Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

BAB

Teknologi Kekebalan Tubuh

Struktur dan Fungsi Antibodi
Antibodi, Antigen, dan Epitop
Keragaman Antibodi Struktur
Antibodi
Struktur dan Fungsi Imunoglobulin Antibodi
Monoklonal untuk Penggunaan Klinis Humanisasi
Antibodi Monoklonal Antibodi yang Dimanusiakan
dalam Aplikasi Klinis Rekayasa Antibodi
Diabodi dan Antibodi Bispesifik Membangun Uji
ELISA
ELISA sebagai Alat Diagnostik Memvisualisasikan
Komponen Sel Menggunakan 173
Pemilahan Sel yang Diaktifkan dengan Fluoresensi
Antibodi
Memori Kekebalan Tubuh dan
Vaksinasi Menciptakan Vaksin
Pembuatan Vaksin Vektor Menggunakan Vaksinologi
Rekombinasi Homolog Rekombinasi Terbalik
Mengidentifikasi Antigen Baru untuk Vaksin
Vaksin DNA Melewati Kebutuhan untuk Memurnikan
Vaksin yang Dapat Dimakan Antigen
 Teknologi Kekebalan Tubuh

STRUKTUR DAN FUNGSI ANTIBODI

Dunia ini penuh dengan mikroorganisme yang menular, semuanya mencari inang yang cocok untuk
menginfeksi. Bakteri, virus, dan protozoa terus-menerus berusaha masuk ke dalam jaringan
kita. Jika tidak ada
dilakukan terhadap upaya invasi ini, tidak ada manusia yang dapat bertahan hidup.
Untungnya, sel-sel sistem kekebalan tubuh berpatroli di jaringan internal, aliran darah,
dan permukaan tubuh, baik di luar maupun di dalam, melindungi seluruh organisme dari
serangan. Setiap makromolekul asing
yang tidak dikenali sebagai "diri sendiri" akan dianggap sebagai tanda adanya gangguan dan akan
memicu respons imun. Mikroorganisme yang menyerang memiliki protein khas mereka
sendiri, yang berbeda dalam urutan dan oleh karena itu dalam struktur 3-D dari hewan
inang. Secara khusus, molekul-molekul yang terpapar pada permukaan mikroorganisme yang
menyerang akan menarik perhatian sistem kekebalan tubuh. Molekul-molekul asing ini disebut
A) sebagai antigen, Sdiatuns molekul sistem kekebalan yang mengenali dan mengikatnya
dikenal sebagai
pe n g ik at a n
antibodantigen
i ( G b r . 6.1).
Engsel
Meskipun kita sering berbicara seolah-olah tubuh
membuat antibodi sebagai respons terhadap invasi oleh
antigen asing, hal ini sebenarnya
menyesatkan. Faktanya, jauh sebelum infeksi, sistem
kekebalan tubuh menghasilkan miliaran antibodi yang
Antigen
berbeda. Setiap sel B dari sistem kekebalan tubuh memiliki
Wilayah (molekul kemampuan untuk membuat salah satunya. Sistem
konstan Wilayah asing)
variabel kekebalan tubuh menyimpan beberapa sel B dalam keadaan
siaga untuk setiap repertoar antibodi yang sangat banyak.
Hal ini terjadi sebelum bertemu dengan antigen dan tanpa
ANTIBODI MENGIKAT
mengetahui antibodi mana yang sebenarnya akan
{

174 ANTIGEN
dibutuhkan nantinya. Jika cukup banyak antibodi yang
B) berbeda tersedia, setidaknya satu atau dua antibodi akan
cocok dengan antigen dalam bentuk apa pun, meskipun
tubuh belum pernah bersentuhan dengannya.
Akhirnya, antigen asing muncul (Gbr. 6.2). Di antara
miliaran antibodi yang telah dirancang sebelumnya,
setidaknya satu atau dua antibodi akan cocok dengan antigen
dengan cukup baik. Sel-sel B yang membuat antibodi yang
mengenali antigen sekarang membelah dengan cepat dan
masuk ke
produksi massal. Dengan demikian, antigen menentukan
GAMBAR 6.1 antibodi mana yang diamplifikasi dan diproduksi. Setelah
Antigen Asing antibodi yang cocok mengikat antigen penyerang, sistem
Dikenali oleh kekebalan tubuh menjalankan mekanisme lain untuk
Antibodi
menghancurkan penyerang.
(A) Antibodi adalah
Molekul berbentuk Y Beberapa waktu kemudian, ada tahap penyempurnaan di
yang diproduksi oleh mana antibodi yang terikat pada antigen yang menyerang
sistem kekebalan tubuh
dimodifikasi oleh mutasi agar lebih sesuai dengan antigen.
pada vertebrata.
Selain itu, proses
Ini mengikat protein
spesifik, atau antigen, Sistem kekebalan tubuh menyimpan catatan antibodi yang benar-benar digunakan. Jika
dari patogen yang penyerang yang sama datang kembali, antibodi yang sesuai dapat segera digunakan, lebih
menyerang. cepat dan dalam jumlah yang lebih banyak dari sebelumnya. Vaksin memanfaatkan
kapasitas ini dengan merangsang sistem kekebalan tubuh untuk menyimpan antibodi yang
mengenali dan menghancurkan virus patogen seperti cacar. Namun, vaksin tidak
menyebabkan gejala penyakit itu sendiri (lihat pembahasan selanjutnya).
 ekul
asing
Sistem kekebalan tubuh menyimpan perbendaharaan sel B yang siap untuk membuat antibodi terhadap patogen yang menyerang. Setiap sel B
yang
AN memicu
TI respons
B oleh
O sistem
kekebala
DI, n tubuh.
AN Dalam
TI praktikn
G ya,
sebagian
EN besar
, antigen
DA adalah
N protein
yang
EP dibuat
IT oleh
O bakteri
PE atau
virus
I
yang
s
menyera
t
ng.
i Dalam
l
a
h

a
n
t
i
g
e
n

m
e
n
g
a
c
u

p
a
d
a

s
e
t
i
a
p

m
o
l
 BAB 6

A PERSIAPAN
Pengocokan gen menghasilkan sejumlah besar antibodi yang berbeda. Setiap sel B membuat satu jenis.

B PENGENALAN

Antigen asing Anti asing gen

muncul dikenali

C RESP ONSE

Sel B yang antibodinya cocok dengan antigen akan membelah diri dan memproduksi lebih banyak antibodi

175

D PENYEMPURNAAN E MEMORI
Mutasi meningkatkan ikatan antibodi terhadap antigen
Sel B memori mengingat antigen

GAMBAR 6.2 Antibodi yang Telah Dirancang Sebelumnya Siap untuk Antigen Asing
Jauh sebelum serangan oleh patogen, pasukan sel B menghasilkan sejumlah besar antibodi (A). Ketika salah satu antibodi berikatan
dengan antigen (B), sel B tersebut mulai membelah dan berkembang (C). Mayoritas sel B menyempurnakan antibodi sehingga
kompleks antigen/antibodi mengikat lebih erat, dan mereka melawan patogen (D). Sebagian kecil sel B menjadi sel memori yang
tidak pernah mati, menunggu serangan lain dari patogen yang sama (E).

Khususnya, glikoprotein, yang membawa residu karbohidrat, dan lipoprotein, yang membawa
residu lipid, menghasilkan respons imun yang kuat, yaitu sangat antigenik. Makromolekul lain
juga dapat berfungsi sebagai antigen. Polisakarida sering ditemukan sebagai komponen
permukaan kuman yang menyusup dan dapat bertindak sebagai antigen. Bahkan DNA dapat
bersifat antigenik dalam keadaan tertentu.
 Teknologi Kekebalan Tubuh

Tidak mengherankan, antigen yang terpapar pada

permukaan mikroorganisme asing biasanya akan
terdeteksi pertama kali oleh sistem kekebalan tubuh
Bakteri Virus (Gbr. 6.3). Kemudian dalam infeksi, terutama setelah
sel-sel dari beberapa penyerang telah terganggu oleh
sistem kekebalan, molekul dari
bagian dalam agen infeksi dapat dibebaskan dan juga
Protein dan karbohidrat bertindak sebagai antigen.
permukaan Sistem kekebalan tubuh memediasi kekebalan terhadap
GAMBAR 6.3 berbagai agen infeksi melalui kekebalan spesifik atau
Antigen Permukaan
kekebalan yang didapat. Kekebalan yang didapat dapat
Mikroorganisme
dibagi lagi menjadi
Permukaan bakteri dan
virus dilapisi dengan kekebalan humoral dan kekebalan yang diperantarai sel. Kekebalan humoral
glikoprotein dan dimediasi oleh antibodi, atau imunoglobulin, dalam plasma darah, yang diproduksi oleh
lipoprotein yang sel B. Kekebalan yang diperantarai sel diperantarai oleh sel spesifik antigen yang disebut
dikenali oleh antibodi limfosit T, yang dibagi menjadi sel TH atau sel penolong T, dan sel TC atau sel sitotoksik
dalam organisme
T.
inang.
Antibodi umumnya mengikat
terhadap protein utuh, sedangkan reseptor sel T mengikat fragmen protein. Ketika sebuah antibodi
berikatan dengan protein, ia mengenali area yang relatif kecil pada permukaan protein,
seperti lesung pipit atau proyeksi yang menonjol dari permukaan. Situs pengenalan
tersebut dikenal sebagai
epitop (Gbr. 6.4). Karena protein utuh adalah molekul besar, mereka
mungkin memiliki beberapa epitop pada permukaannya.
Antibodi Akibatnya, beberapa antibodi yang berbeda mungkin dapat
mengikat protein yang sama, meskipun biasanya tidak
secara bersamaan, karena antibodi itu sendiri adalah
176 molekul besar.
Sel T bekerja dengan cara yang sama tetapi hanya mengenali
Protein antigen yang diekspresikan pada permukaan sel tubuh lain,
(antigen) terutama makrofag, sel yang terinfeksi virus, atau pembuatan antibodi
Sel B, yang berlawanan dengan mikroorganisme itu sendiri. Sel T
mengenali sel lain ini melalui protein reseptor permukaan sel yang
Epitope disebut kompleks histokompatibilitas mayor kelas I dan kelas II
(MHC kelas I dan kelas II). MHC kelas I mengaktifkan sel TH, dan
MHC kelas II mengaktifkan
GAMBAR 6.4 Sel TC. Reseptor MHC dikodekan oleh keluarga gen yang
Antibodi berbeda untuk setiap orang. Hal ini dapat digunakan untuk membedakan
Mengikat Epitop orang, dan harus dicocokkan dalam transplantasi organ untuk
pada Antigen mencegah penolakan. Nama lain untuk reseptor MHC adalah
Antibodi hanya mengenali antigen leukosit manusia (HLA).
tonjolan atau lesung pipit
kecil pada permukaan
protein. Wilayah antigen Kekebalan yang didapat dibagi menjadi dua bagian. Kekebalan humoral dimediasi oleh antibodi dalam plasma darah, yang diproduksi oleh se
yang berikatan dengan Antibodi mengenali epitop atau daerah tertentu dari patogen yang menyerang.
Sel T mengenali reseptor permukaan sel yang disebut kompleks histokompatibilitas utama kelas I dan kelas II yang diekspresikan pada permu
antibodi disebut epitop.

KEANEKARAGAMAN ANTIBODI yang luar biasa

Antibodi adalah protein yang mengenali dan mengikat molekul asing. Karena ada
variasi molekul asing yang hampir tak terbatas, maka jumlah molekul asing yang
molekul antibodi yang berbeda dibutuhkan. Asam amino yang menyusun molekul protein
tentu saja dapat diatur untuk menghasilkan urutan yang berbeda dalam jumlah yang
h berbeda.
a Namun,
m hal ini
p menyeba
i bkan
r masalah
genetik
t yang
a besar.
k Jika gen
yang
t terpisah
e mengkod
r ekan
b setiap
a protein
t antibodi,
a hal ini
s akan
membutu
d hkan
a jumlah
n gen yang
, sangat
besar dan
o jumlah
l DNA
e yang
h sangat
banyak.
k Bahkan
a jika
r semua
e DNA
n dalam
a genom
mamalia
i adalah
t DNA
u pengkode
, , DNA
tersebut
d hanya
e dapat
n mengkod
g ekan
a beberapa
n juta
antibodi,
b dan itu
e terlalu
n sedikit.
t
u
k

y
a
n
g
 BAB 6

Jawabannya adalah bahwa sistem kekebalan tubuh menghasilkan sistem

berbagai macam urutan protein yang berbeda dari sejumlah kecil kekebalan
gen dengan mengacak segmen gen. Alih-alih menyimpan gen yang tubuh sering
lengkap kali mengenali
Untuk setiap antibodi, sistem kekebalan tubuh menyusun gen dan mengikat
antibodi dari kumpulan segmen DNA yang lebih pendek. wilayah Fc
Mengacak dan menggabungkan gen-gen parsial ini dari suatu
memungkinkan dihasilkannya berbagai macam antibodi. antibodi (lihat
Pada Gbr. 6.5, ide ini diilustrasikan dengan menggunakan pembahasan
tiga alternatif ujung depan dan tiga ujung belakang. selanjutnya).
Menggabungkannya dengan semua cara yang memungkinkan
akan menghasilkan sembilan gen yang berbeda. Misalkan kita
memiliki 10 segmen depan, tengah, dan ujung yang berbeda. Ini
dapat digabungkan untuk menghasilkan 10 × 10 × 10 = 1000
varian. Ini lebih mendekati apa yang sebenarnya terjadi pada gen
antibodi. Perhatikan bahwa untuk menghasilkan 1000 protein
yang berbeda dengan cara ini hanya membutuhkan 30 segmen
DNA pengkode untuk disimpan pada kromosom.
Ekonomi genetik yang luar biasa dari sistem kekebalan tubuh
sangat kontras dengan fenomena DNA sampah. Pada mamalia,
biasanya 95% atau lebih dari DNA mungkin tidak memiliki kode.
Sebaliknya, sistem kekebalan tubuh adalah contoh yang menarik
tentang bagaimana keanekaragaman genetik yang sangat besar
dapat dihasilkan dengan mengacak-acak segmen informasi genetik
yang relatif sedikit. Hewan dapat membuat miliaran kemungkinan
antibodi hanya dari beberapa ribu segmen gen.
Genetika terperinci dari keragaman antibodi adalah masalah
yang kompleks dan dijelaskan dalam buku-buku teks
tentang imunologi. Sisa bab ini membahas aspek-aspek GAMB
imunologi yang penting untuk AR 6.5
bioteknologi. Hal ini mencakup struktur antibodi, bioteknologi Perakita
n Gen
antibodi, teknik bioteknologi yang menggunakan antibodi, dan
Modular
akhirnya vaksin. Bab ini diakhiri dengan teknik-teknik yang Menghub
digunakan untuk mengidentifikasi dan memproduksi vaksin baru, ungkan
yang merupakan bisnis bioteknologi yang sangat besar. segmen
gen yang
Antibodi memiliki struktur yang sangat beragam sehingga semua patogen dapat dikenali. berbeda
Antibodi diproduksi dengan mengacak segmen gen, bukan dengan satu kode gen untuk setiap antibodi yang berbeda. akan
menghasil
kan
kombina
si unik
STRUKTUR ANTIBODI dalam
jumlah
Setiap antibodi terdiri dari empat subunit protein, dua rantai ringan dan dua rantai ekspone
berat, yang tersusun dalam bentuk Y (Gbr. 6.6). Ikatan disulfida antara residu asam nsial.
amino sistein menyatukan rantai-rantai tersebut. Masing-masing rantai ringan dan rantai
berat terdiri dari daerah konstan dan daerah variabel. Daerah konstan sama untuk
semua rantai dari kelas yang sama. Daerah variabel berikatan dengan molekul target,
yaitu antigen. Ada jutaan daerah variabel yang berbeda, yang dihasilkan oleh
pengocokan genetik.
Memecah antibodi pada "engsel" di mana rantai berat menekuk menghasilkan tiga potongan,
dua fragmen Fab yang identik dan satu fragmen Fc (Gbr. 6.7). Fab, yang berarti "fragmen,
pengikat antigen," terdiri dari satu rantai ringan ditambah setengah dari rantai berat. Fc, yang
berarti "fragmen, dapat dikristalisasi," mengandung bagian bawah dari kedua rantai berat.
Komponen lain dari
 DEPAN AKHI
R

177

Antibodi memiliki struktur berbentuk Y. Daerah engsel atau tikungan membagi dua fragmen Fab dari fragmen Fc. Ada
dua rantai ringan dan dua rantai berat.
KOMBINASIKAN DENGAN SEMUA
CARA YANG MEMUNGKINKAN

Sembilan "gen"
baru
 Teknologi Kekebalan Tubuh

ANTIBODI

KERUSAKAN KIMIAWI

DUA FRAGMEN YANG LUAR BIASA

Antigen berikatan di sini

Antigen Bagian dari rantai berat

berikatan di sini Antigen

Wilayah variabel

S-S
S-S
SATU FRAGMEN FC
CH2

CH2

Wilayah konstan S-S

178

CH2

CH2
Bagian dari rantai berat
Rantai berat

Pengenalan pelengkap
CH3

CH3

CH3

GAMBAR 6.6 Struktur Antibodi

Pengenalan reseptor Fc CH3
Antibodi berbentuk Y terdiri dari dua rantai ringan dan dua rantai
berat. Masing-masing terdiri dari segmen-segmen: CH1, CH2, dan CH3
GAMBAR 6.7 Fragmen Fab dan Fragmen Fc dari
adalah daerah konstan rantai berat; CL adalah daerah konstan rantai
Antibodi
ringan; VH adalah daerah variabel rantai berat; dan VL adalah daerah Antibodi dapat dipecah menjadi dua fragmen Fab dan satu fragmen Fc
variabel rantai ringan. Antigen berikatan dengan daerah variabel. dengan cara memecah molekul pada daerah engsel.

STRUKTUR DAN FUNGSI IMUNOGLOBULIN

Tergantung pada jenis rantai beratnya, antibodi dikategorikan ke dalam kelas-kelas yang
berbeda, dan memiliki peran yang berbeda dalam sistem kekebalan tubuh (lihat Tabel 6.1).
Antibodi yang paling banyak dan khas memiliki rantai berat gamma dan disebut
imunoglobulin G (IgG). IgG memiliki empat subkelas yang berbeda, tetapi secara
keseluruhan, IgG ditemukan terutama dalam serum darah. Sekitar 75% dari antibodi serum
adalah IgG, dan ini sangat penting untuk merangsang sel-sel kekebalan tubuh untuk
menelan patogen yang menyerang. IgG adalah satu-satunya antibodi yang dapat ditransfer
melintasi plasenta selama kehamilan.
Antibodi kedua yang paling umum dalam serum adalah IgA sekretori. Antibodi ini juga
ditemukan dalam sekresi mukosa serta kolostrum dan ASI. Antibodi ini sangat penting
dalam melawan infeksi saluran pernapasan dan saluran cerna, terutama pada bayi, di mana
penyakit saluran cerna sangat mematikan. Yang ketiga yang paling umum adalah IgM,
yang biasanya ditemukan sebagai pentamer. Struktur IgM yang tidak biasa menyediakan
banyak tempat pengikatan untuk antigen (10 pada IgM berbanding dua pada IgG). Struktur
ini membuat IgM baik untuk menggumpalkan mikroorganisme, dan kemudian merangsang
sel kekebalan untuk mencerna seluruh kompleks. IgD ditemukan pada tingkat yang
rendah, dan perannya masih belum pasti. IgE adalah antibodi yang paling sedikit
ditemukan dalam serum dan terutama ditemukan
 BAB 6

Tabel 6.1 Berbagai Jenis dan Fungsi Antibodi Manusia

ANTIBODI SUBTIPE RANT RANT

AI RINGA AI
N BERAT STRUKTUR

Bagian
Rantai
sekretori
IgA κ atau λ J
α1 α2
IgA1 IgA2

SEKRETARI MONOMER
S

IgE tidak ada κ atau λ ε Domain tambahan

IgD tidak ada κ atau λ δ Potongan ekor

Domai
n
IgM μ tambah
tidak ada κ atau λ Poto an
ngan
ekor Rantai
J
MONOMER

PENTAMER 179

IgG1 γ1
κ
IgG2 γ2
atau IgG1, IgG2, IgG4
IgG3 γ3
IgG λ κ
γ4
IgG4

atau

λ IgG3

Catatan: Rantai ringan digam κ warna biru muda dan rantai berat berwarna ungu.

barkan dalam
yang melekat pada sel mast. atau ntibodi yang merangsang respons alergi dengan
IgE melepaskan histamin yang emua gejala umum alergi, termasuk pilek,
adalah
λ a
men bersin, dan batuk.
yebabkan s
κ
ANTIBODI MONOKLON UK PENGGUNAAN KLINIS
Ada banyak kegunaan klinis untuALatau
UNT Antibodi digunakan dalam prosedur diagnostik
k antibodi.
λ
(termasuk ELISA-lihat pembahasan selanjutnya), untuk pengujian kehamilan, dan untuk
mendeteksi keberadaan protein yang khas dari agen penyebab penyakit tertentu. Di masa
depan, antibodi dapat digunakan untuk secara khusus membunuh sel kanker atau
menghancurkan virus. Penggunaan tersebut membutuhkan jumlah yang relatif besar
antibodi murni yang secara khusus mengenali antigen tunggal. Bahkan jika hewan
percobaan diinokulasi dengan antigen tunggal yang telah dimurnikan, serum darahnya
akan mengandung campuran antibodi terhadap antigen tersebut. Ingatlah bahwa antigen
tunggal memiliki beberapa epitop, dan
 Teknologi Kekebalan Tubuh

Dengan demikian, antibodi akan bervariasi dalam hal spesifisitas dan afinitas. Saat ini, campuran
seperti itu disebut sebagai antibodi poliklonal karena dihasilkan dari produksi antibodi oleh
banyak klon sel B yang berbeda, yang semuanya mengenali antigen yang sama. Campuran
seperti itu tidak banyak berguna baik untuk pengujian yang spesifik dan akurat atau untuk
teknik lain dalam bioteknologi.
Entah bagaimana, satu baris sel B yang semuanya membuat satu antibodi tertentu harus
diisolasi dan ditumbuhkan dalam kultur. Antibodi murni yang dibuat oleh satu baris sel dikenal
sebagai antibodi monoklonal. Sayangnya, sel B hanya hidup selama beberapa hari dan
tidak dapat bertahan hidup di luar tubuh.
Solusi untuk masalah ini adalah dengan menggunakan sel kanker. Mieloma adalah kanker
yang terjadi secara alami yang berasal dari sel B dan oleh karena itu mengekspresikan gen
imunoglobulin. Seperti banyak sel tumor lainnya, sel mieloma akan terus tumbuh dan
membelah diri dalam kultur selamanya jika diberi nutrisi yang tepat. Untuk membuat antibodi
monoklonal, sel B yang relatif halus, yang membuat antibodi yang diperlukan, disatukan
dengan sel mieloma (Gbr. 6.8). (Untuk menghindari kebingungan, mieloma yang telah
kehilangan
kemampuan untuk membuat antibodi sendiri). Hibrida yang dihasilkan disebut hibridoma. Pada
prinsipnya, hibridoma ini dapat hidup selamanya dalam kultur dan akan membuat antibodi
yang diinginkan.
Dalam praktiknya, seekor hewan, seperti tikus, disuntik dengan antigen yang dibutuhkan
antibodi. Ketika produksi antibodi telah mencapai puncaknya, sampel sel B yang
mensekresi antibodi diambil dari hewan tersebut. Sel-sel ini digabungkan dengan sel
mieloma abadi untuk menghasilkan campuran dari banyak sel hibridoma yang berbeda.
Bagian yang membosankan datang berikutnya. Banyak garis sel hibridoma individu harus
disaring untuk menemukan satu yang mengenali antigen target. Setelah ditemukan,
hibridoma ditumbuhkan dalam kultur untuk menghasilkan antibodi monoklonal dalam
jumlah besar.

Antibodi monoklonal hanya mengenali satu epitop pada antigen dan berasal dari satu sel B tunggal. Penggabungan
sel B yang dirangsang antigen dari limpa tikus dengan garis sel mieloma menghasilkan sel B yang abadi.
Hibridoma terisolasi. Masing-masing sel dapat ditumbuhkan secara in vitro dan dievaluasi afinitasnya terhadap
180 antigen asli untuk membuat antibodi monoklonal.

HUMANISASI ANTIBODI MONOKLONAL

Antibodi monoklonal secara teori dapat digunakan sebagai peluru ajaib untuk
membunuh sel kanker manusia dengan mengarahkannya ke molekul spesifik yang hanya
muncul di permukaan sel kanker. Ironisnya, masalah utamanya adalah sistem kekebalan
tubuh manusia menganggap antibodi dari tikus atau hewan lain sebagai molekul asing,
sehingga berusaha untuk menghancurkannya!
Salah satu pendekatan yang mungkin dapat memecahkan sebagian masalah ini adalah
menggunakan rekayasa genetika untuk membuat monoklonal yang dimanusiakan (Gbr.
6.9A). Hal ini mengambil keuntungan dari fakta bahwa hanya variabel atau daerah V
antibodi yang mengenali antigen. Oleh karena itu, konstanta atau daerah C dapat diganti.
Hibridoma generasi pertama diisolasi dan dikultur, umumnya menggunakan sel B tikus.
Kemudian DNA yang mengkode antibodi monoklonal tikus diisolasi dan dikloning.
DNA untuk wilayah konstan antibodi tikus diganti dengan urutan DNA manusia yang
sesuai. Wilayah V dibiarkan saja. Gen hibrida manusia/tikus kemudian dimasukkan
kembali ke dalam sel mieloma tikus kedua untuk produksi antibodi dalam kultur.
Meskipun tidak sepenuhnya mirip manusia, hibrida ini tidak terlalu mirip tikus dan
menimbulkan lebih sedikit reaksi dari sistem kekebalan tubuh manusia.
Humanisasi lebih lanjut dapat dilakukan dengan mengubah bagian-bagian dari daerah V
yang tidak secara langsung terlibat dalam pengikatan antigen. Jika dilihat lebih dekat
pada daerah V dari setiap rantai menunjukkan bahwa sebagian besar variasi terbatas pada
tiga segmen pendek yang membentuk loop pada permukaan antibodi, sehingga
membentuk tempat pengikatan antigen (lihat Gbr. 6.9B). Ini dikenal sebagai daerah
hipervariabel atau sebagai daerah penentu komplementaritas (CDR). Secara
keseluruhan, setiap tempat pengikatan antigen terdiri dari enam CDR, tiga dari rantai
ringan dan tiga dari rantai berat. Humanisasi penuh antibodi melibatkan pemotongan
daerah pengkodean untuk keenam CDR ini dari antibodi asli dan menyambungkannya ke
dalam gen untuk rantai ringan dan rantai berat manusia.
 BAB 6

Antigen yang disuntik kan Sel kanker yang ditumbuhkan secara in vitro

A) TAHAP I
DAERAH V TIKUS DITAMBAH DAERAH C MANUSIA

Wilayah
variabel

Sel Sel
limpa mielo ma Wilayah
konstan

FUSI
181

B) TAHAP II
HANYA CDRS BERASAL DARI TIKUS, SISANYA
ADALAH MANUSIA

Clone 1 Clone 2 Klon 3 Klon 4 CDRS

(saling melengkapi)
menentukan
domain)

UJI ANTIBODI TERHADAP ANTIGEN TARGET

Mouse
Huma n
GAMBAR 6.8 Prinsip Hibridoma
Antibodi monoklonal berasal dari satu penghasil antibodi
GAMBAR 6.9 Humanisasi Antibodi Monoklonal Antibodi
Sel B. Antigen pertama-tama disuntikkan ke tikus untuk memicu respons
dari tikus dapat diubah untuk menjadi lebih seperti antibodi manusia.
imun. Limpa dipanen karena mengandung banyak sel B yang teraktivasi.
(A) Seluruh daerah konstan dari rantai berat dan ringan dapat diganti
Sel-sel limpa berumur pendek dalam kultur, sehingga mereka menyatu
dengan daerah konstan dari manusia. (B) Antibodi memiliki enam CDR
dengan sel mieloma abadi. Sel-sel hibridoma dikultur dan diisolasi yang menentukan tempat pengikatan antigen yang sebenarnya. Seluruh
sehingga setiap hibrida terpisah satu sama lain. Setiap klon hibrida antibodi kecuali daerah CDR dapat diganti dengan urutan manusia.
kemudian dapat disaring untuk mendapatkan antibodi terbaik terhadap
protein target.
 Teknologi Kekebalan Tubuh

Menghapus daerah konstan dari antibodi tikus dan menggantinya dengan daerah konstan manusia membuat antibodi
manusiawi. Sel manusia tidak menolak antibodi ini.

ANTIBODI MANUSIA DALAM APLIKASI KLINIS

Saat ini ada banyak antibodi monoklonal yang dimanusiakan yang sedang
dikembangkan untuk mengobati berbagai kondisi. Antibodi monoklonal manusiawi
pertama yang disetujui untuk penggunaan klinis, trastuzumab (Herceptin), adalah
untuk pengobatan kanker payudara. Federal
Badan Pengawas Obat dan Makanan Amerika Serikat (FDA) menyetujui agen terapeutik ini
pada tahun 1998. Herceptin mengenali reseptor permukaan sel yang disebut HER2. Reseptor
ini adalah bagian dari keluarga yang lebih besar, termasuk HER3, HER4, dan anggota
pendiri, reseptor faktor pertumbuhan epidermal (EGFR). Reseptor ini mengontrol apakah sel
berkembang biak, berdiferensiasi, atau mengalami bunuh diri terprogram dengan memberi
sinyal pada berbagai protein intraseluler yang memodulasi ekspresi gen. Pada pasien kanker
payudara, ketika reseptor HER2 diproduksi secara berlebihan, kanker payudara jauh lebih
lebih tahan terhadap kemoterapi. Dengan demikian, kelebihan reseptor merupakan
indikator yang baik bahwa pasien tidak akan bertahan lama. Herceptin berikatan dengan
domain ekstraseluler HER2, mencegah reseptor terinternalisasi. Hal ini mencegah sel
kanker membelah dan menginduksi sistem kekebalan untuk menyerang sel (Gbr. 6.10).
Ketika Herceptin digunakan dalam kombinasi dengan kemoterapi untuk mengobati kanker
payudara, pasien dapat bertahan hidup lebih lama. Hal utama yang perlu diingat adalah
bahwa Herceptin mengikat satu protein spesifik; oleh karena itu, kanker payudara tertentu
harus memiliki jumlah HER2 yang berlebih agar pengobatan menjadi efektif.
Salah satu masalah yang paling umum dalam sistem perawatan kesehatan saat ini adalah
pasien rumah sakit sering terkena infeksi bakteri hanya karena berada di rumah sakit.
Infeksi nosokomial, demikian sebutannya, terlibat dalam ribuan kematian dan
menelan biaya miliaran dolar. Bahkan lebih buruk lagi,
182 beberapa infeksi resisten terhadap semua atau sebagian besar antibiotik.
Pengembangan antibodi yang dimanusiakan untuk salah satu agen bakteri utama
diharapkan akan memberikan metode lain untuk mengobati pasien. Staphylococcus aureus
adalah bakteri yang menyebabkan infeksi serius. Strain telah diidentifikasi yang resisten
terhadap metisilin, yang disebut MRSA (methicillin-resistant
S. aureus), dan strain lainnya resisten terhadap vankomisin, VRSA. Kedua antibiotik ini
adalah yang paling efektif yang tersedia untuk S. aureus, jadi ketika gagal, infeksi dapat
menjadi mematikan. Antibodi monoklonal yang dimanusiakan untuk melawan S. aureus
sedang diuji keefektifannya. Antibodi monoklonal ini berikatan dengan protein ClfA (faktor
penggumpalan A), yang ditemukan pada permukaan sel S. aureus. Protein ClfA bertanggung
jawab atas bakteri yang menempel pada

Herceptin
Reseptor HER2
GAMBAR 6.10
Herceptin Membantu
Membunuh Sel
Kanker dengan HER2
Herceptin adalah antibodi
monoklonal yang Kema tian sel
dimanusiakan yang Teta plah hidu p.
mengenali reseptor HER2
pada sel kanker payudara.
Ketika antibodi berikatan
dengan reseptor, sistem
kekebalan tubuh
membantu
menghancurkan kanker
sel, dan sel kanker
menjadi lebih sensitif
terhadap pengobatan
kemoterapi.
 BAB 6

fibrinogen, protein yang ditemukan Peran

di permukaan sel inang. Ketika
fragmen
antibodi mengikat ClfA, bakteri
S. aureus scFv adalah
tidak dapat menempel pada ClfA untuk
permukaan sel, dan oleh karena itu,
mengenali
tidak dapat menyerang dan
beberapa
menyebabkan kerusakan (Gbr.
molekul
6.11). Versi antibodi yang
target,
dimanusiakan telah diuji pada S. aureus
mungkin
kelinci. Kelinci-kelinci tersebut Antibodi yang
protein
dimanusiakan
diinfeksi dengan S. aureus dan
untukyang
ClfA
kemudian diobati dengan antibodi
Fibrinogen diekspresik
tersebut. Ketika dua dosis antibodi
an hanya
diberikan, 100% kelinci tidak
pada
memiliki bakteri dalam darah
permukaan
mereka selama 96 jam. Hanya
sel yang
sekitar dua pertiga dari kultur
terinfeksi
darah yang negatif untuk
virus atau
S. aureus ketika kelinci diobati
sel kanker.
hanya dengan vankomisin. Uji klinis GAMB
Berbagai
untuk antibodi ini dimulai pada A R 6.11
racun,
bulan Maret 2004 dan masih Antibodi
sitokin, atau
berlangsung. Manusia
enzim dapat
wi untuk
dilekatkan S. aureus
Antibodi monoklonal terhadap HER2 (reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia tipe 2) menghambat pada ujung Mencega
pertumbuhan sel kanker payudara dan digunakan sebagai pengobatan untuk pasien kanker payudara. lain dari h
Antibodi yang dimanusiakan untuk ClfA mencegah S. aureus mengikat dan menyebabkan infeksi bakteri pada fragmen Kolonisas
kelinci. Uji klinis saat ini sedang menentukan kemanjurannya dalam mencegah infeksi S. aureus pada manusia. scFv, untuk i Antibodi
menyediakan terhadap
bagian aktif protein
permukaa n
dari antibodi
REKAYASA ANTIBODI rekombinan
sel, ClfA,
Antibodi alami terdiri dari tempat pengikatan antigen yang bergabung dengan daerah mencegah
akhir. Pada bakteri
efektor yang bertanggung jawab untuk mengaktifkan komplemen dan atau mengikat sel imun.
prinsipnya, berikatan
Dari sudut pandang bioteknologi, spesifisitas yang sangat tinggi dari antibodi yang mengikat
pendekatan dengan
protein target berguna u n t u k berbagai tujuan. Oleh karena itu, rekayasa antibodi protein
ini
menggunakan daerah pengikatan antigen dari antibodi. Ini dimanipulasi dan dilekatkan pada matriks
menyediakan
fragmen molekul lainnya. ekstraselul
cara untuk
er,
Untuk memisahkan tempat pengikatan antigen dari sisa antibodi, segmen gen yang memberikan fibrinogen.
mengkode bagian rantai antibodi disubkloning dan diekspresikan dalam sel bakteri. Urutan agen Jika S.
sinyal bakteri ditambahkan ke ujung N rantai antibodi parsial, yang menghasilkan ekspor terapeutik aureus
rantai ke dalam ruang periplasma. Di sini, domain VH dan VL terlipat dengan benar dan dengan cara tidak dapat
membentuk ikatan disulfida. Fragmen antibodi yang digunakan meliputi Fab, Fv, dan Fv yang sangat berikatan
rantai tunggal (scFv) (Gbr. 6.12). Pada fragmen Fab, ikatan disulfida antar-rantai spesifik. dengan
menyatukan kedua rantai. Namun, fragmen Fv tidak memiliki wilayah rantai antibodi ini Saat ini, matriks
ekstraselul
sehingga kurang stabil. Hal ini menyebabkan pengembangan fragmen Fv rantai tunggal di aplikasi
er, bakteri
mana domain VH dan VL dihubungkan bersama oleh rantai peptida pendek, biasanya klinis dari tidak dapat
sepanjang 15 hingga 20 asam amino. antibodi berkoloni
Hal ini diperkenalkan pada tingkat genetik sehingga satu gen buatan mengekspresikan yang sehingga
seluruh struktur (VH-linker-VL atau VL-linker-VH). Urutan tag (seperti tag His6 atau tag FLAG direkayasa tidak
- lihat Bab 9) sering ditambahkan di bagian akhir untuk memungkinkan deteksi sedang menyebab
dan pemurnian. Fragmen scFv tersebut cukup kecil, sekitar 25.000 berat molekul. dalam kan infeksi.
penyelidika
Fragmen scFv tersebut dilekatkan pada berbagai molekul lain melalui rekayasa genetika.
n
eksperimen
tal.
183
 Teknologi Kekebalan Tubuh

Fv Fragmen yang luar biasa

IgG

VH VL

}
Pengika S-S
tan S-S Luar biasa
antigen
Engsel
CH1 CL

Aktivasi
CH2

pelengka
p

Pemimpin Peptid
Fc
Pemim a
pin penghu
bung
CH3

Makrofag
mengikat

VH VL VH VL

fragmen dsFv fragmen scFv

184
GAMBAR 6.12 Fragmen Antibodi Fab dan Fv
Fragmen Fab diproduksi oleh pencernaan protease pada daerah engsel. Ikatan disulfida menyatukan rantai berat dan rantai ringan. Untuk membuat fragmen
antibodi tanpa daerah konstan, gen untuk domain VH dan domain VL diekspresikan pada plasmid bakteri. Struktur ini tidak stabil karena kurangnya ikatan
disulfida. Oleh karena itu, ikatan disulfida direkayasa menjadi dua bagian (fragmen dsFv), atau penghubung ditambahkan untuk menyatukan domain VH dan
VL (fragmen scFv).

Daerah pengikatan antigen yang digunakan dalam rekayasa antibodi dapat berasal dari antibodi
monoklonal yang telah dikarakterisasi. Sebagai alternatif, perpustakaan segmen DNA yang
mengkode daerah V dapat diperoleh dari kumpulan sel B yang diperoleh dari sampel darah
hewan atau manusia. Perpustakaan seperti itu secara teori harus mengandung daerah V yang
mampu mengenali molekul target apa pun. Menggunakan sumber manusia menghindari
keharusan untuk prosedur humanisasi yang kompleks yang dijelaskan sebelumnya. Namun,
dalam hal ini perlu untuk menyaring perpustakaan daerah-V untuk fragmen antibodi yang
berikatan dengan molekul target yang diinginkan. Hal ini dapat dilakukan dengan prosedur
tampilan fag yang diuraikan dalam Bab 9. Perpustakaan konstruksi daerah-V diekspresikan
pada permukaan fag, dan molekul target dilekatkan pada beberapa penyangga padat dan
digunakan untuk m e n y a r i n g f a g y a n g membawa daerah V antibodi yang diperlukan.

Domain pengikatan antibodi Fv rantai tunggal dihubungkan dengan berbagai toksin, sitokin, atau enzim untuk membuat antibodi rekombinan.

DIABODI DAN KONSTRUKSI ANTIBODI BISPESIFIK

Berbagai konstruksi antibodi yang direkayasa saat ini sedang diselidiki. Antibodi terdiri dari
dua fragmen Fv (scFv) rantai tunggal yang dirangkai menjadi s a t u . M e m p e r p e n d e k
penghubung dari 15 asam amino menjadi lima asam amino akan mendorong dimerisasi dua
rantai scFv. Hal ini tidak lagi memungkinkan perakitan intrachain dari daerah VH dan VL
yang terhubung. Dimer terdiri dari dua
 BAB 6

Fragmen-fragmen scFv tersusun secara berselang-seling (Gbr. 6.13). Diabodi yang

dihasilkan memiliki dua tempat pengikatan antigen yang mengarah ke arah yang
berlawanan. Jika dua fragmen scFv yang berbeda digunakan, hasilnya adalah diabodi
bispesifik yang akan mengikat dua protein target yang berbeda secara bersamaan.
Perhatikan bahwa pembentukan antibodi bispesifik seperti itu mengharuskan VH-A
dihubungkan ke VL-B dan VH-B ke VL-A. Tentu saja dimungkinkan untuk merekayasa kedua
set VH dan

A)
Urutan
sinyal

Promotor DNA RBS VH Penghubung

VL

15 penghubung aa 5 aa
penghubung

scFvBivalen
diabody
VH VH VL
VL

VH VL

B)
DNA Promotor VHA Pengh VLB RBS VHB Linker VLA
RBS ubung

Diabetes bispecific 185

VH VL

VH VL

C)
DNA
Promotor VHA Pengh VLB PenghuVbuHnBgLinker VLA
RBS ubung

Diabetes rantai tunggal

bispesifik

VH VL

VH VL

GAMBAR 6.13 Konstruk Diabodi yang Direkayasa

(A) Rekayasa konstruksi antibodi dimulai dengan menggabungkan secara genetik domain variabel rantai berat dan ringan
(VH dan VL) dengan penghubung. Penghubung panjang memungkinkan satu polipeptida terbentuk menjadi
satu domain pengikatan antibodi. Penghubung pendek memungkinkan dua polipeptida untuk bergabung menjadi satu
molekul dengan dua domain pengikatan antibodi. Konstruksi ini diekspresikan dalam bakteri menggunakan promotor
bakteri dan RBS (situs pengikatan ribosom). Urutan sinyal memberi tahu
bakteri untuk mengeluarkan protein hasil rekayasa. (B) Alih-alih unit Fv yang identik, dua rantai Fv yang berbeda dapat
diekspresikan secara bersamaan di dalam sel bakteri. Dua rantai Fv yang berbeda akan bersatu menjadi diabodi dengan dua
domain pengikatan antibodi yang berbeda,
yang berbeda di setiap sisi. (C) Antibodi bispesifik dapat dibuat sebagai satu transkrip tunggal dengan penghubung antara VHA
dan VLB, penghubung antara dua bagian, dan akhirnya penghubung antara VHB dan VLA.
 Teknologi Kekebalan Tubuh
Dimer scFv yang distabilkan dengan
Ritsleting leusin
GAMBAR 6.14
Konstruk Antibodi
Bispesifik yang
Direkayasa
Alih-alih penghubung
genetik untuk menahan
diabodi, berbagai protein
juga dapat menyatukan
fragmen scFv. Protein
dengan domain ritsleting
186 leusin mengalami
dimerisasi; oleh karena
itu, ketika gen scFv
secara genetis menyatu
dengan ini, domain scFv
bersatu sebagai dimer.
Protein
seperti streptavidin atau
protein dengan empat
domain helix bundle
dapat digabungkan secara
genetik ke domain scFv.
Ketika diekspresikan, ada
empat domain scFv di
bagian luar, yang
menyediakan empat
tempat pengikatan
antibodi yang berbeda.
4 bundel
ritsleting
heliks
leusin
yang distabilkan
Daerah VL ke rantai polipeptida tunggal
tetramer scFv Streptavidin- scFv yang dikodekan oleh satu gen rekombinan,
seperti yang ditunjukkan pada Gbr. 6.13.
Diabetik bispecific memiliki berbagai
kegunaan potensial dalam terapi, karena
dapat digunakan untuk menyatukan dua
molekul lain; misalnya, dapat digunakan
untuk menargetkan racun ke sel kanker.
Streptavidin
Cara lain untuk membuat antibodi
bispecific yang direkayasa adalah
dengan menghubungkan dua fragmen
scFv yang berbeda dengan protein lain
yang berikatan bersama (Gbr. 6.14).
Dua pilihan yang populer adalah ritsleting
streptavidin dan leusin. Streptavidin adalah
protein pengikat biotin kecil dari bakteri
Streptococcus. Protein ini membentuk
tetramer, sehingga memungkinkan hingga
empat fragmen antibodi untuk disatukan.
Selanjutnya, mengikat
ke kolom biotin dapat memurnikan konstruksi akhir. Daerah ritsleting leusin digunakan
oleh banyak faktor transkripsi yang membentuk dimer (lihat Bab 2). Seringkali, protein
tersebut membentuk dimer campuran ketika ritsleting leusinnya saling mengenali dan
berikatan. Daerah ritsleting leusin dari dua faktor transkripsi berbeda yang berasosiasi
(misalnya, protein Fos dan Jun) oleh karena itu dapat digunakan untuk merakit dua
fragmen scFv yang berbeda.
Menghubungkan dua fragmen scFv bersama-sama dengan daerah penghubung polipeptida atau protein (misalnya,
protein ritsleting streptavidin atau leusin) menciptakan antibodi divalen, yaitu, setiap sisi antibodi akan mengenali
antigen yang berbeda. Konstruksi ini berguna untuk membawa dua protein yang berbeda secara berdekatan di dalam
sel.
UJI ELISA
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) secara luas digunakan untuk
mendeteksi dan memperkirakan konsentrasi protein dalam sampel. Protein yang akan
dideteksi dianggap sebagai antigen. Oleh karena itu, langkah pertama adalah membuat
antibodi yang spesifik untuk protein target. Sistem deteksi kemudian dilekatkan pada
bagian belakang antibodi. Biasanya ini terdiri dari enzim yang menghasilkan produk
berwarna dari substrat yang tidak berwarna. Alkaline phosphatase, yang mengubah X-
Phos menjadi pewarna biru (lihat Bab 8), merupakan pilihan yang umum digunakan.
Sampel yang akan diuji diimobilisasi pada permukaan membran atau di dalam sumur
pada cawan mikrotiter (Gbr. 6.15). Sistem deteksi antibodi plus ditambahkan dan
dibiarkan berikatan. Membran atau cawan mikrotiter kemudian dibilas untuk
menghilangkan semua yang tidak terikat.
antibodi. Substrat ditambahkan, dan intensitas warna yang dihasilkan menunjukkan
tingkat protein target.
Terdapat berbagai modifikasi ELISA. Seringkali pengikatan dan deteksi dilakukan dalam
dua tahap, menggunakan dua antibodi yang berbeda. Antibodi pertama spesifik untuk
protein target. Antibodi kedua mengenali antibodi pertama dan membawa sistem deteksi.
Sebagai contoh, antibodi dapat dibesarkan pada kelinci untuk serangkaian protein target.
Antibodi kedua, yang mengenali antibodi kelinci, dapat diproduksi pada domba. Ini
disebut antibodi sekunder dan sering digambarkan sebagai, misalnya, domba anti-kelinci.
Antibodi sekunder
m li antibodi
e apa pun
m yang dibuat
i pada
l kelinci,
i antibodi ini
k tidak perlu
i direkayasa
ulang untuk
s setiap
i protein
s target yang
t berbeda.
e Hal ini
m memungki
nkan
d penggunaa
e n sistem
t deteksi
e antibodi
k akhir yang
s sama pada
i setiap
, pengujian
meskipun
d antibodi
a primer
n yang
berbeda
k digunakan
a untuk
r mengidenti
e fikasi
n protein
a yang
berbeda.
a
n
t
i
b
o
d
i

i
n
i

a
k
a
n

m
e
n
g
e
n
a
 BAB 6

Antibodi digunakan dalam tes ELISA untuk menentukan konsentrasi relatif protein target atau antigen dalam sampel.
Antibodi primer adalah antibodi yang mengenali protein atau antigen target. Antibodi sekunder mengenali
antibodi primer dan sering kali membawa sistem deteksi. Antibodi sekunder dibuat untuk mengenali antibodi apa pun
yang dibuat pada domba, sapi, kelinci, kambing, atau tikus.

ELISA SEBAGAI ALAT DIAGNOSTIK
ELISA digunakan di berbagai bidang. Kit diagnostik yang mengandalkan ELISA diproduksi untuk
diagnosis klinis penyakit manusia, penyakit susu dan unggas, dan bahkan untuk penyakit
tanaman. Kit diagnostik sangat sederhana sehingga sebagian besar membutuhkan
tidak memerlukan peralatan laboratorium
dan hanya membutuhkan waktu 5 menit.
Kit ELISA dapat digunakan untuk
mendeteksi
penyakit tanaman tertentu dengan
menghancurkan daun dan mengoleskan
jaringan daun pada antibodi. Ketika antigen
spesifik penyakit bereaksi dengan antibodi,
bercak antibodi berubah menjadi biru.
Dalam aplikasi klinis, kit ELISA dapat
mendeteksi keberadaan virus atau bakteri
patogen dalam jumlah kecil, bahkan
sebelum patogen memiliki kesempatan untuk
menyebabkan kerusakan besar. Kit ELISA
klinis mendeteksi berbagai penanda penyakit.
Pada penyakit tertentu, protein karakteristik
menandai dimulainya perkembangan
penyakit jauh sebelum pasien menunjukkan
gejala apa pun. Mendeteksi penanda tersebut
dapat membantu mendiagnosis dan
mengobati masalah sebelum penyakit
menyebabkan kerusakan serius.
Tes diagnostik ELISA bahkan tersedia untuk
Anda coba di rumah. Kit kehamilan di rumah
adalah tes ELISA sederhana y a n g
d i j u a l b e b a s u n t u k human
chorionic gonadotropin (hGC). Ini
adalah protein yang diproduksi oleh
plasenta dan disekresikan ke dalam aliran
darah dan air seni wanita hamil. Tes
kehamilan yang sebenarnya memiliki
empat fitur penting (Gbr. 6.16). Pertama,
seluruh tes berada di atas selembar kertas
yang menampung air seni dari satu ujung
ke ujung lainnya. Kertas ini memiliki tiga
daerah: pertama, daerah di mana antibodi
anti HCG melekat secara longgar pada
strip kertas; kedua, daerah yang disebut
jendela kehamilan; dan terakhir, jendela
kontrol. Saat urin mengalir ke strip kertas,
setiap hCG yang ada diikat oleh
antibodi anti-hCG. Jika wanita tersebut
hamil, kompleks anti-hCG/hCG akan
bergerak ke atas strip kertas. Jika wanita
t e
e r
r a
s k
e
b k
A) u
TAMBAHKAN ANTIBODI ANTI-A YANG TERKAIT SECARA KOVALEN DENGAN ENZIM e
t
a
t t
i a
d s
a
Sampel A Sampel B k s
t
B) MEMBERSIHKAN ANTIBODI YANG TIDAK TERIKAT h r
a i
m p
i
l k
, e
r
a t
n a
t s
C)TAMBAHKAN SUBSTRAT TAK BERWARNA i
UNTUK ENZIM b s
o a
d j
i a
.
a
n (
t M
i e
D) ENZIM MEMBUAT PRODUK BERWARNA - s
h k
C i
G p
u
a n
k
a w
n a
n
b i
e t
E) MENGUKUR ABSORBANSI CAHAYA OLEH PRODUK BERWARNA
r a
g
tersebut hamil, terdapat kelebihan anti-hCG,
sehingga antibodi anti-hCG yang tidak terikat
akan selalu ditemukan). Jika wanita
tersebut
hamil, kompleks anti-hCG / HCG
mencapai jendela kehamilan di mana ia
mengikat

187

GAMBAR 6.15
Prinsip ELISA
ELISA mendeteksi dan
mengukur jumlah protein
tertentu yang terikat pada
sumur pada cawan
mikrotiter.
Antibodi anti-A terkait
dengan enzim seperti alkali
fosfatase. Antibodi hanya
mengenali protein
oranye, dan bukan protein
hijau
(A). Setelah
antibodi berikatan
dengan targetnya,
antibodi yang tidak
terikat akan dicuci
dari cawan
(B). Substrat
kolorimetri dari alkali
fosfatase ditambahkan
ke setiap sumur
(C), dan di mana pun
terdapat antibodi, substrat
dibelah untuk membentuk
produknya yang berwarna-
warni (D). Jumlah warna
sebanding dengan jumlah
protein.
 Teknologi Kekebalan Tubuh

GAMBAR 6.16
Rumah SUMBU KERTAS DARI TES KEHAMILAN DI RUMAH
Tes Kehamilan
Adalah Alat
Diagnostik ELISA Sumbu cair dari kiri Urine
atau darah yang dioleska n di sini
Tes kehamilan yang
ditunjukkan di sini
memiliki empat area
penting di sepanjang
sumbu kertas. Urine atau Anti-hCG Antibodi sekunder #1 Antibodi sekunder #2
darah diaplikasikan pada
bagian paling kiri dan
sumbu di sebelah kanan.
Antibodi anti- hCG yang
melekat secara longgar
pada kertas adalah yang
berikutnya. Jika urin
mengandung hCG, maka
akan berikatan dengan
antibodi dan bergerak di
sepanjang kertas sebagai
Kerta s Kerta s
suatu kompleks. Di area
berikutnya, antibodi
sekunder
yang hanya mengenali hCG terikat pada beberapa antibodi anti- hCG Belokan Tak Berwarna Berubah menjadi biru jika anti-hCG jahat sampai uju
kompleks antibodi hCG- biru ketika
primer melekat kuat dalam hCG/anti-hCG
pola plus. Ketika
menempel ini

188
kompleks hCG berikatan
dengan antibodi
sekunder, sistem
pendeteksian berubah
menjadi biru. Titik
terakhir adalah antibodi
sekunder yang berbeda
yang mengenali antibodi
primer tanpa hCG. Ini
adalah kontrol positif, untuk
memastikan bahwa
antibodi dilepaskan dan
mengotori kertas dengan
urin.
ke antibodi sekunder 1. Ini dilekatkan pada kertas dalam bentuk tanda plus dan tidak dapat
bergerak. Antibodi sekunder memiliki sistem deteksi warna yang melekat padanya. Ketika
kompleks anti-hCG/hCG berikatan dengan antibodi sekunder, maka akan memicu pelepasan warna
dan terbentuklah tanda plus. Jendela kontrol berisi antibodi sekunder 2. Ini hanya mengenali
antibodi anti-hCG yang tidak terikat pada hCG, sehingga warnanya diaktifkan apakah wanita
tersebut hamil atau tidak.
ELISA adalah alat diagnostik yang kuat karena antibodi dapat dibuat untuk hampir semua protein. Untuk tes kehamilan, setiap hCG dalam uri
KOMPONEN SEL VISUALISASI MENGGUNAKAN ANTIBODI
Antibodi dapat digunakan untuk memvisualisasikan lokasi protein spesifik di dalam sel.
Imunositokimia mengacu pada visualisasi antigen spesifik dalam sel yang dikultur,
sedangkan imunohistokimia mengacu pada visualisasi antigen tersebut pada bagian
jaringan yang telah disiapkan. Dalam kedua teknik tersebut, langkah pertama adalah
menyiapkan sel. Sel-sel tersebut harus dirawat untuk mempertahankan arsitektur
selulernya, sehingga sel-sel tersebut tampak seperti ketika masih hidup. Biasanya, sel
diperlakukan dengan agen pengikat silang seperti formaldehida atau dengan denaturant
seperti aseton atau metanol. Dalam imunohistokimia, sampel jaringan dapat dibekukan
dan kemudian diiris menjadi bagian-bagian kecil yang tipis (sekitar 4 mm), sehingga
memberikan gambaran dua dimensi sel. Pilihan lainnya adalah dengan menanamkan
sampel jaringan dalam lilin parafin. Di sini sel-sel yang pertama
didehidrasi dalam serangkaian larutan alkohol, dan kemudian diberi lilin. Jaringan
kemudian dipotong menjadi irisan tipis dua dimensi seperti jaringan beku.
Sel yang diawetkan kemudian perlu dipermeabilisasi sehingga antibodi dapat masuk.
S h
e disiapka
t n
e disiapka
l n, sel
a diperlakuk
h an untuk
membuat
s antigen
a lebih
t mudah
u diakses
oleh
l antibodi.
a Jika
p dalam
i lilin,
s bagian
a jaringan
n dikeringk
an dan
t dihidrasi
i ulang
p dalam
i larutan.
s Bagian
jaringan
s yang
e telah
l difiksasi
dapat
a disinari
t dengan
a gelomban
u g mikro,
yang
b memecah
a ikatan
g silang
i yang
a diinduksi
n oleh
fiksatif,
j atau
a sampel
r dapat
i dipanaska
n n di
g bawah
a tekanan.
n Setelah
permeabil
y isasi,
a
n
g

t
e
l
a
 BAB 6

antibodi primer menemukan antigennya di dalam sampel dan mengikat. Antibodi sekunder
berisi sistem deteksi. Antibodi sekunder berikatan dengan kompleks antibodi/antigen
primer, dan kemudian reagen yang sesuai ditambahkan untuk memvisualisasikan lokasi
kompleks. (Dalam beberapa kasus, antibodi tunggal, dengan sistem deteksi yang
terpasang, digunakan).
Antibodi dideteksi dengan menggunakan enzim atau dengan label fluoresen. Sistem deteksi
yang diperantarai enzim yang umum adalah alkali fosfatase, seperti halnya ELISA-lihat
Gbr.
6.15. Antibodi berlabel fluoresen harus dieksitasi dengan sinar UV, di mana label fluoresen
memancarkan cahaya
pada panjang gelombang yang lebih panjang. Sampel secara langsung divisualisasikan dengan
mikroskop yang dipasang pada sumber sinar UV (Gbr. 6.17). Antibodi fluoresen cenderung
memutih ketika terpapar sinar UV yang berlebihan; oleh karena itu, mikroskop dipasangkan ke
kamera untuk merekam data sebagai gambar digital.

Imunositokimia dan imunohistokimia menggunakan antibodi primer terhadap protein target seluler tertentu untuk
memvisualisasikan lokasinya di dalam sel. Antibodi primer divisualisasikan dengan menambahkan antibodi sekunder
dengan sistem deteksi.

wt TLR2-/-
A)

189
B)

C)

GAMBAR 6.17 Pewarnaan Antibodi Fluoresen

Kolokalisasi Streptococcus pneumoniae dan antigen membran pada bagian otak tikus seperti yang terlihat oleh mikroskop
confocal pada pembesaran 63 kali lipat. Bakteri mengekspresikan GFP dan tampak berwarna hijau. Ketiga antigen
divisualisasikan secara terpisah dengan noda fluoresen merah. Daerah kuning menunjukkan kolokalisasi bakteri dengan
antigen.
Di sebelah kiri, tikus tipe liar dan di sebelah kanan tikus yang tidak memiliki reseptor Toll-like 2. (A) Sel epitel pleksus choroideus yang diwarnai dengan GLT1v.
(B)Ventrikel ketiga dengan granulosit bernoda Gr1 yang menyusup ke dalam (sisipkan: gambar 3D bakteri yang diambil oleh granulosit).
(C)Ventrikel ketiga dan astrosit yang diwarnai dengan GFAP. Dari: Echchannaoui dkk. (2005). Regulasi distribusi
Streptococcus pneumoniae oleh reseptor Toll-like 2 in vivo. Immunobiology 210, 229-236. Dicetak ulang dengan izin.
 Teknologi Kekebalan Tubuh

PEMILIHAN SEL YANG DIAKTIFKAN FLUORESCENCE

Seperti yang dijelaskan pada bagian sebelumnya, antibodi fluoresen digunakan untuk
menemukan lokasi protein intraseluler. Antibodi fluoresen juga dapat mengikat antigen
permukaan. Banyak sel sistem kekebalan tubuh memiliki antigen spesifik pada
permukaannya yang membedakannya dari yang lain. Setiap sel imun dapat memiliki lebih
dari 100.000 molekul antigen pada permukaannya.
Antigen permukaan ini mencirikan berbagai jenis sel imun dan secara sistematis dinamai
dengan memberikan nomor antigen diferensiasi (CD). Antigen sebagian besar
diidentifikasi sebelum fungsi fisiologisnya diketahui. Sebagai contoh,
Antigen CD4 dikaitkan dengan sel T-pembantu, dan CD8 dengan sel T pembunuh. Antibodi
monoklonal tersedia untuk memberi label pada banyak antigen CD, terutama yang paling
umum.
Pemilahan sel yang diaktifkan dengan fluoresensi (FACS) melibatkan pemisahan mekanis
campuran sel ke dalam tabung yang berbeda berdasarkan antigen permukaannya (Gbr. 6.18).
Karena antibodi menempel pada bagian luar sel, sel tidak harus disiapkan seperti di atas.
Dalam contoh ini, sel T pembantu dan sel T pembunuh dapat dipisahkan dari sel darah putih
lainnya berdasarkan keberadaan antigen permukaan CD4 atau CD8. Pertama, suspensi sel
diberi label dengan antibodi monoklonal
ke antigen permukaan yang diminati. Dalam contoh ini, antibodi terhadap CD4 dan CD8
digunakan. Kedua antibodi memiliki label fluoresen yang berbeda untuk kedua antibodi
tersebut. Suspensi sel berlabel dimasukkan ke dalam elektroda pengisian. Tetesan cairan yang
hanya mengandung satu sel dilepaskan ke bagian bawah, dan detektor fluoresensi mencatat
apakah tetesan cairan tersebut berlabel CD4 atau CD8 berdasarkan warna fluoresensinya. Jika
tetesan memiliki antigen, pengisi daya listrik menarik atau mendorong tetesan ke kanan atau ke
kiri, memisahkan keSduuspaenasni stiegl en ke dalam tabung terpisah. Jika tetesan tidak memiliki
antigen
di dalamnya, maka tidak ada muatan listrik dan masuk ke tabung ketiga.
Biasanya dua antibodi yang berbeda digunakan, tetapi beberapa mesin FACS yang lebih baru dapat menyortir
hingga = CD4+
Elektroda
= CD8+ pengisian daya

190

Fotodetektor

GAMBAR 6.18 FACS Laser

Memisahkan Sel CD4+
dan CD8+
Mesin FACS dapat
memisahkan sel yang Pelat logam
diberi label fluoresen ke bermuatan Komputer
dalam kompartemen yang
berbeda. A Campuran sel
CD4+ CD8+
, , dan sel yang
tidak berlabel dipisahkan
berdasarkan
fluoresensinya. Ketika
detektor fluoresensi
menunjukkan warna hijau,
pelat logam bermuatan
menarik tetesan tersebut
ke pelat kiri atau minus,
sehingga sel-sel tersebut CD8+ CD4+
terkumpul ke dalam Tidak
berlabel
tabung kiri. Jika tidak ada
fluoresensi yang
terdeteksi, tetesan tetap
netral dan dikumpulkan
di tabung tengah. Jika
tetesan berpendar merah,
pelat bermuatan menarik
tetesan ke sisi positif, dan
terkumpul di tabung kanan.
 BAB 6

12 antibodi berlabel fluoresensi yang berbeda dan Tanpa Peptida + Peptida CMV A2
dapat menyortir hingga 300.000 sel per
menit.
Flow cytometry adalah teknik terkait untuk
menganalisis sel yang dilabeli secara

CMV-A2 Tetramer PE
fluoresen. Seperti halnya FACS, sel diberi
label dengan antibodi monoklonal terhadap
antigen permukaan sel. Antibodi
dikonjugasikan ke berbagai label fluoresen
yang berbeda, dan setiap antibodi dideteksi
berdasarkan fluoresensinya. The
sel dimasukkan ke dalam elektroda pengisian
dan dilepaskan dalam tetesan kecil. Selama
CD107a/b APC
flow cytometry, sel tidak disortir dan
GAMBAR 6.19
disimpan; sebaliknya, sampel sel diukur dan
dibuang. Saat sel melewati detektor, sel
Komputer merekam fluoresensi dan memplot jumlah sel dengan masing-masing label vaksin. Conto
fluoresen. Ini diplot dengan titik kecil yang mewakili masing-masing sel (Gbr. 6.19). h Data
Sebagian
Flow
besar vaksin Cytom
FACS dan flow cytometry menggunakan antibodi monoklonal terhadap antigen permukaan. Mesin FACS dapat hanyalah etry
menyortir sel ke dalam sampel individual, dan flow cytometry hanya merekam label fluoresen dan memplot data pada agen Ekspre
grafik. penyakit, si
yang dibunuh protein
dengan panas pada
MEMORI KEKEBALAN DAN VAKSINASI tinggi atau permuk
aan sel
Individu yang selamat dari suatu infeksi biasanya menjadi kebal terhadap penyakit didenaturasi
darah
tertentu, meskipun tidak terhadap penyakit lainnya. Ini karena sistem kekebalan tubuh secara putih.
"mengingat" antigen asing, suatu proses yang disebut memori kekebalan tubuh. Pada kimiawi. Darah
saat antigen yang sama muncul lagi, antigen tersebut akan memicu respons yang jauh lebih Perlakuan putih
cepat dan lebih agresif daripada sebelumnya. Akibatnya, mikroorganisme yang menyerang panas atau Sel-sel
biasanya akan kewalahan sebelum menyebabkan penyakit yang nyata. kimiawi diwarnai
menonaktifka dengan
Memori kekebalan tubuh disebabkan oleh sel B khusus yang disebut sel memori. Seperti tetramer
n virus atau
yang telah dibahas sebelumnya, sel B yang masih muda dipicu untuk membelah diri jika MHC-kelas
bakteri I dan anti-
menemukan antigen yang cocok dengan antibodi mereka sendiri. Sebagian besar sel B baru
sehingga CD107
dikhususkan untuk sintesis antibodi, dan hanya hidup beberapa hari. Namun, beberapa sel B
tidak dapat yang
yang aktif menjadi sel memori, dan alih-alih membuat antibodi, mereka hanya menunggu.
menyebabkan dilabeli
Jika suatu hari antigen yang mereka kenali muncul lagi, sebagian besar sel memori beralih
penyakit. dengan
dengan sangat cepat ke produksi antibodi. APC
Namun,
masih cukup (alofikosia
Vaksinasi memanfaatkan memori kekebalan tubuh. Vaksin terdiri dari berbagai turunan
nin, biru)
dari agen infeksius yang tidak lagi menyebabkan penyakit tetapi masih bersifat antigenik, banyak
dan
yaitu menginduksi respons imun. Sebagai contoh, bakteri yang dimatikan dengan pemanasan struktur asli diperlaku
terkadang digunakan. Antigen pada bakteri yang mati merangsang pembelahan sel B. yang ada kan
Beberapa sel B membentuk sel memori sehingga, nantinya, ketika kuman hidup yang untuk sebagai
sesuai dengan vaksin menyerang orang yang divaksinasi, sistem kekebalan tubuh sudah merangsang berikut:
siap. Para pembuat vaksin terus berusaha menemukan berbagai cara untuk menstimulasi kekebalan (Panel
sistem kekebalan tubuh, tanpa menyebabkan penyakit. tubuh. Ketika kiri)
Diwarnai
agen hidup
dengan
MEMBUAT VAKSIN menginfeksi anti-CD3
Karena vaksin merupakan bagian yang sangat besar dari industri bioteknologi, dan bagian berlabel
yang sangat penting dari sistem perawatan kesehatan kita, banyak penelitian dan uang phycoeryth
rin (merah)
yang diinvestasikan untuk menemukan vaksin yang baru dan lebih baik. Banyak vaksin
dan anti-
yang diberikan pada bayi muda; oleh karena itu, memastikan keamanan dan efektivitas CD8
vaksin sangatlah penting. Ada banyak metode yang berbeda untuk mengembangkan berlabel
protein klorofil peridinin (hijau), dan dianalisis tanpa inkubasi lebih lanjut. (Panel kanan) Diwarnai setelah stimulasi dengan
peptida serumpun (NLVPMVATV). Dari: Betts dkk. (2003). Identifikasi sel T CD8+ spesifik antigen yang sensitif dan layak dengan
uji flow cytometric untuk degranulasi.
J Metode Imunol 281,
65-78. Dicetak ulang dengan izin.

191
 Teknologi Kekebalan Tubuh

orang yang divaksinasi, sel B memori diaktifkan dan penyakit ditekan. Vaksin utuh
semacam itu memberikan respons kekebalan terbaik, tetapi banyak penyakit tidak dapat
diisolasi atau dibiakkan untuk membuat vaksin utuh. Di lain waktu, biaya untuk
membiakkan patogen sangat mahal. Selain itu, menumbuhkan virus hidup adalah
pekerjaan yang berbahaya, dengan potensi paparan terhadap pekerja laboratorium.
Dengan
m e m p e r t i m b a n g k a n keterbatasan ini, banyak strategi yang berbeda telah dikembangkan
untuk membuat vaksin yang lebih baik.
Vaksin yang dilemahkan adalah patogen yang masih hidup yang tidak lagi mengekspresikan
toksin atau protein yang menyebabkan gejala penyakit (Gbr. 6.20). Terkadang, virus atau
bakteri direkayasa secara genetik untuk menghilangkan gen yang menyebabkan penyakit.
Vaksin yang dilemahkan lainnya adalah jenis yang terkait tetapi tidak patogenik dari agen
penular (lihat Kotak 6.1). Membuat virus yang dilemahkan tidak menimbulkan risiko yang
sama dengan virus hidup. Namun, masih banyak penelitian yang diperlukan untuk
mengidentifikasi gen-gen yang menyebabkan penyakit. Kerugian lainnya adalah virus yang
dilemahkan d a p a t kembali menjadi versi patogen, terutama jika virus yang dilemahkan
bermutasi hanya pada satu gen penyebab penyakit.

A) VIRUS TERDENATURASI PANAS

GAMBAR 6.20
Seluruh Vaksin
Termasuk
Patogen yang
Virus
Dibunuh atau
Dilemahkan
(A)Perlakuan panas atau
kimiawi yang tinggi
membunuh patogen, tetapi
menyisakan cukup
192 banyak antigen yang
masih utuh untuk
B) BAKTERI YANG DILEMAHKAN
menimbulkan respons
imun. Setelah terpapar
virus atau bakteri yang
mati, sel B memori Bakteri
terbentuk dan mencegah
patogen hidup membuat
orang tersebut
(B)Virus atau bakteri yang
dilemahkan telah dimutasi
atau direkayasa secara
genetik untuk
menghilangkan
gen yang menyebabkan Kromosom Virulensi Gen virulensi Gen virulen
penyakit. protein lain yang dihapus
Sistem kekebalan tubuh bermutasi
menghasilkan antibodi
untuk membunuh
patogen yang dilemahkan VIRULEN- MENIMBULKAN REAKSI
dan membentuk sel B
MENYEBABKAN KEKEBALAN TUBUH
memori yang mencegah
PENYAKIT DAN TANPA PENYAKIT
serangan di masa
depan. REAKSI KEKEBALAN
TUBUH
Kotak 6.1 Cacar Sapi dan Cacar

Infeksi cacar sapi hanya menimbulkan penyakit ringan tetapi memberikan

dari sapi-sapi mereka. Akibatnya, para pemerah susu jarang memiliki
kekebalan terhadap cacar yang sering kali berakibat fatal. Pada abad
bopeng dan mendapatkan reputasi kecantikan karena kulit mereka yang
pertengahan, sebagian besar penduduk terkena cacar. Sekitar 20% hingga
tidak bercacat. Hal ini menyebabkan eksperimen klasik Edward Jenner di
30% dari mereka yang terinfeksi meninggal, dan mereka yang selamat
mana ia menyuntik anak-anak dengan cacar sapi dan menunjukkan bahwa
berakhir dengan bopeng- bopeng jelek di wajah mereka - karena itu disebut
hal ini dapat melindungi mereka dari infeksi cacar. Istilah vaksinasi berasal
cacar. Pemerah susu jarang menderita cacar karena sebagian besar sudah
dari vacca, bahasa Latin yang berarti "sapi".
terkena cacar sapi
 BAB 6

Vaksin subunit adalah vaksin untuk melawan satu komponen atau protein dari agen penyakit,
dan bukan keseluruhan penyakit (Gbr. 6.21). Vaksin subunit hanya tersedia karena teknologi
DNA rekombinan. Langkah pertama dalam membuat vaksin subunit adalah mengidentifikasi
protein potensial atau bagian dari protein yang dapat menimbulkan respons imun yang baik.
Protein bagian dalam dari patogen tidak akan memicu sistem kekebalan tubuh ketika virus
yang sebenarnya menantangnya. Karena i tu, sebagian besar vaksin subunit dibuat dari protein
yang ditemukan di permukaan luar virus atau bakteri. Eksperimen harus dilakukan untuk
mengevaluasi protein yang dipilih untuk vaksin subunit. Setelah protein yang sesuai
diidentifikasi, protein tersebut diekspresikan dalam sel mamalia yang dikultur, telur, atau
sistem lain yang mudah dipelihara. Protein target diisolasi dari
protein lain dan digunakan untuk mengimunisasi tikus untuk menguji efektivitasnya. Setelah
pengujian ekstensif pada hewan, protein yang telah dimurnikan digunakan sebagai vaksin.
Kadang-kadang vaksin subunit gagal, mungkin karena protein tidak membentuk
struktur yang benar saat diekspresikan dalam sel mamalia atau telur. Dalam kasus ini,
vaksin peptida dibuat. Vaksin ini hanya menggunakan sebagian kecil protein. Karena peptida
tersebut berukuran kecil, maka peptida tersebut dikonjugasikan ke pembawa atau bahan
pembantu (Gbr. 6.22). Ini berkisar dari yang hidup
virus atau bakteri nonpathogen, hingga protein lain yang merangsang respons imun yang
lebih baik daripada protein vaksin itu sendiri.

Patogen yang dibunuh, patogen yang dilemahkan, protein tunggal, atau epitop dari patogen penyebab penyakit
digunakan sebagai vaksin. Vaksin ini diisolasi dan disuntikkan ke manusia untuk menimbulkan respons kekebalan
tubuh mereka tanpa menyebabkan penyakit.

MEMBUAT VAKSIN VEKTOR MENGGUNAKAN ke

REKOMBINASI RUMAH TANGGA dalam
Metode lain untuk menampilkan antigen asing untuk digunakan sebagai vaksin adalah geno
vaksin vektor. Di sini, rekayasa genetika digunakan untuk mengekspresikan antigen m
penyebab penyakit pada permukaan virus atau bakteri nonpatogen. Ketika ini vaccin
menginfeksi seseorang, ini menginduksi kekebalan baik terhadap mikroorganisme ia.
nonpatogen maupun terhadap antigen yang melekat. Sebagai contoh, virus vaccinia
adalah kerabat nonpatogenik dari virus cacar. Penggunaan virus vaccinia sangat efektif sehingga
penyakit cacar dapat diberantas. Jika virus vaccinia direkayasa untuk mengekspresikan antigen
dari
virus mematikan lainnya, orang yang divaksinasi akan mendapatkan kekebalan terhadap
cacar dan virus lainnya secara bersamaan. Memang, beberapa gen dapat disisipkan,
sehingga memberikan kekebalan terhadap berbagai penyakit. Manfaat dari penggunaan
virus vaccinia adalah bahwa virus ini sangat kuat dan merangsang perkembangan sel B dan
sel T. Sebaliknya, banyak vaksin lain, terutama vaksin subunit, hanya merangsang respons
sel B.
Memasukkan gen ke dalam genom vaccinia merupakan hal yang canggung karena genom
tersebut memiliki sangat sedikit situs enzim restriksi. Namun, urutan genom vaccinia telah
diketahui. Hal ini memungkinkan gen ditambahkan ke dalam genom menggunakan
rekombinasi homolog (Gbr. 6.23). Dalam rekombinasi homolog, dua segmen DNA yang
serupa atau homolog menyelaraskan, dan satu untai
setiap heliks DNA dipecah dan ditukar untuk membentuk persilangan. Satu persilangan
menciptakan molekul hibrida; jika dua persilangan terjadi b e r d e k a t a n , seluruh wilayah DNA
akan dipertukarkan. Selama rekombinasi homolog pada vaksinia, sebuah wilayah DNA untai
tunggal dihasilkan dari pemutusan untai ganda pada gen baru yang masuk. Daerah untai
tunggal menyerang heliks ganda dari genom vaccinia untuk membentuk heliks tiga. Salah
satu untai dari vaccinia kemudian bebas untuk melakukan hibridisasi ke daerah homolog
untai tunggal pada gen yang masuk. Jika hal ini terjadi di kedua sisi, gen asing dimasukkan
 193

Mengubah virus atau bakteri yang tidak berbahaya sehingga mengekspresikan protein dari patogen penyebab penyakit
pada permukaannya dapat mengelabui sistem kekebalan tubuh untuk membuat antibodi terhadap patogen penyebab
penyakit.
 Teknologi Kekebalan Tubuh

GAMBAR 6.21
(KIRI)
Vaksin Subunit
Mengandalkan
Antigen Tunggal Virus
Protein antigenik tunggal
dari patogen diisolasi dan
gennya dikloning ke dalam Epitop
Gen klon antigenik
vektor ekspresi. Gen
untuk antigen
tersebut diekspresikan permukaan
dalam sel mamalia yang
dikultur (seperti sel ANTIGEN PROTEIN
ovarium hamster Cina VIRUS
[CHO]), diisolasi,
dimurnikan, dan g
digunakan sebagai
vaksin.

CHO MENGKLONING DAN

194 sel MENGEKSPRESIKAN
EPITOP ANTIGENIK

Nukleus

Mengisolasi
protein virus yang
disekresikan

untuk mencegah
GAMBAR 6.22 degradasi, dan
PROTEI MEMURNIKAN PEPTIDA
(KANAN) Vaksin N
Peptida MURNI
Terkonjugasi YANG
dengan Protein DIGUN
Pembawa Vaksin AKAN
peptida adalah bagian SEBAG
kecil dari protein AI
antigenik dari patogen. VAKSIN
Peptida sering kali Protein pembawa
merupakan epitop yang
memunculkan respons
imun yang kuat.
Karena
peptida kecil, beberapa
peptida dikonjugasikan
ke protein pembawa
 Penghubung
untuk menstimulasi
kekebalan tubuh TAUTKAN PEPTIDA KE PEMBAWA
sistem.
 BAB 6

GAMBAR 6.23
Plasmid Rekombinasi
Homolog
Menambahkan Gen
Promotor virus Vaccinia Baru ke Genom
Vaksinia Plasmid
berisi
dua daerah yang homolog
dengan gen timidin kinase
DNA virus dan mengapit gen
Vaccinia DNA timidin kinase virus
timidin kinase virusGen
Vaccinia
antigen yang dikloni ng antigen yang dikloning.
Plasmid Ketika plasmid sejajar
dengan genom vaksinia,
daerah homologi
menimbulkan peristiwa
rekombinasi. Vaksinia
rekombinan akan
mendapatkan gen antigen
Promotor virus Vaccinia yang dikloning dan
kehilangan gen untuk
timidin kinase.

Gen timidin kinase DNA virus Vaccinia

Virus vaccinia rekombinan

195

VAKSINASI ULANG
Banyak genom dari agen infeksius yang kini telah diurutkan. Vaksinologi terbalik
memanfaatkan informasi ini untuk menemukan antigen baru untuk digunakan dalam
imunisasi (Gbr. 6.24). Penelitian utama dimulai dengan mengkloning setiap gen dari
organisme yang menular menjadi
perpustakaan ekspresi. Semua protein diekspresikan, diisolasi, dimurnikan, dan
kemudian disaring pada tikus untuk mengetahui respons kekebalannya. Setiap protein
diuji untuk menstimulasi sistem kekebalan tubuh dan kemampuannya untuk melindungi
tikus dari agen infeksius yang sebenarnya. Protein yang memberikan respons terbaik
dapat digabungkan menjadi vaksin subunit atau digunakan sebagai vaksin terpisah.
Vaksinologi terbalik telah digunakan untuk membuat vaksin untuk Neisseria meningitidis
serogrup B, yang merupakan penyebab utama meningitis pada anak-anak. Bakteri yang
dilemahkan tidak efektif sebagai vaksin, dan hingga pengurutan genom N. meningitidis
selesai, tidak ada vaksin yang tersedia. Sebuah perpustakaan yang terdiri dari 350 protein N.
meningitidis yang berbeda diekspresikan dan dimurnikan dari
E. coli. Ini disaring secara individual untuk mengetahui keberadaannya di permukaan
bakteri menggunakan ELISA dan FACS. Protein permukaan kemudian disaring untuk mengetahui
efektivitas kekebalannya. Dari 350 protein yang diuji, hanya 29 yang menjadi kandidat
potensial dan saat ini sedang dikembangkan menjadi vaksin. Tanpa kemampuan untuk
mengurutkan genom, pengembangan vaksin sering kali tidak mungkin dilakukan, tetapi
sekarang penyakit-penyakit baru dan yang baru muncul dapat dipelajari untuk menemukan
vaksin yang potensial.
Vaksinologi terbalik menggunakan sekuens genom yang diekspresikan untuk menemukan vaksin potensial baru. Vaksin normal dibuat dengan menggunakan organisme pat
 Teknologi Kekebalan Tubuh
MENGENALKAN ANTIGEN BARU UNTUK VAKSIN
Pendekatan lain untuk membuat vaksin adalah dengan mengidentifikasi gen patogen bakteri
yang diekspresikan ketika patogen memasuki inang. Gen-gen ini biasanya mengkode protein
yang berbeda
PERPUSTAKAAN EKSPRESI GEN DARI
ORGANISME MENULAR
MENGISOLASI PROTEIN
196
PERIKSA SETIAP PROTEIN
UNTUK RESPON IMUN PADA
TIKUS
GAMBAR 6.24
Vaksinologi Terbalik
Vaksinologi terbalik
menggunakan gen yang
dari antigen permukaan. Mereka mencakup berbagai adaptasi
yang dilakukan patogen untuk hidup di dalam organisme
inang.
Biasanya bakteri yang masuk ke dalam hewan ditelan oleh fagosit
dan dicerna oleh enzim di dalam lisosom. Beberapa patogen ditelan
seperti biasa, tetapi terhindar dari pencernaan. Modifikasi yang
diperlukan untuk hidup secara intraseluler meliputi perubahan
nutrisi dan metabolisme serta mekanisme untuk melindungi diri dari
serangan inang. Banyak jenis gen yang berbeda diperlukan untuk
peralihan ini, dan produk dari gen-gen ini merupakan antigen
potensial untuk pengembangan vaksin.
Secara tradisional, mengidentifikasi gen yang diekspresikan
hanya dalam sel inang bergantung pada penggabungan gen. Gen
yang dicurigai secara genetik menyatu dengan reporter seperti β
galaktosidase, luciferase, atau protein fluoresen hijau (GFP),
atau dengan tag epitop seperti FLAG atau
mikoriza (lihat Bab 9). Gen fusi dimasukkan ke dalam organisme
patogen, yang kemudian dibiarkan menginfeksi inang. Jumlah
ekspresi gen pelapor berkorelasi dengan tingkat ekspresi gen
target. Misalnya, jika gen target dihubungkan dengan GFP,
jumlah fluoresensi dipantau dengan mikroskop fluoresensi atau
sitometri aliran berbasis fluoresensi. Jika fluoresensi meningkat
dengan invasi sel inang, maka gen target merupakan kandidat
vaksin yang potensial karena mungkin penting untuk patogenesis
bakteri.
Fusi gen individu baik-baik saja untuk gen yang dicurigai, tetapi
skrining untuk gen baru dengan metode ini akan membosankan.
Sebagai gantinya, induksi fluoresensi diferensial (DFI)
menggunakan kombinasi fusi GFP dan pemilahan FACS (lihat
diskusi sebelumnya) untuk mengidentifikasi gen-gen baru yang
terlibat dalam invasi inang (Gbr. 6.25). Pertama, sebuah
perpustakaan gen dari organisme patogen secara genetik
dihubungkan dengan GFP. Pustaka tersebut ditransformasikan ke
dalam sel bakteri di mana fusi gen diekspresikan untuk
menghasilkan GFP. Bakteri
kemudian diberi rangsangan spesifik yang terkait dengan invasi
inang. Sebagai contoh, ketika fagosit menelan mereka, bakteri
meninggalkan lingkungan netral (pH 7) dan memasuki
kompartemen yang bersifat asam (pH 4). Untuk menentukan
apakah perubahan pH menginduksi ekspresi gen, bakteri
dengan pustaka fusi dipindahkan ke lingkungan asam. Mereka
kemudian disortir menggunakan FACS untuk mengumpulkan
dengan ekspresi GFP yang tinggi. Jika gen baru yang menyatu
dengan GFP benar-benar diinduksi oleh pH rendah, tingkat GFP-
nya harus turun ketika digeser kembali ke pH netral. Oleh karena
itu, sel dengan ekspresi GFP yang tinggi
digeser ke pH 7 dan digunakan, tetapi kali ini bakteri dengan pH rendah
diidentifikasi dalam genom agen patogen. Pertama, gen-gen tersebut dikloning ke dalam vektor ekspresi dan diekspresikan untuk
menghasilkan protein. Setiap protein diuji pada tikus untuk mengetahui respons kekebalannya.
tingkat GFP terinfeksi penyakit tertentu yang membutuhkan vaksin. Serum tersebut
dikumpulkan. merupakan sumber yang kaya akan antibodi terhadap agen penyakit yang
Kumpulan bakteri dipilih. Serum tersebut kemudian dicampur
yang lebih kecil
kembali
dirangsang
dengan pH
rendah dan
disortir,
mengumpulkan
bakteri yang
memiliki ekspresi
GFP tinggi.
Skema
penyortiran ini
menghilangkan
gen-gen yang
diekspresikan
secara konstitutif
ditambah gen-gen
yang tidak
diinduksi oleh pH
rendah. Gen yang
tersisa adalah gen
yang diinduksi
oleh asam yang
mengadaptasi
organisme untuk
hidup di dalam
inang. Gen-gen
ini kemudian
dapat dievaluasi
sebagai antigen
untuk
pengembangan
vaksin.
Metode
lain untuk
mengident
ifikasi
antigen
baru untuk
pengemba
ngan
vaksin
adalah
teknologi
antigen
terinduksi
in vivo
(in vivo
induced
antigen
technolog
y, IVIAT;
Gbr.
6.26).
Metode ini
mengambi
l serum
dari pasien
yang telah
 BAB 6

GAMBAR 6.25
Bakteri
Induksi Diferensial
Plasmid
Fluoresensi (DFI)
Gen untuk protein fluoresen hijau (GFP)
Pertama, gen dari
patogen yang diminati
Kromosom dikloning dalam bingkai
Segmen DNA acak dari organisme menular
dengan gen GFP.
Kemudian, gen yang telah
dikloning tersebut akan
diinkubasi dengan gen GFP.
Protein fusi kemudian
diekspresikan dalam
bakteri. Pertama,
seluruh populasi bakteri
BERGESER KE pH RENDAH DAN SIMPAN SEMUA GFP YANG DIEKSPRESIKAN
terpapar pada pH rendah.
Bakteri yang
mengekspresikan GFP
diisolasi. Klon-klon ini
mengekspresikan protein
GFP secara konstitutif
atau diinduksi oleh pH
rendah. Untuk
mengisolasi klon yang
hanya diekspresikan
pada pH rendah, sel-sel hijau
digeser ke pH netral, dan
GESER KE pH NETRAL kali ini, hanya sel yang
DAN SIMPAN SEMUA YANG TIDAK MENGEKSPRESIKAN GFP tidak berwarna yang
disimpan.
Mengulangi prosedur ini
akan memastikan
seperangkat gen murni
yang diinduksi hanya
pada pH rendah.
Potensi
gen yang diinduksi asam dan antigen potensial untuk vaksin

197

dengan sampel mikroorganisme penyebab penyakit. Hal ini akan menghilangkan

antibodi yang mengikat protein yang diekspresikan oleh mikroorganisme saat berada
di luar inang. Hal ini menyisakan kumpulan antibodi terhadap protein yang
diekspresikan hanya selama infeksi. Untuk mengidentifikasi protein yang sesuai
dengan antibodi ini, perpustakaan ekspresi genom dibangun
yang mengandung semua gen dari mikroorganisme. Perpustakaan diekspresikan dalam E.
coli dan diperiksa oleh antibodi yang tersisa. Ketika antibodi cocok dengan klon
perpustakaan, sisipan gen diurutkan untuk mengidentifikasi antigen protein. Metode ini
secara langsung mengidentifikasi antigen protein yang merangsang produksi antibodi
selama infeksi asli; oleh karena itu, antigen yang diidentifikasi dengan metode ini
kemungkinan besar merupakan kandidat vaksin.
Patogen harus mengubah metabolisme mereka ketika berubah dari organisme yang hidup bebas ke lingkungan di dalam inangnya. Protein yang membantu patogen beradapta
DFI dan IVIAT adalah dua teknik untuk mengidentifikasi protein yang memungkinkan patogen untuk hidup di dalam organisme. DFI menggabungkan protein potensial den
 Teknologi Kekebalan Tubuh

PUSTAKA EKSPRESI DARI ORGANISME MENULAR

Serum dari pasien yang terinfeksi dengan antibodi

Organism e menular

E. COLI YANG
MENGEKSPRESIKAN SETIAP GEN

MENGHILANGKAN ANTIBODI TERHADAP PROTEIN PERMUKAAN ORGANISME MENU

198

MENGISOLASI PLASMID DAN

MENYISIPKAN SEKUENS
GAMBAR 6.26 Teknologi Antigen yang Diinduksi Secara In Vivo (IVIAT)
Menemukan antigen baru untuk membuat vaksin baru bergantung pada identifikasi protein yang menimbulkan respons imun. IVIAT mengidentifikasi antigen
secara langsung dari pasien yang telah terpapar organisme patogen. Pertama, perpustakaan ekspresi dibuat yang mencakup masing- masing gen dari patogen yang
diminati. Selanjutnya, serum dari pasien yang terinfeksi dikumpulkan dan diserap terlebih dahulu ke organisme yang menular (ditumbuhkan dalam kultur) untuk
menghilangkan antibodi yang mengenali protein permukaan. Antibodi yang tersisa digunakan untuk menyaring pustaka ekspresi. Ketika antibodi mengenali
protein yang dikloning, klon DNA spesifik diurutkan untuk mengidentifikasi produk gen.

VAKSIN DNA MENGHAPUS KEBUTUHAN UNTUK MEMURNIKAN

ANTIGEN
Prinsip dari vaksin DNA adalah hanya memberikan DNA yang mengkode antigen yang
sesuai, bukan memberikan mikroorganisme utuh atau bahkan protein yang telah
dimurnikan. Vaksin DNA telanjang terdiri dari plasmid yang membawa gen untuk antigen
di bawah kendali promotor yang kuat. Promotor awal perantara dari sitomegalovirus
sering digunakan karena ekspresinya yang kuat. DNA kemudian disuntikkan langsung ke
dalam jaringan otot. Gen asing diekspresikan selama beberapa minggu dan protein yang
dikodekan dibuat dalam jumlah yang cukup untuk memicu respons imun. Respons imun
dilokalisasi ke bagian yang dipilih.
 BAB 6

otot, yang membantu menghindari efek samping. Selain itu, vaksin s

DNA yang dimurnikan jauh lebih murah untuk dipersiapkan e
memiliki lebih
daripada protein yang dimurnikan dan dapat disimpan dalam d
banyak
keadaan kering pada suhu kamar, sehingga tidak perlu Beruntai ganda
DNA plasmid antibodi a
pendinginan. Metode terbaik untuk menghantarkan DNA adalah n
terhadap
m e n e m p e l k a n n y a pada mikropartikel dengan permukaan g
hepatitis B.
kationik (Gbr. 6.27) karena permukaan tersebut berikatan dengan d
Semua
tulang punggung fosfat yang bermuatan negatif. peserta i
Setelah mikropartikel berlapis DNA memasuki sel, DNA secara sebelumnya k
perlahan dilepaskan dari manik-manik dan kemudian diubah Microbead telah e
menjadi protein. Pelepasan DNA secara perlahan akan menerima m
menimbulkan respons imun yang lebih baik daripada dosis DNA vaksin b
langsung yang besar. Sistem kekebalan tubuh harus membuat tradisional, a
lebih banyak antibodi terhadap protein. sehingga n
Salah satu masalah dengan vaksin DNA adalah bahwa urutan DNA vaksin g
tertentu dapat menginduksi respons imun secara langsung. kentang k
Secara khusus, beberapa motif urutan DNA yang ditemukan hanya a
dalam DNA bakteri dapat menimbulkan respons imun yang kuat, meningkatka n
yang pada gilirannya dapat menyebabkan tubuh menargetkan n kekebalan
DNA-nya sendiri, sehingga menghasilkan respons autoimun. tubuh.
Kelemahan
utama
Alih-alih menyuntikkan protein, beberapa vaksin hanya berupa DNA dari gen yang akan memunculkan respons
penggunaan
imun. Setelah DNA memasuki sel, DNA akan diubah menjadi protein, yang akan memunculkan respons imun,
sehingga memberikan kekebalan.
vaksin dalam
sumber
makanan
VAKSIN YANG DAPAT DIMAKAN adalah
kemungkinan
Banyak vaksin yang rentan terhadap panas, dan rusak bila tidak disimpan dalam lemari
sayuran
pendingin. Di negara maju, hal ini tidak menjadi masalah, tetapi di negara berkembang, tempat
vaksin
penyimpanan yang tepat sulit ditemukan. Selain itu, diperlukan jarum dan tenaga yang
tertukar
berkualifikasi untuk memberikan vaksin yang disuntikkan. Alternatif lain dari suntikan adalah
dengan
dengan menggunakan vaksin oral. Vaksin ini diminum melalui mulut dalam bentuk cair atau
sayuran biasa
pil. Tentu saja, antigen yang diberikan secara oral tidak boleh terdegradasi oleh enzim
dan
pencernaan dan harus tetap merangsang sistem kekebalan tubuh. Salah satu contohnya adalah
digunakan
vaksin polio oral, yang mengandung virus polio hidup yang dilemahkan, sedangkan vaksin
sebagai
polio yang disuntikkan mengandung virus yang tidak aktif. Keuntungan dari vaksin oral adalah
makanan.
bahwa virus yang dilemahkan akan menjajah usus dan merangsang sistem kekebalan tubuh
dengan cara yang sama seperti bentuk polio yang ganas. Kerugiannya adalah kemungkinan Alih-alih
virus hidup yang dilemahkan dapat berubah kembali menjadi bentuk yang ganas dan penerima vaksin
akan terkena polio. Perkiraan berbasis
untuk ini adalah 1 dosis ganas dalam 2,5 juta. Di mana polio sendiri sangat jarang terjadi, makanan,
risiko ini terlalu besar. Sebagian besar anak-anak di Amerika Serikat saat ini menerima bentuk para peneliti
vaksin polio yang tidak aktif. kini
mengemban
Metode lain untuk membuat vaksin yang stabil terhadap panas dan berbiaya rendah adalah gkan vaksin
dengan mengekspresikan antigen pada tanaman dan kemudian memakan tanaman tersebut. oral yang
Manfaat dari vaksin yang dapat dimakan adalah d a p a t "memproduksi" vaksin dalam tahan
jumlah besar dengan harga murah. Pasien harus memakan bagian tertentu dari jaringan panas. Alih-
tanaman untuk mendapatkan kekebalan. Pendistribusian vaksin di negara-negara alih tanaman
berkembang mudah dilakukan, dan penyimpanannya sama dengan tanaman biasa. seperti
Kemajuan terbaru dalam mengekspresikan protein asing pada tanaman (lihat Bab 14) telah jagung dan
memfasilitasi pengembangan vaksin yang dapat dimakan. Kentang hasil rekayasa genetika kentang,
yang mengandung vaksin hepatitis B saat ini telah memasuki tahap uji coba pada manusia. tanaman lain
Para sukarelawan memakan potongan kentang mentah yang telah dicincang halus yang dapat
mengekspresikan protein permukaan dari hepatitis B. Enam puluh persen dari mereka yang makan dimakan
GAMBAR 6.27
Microbeads Berlapis DNA Microbeads dilapisi dengan DNA plasmid yang mengkode gen antigen dan disuntikkan ke dalam
tubuh pasien. Begitu berada di dalam sel, DNA plasmid dilepaskan secara perlahan dan antigen protein diekspresikan selama periode
waktu tertentu. The
protein yang diekspresikan menimbulkan respons kekebalan tanpa menyebabkan penyakit, sehingga memvaksinasi orang tersebut
terhadap paparan patogen di masa depan.

199
 Teknologi Kekebalan Tubuh

untuk mengekspresikan vaksin. Salah satu tanaman yang potensial adalah Nicotiana
benthamiana, kerabat tembakau yang dapat dimakan, tetapi tidak digunakan untuk
makanan. Tanaman ini mudah dibuat transgenik, dan antigen vaksin diekspresikan
dalam jaringan daun. Untuk menjaga agar antigen tetap berada di dalam jaringan daun,
protein rekombinan hanya diproduksi di dalam kloroplas. Karena kloroplas hanya
diwariskan secara maternal, serbuk sari dari tanaman transgenik tidak mengandung
transgen. (Jika serbuk sari mengandung gen rekombinan, maka gen tersebut dapat
terbawa ke ladang tembakau normal dan memengaruhi genetika tanaman normal).
Setelah tanaman yang mengekspresikan vaksin tumbuh, bagian yang berdaun dipanen,
dicuci, digiling, dan dikeringkan. Bubuk tersebut kemudian dimasukkan ke dalam
kapsul gelatin. Jenis vaksin ini mudah diangkut dan didistribusikan, daun yang
dikeringkan dengan cara dibekukan tahan terhadap panas, dan pilnya mudah diberikan.
Tentu saja, efektivitas dan potensi efek samping perlu dinilai melalui serangkaian uji
klinis.

Vaksin yang dapat dimakan dapat berupa virus hidup yang dilemahkan seperti vaksin polio oral, atau protein antigenik
yang diekspresikan dalam makanan.

Kotak 6.2 Keamanan Vaksin

Di Amerika Serikat, bayi menerima vaksin untuk berbagai penyakit, meluasnya vaksinasi pertusis, jumlah kasus batuk rejan terus
termasuk difteri, tetanus, pertusis (batuk rejan), campak, gondong, rubella, meningkat. Pada tahun 2004, negara bagian Wisconsin saja melaporkan
cacar air, polio, dan hepatitis A dan B. Semua vaksin ini diberikan pada lebih dari
anak-anak sebelum mereka masuk sekolah. Daftarnya panjang, tetapi
banyak vaksin yang digabungkan menjadi satu suntikan. Paradoksnya,
2000
0 efektivitas vaksin membuat banyak orang mempertanyakan penggunaannya.
Banyak yang berpendapat bahwa vaksin tidak diperlukan karena hanya
sedikit orang yang terkena penyakit-penyakit tersebut. Sangat mudah untuk
melupakan bahwa alasan mengapa sangat sedikit orang yang terkena
difteri atau campak adalah karena begitu banyak orang yang divaksinasi.
Pada tahun 1980, sekitar 4 juta orang tertular campak, tetapi hanya sekitar
10% dari populasi dunia yang telah menerima vaksin campak. Pada tahun
2002, sekitar 500.000 kasus campak tercatat di dunia, tetapi sekitar 70%
populasi dunia telah menerima vaksin campak. Di Amerika Serikat, sekitar
216 kasus campak dilaporkan dari tahun 2001 hingga 2003, jadi jika Anda
tidak divaksinasi, kemungkinan tertular campak sangat kecil. Namun,
semakin banyak orang yang memilih untuk tidak memvaksinasi anak-anak
mereka, semakin banyak kasus penyakit ini, dan mereka yang tetap tidak
divaksinasi secara bertahap akan berisiko lebih tinggi.
Vaksin-vaksin lain telah dihilangkan dari jadwal imunisasi anak
karena penyakit-penyakit tersebut telah diberantas. Sebagai contoh, begitu
banyak orang di seluruh dunia yang divaksinasi cacar sehingga penyakit ini
tidak terlihat sama sekali selama bertahun- tahun. Sekarang, vaksin cacar
tidak lagi diberikan kepada seluruh populasi. Satu-satunya vaksin cacar yang
masih ada disimpan di dua laboratorium yang berbeda, satu di Amerika
Serikat dan satu lagi di Rusia. Setelah serangan 2001 di World Trade
Center, banyak perhatian diberikan pada kemungkinan cacar dapat
digunakan sebagai agen biowarfare (lihat Bab 23). Beberapa orang
menyerukan agar vaksinasi cacar dihidupkan kembali untuk mencegah hal
ini terjadi. Vaksin-vaksin lain justru sebaliknya: Bahkan dengan
5000 kasus batuk rejan. Negara-negara bagian lain juga melaporkan
peningkatan. Pada tahun 2002, Pusat Pengendalian Penyakit melaporkan
9.771 kasus di seluruh Amerika Serikat- jumlah tertinggi sejak tahun
1964. Wisconsin memiliki sekitar setengah dari jumlah kasus tersebut.
Banyak teori yang berbeda yang mencoba menjelaskan peningkatan
batuk rejan. Beberapa mengaitkan penggunaan tes yang lebih sensitif
untuk mendiagnosis batuk rejan, dan yang lainnya menganggap bahwa
hal ini mungkin merupakan siklus alami dari patogenisitas B. pertusis.
Yang lain mengaitkan peningkatan ini dengan berkurangnya kekebalan
tubuh. Setelah suntikan penguat terakhir diterima pada usia 5 tahun,
kekebalan terhadap batuk rejan akan berkurang setelah sekitar 10 tahun.
Pada saat artikel ini ditulis, tidak ada vaksinasi tambahan untuk orang
dewasa yang tersedia, sehingga orang dewasa relatif tidak terlindungi.
Vaksin menyebabkan beberapa efek samping yang merugikan. Pada
kebanyakan kasus, vaksinasi menyebabkan reaksi lokal, rasa sakit dan
bengkak di tempat suntikan. Efek samping lain yang mungkin terjadi
adalah sistemik, mungkin demam atau bentuk penyakit ringan, seperti
halnya pada vaksinasi flu. Beberapa vaksin dapat menyebabkan reaksi
alergi karena adanya kotoran di dalam vaksin. Beberapa vaksin dibuat
dalam telur dan jejak protein telur mungkin tertinggal dalam vaksin.
Orang yang alergi terhadap telur sering kali masih dapat menoleransi
vaksin, tetapi beberapa orang mungkin mengalami reaksi alergi.
Komponen alergen potensial lainnya adalah gelatin.
Kekhawatiran keamanan lainnya tentang vaksin didasarkan pada
bahan pengawetnya. Hingga tahun 1999, bahan pengawet yang paling
umum digunakan adalah thimerosal, senyawa yang mengandung
merkuri. Thimerosal dapat menyebabkan reaksi alergi pada beberapa
anak dan juga dianggap menyebabkan autisme. Sejak tahun 1999,
banyak produsen telah sepenuhnya menghilangkan thimerosal dari
vaksin mereka, namun jumlah kasus autisme belum menurun. Namun
karena ada kasus anekdot autisme yang berkembang pada anak-anak
setelah menerima vaksin yang mengandung thimerosal, banyak produsen
yang beralih ke jenis pengawet lainnya. Bisa dibayangkan latar belakang
genetik tertentu membuat beberapa anak lebih rentan terhadap merkuri
daripada yang lain.
 BAB 6

Ringkasan
Sistem kekebalan tubuh memiliki dua komponen yang berbeda, yaitu kekebalan humoral
(Lanjutan)
dan kekebalan yang diperantarai oleh sel. Kekebalan humoral mencakup produksi antibodi
oleh sel B yang ditemukan dalam serum dan cairan tubuh lainnya. Antibodi memiliki bentuk
umum Y yang terdiri dari dua rantai berat dan dua rantai ringan. Daerah engsel Y membagi
molekul ke dalam daerah Fc (konstan) dan Fab (variabel). Kekebalan yang diperantarai sel
melibatkan aktivasi sel T, bagian dari sel darah putih. Sel T menjadi aktif ketika patogen
menyerang sel, dan sel mulai menyajikan fragmen patogen pada kompleks histokompatibilitas
utama di permukaan sel. Pada kedua lengan reaksi kekebalan tubuh, antibodi atau sel T
hanya mengenali epitop kecil atau daerah yang berbeda dari protein patogen. Sistem
kekebalan tubuh dapat membuat banyak antibodi yang berbeda untuk satu protein karena
hanya area kecil ini yang dikenali.
Di laboratorium, antibodi dapat dibuat untuk protein spesifik dengan menyuntikkan
sampel murni protein kepada hewan seperti tikus atau kelinci. Untuk membuat antibodi
monoklonal, sel B tikus disatukan dengan sel mieloma abadi untuk membuat hibridoma. Setiap
fusi sel B
membuat antibodi terhadap satu epitop spesifik protein. Antibodi poliklonal, di sisi lain,
mencakup semua antibodi terhadap protein, yaitu, antibodi mengenali beberapa epitop.
Antibodi digunakan dalam ELISA, di mana jumlah protein target dalam suatu campuran
dapat diperkirakan dengan jumlah antibodi yang mengikat. Dalam imunohistokimia dan
imunositokimia, antibodi terhadap protein target digunakan untuk melokalisasi posisinya di
dalam sel. Antibodi juga digunakan untuk menyortir sampel sel dengan FACS dan
digunakan untuk menghitung jenis sel tertentu dalam flow cytometry.
Vaksin merangsang sistem kekebalan tubuh kita untuk membentuk antibodi dan sel B
memori tanpa menyebabkan penyakit yang dilindungi oleh vaksin. Vaksin adalah virus hidup yang
dilemahkan, virus yang tidak aktif atau virus mati, subunit virus, atau hanya peptida dari
protein virus. Vaksin juga dapat dibuat dari virus atau bakteri yang terkait tetapi tidak
berbahaya
yang mengekspresikan protein dari virus atau bakteri patogen. Vaksin terbalik dan
vaksin DNA dibuat dari sekuens DNA genom yang diekspresikan menjadi protein.
Vaksin terbalik dibuat di laboratorium, sedangkan vaksin DNA disuntikkan langsung ke dalam
jaringan otot sebagai DNA. Selain itu, beberapa vaksin juga dibuat dengan
mengekspresikan bakteri patogen.
protein dalam tanaman yang dapat dimakan. Seseorang dapat memperoleh kekebalan
terhadap patogen hanya dengan mengonsumsi tanaman ini. Protein antigenik baru adalah
kunci untuk membuat vaksin yang baik. DFI dan IVIAT adalah dua metode untuk
mengidentifikasi protein antigenik potensial dari organisme patogen.

Pertanyaan Akhir Bab

Apa yang dimaksud dengan antigen dan antibodi?
Antigen adalah benda asing dan antibodi adalah komponen sistem kekebalan tubuh yang mengenali antigen.
Antibodi adalah benda asing dan antigen mengenalinya dan bekerja untuk menghancurkannya.
Antigen diproduksi oleh sel B sebagai respons terhadap akumulasi antibodi.
Antigen adalah benda asing dan antibodi adalah jenis sel spesifik dari sistem kekebalan tubuh.
tidak satu pun dari yang di atas
201
 Teknologi Kekebalan Tubuh

2. Manakah dari berikut ini yang merupakan deskripsi akurat tentang sel B dan T?
a. Sel B mengenali antigen yang diekspresikan pada permukaan sel lain dan sel
T menghasilkan antibodi.
b. Sel B merupakan komponen dari imunitas yang diperantarai sel dan
sel T merupakan imunitas humoral.
c. Kompleks histokompatibilitas utama dikaitkan dengan sel B sedangkan sel T
menghasilkan antibodi.
d. Sel B menghasilkan antibodi dan sel T mengenali antigen yang
diekspresikan pada permukaan sel lain.
e. tidak satu pun dari yang di atas
3. Bagaimana varian antibodi diproduksi?
a. Setiap varian dikodekan pada satu gen.
b. dengan modifikasi antibodi pasca-translasi
c. dengan mengacak sejumlah kecil segmen gen di sekitar
d. dengan menyambung transkrip ke dalam berbagai konfigurasi
e. semua hal di atas
4. Manakah dari pernyataan berikut ini tentang antibodi yang tidak benar?
a. Antibodi terdiri dari dua rantai ringan dan dua rantai berat.
b. Antibodi poliklonal berasal dari hibridoma.
c. Antibodi diklasifikasikan ke dalam beberapa kelas dan memiliki
peran yang berbeda dalam sistem kekebalan tubuh.
d. Satu antibodi tertentu yang dibuat dari sel B klonal disebut antibodi
monoklonal.
202 e. Antibodi monoklonal dibuat dengan menggabungkan sel B ke mieloma,
mengkultur mieloma hibrida, dan menyaring pengenalan antigen yang
sesuai.
5. Manakah dari pernyataan berikut ini tentang antibodi yang dimanusiakan yang benar?
a. Antibodi yang dimanusiakan terhadap protein ClfA dari S. aureus dapat
memberikan cara untuk menghilangkan patogen yang resisten terhadap antibiotik
pada pasien dengan infeksi nosokomial.
b. Herceptin telah efektif dalam mengobati beberapa pasien kanker payudara.
c. Antibodi monoklonal yang dimanusiakan dibuat dengan menghilangkan daerah
konstan antibodi tikus dan menggantinya dengan daerah konstan manusia.
d. Humanisasi penuh antibodi melibatkan penghilangan daerah
hipervariabel dan menyambungkannya ke dalam rantai berat dan ringan
antibodi manusia.
e. Semua hal di atas adalah benar.
6. Bagaimana pembuatan antibodi rekombinan bermanfaat bagi para peneliti?
a. Antibodi rekombinan dapat digunakan untuk mengantarkan
racun, sitokin, dan enzim secara tepat langsung ke antigen.
b. Produksi antibodi rekombinan hanya bersifat teoritis dan mungkin tidak
akan berguna bagi penelitian bioteknologi.
c. Antibodi rekombinan memungkinkan produksi dan isolasi scFv yang lebih
efisien.
d. Antibodi rekombinan dapat mengantarkan racun, sitokin, dan enzim, tetapi
disebarkan ke seluruh organisme.
e. tidak satu pun dari yang di atas
 BAB 6

7. Mengapa ELISA digunakan?

a. untuk mengukur jumlah protein atau antigen tertentu dalam sampel
(Lanjutan)
b. untuk mengukur jumlah DNA dalam sampel
c. untuk menentukan jumlah antibodi dalam sampel
d. untuk mengencerkan antibodi dari serum dalam piring mikrotiter
e. tidak satu pun dari yang di atas
8. Manakah dari berikut ini yang merupakan contoh bagaimana ELISA digunakan?
a. tes kehamilan di rumah
b. deteksi organisme patogen
c. deteksi penyakit tanaman
d. mendeteksi penyakit susu dan unggas
e. semua hal di atas
9. Dalam aplikasi apa antibodi fluoresen digunakan?
a. imunositokimia
b. sitometri aliran
c. imunohistokimia
d. penyortiran sel yang diaktifkan dengan fluoresensi
e. semua hal di atas
10. Manakah dari pernyataan berikut ini tentang kekebalan yang tidak benar?
a. Vaksin menggunakan agen infeksius hidup yang masih mampu
menghasilkan penyakit untuk menimbulkan respons imun.
b. Sistem kekebalan tubuh mengingat antigen asing melalui sel B memori.
c. Vaksin terdiri dari antigen dari agen infeksius yang menginduksi
respons imun.
d. Kekebalan terhadap penyakit fatal sering kali dapat dipicu oleh infeksi dengan
agen infeksius yang terkait erat, seperti pada kasus cacar air dan cacar.
e. Sel B yang memproduksi antibodi biasanya hanya hidup beberapa hari, tetapi
sel memori dapat bertahan lama.
11. Bagaimana vaksin dibuat sehingga tidak menyebabkan penyakit?
a. membunuh agen penular dengan panas atau mendenaturasi agen penular
dengan bahan kimia
b. menggunakan komponen atau protein dari agen infeksi, bukan
organisme itu sendiri
c. merekayasa genetika agen infeksi untuk menghilangkan gen yang
menyebabkan penyakit
d. menggunakan jenis agen infeksius yang terkait tetapi tidak patogenik
e. semua hal di atas
12. Apa yang dimaksud dengan vaksinologi terbalik?
a. menghilangkan sel B dari tubuh seseorang, mengekspos mereka ke
agen infeksius secara in vitro, dan kemudian mengembalikannya ke
tubuh
b. penggunaan gen yang diekspresikan dari pustaka ekspresi untuk menemukan
protein yang menimbulkan respons imun pada tikus untuk membuat kandidat
vaksin baru
c. vaksinasi seseorang dengan strain yang terkait, tetapi tidak patogenik, untuk
memperoleh respons imun
d. vaksinasi seseorang setelah ia terpapar patogen
e. tidak satu pun dari yang di atas
203
 Teknologi Kekebalan Tubuh

13. Apa yang penting dalam menemukan antigen baru untuk pengembangan vaksin?
a. pertumbuhan agen infeksius hidup untuk membuat vaksin utuh
b. rekayasa gen untuk melemahkan agen infeksius
c. identifikasi protein yang menimbulkan respons imun
d. identifikasi komponen sistem kekebalan tubuh yang unik untuk agen
infeksius tertentu
e. tidak satu pun dari yang di atas
14. Manakah dari pernyataan berikut ini tentang vaksin yang dapat dimakan yang tidak benar?
a. Di negara berkembang, penyimpanan yang tepat dan ketersediaan jarum serta
personel untuk memberikan vaksin merupakan faktor pembatas dalam
memvaksinasi populasi.
b. Vaksin yang dapat dimakan tidak boleh dihancurkan oleh sistem
pencernaan dan harus tetap menimbulkan respons imun.
c. Masalah dengan menggunakan vaksin yang dapat dimakan adalah
kemungkinan bahwa sayuran vaksin dapat disalahartikan sebagai sayuran
biasa yang digunakan sebagai makanan.
d. Vaksin yang dapat dimakan biasanya terlalu mahal untuk diproduksi dalam
jumlah besar.
e. Semua hal di atas adalah benar.
15. Manakah dari hal berikut ini yang bukan merupakan risiko yang terkait dengan vaksin?
a. efek samping yang merugikan
b. reaksi alergi
c. pengawet yang mengandung merkuri
204 d. induksi autoimunitas pada beberapa individu
e. semua hal di atas adalah risiko potensial yang terkait dengan vaksinasi

Bacaan Lebih Lanjut

Betts MR, Brenchley JM, Price DA, De Rosa SC, Douek DC, Roederer M, Koup RA (2003). Identifikasi sel T CD8+
spesifik antigen yang sensitif dan layak dengan uji sitometri aliran untuk degranulasi. J Imunol Metode 281, 65-78.
Clark DP (2005). Biologi Molekuler: Memahami Revolusi Genetika. Elsevier Academic Press, San Diego, CA. Clark M
(2000). Humanisasi antibodi: Sebuah kasus "pakaian baru Kaisar"? Immunol Today 8, 397-402.
Elgert KD (1996). Imunologi: Memahami Sistem Kekebalan Tubuh. Wiley-Liss, New York.
Fischer OM, Streit S, Hart S, Ullrich A (2003). Di luar Herceptin dan Gleevec. Curr Opin Chem Biol 7, 490-495.
Glick BR, Pasternak JJ (2003). Bioteknologi Molekuler: Prinsip dan Aplikasi DNA Rekombinan, 3rd ed. ASM Press,
Washington, DC.
Handfield M, Brady LJ, Progulske-Fox A, Hillman JD (2000). IVIAT: Metode baru untuk mengidentifikasi gen
mikroba yang diekspresikan secara khusus selama infeksi pada manusia. Tren Mikrobiol 8, 336-339.
Patti JM (2004). Antibodi monoklonal yang dimanusiakan yang menargetkan Staphylococcus aureus. Vaksin 228,
S39-S43. Scarselli M, Giuliana MM, Adu-Bobie J, Pizza M, Rappuoli R (2005). Dampak genomik pada desain
vaksin.
Tren Bioteknologi 23, 84-91.

Valdivia RH, Falkow S (1997). Menyelidiki ekspresi gen bakteri di dalam sel inang. Tren Mikrobiol 5, 360-363.
 BAB 7
Nanobioteknologi
Pendahuluan
Visualisasi pada Mikroskopi Pemindaian
Tunneling Mikroskopi Gaya Atom
Deteksi Virus melalui AFM
Menimbang Bakteri Tunggal dan Partikel Virus
Nanopartikel dan Kegunaannya Nanopartikel
untuk Pelabelan
Efek Ukuran Kuantum dan Warna Nanokristal
Nanopartikel untuk Penghantaran Obat, Nanopartikel DNA,
atau RNA dalam Terapi Kanker
Perakitan Nanokristal oleh Mikroorganisme Nanotube
Karpet Nano Antibakteri Deteksi 205
Virus dengan Nanowires Saluran
Ion Nanosensor Rekayasa Nano
DNA
Perangkat Nano Mekanis DNA
Denaturasi Terkendali DNA oleh Nanopartikel Emas
Perubahan Bentuk Protein Terkendali oleh Motor
Biomolekuler DNA
 Nanobioteknologi

PENDAHULUAN
Pada tahun 1959, Richard Feynman adalah ilmuwan pertama yang menyatakan bahwa suatu
hari nanti, perangkat dan bahan dapat dibuat dengan spesifikasi atom: "Prinsip-prinsip fisika,
sejauh yang saya lihat, tidak menentang kemungkinan untuk melakukan manuver atom demi
atom."
Biologi molekuler sebagian besar berasal dari studi tentang mikroorganisme. Satu
mikrometer adalah sepersejuta meter, dan sel Escherichia coli, bakteri favorit para ahli
genetika, memiliki panjang sekitar 1 mikrometer (= "mikron"). Nanometer adalah
seperseribu mikrometer = 10-9 meter (Gbr. 7.1). Istilah mikro dan nano berasal dari
bahasa Yunani.
Mikros berarti "kecil". Yang lebih imajinatif adalah nanos, orang tua kecil atau kurcaci.
Pico- berasal dari bahasa Spanyol yang berarti jumlah kecil, atau paruh (dari bahasa Latin
beccus, "paruh", yang pada akhirnya berasal dari bahasa Celtic). Awalan untuk jumlah yang
lebih kecil lagi ditunjukkan pada Tabel 7.1. Sejauh menyangkut panjang, ini hanya berlaku
untuk dimensi subatomik. Namun demikian, ketika berurusan dengan massa dan volume
pada skala nano, kita dapat menemukan femtogram dan zeptoliter.
Baru-baru ini, ilmu pengetahuan telah maju ke bidang nanoteknologi. Seperti yang
ditunjukkan oleh namanya, dorongan datang dari mengejar aplikasi praktis, terutama di bidang
elektronika dan ilmu material, daripada pencarian pengetahuan teoritis. Nanoteknologi
melibatkan manipulasi individual molekul tunggal atau bahkan atom. Membangun
komponen atom per atom atau molekul per molekul untuk menciptakan bahan dengan sifat
baru atau sifat yang jauh lebih baik mungkin merupakan tujuan awal para ahli
nanoteknologi. Namun, bidang ini telah berkembang dengan cara yang tidak terdefinisi
dengan baik dan cenderung mencakup struktur apa pun sehingga
kecil sehingga studi atau manipulasi mereka tidak mungkin atau tidak praktis sampai saat
206 ini. Pada skala nano, efek kuantum muncul dan material sering kali berperilaku
aneh, dibandingkan dengan sifat-sifat bulknya.
Komponen internal sel biologis berada pada skala yang sama dengan yang dipelajari oleh
nanoteknologi. Sebagai konsekuensinya, para ahli nanoteknologi telah melihat ke biologi
sel untuk mendapatkan struktur, proses, dan informasi yang berguna. Organel seluler seperti
ribosom dapat dianggap sebagai "mesin nano" yang dapat diprogram atau "perakit nano".
Dengan demikian, nanoteknologi merambah ke biologi molekuler. Sebagian besar
"nanobioteknologi" sebenarnya adalah molekuler
biologi dilihat dari perspektif ilmu material dan dijelaskan dalam terminologi baru.
Semua reaksi kimia beroperasi pada tingkat molekuler. Yang membedakan nanoteknologi sejati
adalah bahwa molekul tunggal atau struktur nano dirakit dengan mengikuti instruksi
khusus.
Ribosom tidak hanya mempolimerisasi asam amino menjadi sebuah rantai. Ribosom
mengambil asam amino tertentu, satu per satu, sesuai dengan informasi yang diberikan,
dan menghubungkannya dalam urutan tertentu. Dengan demikian, sifat-sifat penting dari
nanoassembler mencakup kemampuan tidak hanya untuk merakit struktur pada tingkat
molekuler, tetapi juga melakukannya dengan cara yang spesifik dan terkendali.

Jam 1 siang Jam

100 pm 1 nm 10 nm 100 nm 1 μm 10 μm 100 μm 1 mm 1 cm 0.1 m 1m
10
mala
}
}

m
 Elektron Atom
hidroge Atom Protein Fag Bakteri Eukariotik Seran Anjin
n karbo T2 sel gga g
n kecil besar
GAMBAR 7.1 Perbandingan Ukuran
Ukuran objek berkisar dari 1 meter hingga 1 pikometer.