Terjemahan dari ebook oci

Kelebihan dan kekurangan dari IB

Kelebihan:

Inseminasi buatan menawarkan beberapa keunggulan potensial dibandingkan alami. Secara

historis, alasan terpenting adalah kontrol penyakit kelamin, khususnya pada sapi. Saat ini, alasan
yang paling banyak dianjurkan adalah sebagai sarana perbaikan genetik. Potensi IB untuk
digunakan dalam pengendalian penyakit kelamin adalah dorongan utama untuk pengembangan
sapi di Inggris selama tahun 1940-an. Saat itu, patogen kelamin Tritrichomonas janin dan
Campylobacter subsp. venerealis adalah epizootic di sebagian besar populasi ternak, tetapi di
Inggris, sama dengan sebagian besar negara-negara di mana IB sapi diperkenalkan dalam
menghadapi trikomonosis dan campylobakteriosis, patogen ini hampir dihilangkan dengan
penggunaannya. Namun, kebalikannya adalah: penggunaan indukan yang tidak terkontrol dalam
IB dapat menyebarkan penyakit. Banyak penyakit menular melalui semen, tidak hanya penyakit
kelamin klasik, tetapi juga kondisi lain yang akan terjadi umumnya tidak dianggap sebagai
penyakit kelamin utama (Roberts, 1986). Oleh karena itu, pemantauan yang ketat terhadap
kesehatan pejantan pendonor.

Pelaksanaan IB sebagai sarana perbaikan genetik berasal dari fakta bahwa, pada sebagian besar
hewan penghasil makanan, setiap ejakulasi bisa menjadi banyak dosis untuk inseminasi,
sehingga masing-masing pejantan bisa berpotensi digunakan untuk membiakkan sejumlah besar
betina. Karenanya, jumlah indukan yang dibutuhkan berkurang, dengan konsekuensi peningkatan
intensitas seleksi yang dapat diterapkan pada indukan pejantan. Pada sapi perah, hanya 1% sapi
terbaik yang dipilih, induk banteng potensial dan hanya sekitar 1% hingga 3% terbaik dari
mereka keturunan pejantan akhirnya menjadi indukan dari generasi berikutnya. Di sapi potong
dan babi, intensitas seleksinya tidak begitu besar tetapi bagaimanapun, jauh lebih intens daripada
yang bisa dicapai dalam perkembangbiakan alami. Seleksi genetik langsung dari indukan
hanyalah salah satu cara yang dapat dilakukan. IB dapat digunakan untuk mencapai perbaikan
genetik, sejauh ini IB memungkinkan penyebaran cepat dan/atau penggantian breed baru. Di
Inggris, IB adalah salah satu sarana utama ternak Friesian berkembang biak menggantikan
keturunan sapi perah asli Inggris. Selanjutnya, IB juga menjadi sarana Friesian digantikan oleh
Holstein. Dalam program substitusi breed seperti itu, IB dapat digunakan untuk mengubah
lungkang gen suatu kawanan dengan cepat; teknik yang juga digunakan untuk mengupgrade
ternak yang tidak berkembang di daerah terpencil. Dalam proses ini, IB memiliki keunggulan
yaitu murah dan sederhana, karena distribusi lokal diperpanjang dan semen yang didinginkan
dari sejumlah kecil indukan impor berada di dalam kemampuan ekonomi negara-negara
termiskin sekalipun. Perdagangan ternak internasional juga difasilitasi oleh IB. peningkatan stok
dapat diimpor dalam bentuk semen untuk IB tidak harus memindahkan hewan sendiri. Dengan
cara ini, banyak dari masalah aklimatisasi, seperti kurangnya ketahanan terhadap penyakit lokal,
dapat dihilangkan. Mengimpor semen juga memungkinkan negara pengimpor untuk
mengerahkan tingkat kontrol efektif yang jauh lebih besar atas status kesehatan indukan donor
daripada jika ternak itu sendiri diimpor.

Keuntungan utama ketiga dari IB adalah pengurangan jumlah indukan yang perlu dipelihara
oleh peternak. Jantan umumnya membutuhkan akomodasi di mana mereka dapat dipisahkan dari
betina yang sedang berkembang biak, sehingga dapat dikendalikan; Perumahan dan tenaga kerja
yang signifikan, biaya yang terlibat dalam memelihara hewan tersebut dapat dihindarkan dengan
penggunaannya dari IB. Selain itu, peternak umumnya memiliki akses ke materi genetik melalui
pusat IB yang akan jauh melampaui kemampuan keuangan mereka untuk membeli secara
langsung.

Namun demikian, meskipun IBmemiliki banyak keunggulan dibandingkan yang alami, teknik ini
tetap memliki kekurangan. Masalah deteksi dari masa subur dalam siklus estrus betina paling
berpotensi program IB. Pada sapi, perilaku betina birahi yang menonjol, di mana mereka
berulang kali menaiki yang lain memungkinkan identifikasi yang relatif akurat saat estrus.
Demikian pula pada babi, betina reseptif 'diam' saat ada tekanan ke punggung mereka. Namun,
pada sebagian besar spesies lain, deteksi estrus sedikit sulit. Pada spesies seperti itu, deteksi
birahi membutuhkan kehadiran jantan yang tidak subur (misalnya, vasektomi), atau waktu birahi
harus dikontrol oleh rejimen farmakologis (misalnya, sinkronisasi/induksi estrus), atau prosedur
manajemen (misalnya, waktu penyapihan pada babi). Jadi untuk domba betina, yang biasanya
tidak menunjukkan tanda-tanda birahi apapun tanpa adanya pejantan, IB membutuhkan
keberadaan domba jantan yang divasektomi untuk mendeteksi birahi atau farmakologis
manipulasi birahi untuk menentukan waktu masa subur. Oleh karena itu, deteksi masa subur
domba betina menjadi lebih besar. Setelah estrus telah diidentifikasi, hewan betina harus ditahan
untuk inseminasi, yang umumnya membutuhkan pemisahan dari kawanan atau kandang khusus.
Proses dari inseminasi juga membutuhkan tenaga terlatih dengan gelar tertentu dan kemahiran
teknis, seperti inseminasi babi betina; namun, di beberapa kasus prosedur mungkin menuntut
secara teknis, seperti dalam kasus inseminasi intrauterin laparoskopi domba.

Kekhawatiran atas kemungkinan inbreeding dan pengurangan populasi efektif dari suatu breed
diperkirakan sebagai akibat dari meluasnya penggunaan IB dari sejumlah kecil garis darah yang
dipilih. Ada bukti bahwa ini mungkin terjadi, khususnya dalam ras sapi Holstein. sejumlah
penelitian telah mengidentifikasi efek negatif yang nyata atau potensial perkawinan sedarah pada
sifat-sifat seperti distokia dan gangguan reproduksi (Adamec et al. 2006, McParland et al.
2007a), dan sifat produksi (Biffani et al. 2002, Croquet et al. 2006), tetapi umumnya tidak pada
sifat tipe/konformasi. Perkiraan koefisien perkawinan sedarah pada sapi Holstein telah
menunjukkan periode peningkatan pesat selama tahun 1990-an, sedangkan jumlah yang efektif
penyumbang breed menurun (Sorensen et al. 2005, Koenig & Simianer 2006, Kim & Kirkpatrick
2009). Tingkat peningkatan perkawinan sedarah mungkin telah berkurang dalam beberapa tahun
terakhir (Stachowicz et al. 2011). Kecenderungan ini juga terlihat pada sapi potong seperti
Hereford dan breed Charolais (McParland et al. 2007b). McParland dkk. (2007a) mencatat
bahwa meskipun efek ini signifikan secara statistik, efek ini kecil dan tidak mungkin
menyebabkan kerugian yang besar pada tingkat saat ini. Namun, yang lain menganjurkan peran
yang lebih aktif dalam pengelolaan perkawinan sedarah (Kearney et al. 2004, Colleau &
Moureaux 2006, Haile-Mariam dkk. 2007).

1. Perpanjangan

Ejakulasi sebagian besar hewan peliharaan mengandung lebih banyak spermatozoa dari yang
dibutuhkan untuk mencapai kebuntingan. Oleh karena itu, dengan pengenceran semen,
berpotensi dapat digunakan untuk beberapa inseminasi.
Pada spesies seperti anjing dan kuda, seluruh fraksi ejakulasi yang kaya sperma diencerkan dan
didinginkan, kemudian digunakan untuk inseminasi berurutan dari betina yang sama di atasnya
memperpanjang masa birahi (Jeffcoate & Lindsay 1989, Brinsko & Varner 1993). Hasil ejakulasi
umumnya diencerkan sehingga bisa digunakan untuk membuahi banyak betina. Dalam kedua
kasus, tingkat pengenceran maksimum ditentukan dari jumlah minimum spermatozoa dan
volume membuahi yang dianggap perlu untuk mencapai tingkat kebuntingan yang dapat
diterima. Faktor-faktor ini sendiri ditentukan oleh situs inseminasi, kelangsungan hidup
spermatozoa dalam ekstender, dan keistimewaan spesies individu dan indukan. Secara umum,
ketika sebuah inseminasi intrauterin dapat dicapai, jumlah minimum spermatozoa adalah satu
atau dua urutan besarnya lebih rendah dari untuk inseminasi intraserviks lebih rendah daripada
untuk inseminasi intravaginal. Karenanya, ketika penggunaan indukan secara luas diperlukan,
ada keuntungan besar dalam merancang metode untuk mencapai inseminasi intrauterin, bahkan
membutuhkan prosedur yang rumit seperti inseminasi laparoskopi, seperti pada domba betina.

 Penambahan Volume

Dosis inseminasi harus disiapkan dalam volume yang merupakan kompromi antara kemudahan
penanganan dan volume yang sesuai untuk tempat inseminasi. Jadi untuk inseminasi intraserviks
ovine, meminimalkan volume penting untuk mengurangi retrograde loss dari serviks (Evans &
Maxwell 1987), sedangkan untuk babi inseminasi intrauterin, volume minimal 50 mL diperlukan
untuk menyebarkan semen melalui rahim induk babi yang luas (Reed 1982). Pengenceran semen
tidak sepenuhnya mudah, untuk mamalia spermatozoa ditempatkan dalam pengencer sederhana
menunjukkan peningkatan awal motilitas, yang kemudian dengan cepat diikuti oleh hilangnya
motilitas dan peningkatan pewarnaan (Mann 1964). Fenomena ini, diketahui sebagai 'efek
pengenceran', mungkin menunjukkan hilangnya viabilitas sel melalui pencucian komponen
struktural membran sel. Meskipun itu sangat memprihatinkan di kalangan praktisi awal IB,
penggunaan ekstender yang mengandung makromolekul seperti protein atau alkohol polivinil
kemudian ditemukan untuk membatalkan efek pengenceran (Suter et al. 1979, Clay et al. 1984).
  Penyangga

Spermatozoa memiliki kisaran toleransi yang rrendah terhadap perubahan pH, jadi penyediaan
kapasitas penyangga diperlukan. Buffer terutama penting ketika semen hanya didinginkan dan
tidak dikriopreservasi, karena aktivitas metabolisme spermatozoa yang didinginkan tetap ada
(Salisbury et al. 1978). Meskipun dalam banyak pengencer komponen volume utama juga
merupakan agen penyangga utama, buffer adalah konstituen minor dari beberapa pengencer.
Buffer sederhana efektif, dengan sitrat awalnya digunakan secara luas (Willett & Salisbury
1942). Saline buffer fosfat agak kurang cocok, karena predisposisi aglutinasi sperma head-to-
head. baru-baru ini, buffer organik telah digunakan. Tris (tris (hidroksimetil) aminomethane)
mungkin yang paling banyak digunakan, tetapi keberhasilan penggunaan banyak bahan serupa
(mis., TES, HEPES, Tricene) telah dijelaskan. Protein yang terkandung dalam produk susu skim
juga memberikan penyangga yang cukup besar kapasitas untuk pengencer. Baru-baru ini, telah
terjadi perpindahan dari penggunaan bahan asal hewan dalam pemanjang semen karena risiko
penularan penyakit secara tidak langsung. Lesitin dari tanaman dan liposom telah digunakan
sebagai pengganti skim susu dan kuning telur dalam pengawetan semen.

 Pemeliharaan Tekanan Osmotik

Plasma semen memiliki tekanan osmotik 285 mOsmol spermatozoa dapat mentolerir kisaran
tonisitas sedang (Foote, 1969). Beberapa perdebatan berpusat pada apakah spermatozoa
merespons lebih baik menjadi pengencer yang sedikit hiperosmotik (Foote 1970) atau isosmotik,
dengan yang pertama. Selain osmotik aktivitas komponen ion pengencer, kontribusi substansial
dibuat oleh protein dan, khususnya, oleh gula, yang ditambahkan untuk memberi nutrisi bagi
spermatozoa atau untuk berkontribusi pada sifat cryoprotective (Watson 1990) dari pengencer

 Penyediaan Substrat Energi

Kebanyakan pengencer membuat beberapa penyediaan substrat energi untuk sperma. Pada
umumnya gula sederhana seperti glukosa, fruktosa, manosa, dan arabinose adalah substrat yang
cocok, meskipun tingkat di mana gula yang dimetabolisme bervariasi secara substansial antar
spesies (ditinjau oleh Bedford & Hoskins 1990). Laktosa, yang hadir dalam pengencer berbasis
susu, tidak dimetabolisme sampai batas tertentu. Namun, kuning telur juga merupakan
komponen dari banyak pengencer substrat untuk metabolisme spermatozoa (Salisbury et al.
1978). Penyediaan energi relatif kurang penting ketika semen harus dibekukan, karena hanya
spermatozoa aktif yang tersisa selama beberapa jam paling lama sebelum pembekuan
menghentikan metabolisme aktivitas. Namun, ketika metabolisme spermatozoa harus
dipertahankan selama beberapa hari (misalnya, jika semen yang didinginkan akan digunakan)
penyediaan energi merupakan hal yang penting.

 Aktivitas Antimikroba

Antibiotik ditambahkan ke sebagian besar pengencer semen sebagai pengukur profilaksis

terhadap transmisi bakteri patogen dan untuk mengurangi beban organisme nonpatogen yang
mencemari semen. IB pada sapi, benzilpenisilin dan streptomisin (Melrose 1962) merupakan
antibiotik yang paling banyak digunakan, karena berkhasiat terhadap C. fetal. Sebagian besar
antibiotik lain gagal untuk mengontrol organisme ini atau secara langsung merugikan sperma.
Kekhawatiran berakhir potensi penularan spesies Mycoplasma dan Ureaplasma dalam semen
sapi telah menyebabkan penggabungan linkomisin dan spektinomisin (Almquist & Zaugg 1974)
ke dalam pengencer semen di upaya untuk mengendalikan organisme tersebut. Ada bukti bahwa
efisiensi antibiotik dapat dikurangi dengan adanya beberapa komponen pengencer, terutama
kuning telur (Morgan et al. 1959); karenanya, praktik di beberapa sentra IB sapi adalah
prainkubasi semen mentah dengan koktail antibiotik sebelum pengenceran utama terjadi.
Prosedur ini biasa terjadi di Amerika Serikat tetapi jarang dilakukan di Eropa. Saat ini,
kekhawatiran semakin meningkat atas penyebaran resistensi antimikroba, yang menimbulkan
pertanyaan tentang apakah dimasukkannya antibiotik dalam ekstender semen dibenarkan karena
memiliki profilaksis daripada terapeutik tujuan. Alternatif untuk antibiotik, seperti penghilangan
bakteri kontaminan selama pemrosesan semen, akan menjadi lebih mudah (Morrell & Wallgren
2014).
 2. Memperpanjang Rentang Hidup

Masa hidup spermatozoa dari sebagian besar spesies lain dapat diperpanjang lebih nyaman
dengan:

• Mendinginkan hingga suhu jauh di bawah ambien;

• Pembekuan (cryopreservation); dan

• Menghentikan sementara aktivitas metabolisme spermatozoa dan mempertahankannya pada

suhu sekitar atau dingin.

 Cooling and cold shock

semen dapat disimpan dalam bentuk cair jika terjadi aktivitas metabolisme spermatozoa
berkurang dengan pendinginan. Proses pendinginan dari suhu tubuh hingga 5°C menyebabkan
kerusakan yang cukup besar pada sel kecuali mereka dilindungi dari efek “cold shock”.
perkembangan cold shock diperparah oleh laju pendinginan yang cepat tetapi tidak dapat
sepenuhnya dicegah bahkan dengan pendinginan lambat. Cold shock mengakibatkan kerusakan
membran sel, menyebabkan kebocoran kalium intraseluler, enzim, lipid, kolesterol, lipoprotein,
dan adenosin trifosfat (ATP) (Salisbury et al. 1978). Bagaimana ini mempengaruhi fungsi
spermatozoa masih belum sepenuhnya dipahami, meskipun jelas bahwa sebagian besar efek
dimediasi melalui perubahan sifat membran sel. Menurunkan suhu menyebabkan fosfolipid
membran berubah dari cairan menjadi gel fase, yang karena ini terjadi pada suhu yang berbeda
untuk lipid struktural berbeda, dapat menyebabkan pemisahan fase. Sebagai konsekuensi, protein
membran menjadi terkelompok secara ireversibel, menyebabkan hilangnya fungsi (De Leeuw et
al. 1990). Jadi spermatozoa kaget lebih permeabel, terutama terhadap kalsium (Robertson &
Watson 1986). Membran juga lebih fusogenik, menyebabkan perubahan dalam proses kapasitasi
(Johnson et al. 2000). Perubahan ini disebut sebagai 'kriokapasitasi'. Perbedaan spesies dan
mungkin perbedaan antara masing-masing pejantan bergantung pada komposisi membran: rasio
fosfolipid yang berbeda dan konsentrasi kolesterol dalam membran tampaknya menjadi penentu
kritis dari respon terhadap cold shock.
Cara yang paling efektif untuk melindungi spermatozoa terhadap efek merugikan dari
pendinginan adalah dengan masuknya kuning telur atau susu dalam pengencer. Oleh karena itu,
pengencer untuk penyimpanan semen yang didinginkan biasanya mengandung sekitar 20%
kuning telur ditambah buffer. Susu skim, susu murni, dan santan juga telah berhasil digunakan,
meskipun kuning telur adalah aditif yang paling umum digunakan (Vishwanath & Shannon
2000). Susu murni mengandung protein, laktenin, yang bersifat spermisida, jadi susu digunakan
sebagai pengencer semen harus diberi perlakuan panas (misalnya, dalam proses skimming) untuk
menonaktifkan faktor beracun (Flipsse et al. 1954). Didefinisikan secara kimia ekstender yang
mengandung fosfokaseinat kini telah dikembangkan (Batellier et al. 1998) dan cenderung
menggantikan susu skim ekstender. Pengencer awal didasarkan pada buffer fosfat, tetapi sitrat
segera terbukti lebih baik, mungkin karena meningkatkan kelarutan protein kuning telur. Baru-
baru ini, buffer zwitterion juga telah digunakan; Tris telah menjadi yang paling banyak
digunakan tapi hasil yang bagus juga telah dicapai dengan TES (N-tris (hidroksimetil) asam
metil-2-aminoetana sulfonat) atau UJI (Tris dititrasi dengan TES) (Holt, 2000). Pemahaman rinci
tentang mekanisme dimana kuning telur dan produk alami lainnya mencegah cold shock sulit
dipahami, sehingga sulit untuk diproduksi pengencer secara kimiawi yang ditentukan. Pekerjaan
awal mengidentifikasi komponen kunci dari bahan-bahan ini adalah lesitin, protein, lipoprotein,
dan sejenisnya kompleks molekul besar (ditinjau oleh Salisbury et al. 1978). Studi pada 1970-an
dan 1980-an (misalnya, Watson 1976, 1981, Foulkes 1977) menunjukkan bahwa fraksi low
density lipoprotein (LDL) adalah komponen kunci dari kuning telur, dengan kemungkinan
lipoprotein yang paling penting (Watson 1990). Dalam 20 tahun terakhir sudah telah ditunjukkan
bahwa lesitin dari tumbuhan, misalnya lesitin kedelai, juga memiliki efek perlindungan dan dapat
diganti dengan kuning telur (Hinsch et al. 1997) setidaknya untuk beberapa spesies. Evolusi
berbahan dasar kedelai extender telah ditinjau baru-baru ini (Layek et al. 2016).

Telah dikemukakan bahwa LDL menstabilkan membran spermatozoa (Watson 1975), atau
melindungi spermatozoa dengan membentuk lapisan pelindung di atas permukaannya (Quinn et
al. 1980) atau dengan mengganti fosfolipid membran yang hilang atau rusak (Foulkes et al.
1980). LDL, glikolipid, dan kolesterol menjadi tergabung menjadi membran, mengurangi
kecenderungan untuk berubah dari cairan menjadi fase gel selama pendinginan (Isachenko et al.
2004). Pembelajaran lebih lanjut berfokus pada interaksi LDL dengan komponen protein dalam
plasma semen (Vishwanath et al. 1992). Bergeron dan Manjunath (2006) mengembangkan ide
ini lebih lanjut berdasarkan protein plasma semen sapi (BSP) yang bekerja. Secara in vivo, BSP
berikatan dengan membran spermatozoa selama ejakulasi, memfasilitasi proses kapasitasi pada
sistem betina. Selama penyimpanan, BSP berikatan dengan membran spermatozoa dan
menyebabkan hilangnya fosfolipid dan kolesterol, sehingga menginduksi satu dari mekanisme
utama cold shock. LDL disarankan terutama fosfatidilkolin, mengikat BSP di extender,
mencegah interaksinya dengan spermatozoa dan karenanya melindungi membran dari kerusakan.

Kemungkinan memasukkan liposom dalam ekstender untuk menstabilkan membran spermatozoa

selama kriopreservasi juga menarik perhatian (Röpke et al. 2011). Liposom Phosphatidylcholine
memiliki telah dimasukkan ke dalam extender komersial dan berhasil digunakan untuk beberapa
spesies, misalnya banteng (Röpke et al. 2011), anjing (Belala et al. 2016), kerbau (Kumar et al.
2015), dan kuda jantan (Pillet et al. 2012).

Kesuburan semen sapi yang disimpan pada suhu 5°C dalam pengencer tersebut tetap dapat
diterima selama 2 sampai 4 hari (Foote et al. 1960), meskipun semen ram hanya bertahan selama
12 sampai 24 jam (Evans & Maxwell 1987). Penurunan kesuburan yang terjadi setelah waktu
tersebut adalah awalnya karena penurunan motilitas dan kelangsungan hidup pada alat kelamin
wanita saluran daripada kematian spermatozoa per se. Jangka pendek penyimpanan semen
dengan pendinginan hingga 5°C, bagaimanapun, adalah cara yang sangat murah dan cara yang
efektif untuk membangun program IB untuk sapi dan dari nilai untuk koleksi on-farm dan
inseminasi domba, sedangkan penggunaan cairan semen babi pada suhu lingkungan tetap ada,
efektif, dasar teknik dalam spesies itu. Jangka pendek Penyimpanan 5°C juga banyak digunakan
pada kuda dan anjing menghindari respons tak terduga terhadap pembekuan yang menjadi ciri
khasnya semen spesies ini.

3. Kriopreservasi dan Krioprotektan

Penyimpanan semen jangka panjang dicapai melalui kriopreservasi, yang memfasilitasi

penyebaran materi genetik yang diinginkan ke sebagian besar dunia. Dosis semen dapat
dikarantina sampai pejantan telah terbukti bebas dari penyakit pada saat itu dari pengumpulan
semen. Kriopreservasi mempertahankan kehidupan subur spermatozoa hampir tak terbatas,
meskipun sebagian besar spermatozoa individu gagal bertahan dari tekanan yang cukup besar
pembekuan dan pencairan. Untuk bertahan dari pembekuan, ekstender digunakan tidak hanya
mengandung zat yang melindungi dari sengatan dingin tetapi juga cryoprotectants seperti gliserol
(Polge et al. 1949), yang melindungi mereka dari konsekuensi buruk dari pembentukan kristal es.
Tanggapan umum sel terhadap pembekuan (ditinjau oleh Farrant 1980, Watson 1990) tidak
dipahami sampai lama setelah empiris metode kriopreservasi telah diadopsi secara luas.
Mulanya, saat suhu media eksternal turun di bawah titik bekunya, kristal air murni mulai
terbentuk. Konsentrasi zat terlarut di bagian media yang tidak beku karena itu naik sebagai
melakukan tekanan osmotiknya. Kristal es tidak meluas ke dalam sel, pada tahap ini membran
sel dikecualikan. Dengan demikian isi intraseluler mengalami periode supercooling, di mana sel
kehilangan air ke bagian yang tidak beku dari media ekstraseluler melalui osmosis. Tingkat
dehidrasi sel yang bervariasi mengikuti, yang diakhiri dengan pembentukan intraseluler Kristal
es. Dengan demikian kerusakan dapat terjadi pada sel dengan salah satu dari dua cara. Ketika
tingkat dehidrasi seluler yang substansial terjadi, yang tinggi konsentrasi zat terlarut dalam sisa
air intraseluler dapat merusak, sedangkan jika hanya terjadi dehidrasi ringan, es besar kristal
dapat terbentuk di dalam sel, yang menyebabkan kerusakan fisik membran internal dan
pembatasnya. Tingkat di mana masing-masing mempengaruhi sel ditentukan oleh ukuran sel dan
laju pendinginan. Jadi semakin besar selnya, semakin lambat laju inherennya dehidrasi; semakin
lambat lajunya, semakin banyak dehidrasi; tercepat lajunya, semakin besar kerusakan akibat
pembentukan es.
Namun, efek pembekuan dan pencairan juga perlu dijelaskan dalam istilah di luar efek osmotik
dan kerusakan kristal es. Selaput spermatozoa tidak biasa dalam hal lipid dari mana mereka
terdiri dan dari pengaturan lipid di dalam membran. Penyebab pendinginan dan kriopreservasi
perubahan fase dalam lipid membran, yang mengakibatkan hilangnya integritas, hilangnya
kontrol pergerakan kalsium, dan hilangnya membran Aktivitas ATPase (Holt 2000). Banyak
spermatozoa tidak bertahan hidup pada proses ini – biasanya kurang dari 50% dari spermatozoa
yang hidup yang ada sebelum kriopreservasi. Apalagi, bahkan untuk spermatozoa yang bertahan
hidup, perubahan seperti kapasitasi pada kepala terjadi (Curry 2000, Thomas et al. 2006), yang
mengubah durasi kelangsungan hidup mereka di saluran reproduksi betina. Telah dikemukakan
bahwa variasi spesies-ke-spesies dalam kemampuan spermatozoa untuk bertahan hidup dari
kriopreservasi, serta beberapa variabilitas jantan ke jantan dalam spesies, dapat dikaitkan dengan
kemampuan membran untuk menahan atau mengakomodasi perubahan tersebut. Respons
spermatozoa terhadap kriopreservasi dapat ditingkatkan dengan penggunaan cryoprotectants,
komposisi extender dan tingkat di mana spermatozoa dibekukan dan dicairkan. Krioprotektif
diklasifikasikan sebagai agen yang memasuki sel (menyerap) atau itu dipertahankan dalam
cairan ekstraseluler (non-permeating). Tindakan cryoprotectants awalnya dianggap dimediasi
semata-mata melalui ikatan hidrogen air, sehingga mengurangi ketersediaan air baik untuk
dehidrasi maupun untuk pembentukan kristal es. Krioprotektan penetrasi (misalnya, gliserol atau
dimetil sulfoksida (DMSO)) mengurangi hilangnya air dari sel, sehingga mengurangi kerusakan,
dan mengikatnya dalam bentuk yang membuatnya tidak tersedia untuk pembentukan kristal es.

Cryoprotectants non-penetrasi, seperti sebagai disakarida atau protein, dapat mempercepat

dehidrasi selama pendinginan cepat, sehingga meminimalkan pembentukan es intraseluler.
Namun, mekanisme lain juga terlibat. Molekul kutub seperti gliserol dan gula tampaknya
membentuk ikatan hidrogen dengan kelompok kepala polar lipid membran (Vishwanath &
Shannon 2000), menstabilkan membran selama transisi melalui zona suhu kritis (Woelders
1997). Demikian juga, penyisipan gliserol ke dalam lapisan ganda membran juga tampaknya
mempengaruhi stabilitas dan permeabilitas air membran melalui perubahan sifat fisik lipid
membran (Holt 2000).

Gula seperti gliserol mengubah sifat mekanik pengencer dengan meningkatkan viskositasnya.
Hal ini mencegah kristalisasi zat terlarut dan meningkatkan kecenderungan pembentuk kaca dari
medium (properti yang dieksploitasi dalam metode vitrifikasi untuk membekukan sel yang lebih
besar; Isachenko dkk. 2004). Sayangnya, cryoprotectants meresap relatif beracun pada
spermatozoa. Gliserol, yang merupakan krioprotektan primer utama digunakan dalam
pembekuan sperma mamalia, memiliki efek toksik langsung pada spermatozoa (Watson 1979,
1990). Konsentrasi gliserol yang dapat ditoleransi oleh spermatozoa tergantung pada spesies dan
komponen pengencer lainnya. Misalnya, extender untuk semen sapi yang mengandung
disakarida dapat menggunakan persentase yang lebih rendah (3%–4%) gliserol daripada
pengencer yang kekurangan disakarida tersebut, yang memiliki konsentrasi gliserol akhir
minimal 7% (Unal et al. 1978). Spermatozoa sapi jantan tampaknya relatif tahan terhadap racun
efek gliserol, sedangkan spermatozoa babi, mentolerir konsentrasi yang jauh lebih rendah
sebelum efek toksik mulai terjadi. Apakah efek toksik gliserol diperburuk pada tingkat tinggi
suhu telah menjadi bahan perdebatan. Studi awal (Polge 1953) menunjukkan bahwa penambahan
gliserol pada suhu 28°C lebih banyak merusak spermatozoa sapi daripada penambahannya pada
suhu 4°C. Salisbury et al., (1978), meninjau (pada saat itu) literatur yang berlebihan,
menyimpulkan bahwa efek suhu yang samar-samar. kemudian menyarankan bahwa penambahan
gliserol bertahap menghindari perubahan volume sel yang berlebihan yang dapat menyebabkan
pecahnya membran (Gao et al. 1993, 1995). Namun demikian, praktik normal di pusat IB sapi
komersial adalah, ketika konsentrasi akhir dari gliserol tinggi (≈7%), dilakukan pengenceran
primer semen dengan pengencer yang mengandung sedikit atau tanpa gliserol, dengan
gliserolisasi dilakukan setelah suhu diturunkan menjadi 4°C. Namun, pengencer yang
menggunakan konsentrasi akhir yang lebih rendah (<5%) ditambahkan satu langkah pada 30 ° C.
Dengan semen babi, toksisitas gliserol di suhu tinggi jauh lebih samar-samar, dan suhu rendah
gliserolisasi diinginkan (Paquignon 1985). Mungkin saja spermatozoa dari masing-masing
indukan menunjukkan toleransi yang kurang gliserol daripada yang lain.

Potensi toksisitas gliserol telah menyebabkan pencarian yang lain, kurang beracun,
cryoprotectants. Sedangkan zat seperti etilen glikol dan propanediol dapat digunakan untuk
kriopreservasi embrio tidak memiliki keunggulan dibandingkan gliserol untuk membekukan
spermatozoa. Berbagai amida, bagaimanapun, telah terbukti bermanfaat, setidaknya untuk semen
beberapa individu dan bergantung pada cryoextender mana yang digunakan sebagai basis (lihat
review oleh Alvarenga et al. 2005). Sebuah kombinasi dimetilformamida dan gliserol dalam
INRA96 adalah krioprotektan yang berguna untuk semen kuda (Alvarez et al. 2014). Sebaliknya,
dimethylacetamide tidak meningkatkan kelangsungan hidup spermatozoa babi hutan (Yang et al.
2016). Kerusakan oksidatif juga terjadi pada membran spermatozoa selama proses pembekuan.
Sejumlah studi telah terlibat peroksidasi lipid membran sebagai penyebab rusaknya fungsi
spermatozoa setelah kriopreservasi (Salamon & Maxwell 1995). Upaya untuk mengatasi masalah
tersebut antara lain dengan penambahan antioksidan seperti glutation peroksidase (Slaweta &
Laskowska 1987) atau katalase (Shannon 1972), meskipun juga disarankan bahwa pengukuran
derajat oksidasi membran fosfolipid dapat menjadi sarana yang berguna untuk menilai kualitas
spermatozoa beku-cair (Neild et al. 2005).