Kinetika Enzim

Mengapa perlu mempelajari kinetika Enzim?

● Memberikan informasi berharga terhadap
mekanisme kerja enzim
● Memberikan pengertian peranan enzim
dibawah kondisi kondisi di dalam sel dan
tanggapan/respon enzim terhadap
perubahan dari konsentrasi metabolit.
● Membantu memperlihatkan bagaimana
aktivitas dapat dikendalikan, terhadap
mekanisme pengaturan dibawah kondisi
fisiologi.
Cara memperoleh data kinetika :
● Sustrat, buffer,dll sedapat mungkin dalam
kondisi kemurnian yang tinggi.
● Sediaan enzim tidak mengandung senyawa
pengganggu (inhibitor).
● Enzim harus stabil
 Parameter kinetika Enzim
• Km dan V maks

Parameter tersebut adalah :

1. Untuk Karakterisasi spesifitas enzim terhadap
substrat tertentu
2. Untuk menentukan antara kemanisme steady state
atau kesetimbangan(equilibrium)
3. Untuk memperlihatkan peranan enzim dalam
metabolisme
Daalam reaksi enzim dikenal kecepatan reaksi
hidrolisis, penguraian atau reaksi katalisis lain
yang disebut velovity (V)

Harga V dari suatu reaksi enzimatis akan

meningkat dengan bertambahnya konsentrasi
substrat ( S), akan tetapi setelah S meningkat
selanjutnya akan sampai pada kecepatan yang
tetap.
Pada konsentrasi enzim tertentu, harga/nilai V
hampir linear dengan S. Pada kondisi dimana V
tidak dapat bertambah lagi dengan
bertambahnya S, disebut kecepatan maksimum
(Vmaks).

Km merupakan konsentrasi substrat yang

separuh dari lokasi aktifnya telah terisi, yaitu
bila kecepatan reaksi enzim telah mencapai ½ V
maksimum.
Nilai Km dapat digunakan dalam menentukan
ukuran afinitas enzim – substrat (E-S), yang
merupakan suatu indikator kekuatan ikatan
kompleks E-S, atau suatu tetapan
keseimbanganuntuk disosiasi kompleks E-S.
Menjadi E dan S.

Nilai Km kecil, berarti kompleks Enzim –S

mantap, afinitas enzim tinggi terhadap
substrat,dan bila Km besar berlaku sebaliknya.
 Pengukuran Aktivitas Enzim
• Berdasarkan aktivitasnya : 1. IU mikromol
P/menit.
• Pada enzim tertentu : 1 IU, perubahan
kepekatan pada 340 nm sebesar 0,001
permenit.
• Kecepatan reaksi : jumlah substrat yang
diubah persatuan waktu.
Jumlah produk yang terbentuk persatuan
waktu.
1 IU = Jumlah enzim yang diperlukan untuk
mengkatalisis pembentukan 1 mikromol
produk/menit pada kondisi tertentu.

1 Unit aktivitas spesifik enzim = jumlah enzim

yang dapat menghasilkan satu mol produk stiap
detik pergram molekul protein enzim.
• Kecepatan awal : pada waktu kadar substrat,
enzim, suhu, pH dapat diketahui dengan
tepat.

• Paada awal reaksi , kurva perjalanan masih

lurus (biasanya berkurangnya substrat < 10%).
 Cara Pengukuran Kecepatan awal
• Ambil kurva perjalanan yang masih berupa
garis lurus (awal reaksi).Kecepatan awal
berbanding lurus dengan kadar enzim.
Pengaruh kadar Substrat terhadap reaksi
enzimatis
Melakukan beberapa kali percobaan dalam
kondisi sama kecuali kadar S
● Kadar substrat absis (x)
● Kecepatan awal V0 ordinat (Y)
● Kurva berbentuk hiperbola