ketamin membalikkan defisit dalam plastisitas sinaptik yang
bergantung pada dopamin. Biol Psikiatri 76:927–936.
Belujon P, Grace AA (2017) Disregulasi sistem dopamin pada
gangguan depresi mayor. Int J Neuropsikofarmakol 20:1036–1046.
Conlay LA, Conant JA, deBros F, Wurtman R (1997) Perubahan kafein
kadar adenosin plasma. Alam 389:136.
Corkrum M, Covelo A, Baris J, Bellocchio L, Pisansky M, Loke K,
Quintana R, Rothwell PE, Lujan R, Marsicano G, Martin ED, Thomas
MJ, Kofuji P, Araque A (2020) Regulasi sinaptik yang ditimbulkan
dopamin dalam nukleus accumbens membutuhkan aktivitas
astrosit. Neuron 105:1036–1047.e5.
Cunningham CL, Gremel CM, Groblewski PA (2006) Diinduksi obat
preferensi tempat terkondisi dan keengganan pada tikus. Nat
Protoc 1:1662–1670.
Edwards NJ, Tejeda HA, Pignatelli M, Zhang S, McDevitt RA, Wu J,
Bass CE, Bettler B, Morales M, Bonci A (2017) Kekhususan sirkuit
dalam arsitektur penghambat VTA mengatur perilaku yang
diinduksi kokain. Nat Neurosci 20:438–448.
El Yacoubi M, Ledent C, Menard JF, Parmentier M, Costentin J,
VaugeoisJM(2000)Efek stimulan dari perilaku lokomotor kafein pada
tikus dimediasi melalui blokade reseptor adenosinA(2A).Br J
Pharmacol 129:1465–1473.
Ferré S (2008) Pembaruan tentang mekanisme
efek psikostimulan dari kafein. J Neurochem 105:1067– 1079.
Ferré S (2010) Peran neurotransmitter asenden sentral
sistem dalam efek psikostimulan kafein. J. Alzheimer's Dis 20 Suppl
1:S35-S49.
Ferré S (2016) Mekanisme efek psikostimulan dari
kafein: implikasi untuk gangguan penggunaan zat.
Psikofarmakologi 233:1963–1979.
Floran B, Gonzalez B, Florán L, Erlij D, Aceves J (2005) Interaksi
antara reseptor adenosin A(2a) dan dopamin D2 dalam kontrol
pelepasan [(3)H]GABA di globus pallidus tikus. Eur J Pharmacol
520:43–50.
Floresco SB, AR Barat, Ash B, Moore H, Grace AA (2003) Aferen
modulasi penembakan neuron dopamin secara berbeda mengatur
transmisi dopamin tonik dan fasik. Nat Neurosci 6:968–973.
Forro T, Valenti O, Lasztoczi B, Klausberger T (2013) Temporal or-
ganisasi interneuron GABAergik di hippocampus CA1 perantara
selama osilasi jaringan. Cereb Cortex 25:1–13.
Franklin KBJ, Paxinos G (2008) Otak tikus dalam koordinasi stereotaxic
inat, kompak. edisi ke-3. London: Pers Akademik. Fredholm BB,
Battig K, Holmén J, Nehlig A, Zvartau EE (1999) Ak-
tions kafein di otak dengan referensi khusus untuk faktor-faktor yang berkontribusi
terhadap penggunaannya secara luas. Pharmacol Wahyu 51:83–133.
Fuxe K, Marcellino D, Borroto-Escuela DO, Guescini M, Fernández-
Dueñas V, Tanganelli S, Rivera A, Ciruela F, Agnati LF (2010) Interaksi
adenosin-dopamin dalam patofisiologi dan pengobatan gangguan
SSP. CNS Neurosci Ada 16:e18–e42. Geuzaine A, Tyhon A, Grisar T,
Brabant C, Lakaye B, Tirelli E (2014)
Imbalan amfetamin pada tikus yang dibatasi makanan tidak
memiliki reseptor hormon pemusat melanin-1. Behav Brain Res
262:14–20.
Gołembiowska K, Wardas J, Noworyta-Sokołowska K, KamiNska K,
Górska A (2013) Efek antagonis reseptor adenosin pada model
peradangan penyakit parkinson yang diinduksi lps in vivo. Neurotox
Res 24:29–40.
Grace AA (2000) Gerbang arus informasi dalam limbik
sistem dan patofisiologi skizofrenia. Otak Res Otak Res Rev 31:330–
341.
Grace AA (2010a) Hippocampus ventral, interneuron, dan
skizofrenia: pemahaman baru tentang patofisiologi skizofrenia dan
implikasinya untuk pengobatan dan pencegahan. Curr Dir Psychol
Sci 19:232–237.
Grace AA (2010b) Disregulasi sistem dopamin oleh vena-
subikulum tral sebagai dasar patofisiologi umum untuk psikosis
skizofrenia, penyalahgunaan psikostimulan, dan stres. Neurotox Res
18:367–376.
Grace AA, Bunney BS (1984a) Kontrol pola tembakan di
neuron dopamin nigral: penembakan lonjakan tunggal. J Neurosci
4:2866–2876.
Grace AA, Bunney BS (1984b) Kontrol pola tembakan di
neuron dopamin nigral: penembakan meledak. J Neurosci 4:2877–2890.
Grace AA, Floresco SB, Goto Y, Lodge DJ (2007) Peraturan pemecatan
neuron dopaminergik dan kontrol perilaku yang diarahkan pada
tujuan. Tren Neurosci 30:220–227.
Grace AA, Gomes FV (2019) Sirkuit sistem dopamin
regulasi dan gangguannya pada skizofrenia: wawasan tentang
pengobatan dan pencegahan. Schizophr Bull 45:148–157.
Griebel G, Saffroy-Spittler M, Misslin R, Remmy D, Vogel E, Bour-
guignon JJ (1991) Perbandingan efek perilaku antagonis reseptor
adenosin A1/A2, CGS 15943A, dan antagonis selektif A1, DPCPX.
Psikofarmakologi 103:541–544.
Heckman MA, Weil J, de Mejia EG (2010) Kafein (1, 3,
7-trimethylxanthine) dalam makanan: tinjauan komprehensif
tentang konsumsi, fungsi, keamanan, dan masalah regulasi. Ilmu
Makanan J 75:77–87.
Hsu CW, Chen CY, Wang CS, Chiu TH (2009) Kafein dan se-
antagonis reseptor adenosin A2A lective menginduksi hadiah dan
perilaku kepekaan yang terkait dengan peningkatan fosfo-Thr75-
DARPP-32 pada tikus. Psikofarmakologi204:313–325. Iversen L
(2006) Transporter neurotransmitter dan dampaknya
tentang perkembangan psikofarmakologi. Br J Pharmacol 147 Suppl
1:S82–S88.
Juliano LM, Griffiths RR (2004) Tinjauan kritis terhadap kafein
penarikan: validasi empiris dari gejala dan tanda, kejadian, tingkat
keparahan, dan fitur terkait. Psikofarmakologi 176:1–29.
Karcz-Kubicha M, Antoniou K, Terasmaa A, Quarta D, Solinas M,
Justinova Z, Pezzola A, Reggio R, Müller CE, Fuxe K, Goldberg SR,
Popoli P, Ferré S (2003) Keterlibatan reseptor adenosin A1 dan A2A
dalam efek motorik kafein setelah pemberian akut dan kronis.
Neuropsikofarmakologi 28:1281– 1291.
Koob GF, Volkow ND (2010) Sirkuit saraf kecanduan.
Neuropsikofarmakologi 35:217–238.
Lindskog M, Svenningsson P, Pozzi L, Kim Y, Fienberg AA, Bibb JA,
Fredholm BB, Nairn AC, Greengard P, Fisone G (2002) Melibatkan-

ment fosforilasi DARPP-32 dalam aksi stimulan kafein. Alam
418:774–778.
Lodge DJ, Grace AA (2005) Kortikotropin akut dan kronis
melepaskan blokade reseptor faktor 1 menghambat pelepasan
dopamin yang diinduksi kokain: korelasi dengan aktivitas neuron
dopamin. J Pharmacol Exp Ada 314:201–206.
Lodge DJ, Grace AA (2006) The laterodorsal tegmentum adalah es-
penting untuk ledakan penembakan neuron dopamin area
tegmental ventral. Proc Natl Acad Sci USA 103:5167–5172.
Lodge DJ, Grace AA (2008) Aktivasi amfetamin
dorongan hippocampal dari neuron dopamin mesolimbik:
mekanisme sensitisasi perilaku. J Neurosci 28:7876–7882. Manzoni
O, Pujalte D, Williams J, Bockaert J (1998) Penurunan sebelum
sensitivitas sinaptik terhadap adenosin setelah penarikan kokain. J
Neurosci 18:7996–8002.
Moore H, Rose HJ, Grace AA (2001) Stres dingin kronis berkurang
aktivitas spontan neuron dopamin ventral tegmental.
Neuropsikoparmakologi 24:410–419.
Muñiz JA, Prieto JP, González B, Sosa MH, Kadet JL, Scorza C,
Urbano FJ, Bisagno V (2017) Efek kokain dan kafein pada tes
preferensi tempat terkondisi: perubahan bersamaan pada gen awal
dalam korteks prefrontal tikus dan nukleus akumbens. Front Behav
Neurosci 11:200.
Nestler EJ (2005) Apakah ada jalur molekuler umum untuk ad-
artikulasi? Nat Neurosci 8:1445–1449.
NikodijeviCO, Jacobson KA, Daly JW (1993) Kegiatan lokomotor di
tikus selama pengobatan kronis dengan kafein dan penarikan.
Pharmacol Biochem Perilaku 44:199–216.
Quarta D, Ferré S, Solinas M, You ZB, Hockemeyer J, Popoli P,
Goldberg SR (2004) Peran modulasi berlawanan untuk reseptor
adenosin A1 dan A2A pada pelepasan glutamat dan dopamin di
kulit nukleus accumbens. Efek paparan kafein kronis. J Neurochem
88:1151–1158.
Rosin DL, Robeva A, Woodard RL, Guyenet PG, Linden J (1998)
Lokalisasi imunohistokimia reseptor adenosin A2A pada sistem
saraf pusat tikus. J Comp Neurol 401:163–186. Schultz W, Dickinson
A (2000) Pengkodean prediksi saraf
kesalahan. Annu Rev Neurosci 23:473–500.
Sesack SR, Grace AA (2010) Jaring hadiah kortiko-basal ganglia
pekerjaan: sirkuit mikro. Neuropsikofarmakologi 35:27–47. Shi D,
NikodijeviCO, Jacobson KA, Daly JW (1994) Efek dari
kafein kronis pada sistem adenosin, dopamin dan asetilkolin pada
tikus. Arch Int Pharmacodyn Ada 328:261–287.
Valenti et al. |841
Steinkellner T, Mus L, Eisenrauch B, Constantinescu A, Leo D,
Konrad L, Rickhag M, Sørensen G, Efimova EV, Kong E,Willeit M,
Sotnikova TD, Kudlacek O, Gether U, Freissmuth M, Pollak DD,
Gainetdinov RR, Sitte HH (2014) Aksi amfetamin in vivo bergantung
pada αCaMKII. Neuropsikofarmakologi 39:2681–2693.
Stoner GR, Skirboll LR, Werkman S, Hommer DW (1988) Preferensi-
efek kafein pada sistem dopamin limbik dan kortikal. Biol Psikiatri
23:761–768.
Sukhanov I, Caffino L, Efimova EV, Espinoza S, Sotnikova TD,
Cervo L, Fumagalli F, Gainetdinov RR (2016) Peningkatan pengkondisian
yang bergantung pada konteks untuk amfetamin pada tikus yang
kekurangan TAAR1. Pharmacol Res 103:206–214.
Svenningsson P, Nomikos GG, Ongini E, Fredholm BB (1997) An-
tagonisme reseptor adenosin A2A mendasari efek pengaktifan
perilaku kafein dan dikaitkan dengan penurunan ekspresi
messenger RNA untuk NGFI-A dan NGFI-B pada putamen berekor
dan nukleus accumbens. Ilmu Saraf 79:753–764.
Ungless MA, Grace AA (2012) Apakah Anda atau bukan? Tantangan
lenges terkait dengan fisiologis mengidentifikasi neuron dopamin.
Tren Neurosci 35:422–430.
Valenti O, Grace AA (2010) Induksi obat antipsikotik
lipatan di area ventral tegmental aktivitas populasi neuron dopamin
melalui aktivasi jalur nukleus accumbensventral pallidum. Int J
Neuropsikofarmakol 13:845–860.
Volkow ND, Wise RA, Baler R (2017) Motif dopamin
sistem: implikasi untuk obat dan makanan kecanduan. Nat Rev
Neurosci 18:741–752.
Wang X, Gallegos DA, Pogorelov VM, O'Hare JK, Calakos N,
Wetsel WC, West AE (2018) Parvalbumin interneuron dari nukleus
accumbens tikus diperlukan untuk sensitisasi alat gerak yang
diinduksi amfetamin dan preferensi tempat yang dikondisikan.
Neuropsikofarmakologi 43:953–963.
Wise RA (2004) Dopamin, pembelajaran dan motivasi. Nat Pdt
Neurosci 5:483–494.
Wise RA (2009) Peran nigrostriatal–bukan hanya mesokortikolimbik–
dopamin dalam penghargaan dan kecanduan. Tren Neurosci 32:517–
524.
Kayu S, Sage JR, Shuman T, Anagnostaras SG (2014)
Psikostimulan dan kognisi: rangkaian aktivasi perilaku dan kognitif.
Pharmacol Rev 15261:193–221.