Epi Supri Wardi, M.Si. – apt. Oktafera, M.Farm.

Fakultas Farmasi
Universitas Perintis Indonesia
BIOSENSOR

Biosensor Glukosa
BIOSENSOR
Principle of Electrochemical Biosensors
substrate product

Enzyme
(label)
electrode

Apply voltage Measure current prop.

to concentration of substrate
ISOLASI ENZIM
LETAK ENZIM FUNGSIONAL
ENZIM EKSTRASELULER
ENZIM INTRASELULER
ISOLASI ENZIM (1)
Sel
Lisis
Osmosis
Freeze/Thaw
French press
Grinding glass beads
Sonication (bakteri)

Sentrifugasi

Pelet Supernatan
Debris sel
Protein terlarut

Isolasi Enzim
ISOLASI ENZIM INTRASELULER
LISIS SEL SECARA MEKANIK (1)
LISIS SEL SECARA MEKANIK (2)
LISIS SEL SECARA MEKANIK (3)
LISIS SEL SECARA MEKANIK (4)
LISIS SEL SECARA MEKANIK (5)
LISIS SEL SECARA KIMIA (1)
LISIS SEL SECARA KIMIA (2)
LISIS SEL SECARA KIMIA (3)
PEMURNIAN AWAL LAR. ENZIM
KLARIFIKASI DAN PRESIPITASI
KLARIFIKASI DAN PRESIPITASI
SENTRIFUGASI
FILTRASI
PEMURNIAN ENZIM
PEMURNIAN ENZIM
PEMURNIAN ENZIM
SDS-PAGE

 Pemisahan protein
(molekul bermuatan
berdasarkan ukuran
dalam medan listrik
 Protein didenaturasi
dengan detergen anion
SDS-PAGE

Penentuan Massa Molekul Protein

AKTIVITAS VS AKTIVITAS SPESIFIK
AKTIVITAS VS AKTIVITAS SPESIFIK
JUMLAH DAN SATUAN ENZIM

Analisis kimia menunjukkan bahwa komposisi E-

aktif dengan E-inaktif adalah sama, tidak bisa
menunjukkan aktivitas
Aktivitas → kualitatif → reaksi kimia,
substrat yang
dapat dikatalisis
enzim tersebut
→ kuantitatif → mengukur laju
reaksi

Jumlah Enzim → dinyatakan dengan unit enzim

AKTIVITAS VS AKTIVITAS SPESIFIK
JUMLAH DAN SATUAN ENZIM

Satu Unit Enzim adalah

Ø jumlah enzim yang mampu mengkatalisis 1 mmol
substrat per menit pada kondisi tertentu (optimal)

Aktivitas Spesifik :
Ø Unit enzim/mg preparat enzim
Ø Untuk menentukan kemurnian enzim dalam preparat,
semakin besar semakin murni
AKTIVITAS VS AKTIVITAS SPESIFIK
JUMLAH DAN SATUAN ENZIM

Contoh : aktivitas spesifik a-amilase murni =

5000 unit/mg. Preparat dengan aktivitas spesifik
= 5 unit/mg, maka
Ø Kemurniannya = 5/5000 x 100% = 0,10 %
Aktivitas Molekuler (Mr diketahui) :
Ø Unit /mmol enzim
Ø Molekul substrat yang diubah tiap menit oleh tiap
molekul enzim