TOKSISITAS AKUT MAGIC MUSHROOM (Psilocybe cubensis

(Earle) singer) PADA TIKUS JANTAN BERDASARKAN

METODE OECD (Organzation for Economic Co-operation and
Development) DAN PENENTUAN LD50

LAPORAN TUGAS AKHIR

Yusup Bahtiar
11151087

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA
BANDUNG
2019
 PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI

Skripsi yang tidak dipublikasikan terdaftar dan tersedia di

Perpustakaan Universitas Bhakti Kencana Bandung, dan terbuka
untuk umum.

Referensi kepustakaan diperkenankan dicatat, tetapi pengutipan atau

peringkasan hanya dapat dilakukan seizin pengarang dan harus
disertai dengan kebiasaan ilmiah untuk menyebutkan sumbernya.

Memperbanyak atau menerbitkan sebagian atau seluruh skripsi

haruslah seizin Dekan Fakultas Farmasi di lingkungan Universitas
Bhakti Kencana Bandung
 ABSTRAK

Toksisitas Akut Magic Mushroom (Psilocybe

cubensis(earle)singer) Pada Tikus Jantan Berdasarkan Metode
OECD (Organzation for Economic Co-operation and
Development) dan Penentuan LD50

Oleh :
Yusup Bahtiar
1151087

Ekstrak Magic mushroom telah lama dikenal sebagai jamur yang

membuat halusinogen. Salah satu langkah pra-klinis yang dilakukan
dalam pengembangan potensinya sebagai obat herbal adalah
pengujian toksisitas akut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
Lethal Dose (LD50) dari ekstrak Magic mushroom dan pengaruhnya
terhadap hewan uji. Metode uji toksisitas akut diadaptasi dari OECD
423 dengan diberikan dosis tunggal 300, 2000, 5000, 8000, dan
16000 mg/kg BB dengan jumlah setiap kelompok uji sebanyak 5
ekor tikus jantan. Pengamatan dilakukan selama 14 hari dengan
diamati gejala toksisitas yang terjadi serta adanya kematian. Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian dosis tinggi ekstrak
jamur Magic menimbulkan perubahan aktifitas pada tikus antaralain
penurunan kekuatan cengkraman dan aktifitas menggelantung, serta
peningkatan aktifitas ptosis, katalepsi dan grooming. Namun sampai
pemberian dosis yang cukup tinggi tersebut (16000 mg/kg bb) tidak
terjadi kematian. Sehingga sesuai acuan metode oecd 423 dimana zat
diklasifikasikan toksik jika terjadi kematian pada dosis 5000 mg/kg
bb, maka jamur magic bukan sebagai zat toksik. Selain itu, LD50
dari jamur magic tersebut lebih dari 16000 mg/kg bb.

Kata kunci : Toksisitas Akut, Jamur magic, Psilocybe cubensis,

OECD

i
 ABSTRACT

Acute toxicity of Magic Mushroom (Psilocybe

cubensis(earle)singer) in male rats Based on the OECD
(Organzation for Economic Co-operation and Development)
Method and Determination of LD50

By :
Yusup Bahtiar
1151087

Magic mushroom extract has been known as a hallucinogenic fungus.

One of the pre-clinical steps taken in developing its potential as an
herbal medicine is acute toxicity testing. This study aims to determine
Lethal Dose (LD50) from Magic mushroom extract and its effect on test
animals. The acute toxicity test method was adapted from OECD 423
with a single dose of 300, 2000, 5000, 8000, and 16000 mg / kg BW
with the number of each test group as many as 5 male rats.
Observations were carried out for 14 days involving toxicity that
occurred as well as death. The results of this study indicate that
administration of high doses of Magic mushroom extract causes
changes in activity in rats, among others, a decrease in grip strength
and hanging activity, and increased activity of ptosis, catalepsy and
grooming. But until the dose is quite high (16000 mg / kg bw) there is
no death. So that according to the method reference oecd 423 where the
substance is classified as toxic in the event of death at a dose of 5000
mg / kg bw, then mushroom magic is not a toxic substance. In addition,
LD50 from magic mushrooms is more than 16000 mg / kg bw.

Keywords : Acute toxicity, Magic mushroom, Psilocybe cubensis and

Oecd

ii
 KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmanirrahim..

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, Tuhan yang

Maha Esa atas segala karunia, rahmat, serta hidayahnya sehingga
penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul “Uji
Toksisitas Akut magic mushroom (psilocybe cubensis) pada Tikus
Jantan Berdasarkan Metode OECD dan penentuan Ld50” dengan
lancar tanpa halangan suatu apapun sebagai syarat untuk
menyelesaikan pendidikan Strata 1 di Sekolah Tinggi Farmasi
Bandung.

Penelitian ini dapat diselesaikan dengan baik atas dukungan dan

bantuan berbagai pihak baik secara langsung maupun tidak langsung.
Oleh sebab itu, penulis mengucapkan terima kasih yangs setulusnya
kepada :
1. Bapak, Ibu, dan Kakak yang tidak henti-hentinya memberikan
doa dan dukungan
2. Ibu Ika Kurnia Sukmawati., M.Si., Apt. dan Ibu Idar M.Si.
selaku pembimbing tugas akhir atas arahan, bimbingan,
dukungan, dan ilmu yang diberikan dalam menyelesaikan
laporan tugas akhir ini.

iii
3. Teman-teman Program Studi Farmasi sebagai rekan
seperjuangan dalam menyelesaikan studi khususnya rubi
farmakologi.
4. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu
yang telah membantu tersusunnya tugas akhir ini

Pastinya sebagai manusia selalu mampunyai kesalahan. Penulis

menyadari bahwa tugas akhir ini masih jauh dari sempurna. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan adanya kritikan yang membangun
dari semua pihak. Akhir kata, penulis berharap tugas akhir ini dapat
bermanfaat bagi pembaca, khususnya di bidang ilmu kefarmasian
terutama dalam pengembangan dan penelitian obat-obat baru.

Bandung, Juli 2019

Penulis

iv
 DAFTAR ISI
Daftar Lampiran...............................................................................viii
Bab I Pendahuluan..............................................................................1
1.1 Latar Belakang..............................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.........................................................................4
1.3 Tujuan Penelitian..........................................................................4
1.4 Manfaat Penelitian........................................................................5
Bab II Tinjauan Pustaka......................................................................6
2.1 Jamur Magic.................................................................................6
2.1.1 Taksonomi Jamur Magic...........................................................7
2.1.2 Identifikasi Makroskopik...........................................................8
2.1.3 Kandungan.................................................................................8
2.1.4 Khasiat.......................................................................................9
2.2 Senyawa Toksik pada Jamur.......................................................10
2.3 Uji Toksisitas..............................................................................12
2.3.1 Tipe-tipe Uji Toksisitas...........................................................12
2.3.2 Metode Uji Toksisitas Akut.....................................................16
2.3.3 Lethal Dose 50.........................................................................19
Bab III Metode Penelitian.................................................................24
Bab IV Alat Dan Bahan....................................................................29
4.1 Alat..............................................................................................29
4.2 Bahan..........................................................................................29
4.3 Hewan percobaan........................................................................29
Bab V Prosedur Penelitan.................................................................30

v
5.1. Pengumpulan dan Determinasi Bahan.......................................30
5.2 Pengolahan Bahan....................................................................30
5.3 Pembuatan Ekstrak.....................................................................31
5.4 Karakterisasi Sampel..................................................................31
5.5 Skrining Fitokimia......................................................................34
5.6 Penyiapan Hewan Uji.................................................................36
5.7 Pembuatan Larutan Uji...............................................................36
5.8 Metode Pengujian OECD...........................................................36
5.9 Bagan Alur OECD 423...............................................................38
5.11 Alur Penentuan Ld50................................................................40
Bab VI Hasil dan Pembahasan..........................................................42
6.1 Pengumpulan dan Pengelolaan Bahan........................................42
6.2 Determinasi Bahan......................................................................42
6.3 Uji Karakterisasi Simplisia.........................................................42
6.4 Uji Skrining Fitokimia................................................................44
6.5 Pengujian Toksisitas Akut pada Tikus........................................44
BAB VII Kesimpulan dan Saran......................................................63
7.1. Kesimpulan................................................................................63
7.2 Saran...........................................................................................63
Daftar pustaka...................................................................................64
LAMPIRAN......................................................................................66

vi
 Daftar Singkatan

BB : Berat Badan
BPOM : Badan Pengawas Obat dan Makanan
Depkes RI : Departemen Kesehatan Republik Indonesia
FDA : Food and Drug Administration
KBPOM : Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan
Kg : Kilogram
LC50 : Lethal concentration
LD50 : Lethal dose 50
Ml : Mililiter
Mg : Miligram
NOAEL : No Observed Adverse Effect Level
OECD : Organization for Economic Co-operation and
development
OPPTS : Office of Prevention, Pesticides, and Toxic
substance

vii
 Daftar Lampiran

Lampiran 1 Hasil Determinasi

Lampiran 2 Komisi Etik

Lampiran 3 Dokumentasi

Lampiran 4 Perhitungan

Lampiran 5. Perhitungan Volume Pemberian Hewan Uji

Lampiran 6. Pengujian ANOVA

viii
 Bab I Pendahuluan

1.1 Latar Belakang

Obat tradisional adalah bahan atau ramuan yang berupa bahan
tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik)
atau campuran bahan tersebut yang secara turun temurun telah
digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (BPOM RI,
2005).

Obat tradisional salah satunya berasal dari tanaman termasuk jamur

magic. Dewasa ini di Indonesia muncul sebuah trend penggunaan
suatu jamur yang menyebabkan efek halusinasi yang terkenal di
kalangan muda-mudi. Jamur ini terkenal dengan sebutan magic
mushroom. Jamur ini bukanlah jenis jamur yang biasa dikonsumsi,
melainkan jamur yang dapat menimbulkan halusinasi. Sebagian
besar jamur yang menyebabkan halusinasi tergolong dalam genus
Psilocybe (Sativa N.O., 2013).

Indonesia merupakan negara yang menjadikan narkotika sebagai

barang yang ilegal dan tidak dibenarkan untuk disebarluaskan di
negara ini. Salah satu masalah yang merambah di Indonesia sejak
tahun 1960 adalah berkembangnya penyalahgunaan narkotika dan
kenakalan remaja. Berdasarkan hasil survey yang dilakukan Badan
Narkotika Nasional (BNN) menyebutkan bahwa hasil penelitian
penyalahgunaan dan peredaran gelap narkoba pada kelompok belajar
atau mahasiswa di Indonesia oleh pusat penelitian kesehatan UI dan

1
 2

BNN menunjukan terjadinya peningkatan angka prevalensi yang

cukup tinggi yaitu dari 5,8% pada tahun 2003 menjadi 8,3% pada
tahun 2006. Namun hasil penelitian 2009 memperlihatkan bahwa
angka penyalahgunaan narkoba relatif stabil jika dibandingkan
dengan tahun 2006. Angka di tahun 2009 dan 2011 terlihat
mengalami penurunan di semua lokasi studi, baik kota dan
kabupaten ataupun gabungan keduanya (BNN RI-PPKUI, 2011).

Salah satu jenis narkotika yang memberikan efek halusinasi yaitu

Psilocybin. Psilocybin mushroom adalah jamur yang mengandung
alkaloid indol psikoaktif. Efek jamur magic berasal dari psilocybin
dan psilocin. Efek dari jamur psilocybin bersifat subyektif dan
berbeda-beda pada masing-masing penggunanya. Efek halusinasi
psilocybin yang berasal dari jamur biasanya dapat berlangsung 3-8
jam. Lama waktu dari efek yang ditimbulkan tergantung dari
bagaimana dosis yang diberikan, pengolahan jamur, dan
metabolisme dari pengguna itu sendiri. (Farisan B.K., 2013)

Halusinogen dari psilosibin dikenal untuk mengubah pengalaman

secara subjektif. Namun, tidak ada studi yang meneliti toksisitas akut
yang di ukur dengan penentuan LD50. Efek umum dari psilosibin
meliputi: dilatasi pupil , perubahan denyut jantung, termasuk
peningkatan, menurun, dan tanggapan variabel, perubahan tekanan
darah, termasuk hipotensi, hipertensi, dan ketidakstabilan umum,
perubahan stretch reflex, termasuk peningkatan dan menurun, mual;
tremor, dan dysmetria (ketidakmampuan untuk mengarahkan dengan
benar atau gerakan batas) peningkatan sementara tekanan darah yang
 3

disebabkan oleh obat dapat menjadi faktor risiko bagi pengguna

yang memiliki pra-hipertensi. Ini adalah efek somatik secara
kualitatif yang disebabkan oleh psilosibin telah dikuatkan oleh
beberapa studi klinis awal. Maka dari itu harus di adakan penelitian
uji toksisitasnya (Sativa N.O., 2013)

Uji toksisitas adalah suatu pengujian untuk mendeteksi efek suatu zat
pada sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis-respon yang
khas dari sediaan uji (BPOM, 2014).

Banyak manfaat yang dapat diperoleh dari konsumsi jamur, jamur

juga dapat menimbulkan efek keracunan. Menurut Sevki, dkk.,
hanya 20-25% jamur telah diketahui nama dan jenisnya dan 3%
diantaranya beracun. Keracunan jamur (toksisitas jamur) terjadi
setelah menelan jamur yang mengandung racun. Tidak ada aturan
yang pasti untuk membedakan jamur yang dapat dimakan dari jamur
beracun. Lebih dari 95% kasus toksisitas jamur, keracunan terjadi
sebagai akibat kesalahan identifikasi jamur oleh pemburu jamur.
Tingkat keparahan keracunan jamur dapat bervariasi, tergantung
pada lokasi geografis di mana jamur tumbuh, kondisi pertumbuhan,
jumlah toksin yang diantarkan, dan karakteristik genetik jamur.
Dalam penelitian retrospektif yang dilaporkan oleh Trabulus dkk.
antara tahun 1996 sampai dengan 2009, terdapat 144 pasien yang
terpapar racun amatoksin dengan angka kematian 9,7% (14 pasien)
(Horowitz, 2015).
 4

Uji toksisitas akut merupakan salah satu uji pra-klinik. Uji ini
dilakukan untuk mengukur derajat efek toksik suatu senyawa yang
terjadi dalam waktu singkat, yaitu 24 jam, setelah pemberiannya
dalam dosis tunggal. Tolak ukur kuantitatif yang paling sering
digunakan untuk menyatakan kisaran dosis letal atau toksik adalah
dosis letal tengah (LD50). (Sulastry feni., 2009)

1.2 Rumusan Masalah

Penelitian ini dilakukan secara in vivo, menggunakan hewan coba
tikus jantan dengan paparan tunggal dosis bertingkat. Pengamatan
meliputi jumlah hewan yang mati serta gejala klinis ketoksikan akut
senyawa pada 24 jam pertama pemberian ekstrak jamur kotoran sapi
(Psilocybe cubensis).
Adapun rumusan masalah dari penelitian ini adalah :
1. Apakah pemberian dosis tunggal ekstrak jamur Magic memiliki
efek toksik terhadap tikus?
2. Berapa nilai LD50 ekstrak jamur Magic yang diberikan secara
peroral pada tikus jantan?

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini ditujukan untuk mengetahui :
1. Menentukan nilai LD50 ekstrak magic mushroom (Psilocybe
Cubensis).
2. Mengamati gejala klinis toksik setelah pemberian ekstrak magic
mushroom (Psilocybe Cubensis) dalam 24 jam pertama
 5

1.4 Manfaat Penelitian

Peneliti berharap agar penelitian ini dapat bermanfaat untuk :
1. Sebagai bahan informasi penelitian lebih lanjut mengenai
toksisitas akut pemberian ekstrak jamur magic mushroom
(Psilocybe Cubensis) terhadap tikus jantan.
2. Menjadi sumber informasi penelitian lebih lanjut mengenai
toksisitas akut pemberian ekstrak magic mushroom (Psilocybe
Cubensis) terhadap tikus jantan dan memperkirakan resiko
penggunaan ekstrak magic mushroom pada manusia.
3. Menambah kekayaan ilmu pengetahuan di bidang ilmu
kefarmasian terutama dalam pengembangan dan penelitian obat-
obat baru.
 Bab II Tinjauan Pustaka

2.1 Jamur Magic

Jamur Magic adalah sejenis jamur yang tidak umum untuk
dikonsumsi. Jamur ini tumbuh dan berkembang pada kotoran
hewan sapi. Jamur Magic adalah jamur yang terdiri dari psilosibin
dan psilosin pada sediaan jamur kering. Jamur yang dibudidayakan
dalam ruangan cenderung memiliki konsentrasi yang lebih tinggi.
Potensi jamur dapat sangat bervariasi antara yang satu dengan yang
lainnya. Umumnya, onset dari jamur Magic di dalam tubuh berkisar
antara 10- 40 menit ketika dikunyah dan dibiarkan di mulut hingga
larut, dan berkisar antara 20-60 menit ketika ditelan dalam keadaan
lambung kosong. Sedangkan tubuh akan kembali normal setelah 6-
8 jam. Jamur Magic tumbuh umumnya dalam kotoran ternak seperti
kotoran sapi, pada jaman dahulu orang-orang Spanyol
memperkenalkan hewan-hewan ke Amerika Utara dan mungkin
mereka juga membawa jamur yang brsifat halusinogen. Psilosin
mungkin telah digunakan di masa Pra-Columbus. Beberapa
curanderos (dukun) menganggap jamur magic akan kalah dengan
halusinogen jamur lain. Namun, ini hasil dari prasangka budaya
ketimbang sifat kimia. (Badnam Edmond R., 1983)

Hampir 50% psilocybin diabsorpsi melalui lambung dan usus;

kemudian dihepar akan diubah menjadi psilocin, yang secara
farmakologis merupakan bentuk aktif yang akan menjadi glukoronat
dan dikeluarkan melalui urin atau diubah dalam metabolit psilocinics
lainnya. Dalam 24 jam setelah pemberian 65% dari halusinogen
6
 7

dieksresikan di urin, yang lainnya 15-20% dieksresi melalui empedu

dan feses. Walaupun mekanisme fisiologis untuk eliminasi
komponen terjadi dalam waktu yang sangat pendek (setelah 8 jam
setelah efek obat tidak dirasakan lagi), komponen yang terdapat di
urin dapat terdeteksi walaupun setelah 7 hari. (Muntaha M., 2013)

2.1.1 Taksonomi Jamur Magic

Kingdom : Fungi
Nama Lain : Magic Mushroom
Divisi : Basidiomycota
Class : Agaricomycetes
Ordo : Agaricales
Family : Strophariaceae
Genus : Psilocybe
Spesies : Psilocybe Cubensis
(Stamen, 1996)

Gambar II.1 Jamur Magic

 8

2.1.2 Identifikasi Makroskopik

Jamur magic memiliki karakteristik sebagai berikut: badan buah
berukuan kecil, tudung buah 0.5-4 cm, cembung atau berbentuk
seperti bel, dengan bagian tengah menonjol, berwarna kuning
kecoklatan atau coklat. Bilah adnexed, adnate, warna coklat,
menjadi coklat gelap seiring dengan tuanya basidiospora, dan tepi
menjadi putih karena adanya sistidia. Batang tipis, gampang
dipatahkan, gundul, warna coklat, dan berubah menjadi kebiruan
kalau diluka (Bimo Setiarto R.Haryo, 2015)

2.1.3 Kandungan
Jamur magic dan beberapa genus jamur penyebab halusinasi
lainnya mempunyai kandungan utama penyebab halusinasi, yaitu
senyawa psilocybin dan psilocin.kandungan ini yang mempunyai
nama kimia psilosibin (O-Phosphoril-4-hidroxy-N) dan psilocin (4-
hidroxylated-N-dimethyltryptamine) digunakan oleh beberapa
perusahaan obat di Swiss dengan formulasi sediaan berbentuk pil.
jamur halusinasi ini juga dimanfaatkan dalam dunia kedokteran.
Misalnya dalam penelitian dari total 26 orang koresponden terdapat
22 orang yang berkurang sakit kepalanya akibat penggunaan
psilocybin. penggunaan psilocybin pada penderita kanker juga
diketahui dapat memperbaiki kondisi psikologi dan menurunkan
rasa cemas pasien. penggunaan senyawa jamur ini sebagai
pengobatan masih menjdai kontroversi, ilegal di beberapa negara,
dan belum 'terkenal' di Indonesia. terutama di Indonesia,
perkemabangan dan penelitian jamur ini mulai dilakukan apalagi
proses budidayanya mulai banyak dilakukan sehingga diharapkan
 9

dengan budidaya dan pengembangan jadi tanaman obat dapat

bermanfaat bagi perusahaan farmasi di Indonesia sendiri. (Berti T
dan Martha M., 2010)

2.1.4 Khasiat
Jamur magic yang lebih dikenal masyarakat dengan nama magic
mushroom. Jamur ini telah lama disalahgunakan dengan tujuan
non-medis yaitu untuk mengubah suasana hati dan memperoleh
sensasi dengan berhalusinasi (Gartz, 1993). Adapun khasiat secara
empiris maupun dengan bukti ilmiah digunakan sebagai salah satu
bahan obat. Selain itu, jamur yang berasal dari kotoran hewan
ternak terutama dari kotoran sapi ini memiliki khasiat secara
empiris sebagai bahan yang dapat memabukkan, menimbulkan efek
euphoria atau penekanan situasi depresi tertentu dan berhalusinasi.
Masyarakat awam belum megetahui bahaya dari konsumsi jamur
ini, di salah satu daerah di Jawa Barat terutama kota Lembang,
jamur ini dikenal dengan sebutan mushroom. Sedangkan secara
ilmiah, menurut Kurama N.P dkk, 2013, jamur magic (Psilocybe
cubensis) memiliki efek sebagai obat antidepresan yang ditinjau
dari immobility time dari tikus dengan metode forced swim test.
Dapat disimpulkan juga bahwa ekstrak dengan dosis 750 mg/KgBB
dan 625 mg/KgBB memiliki efek yang lebih baik dibandingkan
dengan ekstrak dosis 500 mg/KgBB
 10

2.2 Senyawa Toksik pada Jamur

Menurut BPOMRI (2011), ada beberapa jenis racun/toksin pada
jamur beracun dan menyebabkan bermacam-macam dampaknya
pada kesehatan manusia, yaitu :
1. Amatoxin/Amanitin (Cyclopeptide)
Terbagi menjadi tiga kelas toksin: Amatoxins, Phallotoxins dan
Virotoxins. Dari ketiga kelas tersebut Amatoxins yang sering
menyebabkan keracunan. Racun ini mengganggu transkripsi
DNA dan menyebabkan nekrosis pada sel-sel dengan sintesa
protein tingkat tinggi. Kerusakan yang paling penting adalah
nekrosis hati. Kelompok jamur Amatoxins adalah kelompok
jamur Amanita (Amanita phalloides, Amanita virosa) atau
dikenal dengan The Death- cap atau Destroying Angel, The
Fool’s Mushroom (A. verna).
2. Gyromitrin
Gyromitrin merupakan salah satu grup hidrazin yang mengikat
protein dan banyak ditemukan pada genus Gyromitra. Toksin
Gyromitrin (N-methyl-N formylhydrazone) terurai dengan cepat
dalam lambung dan usus duodenum, menjadi asetaldehida dan
Nmethyl-N-formylhydrazine, melalui hidrolisis lambat diubah
menjadi monomethylhydrazine (MMH) dan hidrazin lainnya.
Monomethylhydrazine diyakini menjadi penyebab utama dari
keracunan jamur spesies Gyromitra esculenta (the false Morel)
dan spesies Gyromitra lainnya (G. gigas and G. fastigiata).
3. Orellanine
Cortinarius merupakan genus yang memiliki kurang lebih 800
spesies di Amerika Utara. Sejak peristiwa keracunan pertama
 11

karena spesies C. Orellanus, Cortinarius banyak ditemukan

mengandung racun Orellanine. The Lethal webcaps, dua spesies
genus Cortinarius, yang termasuk dalam jamur beracun di dunia
yaitu The Deadly Webcap (Cortinarius rubellus) dan The Fool's
Webcap (C. Orellanus).
4. Ibotenic Acid dan Muscimol
The Fly Agaric (Amanita muscaria) dan Panthercap (Amanita
pantherina) menghasilkan toksin Ibotenic Acid dan Muscimol.
Keduanya mengandung asam yang dengan cepat dilepaskan dari
dalam tubuh jamur karena proses memasak dan merebus, namun
proses ini tidak menghilangkan semua zat beracun yang
dikandungnya atau tidak memperlihatkan toksisitas yang lebih
rendah. Muscimol 5 kali lebih potensial dari Ibotenic Acid.
5. Psilocybin
Genus Psilocybe, Panaeolus, Copelandia, Gymnopilus,
Conocybe dan Pluteus memproduksi toksin Psilocybin. Jamur
ini biasa dikenal nama Deadly conobye, bentuk topinya
mengerucut dan memiliki warna coklat pudar. Memiliki nama
ilmiah Pholiotona filaris, jamur ini tersebar di Amerika bagian
barat laut Pasifik. Keberadaannya sering membuat orang
tertukar dengan jamur magic. Jamur conocybe mengandung
racun mycotoxins yang menyebabkan kematian jika dikonsumsi
manusia.
6. Coprine
Genus Coprinus (Coprinus atramentarius, Coprinus cornatus,
Coprinus disseminatus, Coprinus micacues, Coprinus picaceus)
memproduksi toksin coprine. Efek dari jamur ini tidak seperti
 12

jamur pada umumnya, efeknya akan terlihat jika dikonsumsi

bersamaan dengan alkohol (etanol) sedangkan jika dikonsumsi
secara tunggal tidak beracun.

2.3 Uji Toksisitas

Uji toksisitas adalah suatu uji untuk mendeteksi efek toksik suatu
zat pada sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis-respon
yang khas dari sediaan uji. Data yang diperoleh dapat digunakan
untuk memberi informasi mengenai derajat bahaya sediaan uji
tersebut bila terjadi pemaparan pada manusia, sehingga dapat
ditentukan dosis penggunaannya demi keamanan manusia (BPOM,
2014). Studi toksisitas hewan penting untuk memprediksi efek
samping dan menentukan dosis obat yang aman sebelum studi
klinis dan merupakan “standar emas” dalam penilaian toksisitas
suatu bahan (Mulyani, dkk., 2017).
2.3.1 Tipe-tipe Uji Toksisitas
Dalam Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan
(KBPOM) Republik Indonesia Nomor 7 tahun 2014 tentang Uji
Toksisitas Nonklinik secara In Vivo, ruang lingkup uji toksisitas
nonklinik secara in vivo yang diatur dalam peraturan ini meliputi :
1. Uji Toksisitas Akut Oral
Uji toksisitas akut oral adalah suatu pengujian untuk mendeteksi
efek toksik yang muncul dalam waktu singkat setelah pemberian
sediaan uji yang diberikan secara oral dalam dosis tunggal, atau
dosis berulang yang diberikan dalam waktu 24 jam. Prinsip uji
toksisitas akut oral yaitu, sediaan uji dalam beberapa tingkat
dosis diberikan pada beberapa kelompok hewan uji dengan satu
 13

dosis per kelompok, kemudian dilakukan pengamatan terhadap

adanya efek toksik dan kematian. Penilaian toksisitas akut
ditentukan dari kematian hewan uji sebagai parameter akhir.
Hewan yang mati selama percobaan dan yang hidup sampai
akhir percobaan diautopsi untuk dievaluasi adanya gejala-gejala
toksisitas dan selanjutnya dilakukan pengamatan secara
makropatologi pada setiap organ (BPOM, 2014). Tujuan uji
toksisitas akut oral adalah untuk mendeteksi toksisitas intrinsik
suatu zat, menentukan organ sasaran, kepekaan spesies,
memperoleh informasi bahaya setelah pemaparan suatu zat
secara akut, memperoleh informasi awal yang dapat digunakan
untuk menetapkan tingkat dosis, merancang uji toksisitas
selanjutnya, memperoleh nilai LD50 suatu bahan/sediaan, serta
penentuan penggolongan bahan/sediaan dan pelabelan.
2. Uji Toksisitas Kronik Oral
Uji toksisitas kronis oral adalah suatu pengujian untuk
mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian sediaan
uji secara berulang sampai seluruh umur hewan. Uji toksisitas
kronis pada prinsipnya sama dengan uji toksisitas subkronis,
tetapi sediaan uji diberikan selama tidak kurang dari 12 bulan.
Tujuan dari uji toksisitas kronis oral adalah untuk mengetahui
profil efek toksik setelah pemberian sediaan uji secara berulang
selama waktu yang panjang, untuk menetapkan tingkat dosis
yang tidak menimbulkan efek toksik (NOAEL). Uji toksisitas
kronis harus dirancang sedemikian rupa sehingga dapat
diperoleh informasi toksisitas secara umum meliputi efek
 14

neurologi, fisiologi, hematologi, biokimia klinis dan

histopatologi.
3. Uji Toksisitas Subkronik Oral
Uji toksisitas subkronis oral adalah suatu pengujian untuk
mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian sediaan
uji dengan dosis berulang yang diberikan secara oral pada
hewan uji selama sebagian umur hewan, tetapi tidak lebih dari
10% seluruh umur hewan. Tujuan uji toksisitas subkronis oral
adalah untuk memperoleh informasi adanya efek toksik zat yang
tidak terdeteksi pada uji toksisitas akut; informasi kemungkinan
adanya efek toksik setelah pemaparan sediaan uji secara
berulang dalam 28 atau 90 hari; informasi dosis yang tidak
menimbulkan efek toksik (No Observed Adverse Effect Level /
NOAEL); dan mempelajari adanya efek kumulatif dan efek
reversibilitas zat tersebut.
4. Uji Sensitisasi Kulit
Uji sensitisasi kulit adalah suatu pengujian untuk
mengidentifikasi suatu zat yang berpotensi menyebabkan
sensitisasi kulit.
5. Uji Teratogenisitas
Uji teratogenisitas adalah suatu pengujian untuk memperoleh
informasi adanya abnormalitas fetus yang terjadi karena
pemberian sediaan uji selama masa pembentukan organ fetus
(masa organogenesis). Informasi tersebut meliputi abnormalitas
bagian luar fetus (morfologi), jaringan lunak serta kerangka
fetus.
 15

6. Uji Iritasi Akut Dermal

Uji iritasi akut dermal adalah suatu uji pada hewan (kelinci
albino) untuk mendeteksi efek toksik yang muncul setelah
pemaparan sediaan uji pada dermal selama 3 menit sampai 4
jam. Tujuan uji iritasi akut dermal adalah untuk menentukan
adanya efek iritasi pada kulit serta untuk menilai dan
mengevaluasi karakteristik suatu zat apabila terpapar pada kulit
7. Uji Iritasi Mata
Uji iritasi mata adalah suatu uji pada hewan uji (kelinci albino)
untuk mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemaparan
sediaan uji pada mata. Tujuan uji iritasi mata adalah untuk
memperoleh informasi adanya kemungkinan bahaya yang
timbul pada saat sediaan uji terpapar pada mata dan membran
mukosa mata.
8. Uji Toksisitas Akut Dermal
Uji toksisitas akut dermal adalah suatu pengujian untuk
mendeteksi efek toksik yang muncul dalam waktu singkat
setelah pemaparan suatu sediaan uji dalam sekali pemberian
melalui rute dermal. Tujuan uji toksisitas akut dermal adalah
untuk mendeteksi toksisitas intrinsik suatu zat, memperoleh
informasi bahaya setelah pemaparan suatu zat melalui kulit
secara akut dan untuk memperoleh informasi awal yang dapat
digunakan untuk menetapkan tingkat dosis dan merancang uji
toksisitas selanjutnya serta untuk menetapkan nilai LD50 suatu
zat, penentuan penggolongan zat, menetapkan informasi pada
label dan informasi absorbsi pada kulit.
 16

9. Uji Toksisitas Subkronik Dermal

Uji toksisitas subkronis dermal adalah suatu pengujian untuk
mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian sediaan
uji dengan dosis berulang yang diberikan melalui rute dermal
pada hewan uji selama sebagian umur hewan, tetapi tidak lebih
dari 10% seluruh umur hewan. Tujuan uji toksisitas subkronis
dermal adalah untuk mendeteksi efek toksik zat yang belum
terdeteksi pada uji toksisitas akut dermal, mendeteksi efek
toksik setelah pemaparan sediaan uji melalui kulit secara
berulang dalam jangka waktu tertentu, mempelajari adanya efek
kumulatif dan efek reversibilitas setelah pemaparan sediaan uji
melalui kulit secara berulang dalam jangka waktu tertentu.

2.3.2 Metode Uji Toksisitas Akut

Saat ini banyak pedoman pengujian toksisitas akut yang telah
diterbitkan oleh organisasi dan diterima di berbagai negara.
Masingmasing pedoman tentunya memiliki kelebihan dan
keterbatasan yang harus disesuaikan dengan penggunaan dalam
pengujian. Pedoman yang banyak digunakan antara lain :
1. Organization for Economic Co-corperation Development
(OECD)
Pedoman pengujian toksisitas umum yang paling banyak
diterima secara universal adalah yang diterbitkan oleh OECD
dan diterima di banyak negara negara. Panduan ini
dikembangkan untuk penggunaan internasional dan dianggap
memadai untuk evaluasi kebanyakan bahan kimia. Pedoman
OECD secara berkala ditinjau berdasarkan kemajuan ilmiah atau
 17

perubahan praktik penilaian. Pedoman OECD terdiri dari

beberapa jenis yang dapat disesuaikan dengan tujuan penelitian,
antara lain OECD 402 untuk pengujian toksisitas akut dermal,
OECD 412 untuk pengujian toksisitas subakut inhalasi, OECD
413 untuk pengujian toksisitas subkronik inhalasi, OECD 405
untuk pengujian iritasi atau korosi mata subakut, OECD 420,
OECD 423, dan OECD 425 untuk pengujian toksisitas akut oral,
dan lainlain. Adapun perbedaan antara OECD 420, 423, dan 425
adalah OECD 420 pengujian toksisitas akut menggunakan
prosedur dosis tetap yang digunakan untuk bahan-bahan kimia
yang telah diketahui informasi meliputi sifat-sifat fisikokimia,
identita zat, serta struktur kimianya. OECD 423 merupakan uji
toksisitas akut oral menggunakan metode kelas toksik akut dan
digunakan untuk menentukan rentang paparan dimana kematian
hewan uji diharapkan. Sedangkan OECD 425 merupakan uji
toksisitas akut oral dengan prosedur up and down (UDP) dan
digunakan ketika tidak terdapat informasi yang tersedia untuk
mempersiapkan estimasi LD50.
2. Office of Prevention, Pesticides, and Toxic Substance (OPPTS)
870.1000
Pedoman ini merupakan salah satu pedoman tes berseri yang
dikembangkan oleh Office of Prevention, Pesticides, and Toxic
Substance (OPPTS) yang biasa digunakan untuk menguji
pestisida dan zat toksik, serta mengembangkan data tes yang
harus diserahkan kepada agensi untuk di review di bawah
regulasi federal. OPPTS mengembangkan pedoman melalui
proses harmonisasi yang berbaur dengan pedoman pengujian
 18

dan keperluan yang ada pada Office Pollution Prevention and

Toxics (OPPT). Badan ini mempertimbangkan evaluasi
toksisitas pada paparan jangka pendek terhadap bahan kimia dan
menjadi penilaian potensi racunnya pada program regulasi zat
pestisida dan racun. Untuk pestisida, uji toksisitas jangka
pendek terdiri dari toksisitas akut rute oral, dermal, inhalasi,
iritasi kulit dan mata, serta pengujian sensitisasi kulit. Data yang
diperoleh berfungsi sebagai dasar kategori bahaya, pelabelan,
atau kemasan child-resistant. Hal ini digunakan sebagai langkah
awal dalam membangun regimen dosis dalam penelitian
subklinis. Evaluasi data toksisitas akut harus mencakup
hubungan antara pemaparan hewan ke zat uji, kejadian, dan
tingkat keparahan terhadap semua kelainan termasuk kelainan
perilaku dan klinis, reversibilitas kelainan yang diamati, lesi
kasar, perubahan berat badan, efek mortalitas, dan efek toksik
lainnya (EPA, 2002).
3. Food and Drug Administration (FDA)
Pedoman ini dikeluarkan oleh FDA departemen kesehatan dan
pelayanan manusia Amerika pada tahun 2000 dan direvisi pada
tahun 2007. Pedoman ini mencakup pedoman studi toksisitas
secara umum dan secara khusus. Pada pedoman studi toksisitas
spesifik, hal ini mencakup pengujian jangka pendek untuk
toksisitas genetik, pengujian toksisitas akut oral, studi toksisitas
jangka pendek, studi toksisitas subkronik, studi toksisitas
kronik, studi karsinogenik, kombinasi toksisitas kronik dan
karsinogenik, pemaparan fase in utero, studi toksisitas
reproduksi, dan studi nekrotoksisitas. (FDA, 2000)
 19

2.3.3 Lethal Dose 50

Lethal dose 50 atau LD50 adalah dosis perkiraan bahwa ketika
racun itu diberikan langsung kepada hewan uji, menghasilkan
kematian 50% dari populasi di bawah kondisi yang ditentukan dari
tes atau LC50 merupakan konsentrasi perkiraan, dalam lingkungan
hewan yang terpapar, yang akan membunuh 50% dari populasi di
bawah kondisi yang ditentukan dari tes (Hodgson, 2004).
Klasifikasi lazim zat kimia sesuai dengan toksisitas relatifnya
menurut Lu (2002) adalah sebagai berikut:

Tabel 2.1. Klasifikasi Lazim Zat Kimia dengan Toksisitas

Relatifnya
Kategori LD50

5 mg/kg atau
Super toksik
kurang

Amat sangat toksik 5-50 mg/kg

Sangat toksik 50-500 mg/kg

Toksik sedang 0,5-5 g/kg

Toksik ringan 5-15 g/kg

Praktis tidak toksk >15 g/kg

 20

Toksisitas suatu bahan erat kaitannya dengan perubahan sistem

tubuh. Hubungan antara tanda-tanda toksik dengan organ tubuh
atau sistem tubuh menurut Lu (2002) adalah :

Tabel 2.2. Hubungan Tanda-tanda Toksik dengan Organ

Tubuh
Sistem Tanda Ketoksikan

Salivasi, diare, urinasi, piloereksi,

Autonomic
eksoftalmos

Sedasi, gelisah, menatap lurus, kepala

terkulai, depresi berat, mudah

tersinggung,
Perilaku
terengah-engah, agresif, defensif,

ketakutan, kebingungan, aktivitas

aneh

Sensitif terhadap nyeri, refleks

kornea, sensitivitas terhadap suara dan
Sensorik sentuhan,

nistagmus

Neuromuskula Penurunan dan peningkatan aktivitas,

r
 21

tremor, kejang, ataksia, lemas pada

tungkai, kematian

Meningkatkan dan menurunkan

denyut
kardiovaskular
jantung, sianosis, vasokonstriksi,

vasodilatasi, pendarahan

Miosis, ptosis, nistagmus, refleks

Ocular
cahaya pada pupil

Faktor-faktor yang berpengaruh pada LD50 sangat bervariasi antara

jenis yang satu dengan jenis yang lain dan antara individu yang satu
dengan individu yang lain dalam satu jenis. Beberapa faktor
tersebut antara lain (Retnomurti, 2008):
1. Spesies, strain dan keragaman individu
Setiap spesies dan strain yang berbeda memiliki sistem
metabolisme dan detoksikasi yang berbeda. Setiap spesies
mempunyai perbedaan kemampuan bioaktivasi dan toksikasi
suatu zat.
2. Umur
Hewan-hewan yang lebih muda memiliki kepekaan yang lebih
tinggi terhadap obat karena enzim untuk biotransformasi masih
kurang dan fungsi ginjal belum sempurna. Pada hewan yang tua
 22

kepekaan individu meningkat karena fungsi biotransformasi dan

ekskresi sudah menurun.
3. Perbedaan jenis kelamin
Perbedaan jenis kelamin mempengaruhi toksisitas akut yang
disebabkan oleh pengaruh langsung dari kelenjar endokrin.
Hewan betina mempunyai sistem hormonal yang berbeda
dengan hewan jantan sehingga menyebabkan perbedaan
kepekaan terhadap suatu toksikan.
4. Cara pemberian
Lethal dosis juga dapat dipengaruhi oleh cara pemberian.
Pemberian obat peroral tidak langsung didistribusikan ke
seluruh tubuh. Pemberian obat atau toksikan peroral
didistribusikan ke seluruh tubuh setelah terjadi penyerapan di
saluran cerna sehingga mempengaruhi kecepatan metabolisme
suatu zat di dalam tubuh.
5. Berat badan
Penentuan dosis dalam pengujian toksisitas akut dapat
didasarkan pada berat badan. Pada spesies yang sama, berat
badan yang berbeda dapat memberikan nilai LD50 yang berbeda
pula, semakin besar berat badan maka jumlah dosis yang
diberikan semakin besar.
6. Faktor lingkungan
Beberapa faktor lingkungan yang mempengaruhi toksisitas akut
antara lain temperatur, kelembaban, iklim, perbedaan siang dan
malam. Perbedaan temperatur suatu tempat akan mempengaruhi
keadaan fisiologis suatu hewan.
 23

7. Kesehatan hewan
Status hewan dapat memberikan respon yang berbeda terhadap
suatu toksikan. Kesehatan hewan sangat dipengaruhi oleh
kondisi hewan dan lingkungan. Hewan yang tidak sehat dapat
memberikan nilai LD50 yang berbeda dibandingkan dengan
nilai LD50 yang didapatkan dari hewan sehat.
 24

Bab III Metode Penelitian

Penelitian ini merupakan pernelitian eksperimental laboratorik.

Penelitian ini merupakan percobaan untuk menguji toksisitas akut
dari jamur magic. Selanjutnya dilakukan skrining fitokimia dari
simplisia ekstrak jamur magic yang bertujuan untuk mengetahui
senyawa-senyawa yang terkandung di dalam sampel. Skrining
fitokimia yang dilakukan meliputi alkaloid, flavonoid, saponin,
tanin, kuinon, terpenoid, dan steroid. Penetapan karakterisasi
simplisia juga dilakukan meliputi penetapan kadar sari larut air,
penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar air dan penetapan
kadar abu total. Ekstraksi simplisia dilakukan dengan metode
maserasi dengan menggunakan pelarut etil asetat.

Metode yang digunakan pada pengujian toksisitas akut jamur magic

mengacu pada pedoman pengujian toksisitas akut OECD 423 metode
kelas toksik akut dengan menggunakan hewan uji berupa tikus
jantan. Pengujian dilakukan secara bertingkat dimulai dengan dosis
awal 5 mg/kg BB yang diberikan secara oral. tikus diamati pada 24
jam pertama untuk diamati tanda-tanda ketoksikannya. Selanjutnya,
tikus diamati perilaku dan kematiannya setiap hari selama 14 hari
sebagai parameter ketoksikan. Adapun parameter ketoksikan yang
diamati adalah berat badan, grooming, piloereksi, tremor, konvulsi,
gripping strength, refleks pinna, refleks kornea, refleks pupil,
salivasi, urinasi, lakrimasi, katalepsi, fleksi, menggelantung,
stereotif, straub, ptosis, righting reflex, jentik ekor, rasa ingin tahu,
dan kematian. tikus yang mengalami kematian selanjutnya dilakukan
 25

histopatologi terhadap organ hati dan ginjalnya. Dari hasil

pengamatan akan didapatkan rentang dosis ekstrak jamur magic yang
dapat menyebabkan kematian.
Adapun cara pengujian pada setiap parameter yang diamati :

Tabel 3.1 Parameter yang Diamati

No Parameter Cara Pengujian

1 Berat Badan Tikus ditimbang setiap harinya

dengan menggunakan timbangan

digital

2 Grooming Tikus diamati perilaku menjilat

bulunya dan menggosokkan kaki

depannya ke kepala.

3 Piloereksi Tikus diamati terhadap adanya

bulubul yang berdiri pada sekitar
tengkuk

4 Tremor Tikus diamati terhadap adanya

gemetaran pada tubuh

5 Konvulsi Tikus diamati terhadap adanya

 26

kejang

6 Gripping Strength Tikus diamati berapa lama dapat

bertahan pada ram kawat yang

diposisikan terbalik tanpa jatuh

7 Refleks Pinna Tikus diamati terhadap refleks

yang timbul saat telinga bagian
dalamnya disentuh dengan benda
halus

8 Refleks Kornea Tikus diamati terhadap refleks

yang timbul saat bola matanya
disentuh dengan benda halus

9 Refleks Pupil Tikus diamati terhadap

perubahan diameter pupil saat
bola matanya diberikan stimulus
cahaya maupun tidak

10 Salivasi Tikus diamati terhadap adanya

salivasi

11 Urinasi Tikus diamati terhadap adanya

urin dengan menggunakan kertas
saring yang telah diberikan
metilen blue. tikus yang urinasi
 27

akan meninggalkan noda

berwarna biru pada kertas saring

12 Lakrimasi Tikus diamati terhadap adanya

air mata

13 katalepsi Tikus diamati terhadap posisi

terdiam selama beberapa saat
dengan menggunakan batang
silinder yang ditempatkan pada
kaki depannya.

14 Fleksi Tikus diamati terhadap gerakan

menarik kaki saat diberi stimulus
nyeri dengan cara dijepit pada
bagian telapak kaki belakang

15 Menggelantung Tikus diamati terhadap

kemampuannya menggantung
pada sebuah tali dan usaha untuk
mempertahankan posisinya

16 Stereotif Tikus diamati terhadap adanya

gerakan berulang seperti
berputarberputar atau jungkir-
balik secara berulang

17 Straub Tikus diamati terhadap adanya

 28

kondisi ekor berdiri

18 Ptosis Tikus diamati terhadap adanya

kondisi turunnya kelopak mata
bagian atas

19 Righting reflex Tikus diamati terhadap

kemampuannya untuk
mempertahankan posisinya
setelah tikus diposisikan secara
terlentang

20 Jentik Ekor Tikus diamati terhadap adanya

respon menjentikkan ekor saat
ekor tikus dimasukkan ke dalam
air hangat

21 Rasa ingin ttahu Tikus diamati terhadap adanya

respon menjengukkan kepalanya

22 Kematian Tikus diamati terhadap adanya

kematian
 29

Bab IV Alat Dan Bahan

4.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang tikus,
waterbath, spatel, gelas beaker, batang pengaduk, timbangan analitik,
cawan penguap, sonde oral, spuit injeksi, kertas saring, pipet tetes,
rotary evaporator.

4.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak jamur
magic

4.3 Hewan percobaan

Hewan yang digunakan dalam penelitian ini berupa tikus jantan yang
sehat dan memiliki aktivitas normal.
 Bab V Prosedur Penelitan

5.1. Pengumpulan dan Determinasi Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah jamur magic yang
diperoleh dari Cigagak, Bandung.. Determinasi tanaman dilakukan di
Institut Teknologi Bandung (ITB).

5.2 Pengolahan Bahan

Pengolahan bahan meliputi sortasi basah, pencucian, pengeringan,
sortasi kering, dan penyimpanan.
1. Sortasi Basah
Sortasi basah dilakukan utuk memisahkan kotoran-kotoran dan
bahan-bahan asing lainnya dari bahan jamur magic.
2. Pencucian
Proses pencucian bertujuan untuk menghilangkan tanah, ataupun
pengotor yang melekat pada simplisia. Pencucian dilakukan
menggunakan air bersih yang mengalir.
3. Pengeringan
Metode pengeringan yang dilakukan berupa pengeringan dengan
menggunakan oven pada suhu 40◦C±2ᵒC (Ruksiriwanich et al.,
2014). Hal ini bertujuan untuk memperoleh simplisia yang tidak
mudah rusak sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih
lama dengan cara mengurangi kadar air melalui proses
pengeringan.
 31

4. Sortasi Kering
Bertujuan untuk memisahkan benda-benda asing seperti bagian-
bagian pada jamur yang tidak diinginkan serta pengotor sisa yang
masih tertinggal pada jamur.
5. Penyimpanan
Jamur yang sudah dikeringkan ditempatkan dalam satu wadah
tersendiri yang bersih dan sesuai dengan sifat simplisia sehingga
tidak berpengaruh terhadap kandungan zat yang terdapat pada
simplisia.

5.3 Pembuatan Ekstrak

Ekstraksi alkaloid dilakukan dengan cara 100 mL asam asetat 10%
dituangkan ke 10 g simplisia magic mushroom, disonikasi selama 10
menit, 100 mL air deionisasi dituangkan dan campuran itu ditumbuk
halus. Supernatan dinetralkan dengan menambahkan natrium
bikarbonat setelah mentransfer campuran ke dalam tabung reaksi dan
sentrifugasi selama 3 menit. Jumlah kloroform yang sama
ditambahkan untuk mengekstraksi larutan. Kemudian, lapisan
kloroform dikumpulkan dan dikeringkan di bawah vakum

5.4 Karakterisasi Sampel

Berdasarkan Farmakope Herbal Indonesia (2013), karakterisasi
ekstrak dapat dilakukan sebagai berikut:
1. Penetapan Kadar Air
Bersihkan tabung penerima dan pendingin dengan asam pencuci,
bilas dengan air, kemudian keringkan dalam lemari pengering.
Timbang seksama sejumlah bahan yang diperkirakan
 32

mengandung 1-4 mL air, masukkan ke dalam labu kering.

Tambahkan batu didih secukupnya untuk mengurangi gejolak
saat mendidih. Masukkan lebih kurang 200 mL toluen jenuh air
ke dalam labu, pasang rangkaian alat. Masukkan toluen jenuh air
ke dalam tabung penerima melalui pendingin sampai leher alat
penampung. Panaskan labu dengan hati-hati selama 15 menit.

Setelah toluen mendidih, atur penyulingan dengan kecepatan

lebih kurang dua tetes tiap detik, hingga sebagian besar air
tersuling, kemudian naikkan kecepatan penyulingan hingga
empat tetes tiap detik. Setelah semua air tersuling, bagian dalam
pendingin dicuci dengan toluen jenuh air, sambil dibersihkan
dengan sikat tabung yang disambungkan pada sebuah kawat
tembaga dan telah dibasahi dengan toluen jenuh air. Lanjutkan
penyulingan selama 5 menit. Dinginkan tabung penerima hingga
suhu ruang. Jika ada tetes air yang melekat, gosok tabung
pendingin dan tabung penerima dengan karet yang diikatkan pada
sebuah kawat tembaga dan dibasahi dengan toluen jenuh air
hingga tetesan air turun. Baca volume air setelah air dan toluen
memisah sempurna. Kadar air dinyatakan dalam persen dengan
rumus :
Kadar air (%) = (𝑛1−𝑛𝑤) x 100%
Keterangan :
w = berat zat uji dalam gram.
n = volume destilasi pertama atau volume air setelah penyulingan
dalam mL.
n1 = volume destilasi kedua atau volume total air dalam mL.
 33

2. Penetapan Kadar Abu Total

Penetapan kadar abu dilakukan dengan cara menimbang secara
saksama 2-3 gram bahan uji yang telah dihaluskan dan masukkan
ke dalam krus silikat yang telah dipijar dan ditara, pijarkan
perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan dan timbang. Jika
dengan cara tersebut arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan
air panas, aduk, saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan
kertas saring beserta sisa penyaringan dalam krus yang sama.
Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan dan pijarkan hingga
bobot tetap. Kadar abu total dihitung terhadap berat bahan uji,
dinyatakan dalam % b/b.
Kadar abu total dinyatakan dengan rumus :
Berat abu sisa pijar
Kadar abutotal= ×100 %
Berat simplisia
3. Penetapan kadar sari larut etanol
Timbang seksama lebih kurang 5 g serbuk yang telah dikeringkan
di udara. Masukkan ke dalam labu bersumbat, tambahkan 100
mL etanol, kocok berkali-kali selama 6 jam pertama, biarkan
selama 18 jam. Saring cepat untuk menghindarkan penguapan
etanol, uapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal
beralas datar yang telah dipanaskan 105°C dan ditara, panaskan
sisa pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Hitung kadar dalam %
sari larut etanol.
Rumus :
berat ekstrak ×5
Kadar sari larut etanol= × 100%
berat simplisia
 34

4. Penetapan kadar sari larut air

Timbang seksama lebih kurang 5 g serbuk yang telah dikeringkan
di udara. Masukkan ke dalam labu bersumbat, tambahkan 100
mL air jenuh kloroform, kocok berkali-kali selama 6 jam
pertama, biarkan selama 18 jam. Saring, uapkan 20 mL filtrat
hingga kering dalam cawan dangkal beralas datar yang telah
dipanaskan 105°C dan ditara, panaskan sisa pada suhu 105°C
hingga bobot tetap. Hitung kadar dalam % sari larut air.
Rumus :
berat ekstrak ×5
Kadar sari larut etanol= × 100 %
berat simplisia

5.5 Skrining Fitokimia

Skrining atau penapisan fitokimia pada jamur magic meliputi
identifikasi alkaloid, kuinon, tanin, flavonoid, saponin dan steroid
atau terpenoid (Harbone, 1987) :
1. Identifikasi Alkaloid
Simplisia ditimbang 500 mg, kemudian dibasakan dengan 1 mL
amoniak pekat digerus dengan 5 mL kloroform dan saring. Filtrat
kemudian dikocok dengan asam klorida 3 N. tambahkan 1 mL
pereaksi Mayer, apabila terjadi endapan putih sampai kuning
menandakan adanya alkaloid.
2. Identifikasi Saponin
500 serbuk simplisia yang akan diperiksa dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, kemudian ditambahkan 10 mL air panas,
 35

didinginkan dan dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuk

buih yang stabil selama tidak kurang 10 menit setinggi 1-10 cm.
Tambahkan 1 tetes asam klorida, jika buih tidak hilang
menandakan adanya saponin.
3. Identifikasi Tanin
Serbuk simplisia ditimbang 500 mg, kemudian ditambahkan 50
mL air suling, didihkan selama 15 menit, lalu didinginkan. 5 mL
filtrate dipindahkan kedalam tabung reaksi. Kemudian pereaksi
besi (III) klorida 1% diteteskan, jika terjadi perubahan warna
hitam kehijauan menunjukkan adanya golongan senyawa tanin.
4. Identifikasi Flavonoid
Simplisia ditimbang 500 mg kemudian ditambahkan 50 mL air
panas, didihkan selama 5 menit kemudian disaring. Etanol 5%
dalam HCl dan amil alkohol ditambahkan, kemudian dikocok,
bila terjadi warna kuning, jingga atau merah pada lapisan amil
alkohol menunjukkan adanya golongan senyawa flavonoid.
5. Identifikasi Kuinon
Serbuk simplisia ditimbang 500 mg, kemudian ditambahkan 50
mL air panas, didihkan selama 5 menit, 3 tetes dipindahkan pada
kaca arloji, kemudian larutan NaOH 0,1 N diteteskan. Bila terjadi
warna merah menunjukkan adanya senyawa kuinon.
6. Identifikasi Steroid dan Triterpenoid
Serbuk simplisia ditimbang 500 mg, kemudian ditambahkan 20
mL eter, dimaserasi selama 2 jam. 3 tetes filtrat dipindahkan pada
kaca arloji, kemudian pereaksi Lieberman-Burchard (campuran
asetat anhidrat dan asam sulfat pekat) diteteskan. Bila terjadi
 36

warna hijau atau merah menunjukkan adanya golongan senyawa

steroid atau triterpenoid.

5.6 Penyiapan Hewan Uji

Tikus diadaptasikan selama 14 hari di kandang yang baik, diberi
makan normal dan minum yang cukup. Kondisi kandang yang baik
meliputi : ukuran kandang cukup besar dengan 5 ekor tikus pada
setiap kandang. Ventilasi tutup dari kawat, sehingga tidak pengap
dan tidak panas. Blower selalu dalam keadaan menyala agar aliran
udara selalu terjaga di setiap ruangan. Alas kandang menggunakan
sekam padi bersih yang diganti setiap 2 hari sekali. Di dalam 1
kandang terdapat botol minum khusus berukuran 500 mL. Kandang
hewan ditempatkan jauh dari keramaian, tidak panas dan aman dari
jangkauan predator. Proses adaptasi ini bertujuan untuk
menyesuaikan hewan uji dengan lingkungan penelitian

5.7 Pembuatan Larutan Uji

Pembuatan larutan uji ekstrak etanol jamur magic adalah sebagai
berikut, dilakukan dengan menggunakan dosis yaitu dosis 300,
2000, 5000, 8000 dan 16000 mg/kg BB. Pembuatan dilakukan
dengan menimbang jamur magic sejumlah dosis tersebut dan
disuspensikan kedalam larutan Na-CMC 0,5%.

5.8 Metode Pengujian OECD

Pengujian toksisitas akut jamur magic dilakukan selama 14 hari pada
setiap kelompok uji. Adapun kelompok yang digunakan adalah
kelompok normal, kelompok dosis 300, 2000, 5000, 8000, dan
 37

16000 mg/kg BB. Pembuatan larutan ekstrak jamur magic dilakukan

dengan melarutkan sejumlah ekstrak jamur magic dalam larutan Na-
CMC 0,5% untuk selanjutnya diberikan secara peroral kepada tikus.
Pemberian larutan ekstrak jamur magic kepada tikus dilakukan
dengan maksimal volume pemberian 4 mL pada setiap ekor tikus.
Setelah dilakukan pemberian larutan ekstrak jamur magic, tikus
diamati secara intensif pada 4 jam pertama untuk mengetahui efek
toksik akut yang timbul. Hal-hal yang diamati menurut parameter
ketoksikan antara lain berat badan, grooming, piloereksi, tremor,
konvulsi, gripping strength, refleks pinna, refleks kornea, refleks
pupil, salivasi, urinasi, lakrimasi, katalepsi, fleksi, menggelantung,
stereotif, straub, ptosis, righting reflex, jentik ekor, rasa ingin tahu,
dan kematian. Setiap parameter diberikan skor dari 1-4 untuk melihat
kondisi perubahan yang terjadi pada tikus.
 38

5.9 Bagan Alur OECD 423

5.1
0 Penentuan Ld50
Sebelum mendapat perlakuan, 20 ekor tikus jantan sehat dengan
berat badan 200-250 gram, mengalami masa adaptasi dan diberi
pakan standard dan minum selama 7 hari secara ad libitum.
 39

Pada penelitian ini, 30 ekor tikus jantan dibagi dalam 6 kelompok

perlakuan yang masing – masing terdiri dari 5 ekor tikus yang
ditentukan secara acak. Lima kelompok perlakuan tersebut adalah :
1. Kelompok kontrol : Tidak diberikan ekstrak
2. Kelompok Perlakuan 1 (P1) : diberi 300 mg/kgBB ekstrak
3. Kelompok Perlakuan 2 (P2) : diberi 2000mg/kgBB ekstrak
4. Kelompok Perlakuan 3 (P3) : diberi 5000mg/kgBB ekstrak
5. Kelompok Perlakuan 4 (P4) : diberi 8000mg/kgBB ekstrak
6. Kelompok Perlakuan 4 (P5) : diberi 16000mg/kgBB ekstrak
Pemberian ekstrak magic pada tikus jantan dilakukan melalui oral
dan hanya diberikan satu kali, yaitu pada hari ke- 8.
 40

5.11 Alur Penentuan Ld50

Skema alur penentuan LD50 ekastrak magic mushroom (psilocybe
cubensis) terhadap tikus jantan.
 41

Keterangan :
K : kontrol negatif ( tikus jantan + aquadest ), terus selama 7 hari
P1: tikus jantan + ekstrak Jamur magic dengan dosis 300 mg/kgBB
P2: tikus jantan + ekstrak Jamur magic dengan dosis 3000 mg/kgBB
P3: tikus jantan + ekstrak Jamur magic dengan dosis 5000 mg/kgBB
P4: tikus jantan + ekstrak Jamur magic dengan dosis 8000 mg/kgBB
P5:tikus jantan + ekstrak Jamur magic dengan dosis 16000 mg/kgBB
 Bab VI Hasil dan Pembahasan

6.1 Pengumpulan dan Pengelolaan Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah jamur Magic
yang didapatkan dari Cigagak, Bandung.Jamur Magic segar
dilakukan sortasi basah untuk memisahkan jamur dari kotoran-
kotoran atau bahan asing yang menempel. Selanjutnya jamur Magic
dilakukan pencucian untuk membersihkan kotoran. Jamur Magic
selanjutnya dirajang untuk memperkecil ukuran dan mempermudah
proses pengeringan. Proses pengeringan dilakukan dengan
menggunakan oven. Setelah proses pengeringan, selanjutnya
dilakukan sortasi kering untuk memisahkan simplisia dari benda-
benda asing yang tidak diinginkan. Hasil pengeringan dari simplisia
jamur magic di lakukan pembuatan ekstrak dari simplisisa.

6.2 Determinasi Bahan

Sebagai bahan uji, jamur Magic perlu dilakukan determinasi
tanaman untuk mengidentifikasi dan memastikan kebenaran dari
bahan uji. Determinasi tanaman dilakukan di Pusat Konservasi
Tanaman Kebun Raya LIPI Bogor. Dari hasil determinasi tanaman,
menunjukkan bahwa bahan uji yang digunakan adalah benar jamur
Magic(Pilocybe Cubensis) Hasil determinasi tanaman dapat dilihat
pada lampiran.

6.3 Uji Karakterisasi Simplisia

Uji karakterisasi simplisia bertujuan untuk mengetahui kualitas/mutu
simplisia yang digunakan. Karakterisasi simplisia dilakukan terhadap
 43

kadar sari larut dalam air, kadar sari larut dalam etanol, kadar abu
total, dan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam. Hasil dari
karakterisasi simplisia dapat dilihat pada tabel 6.1

Tabel 6.1 Hasil karakterisasi simplisia magic mushroom

(Psilocybe cubensis (Early) Singer).

No Jenis uji Hasil uji (%)

1 Kadar sari larut dalam air 22,38

2 Kadar sari larut dalam etanol 7,63

3 Kadar abu total 9,55

4 Kadar abu tidak larut dalam asam 4,61

Uji kadar sari larut dalam air dan kadar sari larut dalam etanol
bertujuan untuk menentukan jumlah senyawa aktif yang terekstraksi
dalam pelarut dari sejumlah serbuk simplisia magic mushroom. Dari
hasil diatas didapatkan hasilnya yaitu 22,38 untuk kadar sari larut air
dan 7,63 untuk kadar sari larut etanol, hal ini menunjukkan bahwa
senyawa yang terkandung dalam simplisia magic mushroom lebih
larut dalam etanol dibandingkan dengan air.

Uji kadar abu total dan uji kadar abu tidak larut dalam asam
bertujuan untuk mengetahui mineral dan cemaran anorganik
(Sudarmadji, 1986). Besar kadar abu total dalam ekstrak magic
mushroom mengindikasikan bahwa diperolehnya ekstrak yang
 44

mengandung banyak atau sedikitnya mineral. Berdasarkan tabel 6.1

kadar abu total sebanyak 9,55. Adanya kandungan abu yang tidak
larut dalam asam yang rendah menunjukkan adanya pasir atau
kotoran yang lain dalam kadar rendah.
6.4 Uji Skrining Fitokimia

Tabel 6.1 Hasil Skrining Fitokimia magic mushrooom

No Golongan senyawa Hasil

1 Alkaloid +

2 Flavonoid -

3 Saponin -

4 Tanin -

5 Kuinon -

Keterangan :
+ = Terdeteksi ; - = Tidak terdeteksi
Berdasarkan tabel 6.2 menunjukkan adanya golongan alkaloid pada
ekstrak.

6.5 Pengujian Toksisitas Akut pada Tikus

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah Tikus jantan
dengan berat badan 150-250 gram sebanyak 5 ekor pada setiap
kelompok uji. Data yang telah diperoleh kemudian dianalisis dengan
menggunakan One Way ANOVA. Tidak semua parameter dapat
 45

dianalisis secara statistika, oleh karena itu, hanya beberapa parameter

yang digunakan dalam pengujian statistika. Parameter tersebut antara
lain berat badan, Grooming, gripping strength, ptosis, katalepsi,
menggelantung, dan rasa ingin tahu.
 46

Tabel 6.3 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Grooming
5000 0 1* 1* 0* 0* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8000 0 1* 0* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
16000 0 1* 1* 0* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
 47

Keterangan:
Grooming : 0= Tidak ada aktifitas; 1= Sebentar; 2= Sedang; 3=
Lama; 4= Sangat lama *= Perbedaan bermakna dengan kelompok
normal

Dari hasil pengujian, dapat terlihat bahwa pada parameter grooming,

tikus mengalami perilaku menggosokan kakinya kedepan seiring
dengan bertambahnya dosis di karenakan ada rasa tidak nyaman
pada tikus tersebut. Hal ini berarti semakin tinggi dosis jamur magic
yang diberikan kepada tikus, maka semakin terlihat aktifitas
grooming setelah pemberian larutan ekstrak. Namun, hal ini hanya
terjadi hingga menit ke 240. Setelah menit ke 240, aktifitas
groomingnya tidak terlihat dan menjadi normal kembali. Hal ini
terjadi pada pemberian ekstrak jamur magic dosis tinggi yaitu pada
dosis 5000, 8000, dan 16000 mg/kg BB. Dari hasil analisis dengan
menggunakan ANOVA, pada menit ke 30 hingga 240 terdapat
perbedaan pada antar kelompok uji. Hal ini dibuktikan dengan
signifikansi yang bernilai < 0.05.
 48

Tabel 6.4 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
300 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
2000 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
Gripping Strength
5000 4 3* 3* 3* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
8000 4 3* 3* 3* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
16000 4 2* 2* 3* 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
 49

Keterangan:
Gripping Strength : 1= Cepat; 2= Sedang; 3= Lama; 4= Sangat lama
*= Perbedaan bermakna dengan kelompok normal

Pengujian selanjutnya, dapat terlihat bahwa pada parameter gripping

strength, tikus cenderung mengalami penurunan kekuatan
cengkraman seiring dengan bertambahnya dosis di karenakan
kekuatan otot cengkramannya melamah. Hal ini berarti semakin
tinggi dosis jamur magic yang diberikan kepada tikus, maka semakin
lemah pula kekuatan cengkraman yang tikus setelah pemberian
larutan ekstrak. Namun, hal ini hanya terjadi hingga menit ke 240.
Setelah menit ke 240, kekuatan cengkraman tikus menjadi normal.
Hal ini terjadi pada pemberian ekstrak jamur magic dosis tinggi yaitu
pada dosis 5000, 8000, dan 16000 mg/kg bb. Hasil analisis statistika,
kemampuan penurunan Gripping strength ini relatif tidak berbeda
antar kelompok. Hal ini dapat dibuktikan dari signifikansi pada tikus
ke 30 hingga menit ke 240 yang cenderung memiliki signifikansi <
0.05 meski pada menit ke 240 signifikansi bernilai > 0.05.
 50

Tabel 6.5 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
300 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
2000 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
Menggelantung
5000 4 3* 3* 3* 4* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
8000 4 3* 3* 3* 3* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
16000 4 3* 3* 3* 3* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
 51

Keterangan:
Menggelantung : 1= Cepat; 2= Sedang; 3= Lama; 4= Sangat lama *=
Perbedaan bermakna dengan kelompok normal

Hal yang sama terjadi pada parameter mengelantung, pada

pemberian dosis tinggi akan menurunkan kemampuan tikus untuk
menggantung pada sebuah tali dan mempertahankan posisinya. Di
diduga efek dari ekstrak jamur magic menurunkan aktifutas system
autonomic. Penurunan kemampuan ini terjadi pada dosis 5000 mg/kg
BB, 8000 mg/kg BB dan selanjutnya dosis 16000 mg/kg BB. Pada
ketiga dosis ini, tikus cenderung menjadi lebih lemas segera setelah
pemberian larutan uji, sehingga kerap kali tikus terjatuh pada saat
pengujian parameter ini. Seperti pada parameter gripping strength,
tikus kembali normal dan mampu menggelantung pada tali kembali
dalam 24 jam. Menurut analisis statistika, kemampuan penurunan
gelantung ini relatif berbeda antar kelompok. Hal ini dapat
dibuktikan dari signifikansi pada menit ke 30 hingga menit ke 240
yang cenderung memilik signifikansi bernilai < 0.05.
 52

Tabel 6.6 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
300 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
2000 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
Rasa Ingin Tahu
5000 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
8000 4 3* 3* 3* 3* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
16000 4 2* 1* 2* 2* 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
 53

Keterangan:
Rasa ingin tahu : 1= Sedikit; 2= Sedang; 3= Sering; 4= Sangat sering
*= Perbedaan bermakna dengan kelompok normal

Setelah pemberian larutan ekstrak jamur magic, terdapat penurunan

aktivitas jengukan kepala pada pemberian dosis 8000 dan 16000
mg/kg BB. Hal ini berlangsung pada menit ke 30 hingga menit ke
240. Setelah 24 jam, tikus kembali aktif menjengukkan kepala saat
diletakkan pada ketinggian hingga pada hari ke 14. Dari hasil
analisis menggunakan statistika, terdapat perbedaan antar kelompok
uji pada aktivitas rasa ingin tahu tikus. Hal ini terjadi pada menit ke
30 hingga 24jam yang dibuktikan dari nilai signifikansi < 0,05
 54

Tabel 6.7 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ptosis
5000 0 1* 0* 0* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8000 0 2* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
16000 0 2* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
 55

Keterangan:
Ptosis : Kelopak mata atas 0=Tidak ada aktifitas; 1= Agak turun; 2=
Sedang; 3= Turun; 4= Sangat Turun (Menutup) *= Perbedaan
bermakna dengan kelompok normal

Berbeda dengan kedua parameter sebelumnya, parameter ptosis

cenderung mengalami kenaikan aktifitas pada pemberian dosis
tinggi. Diduga efek dari ekstrak jamur magic mempengaruhi saraf
ocular. Kenaikan intensitas Ptosis terjadi pada dosis 5000 mg/kg BB
dan 16000 mg/kg BB selama rentang waktu menit ke 30 hingga
menit ke 60. Pada menit ke 240, dosis 5000 mg/kg BB sudah mulai
normal. Dari hasil analisis menggunakan statistika, terdapat
perbedaan antar kelompok uji pada aktivitas ptosis. Hal ini terjadi
pada menit ke 30 hingga 60 menit yang dibuktikan dari nilai
signifikansi <0,05.
 56

Tabel 6.8. Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter Kelompok 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Hari 8 Hari 9 Hari 10 Hari 11 Hari 12 Hari 13 Hari 14 Hari

Normal 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Katalepsi
5000 0 1* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
8000 0 1* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
16000 0 1* 1* 1* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
 57

Keterangan:
Katalepsi : 0= Tiadak ada aktifitas; 1= Cepat; 2=Sedang; 3= Lama;
4= Sangat lama *= Perbedaan bermakna dengan kelompok normal

Selanjutnya pada parameter katalepsi atau posisi terdiam selama

beberapa saat akibat adanya kekakuan otot. Seperti halnya grooming
dan Ptosis, pemberian larutan ekstrak jamur magic dosis tinggi
menyebabkan timbulnya kondisi katalepsi pada tikus. Adanya
kondisi katalepsi dapat terlihat mulai dosis ke 5000 mg/kg BB
hingga 16000 mg/kg BB. Katalepsi terjadi pada menit ke 30 dan
kembali normal pada jam ke 24. Secara statistika, terdapat perbedaan
antar kelompok uji dalam pengujian katalepsi. Hal ini dibuktikan
dari signifikansi dari pengujian katalepsi memiliki nilai signifikansi
< 0.05.
 58

Tabel 6.9 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam

Diare Normal 0 0 0 0 0 0
Diare 500mg 0 0 0 0 0 0
Diare 2000mg 0 0 0 0 0 0
Diare 5000mg 0 1* 1* 1* 0 0
Diare 8000mg 0 2* 1* 1* 0 0
Diare 16000mg 0 2* 2* 1* 0 0
 59

Keterangan :
Feses (Diare) : 0= Tidak ada aktifitas; 1= Normal; 2= Keras lembek;
3= Berair, Masa masih berbentuk; 4= Berair masa tidak berbentuk.
*= Perbedaan bermakna dengan kelompok normal

Pada parameter Diare mengalami kenaikan aktifitas pada pemberian

dosis tinggi, diduga efek dari ekstrak jaur magic mempengaruhi saraf
autonomic. Kenaikan intensitas Diare terjadi pada dosis 5000 mg/kg
BB, 8000 mg/kg BB dan 16000 mg/kg BB selama rentang waktu
menit ke 30 hingga menit ke 120. Pada menit ke 240 sudah mulai
normal. Dari hasil analisis menggunakan statistika, terdapat
perbedaan antar kelompok uji pada aktivitas ptosis. Hal ini terjadi
pada menit ke 30 hingga 120 menit yang dibuktikan dari nilai
signifikansi < 0,05.
 60

Tabel 6.10 Hasil Pengamatan Terhadap Parameter Toksisitas

Parameter 0 Menit 30 Menit 60 Menit 120 Menit 240 Menit 24 jam

Ptosis Normal 0 0 0 0 0 0
Ptosis 500mg 0 0 0 0 0 0
Ptosis 2000mg 0 0 0 0 0 0
Ptosis 5000mg 0 1* 0* 0 0 0
Ptosis 8000mg 0 1* 1* 0 0 0
Ptosis 16000mg 0 2* 1* 0 0 0
 61

Keterangan :
Ptosis : Kelopak mata atas 0=Tidak ada aktifitas; 1= Agak turun; 2=
Sedang; 3= Turun; 4= Sangat Turun (Menutup). *= Perbedaan
bermakna dengan kelompok normal

Selanjutnya pada parameter ptosis cenderung mengalami kenaikan

aktifitas pada pemberian dosis tinggi. Kenaikan Ptosis terjadi pada
dosis 5000 mg/kg BB dan 16000 mg/kg BB selama rentang waktu
menit ke 30 hingga menit ke 60. Pada menit ke 60, dosis 5000 mg/kg
BB sudah mulai normal dan menit 120 untuk dosis 8000 mg dan
16000mg sudah kembali normal. Dari hasil analisis menggunakan
statistika, terdapat perbedaan antar kelompok uji pada aktivitas
ptosis. Hal ini terjadi pada menit ke 30 hingga 60 menit yang
dibuktikan dari nilai signifikansi < 0,05

Selama pengujian berlangsung, tidak ada satu ekorpun hewan uji

yang mengalami kematian di mana kematian merupakan salah satu
parameter terpenting dalam pengujian toksisitas akut. Kematian
mengindikasikan adanya zat toksik yang dapat merusak organ-organ
vital pada manusia terutama hati dan ginjal. Dengan tidak adanya
kematian, maka histopatologi hati dan ginjal tidak dilakukan dalam
pengujian ini.

Dari keseluruhan pengujian, tikus pada pemberian larutan ekstrak

dosis tinggi cenderung memiliki perubahan aktivitas dan kondisi
apabila dibandingkan dengan kelompok normal. Hal ini dapat
dibuktikan dari pengujian lanjutan ANOVA di mana signifikansi
kelompok normal terhadap kelompok dosis tinggi adalah <0.05 yang
 62

artinya H1 diterima atau terdapat perbedaan bermakna pada

parameter-parameter tertentu.

Tidak adanya kematian pada seluruh kelompok tikus berarti jamur

magic aman dikonsumsi sebagai obat herbal. Meski demikian,
adanya perubahan pada tikus yang meliputi grooming dan ptosis,
serta perubahan pada gripping strength, rasa ingin tahu,
menggelantung, dan katalepsi menunjukkan adanya pengaruh jamur
magic pada sistem saraf otonom. Dalam metode OECD, tidak
adanya kematian pada dosis 5000 mg/kg BB berarti jamur magic
tidak terklasifikasikan sebagai zat toksik. Begitu pula menurut Lu
(2000), bahwa zat dengan LD > 15 gram/kg BB diklasifikasikan
praktis tidak toksik.
 BAB VII Kesimpulan dan Saran

7.1. Kesimpulan
Dari hasil penelitian yang diperoleh, didapatkan kesimpulan :
1. Ekstrak jamur magic tidak memiliki efek toksik pada pengujian
toksisitas akut terhadap tikus jantan
2. LD50 ekstrak jamur magic yang diberikan secara peroral pada
tikus jantan yaitu lebih dari 16000 mg/kg BB dan berarti jamur
magic diklasifikasikan sebagai bahan herbal yang praktis tidak
toksik. Namun, dari data yang dieproleh, ekstrak jamur magic
yang diberikan dalam dosis tinggi dapat mempengaruhi sistem
saraf otonom.

7.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai uji toksisitas
dengan menggunakan metode toksisitas subkronis dan kronis untuk
mengetahui dampak yang ditimbulkan dari penggunaan jangka
panjang dari ekstrak jamur magic. Selain itu perlu dilakukan variasi
dosis jamur magic yang lebih tinggi untuk mengetahui secara pasti
LD50 ekstrak jamur magic yang diberikan secara peroral.
 Daftar pustaka
Badham, E. R. (1984) ‘Journal of Ethnopharmacology, 10 (1984)
249-254’, 10, pp. 249–254.

BPOM, 2014. Peraturan Badan Pengawas Obat dan Makanan

Republik Indonesia Nomoe 7 Tahun 2014 tentang
Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik secara In vivo. Jakarta.

Dewoto, Hedi R., 2007. Pengembangan Obat Tradisional

Indonesia menjadi Fitofarmaka. Jurnal Penelitian. Majalah
kedokteran Indonesia Volume 57 Nomor 7, Juli 2007, 205-
211

EPA, 2002. Health Effects Test Guidelines OPPTS 870.1000

Acute Toxicity Testing. USA.

FDA, 2000. Guidance for Industry and Other Stakeholders

Toxicological Principles for the Safety Assessment of
Food Ingredients. USA

Hodgson, Ernest. 2004. A Textbook of Modern Toxicology Third

Edition. Hoboken, New Jersey : John Wiley & Sons, Inc.

Kurama, N. P., Bodhi, W. and Wiyono, W. (2013) ‘Uji Efek

Antidepresan Ekstrak Metanol Jamur Tlethong ( Psilocybe
cubensis ) Pada Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus ):
ditinjau dari Immobility Time Dengan Metode Forced
Swim Test’, 2(0), pp. 29–33.
Lu, Sam Kacew, 2002. Lu’s Basic Toxicology Forth Edition.
London : Taylor & Francis.

Manahan, Stanley E., 2003. Toxicological Chemistry and

Biochemistry Third Edition. USA : Lewis Publishers.

Mulyani, Yani, Sukmawati Ika K, Parikesit Thosa, 2017. Effect

from Repeated Dose of Ethanol Extract of Singawalang
Leaves (Petiveria alliacea. L) on Histopatologic Findings
of Liver and Kidney with Aminotransferase Enzymes and
Creatinin Level of Male Mice. International Journal for
Pharmaceutical Reasearch Scholars (IJPRS). Vol 6, 1-4.

OECD, 2001. Guideline for Testing of Chemical. Paris.

Retnomurti, Hayuning Pambayu, 2008. Pengujian Toksisitas

Akut Ekstrak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.)
secara In vivo. Skripsi. Fakultas Tekonologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor.

Trestraill, John Harris, 2007. Criminal Poisoning : Investigation

Guide For Law Enforcement, Toxicologist, Forensic
Scientist, and Attorneys Second Edition. Totowa, New
Jersey : Humana Press.

Woolley, Adam. 2008. A Guide to Practical Toxicology :

Evaluation, Prediction, and Risk Second Edition. New
York : Informa Healthcare USA, Inc..
LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil Determinasi
Lampiran 2 Komisi Etik
 Lampiran 3 Dokumentasi

(Alkoloid) (Flaonoid) (Saponin sebelum + hcl)

(Saponin sesudah + hcl) (Kuion) (Tanin + geliat)

Jamur Magic Pemberian oral

 Lampiran 4 Perhitungan

4.1 perhitungan penetapan kadar abu total

Berat sebelum pijar = 61, 9715 gram
Berat setelah pijar = 61,7804 gram
Berat sampel = 2 gram
61 ,9715 gram−61,7804 gram
Kadar abu = x 100%
2 gram
= 9,55 %
4.2 perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam
Berat sebelum pijar = 61,7397 gram
Berat setelah pijar = 61,6474 gram
Berat sampel = 2 gram
61,7397 gram−61,6474 gram
Kadar abu = x 100% =
2 gram
4,615%
4.3 perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air
Berat sebelum penguapan = 42,5960 gram
Berat setelah penguapan = 42, 3722 gram
Berat sampel = 5 gram
42,5960 gram−42 , 3722 gram
Kadar abu = x 100% =
2 gram
22,38 %
4.4 perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol
Berat sebelum penguapan = 42,4409 gram
Berat setelah penguapan = 42,3645 gram
Berat sampel = 5 gram
 42,4409 gram−42,3645 gram
Kadar abu = x 100% =
5 gram
7,63 %

Lampiran 5. Perhitungan Dosis Larutan Pengujian

1. Pembuatan Larutan Dosis 300 mg/kg BB

200 g
x 300 mg=60 mg
1000 g
60 mg untuk tikus dengan berat badan standar (200g). Ekstrak 300
mg di timbang kemudian di larutkan dalam 20ml Na-CMC 0.5%
60 mg
x 20 ml=4 ml
300 mg
Didapat larutan sebanyak 4ml untuk tikus dengan berat badan 200g

2. Pembuatan Larutan Dosis 2000 mg/kg BB

200 g
x 2000 mg=400 mg
1000 g
400 mg untuk tikus dengan berat badan standar (200g). Ekstrak 2000
mg di timbang kemudian di larutkan dalam 20ml Na-CMC 0.5%
400 mg
x 20 ml=4 ml
2000 mg
Didapat larutan sebanyak 4ml untuk tikus dengan berat badan 200g
3. Pembuatan Larutan Dosis 5000 mg/kg BB
200 g
x 5000 mg=1000 mg
1000 g
1000 mg untuk tikus dengan berat badan standar (200g). Ekstrak
5000 mg di timbang kemudian di larutkan dalam 20ml Na-CMC
0.5%
1000 mg
x 20 ml=4 ml
5000 mg
Didapat larutan sebanyak 4ml untuk tikus dengan berat badan 200g
4. Pembuatan Larutan Dosis 8000 mg/kg BB
200 g
x 8000 mg=1600 mg
1000 g
1600 mg untuk tikus dengan berat badan standar (200g). Ekstrak
8000 mg di timbang kemudian di larutkan dalam 20ml Na-CMC
0.5%.
1600 mg
x 20 ml=4 ml
8000 mg
Didapat larutan sebanyak 4ml untuk tikus dengan berat badan 200g

5. Pembuatan Larutan Dosis 16000 mg/kg BB

200 g
x 16000 mg=3200 mg
1000 g
3200 mg untuk tikus dengan berat badan standar (200g). Ekstrak
16000 mg di timbang kemudian di larutkan dalam 20ml Na-CMC
0.5%.
3200 mg
x 20 ml=4 ml
16000 mg
Didapat larutan sebanyak 4ml untuk tikus dengan berat badan 200g
 Lampiran 5. Perhitungan Volume Pemberian Hewan Uji

1. Kelompok Kontrol (Na-CMC 0,5%)

Bobot Tikus 1 adalah 231 gram
231 gram
x 4 ml=4.62ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 179 gram

179 gram
x 4 ml=3.58 ml
200 gram

Bobot Tikus 3 adalah 171 gram

171 gram
x 4 ml=3.42 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 177 gram

 177 gram
x 4 ml=3.54 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 120 gram

120 gram
x 4 ml=2.4 ml
200 gram

2. Kelompok 300 mg/kg BB

Bobot Tikus 1 adalah 220 gram
220 gram
x 4 ml=4.4 ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 165 gram

165 gram
x 4 ml=3.3 ml
200 gram

Bobot Tikus 3 adalah 165 gram

165 gram
x 4 ml=3.3 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 176 gram

176 gram
x 4 ml=3.52 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 138 gram

 138 gram
x 4 ml=2.76 ml
200 gram

3. Kelompok 2000 mg/kg BB

Bobot Tikus 1 adalah 165 gram
165 gram
x 4 ml=3.3 ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 220 gram

220 gram
x 4 ml=4.4 ml
200 gram

Bobot Tikus 3 adalah 220 gram

220 gram
x 4 ml=4.4 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 138 gram

138 gram
x 4 ml=2.76 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 176 gram

176 gram
x 4 ml=3.52 ml
200 gram

4. Kelompok 5000 mg/kg BB

Bobot Tikus 1 adalah 153 gram
 153 gram
x 4 ml=3.06 ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 170 gram

170 gram
x 4 ml=3.4 ml
200 gram

Bobot Tikus 3 adalah 125 gram

125 gram
x 4 ml=2.5 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 159 gram

159 gram
x 4 ml=3.18 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 139 gram

139 gram
x 4 ml=2.78 ml
200 gram

5. Kelompok 8000 mg/kg BB

Bobot Tikus 1 adalah 150 gram
150 g ram
x 4 ml=3 ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 145 gram

145 gram
x 4 ml=2.9 ml
200 gram
 Bobot Tikus 3 adalah 155 gram
155 gram
x 4 ml=3.1 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 175 gram

175 gram
x 4 ml=3.5 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 132 gram

132 gram
x 4 ml=2.64 ml
200 gram

6. Kelompok 16000 mg/kg BB

Bobot Tikus 1 adalah 135 gram
135 gram
x 4 ml=2.7 ml
200 gram

Bobot Tikus 2 adalah 144 gram

144 gram
x 4 ml=2.88 ml
200 gram

Bobot Tikus 3 adalah 130 gram

130 gram
x 4 ml=2.6 ml
200 gram

Bobot Tikus 4 adalah 146 gram

146 gram
x 4 ml=2.92 ml
200 gram

Bobot Tikus 5 adalah 140 gram

140 gram
x 4 ml=2.8 ml
200 gram
 Lampiran 6. Pengujian ANOVA

1. Grooming
2. Gripping Strength
3. Menggelantung
4. Rasa Ingin Tahu
5. Ptosis
6. Katalepsi
7. Diare
8. Ptosis