Tanaman air yang indah, asli daratan asia.

Tumbuhan dibudidayakan di
kolam- kolam, kadang tumbuh liar di rawa-rawa. Terna, tumbuh tegak,
dengan rimpang yang tebal dan tumbuh menjalar. Lotus atau teratai
mengandung isoquinoline alkaloid, termasuk benzyl isoquinoline type
(armepavine, n-methyl coclaurine) aporphine type (roemerine,
nuciferine, n-nornuciferine, nornuciferine, anonaine, liriodenine
asimilobin, lirinidin), proaporphine type (prunuciferine), flavonoid
(hyperoside, isoquercitrin nelumboside, quercetin glucuronide,
camphor glucuronide), tanin.
Klasifikasi Tanaman
Kingdom : Plantae
Divisio : Spermathophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Nymphaeales
Famili : Nymphaeaceae
Genus : Nymphaea
Spesies : Nymphaea pubescens L., Nelumbium
nelumbo Druce., Nelumbo nucifera Gaertn., N. speciosum
Willd., Nymphaea nelumbo L.
Alkaloid
Alkaloid adalah suatu golongan senyawa biologi yang
terbanyak ditemukan di alam. Hampir seluruh alkaloid berasal
dari tumbuh-tumbuhan dan tersebar luas dalam berbagai jenis
tumbuhan tingkat tinggi. Sebagian besar alkaloid terdapat
pada tumbuhan dikotil sedangkan untuk tumbuhan monokotil
dan pteridofita mengandung alkaloid dengan kadar yang
sedikit.
Selanjutnya dalam Meyers Conversation Lexiconstahun 1896
dinyatakan bahwa alkaloid terjadi secara karakteristik di dalam
tumbuh-tumbuhan, dan sering dibedakan berdasarkan
kereaktifan fisiologi yang khas.
 Pendapat tentang peran alkaloid :
1. Alkaloid berfungsi sebagai hasil buangan nitrogen seperti urea dan asam urat dalam hewan
(salah satu pendapat yang dikemukan pertama kali, sekarang tidak dianut lagi).

2. Beberapa alkaloid mungkin bertindak sebagai iolog penyimpanan nitrogen meskipun banyak
alkaloid ditimbun dan tidak mengalami biological lebih lanjut meskipun sangat kekurangan
nitrogen.

3. Pada beberapa kasus, alkaloid dapat melindungi tumbuhan dari serangan iologic atau pemangsa
tumbuhan. Meskipun dalam beberapa peristiwa bukti yang mendukung fungsi ini tidak
dikemukakan, mungkin merupakan konsep yang direka-reka dan bersifat manusia sentris.

4. Alkaloid dapat berlaku sebagai pengatur tumbuh, karena dari segi struktur, beberapa alkaloid
menyerupai pengatur tumbuh. Beberapa alkaloid merangasang perkecambahan yang lainnya
menghambat.

5. Semula disarankan oleh Liebig bahwa alkaloid, karena sebagian besar bersifat basa, dapat
mengganti basa mineral dalam mempertahankan kesetimbangan ion dalam tumbuhan. Sejalan
dengan saran ini, pengamatan menunjukkan bahwa pemberian nikotina ke biakan akar
tembakau meningkatkan pengambilan nitrat. Alkaloid dapat pula berfungsi dengan cara
pertukaran dengan kation tanah.
Cara isolasi
Metode isoalsi senyawa alkaloida menurut Harborne, Ekstraksi
jaringan secara maserasi dengan asam asetat 5% (15 bagian),
lalu disaring ekstrak tersebut untuk memisahkan serpihan.
Dipanaskan sampai 700C dan ditambahkan ammonia pekat
tetes demi tetes sampai pH=10. Diekstraski ekstrak, lalu
lapisan beningnya dibuang. Endapan diekstraksi dengan
NH4OH 1%. Dikumpulkan, dikeringkan, dan ditimbang solanina
kasar yang diperoleh. Lalu dimurnikan dengan melarutkannya
dalam air mendidih, disaring, dan dipekatkan sampai alkaloida
mulai mengkristal (Harborne, 1987).
Cara isolasi
Metode isolasi senyawa alkaloida menurut Hess, Sampel
tumbuh-tumbuhan dikeringkan dan dihaluskan, kemudian
diekstraksi dengan eter selama tiga hari dalam alat soklet, lalu
diendapkan dan dilarutkan dengan ammonia. Endapan yang
diperoleh diekstraksi lagi dengan pelarut organik lain, misalnya
kloroform, lalu dipisahkan melalui kromatografi kolom dengan
adsorben silika gel dan benzen- kloroform sebagai pengelusi.
Cara isolasi
Metode isolasi senyawa alkaloida menurut BT. Cromwell,
sampel tumbuh-tumbuhan dikeringkan dan dihaluskan, lalu
diekstraksi dengan HCl 0,2M dalam etanol, lalu didiamkan
selama 10 jam pada suhu 600C, kemudian disaring dalam
keadaan panas, dan residu yang dihasilkan dicuci kembali
dengan pelarut yang sama sampai menunjukkan hasil yang
negatif terhadap pereaksi alkaloida. Ekstrak yang diperoleh
didinginkan dan didiamkan selama 12 jam, lalu disaring
filtrat yang diperoleh, kemudian ditambahkan NH4OH(p)
sampai pH=10, lalu didinginkan selama 24 jam pada suhu
kamar. endapan yang dihasilkan dipisahkan, dan dilarutkan
dalam kloroform, lalu disaring. Ekstrak yang diperoleh
dipekatkan dan residu yang diperoleh dipisahkan, lalu
dilakukan kromatografi untuk memperoleh senyawa alkaloida.
Identifikasi Alkaloid
Sebelum melakukan karakterisasi terhadap senyawa kimia hasil
metabolit sekunder yaitu alkaloid, terlebih dahulu melakukan
isolasi dengan ekstraksi, kromatografi lapis tipis (KLT), dan
kromatografi kolom. Kemudian untuk karakterisasi senyawa
kimia tersebut dilakukan dengan alat spektrofotometer
ultraviolet-visibel (UV-vis), spektrofotometer infra merah (IR),
spektrometer resonansi magnetik inti 1H (1H NMR) dan
kromatografi gas (GC).
Alat dan Bahan
Alat:
Counter-current kromatografi
HPLC
Spektrometri massa
Bahan:
Hexane
etil asetat
Metanol
asam klorida dan trietilamina (TEA)
Pemutar osmosis air Milli-Q(18 MQ)
Acetonitrile
Daun teratai
Persiapan ekstrak kasar
Ekstrak etanol Daun Teratai dilarutkan dengan 1% HCl (400 ml)
Setelah menghapus residu, nilai pH keasaman dari larutan
disesuaikan menjadi 10 dengan natrium hidroksida
Kemudian residu serta larutan diekstraksi tiga kali dengan
kloroform
Ekstrak digabung dan diuapkan sampai kering oleh penguapan
rotary di bawah tekanan rendah pada 45C
600 mg ekstrak kasar diperoleh dan disimpan dalam kulkas
(4C) untuk pemisahan CCC pH-zona-pemurnian berikutnya.
Penyusunan sistem pelarut dua-
fasa dan larutan sampel
Dua-tahap Sistem pelarut yang digunakan untuk pemisahan
CCC itu secara menyeluruh disetimbangkan dalam corong
pisah pada suhu kamar dan dua fase dipisahkan.
TEA ditambahkan ke fase atas di 10 mM sebagai penahan dan
HCl ditambahkan ke fase yang lebih rendah pada 5 mM
sebagai eluter.
Larutan sampel disiapkan dengan melarutkan ekstrak kasar
dalam 5 ml fase atas.
Prosedur pemisahan
Untuk setiap pemisahan, kolom CCC pertama sepenuhnya diisi
dengan fase organik atas
Kemudian ekstrak kasar, dilarutkan dalam fase atas disuntikkan
melalui port sampel dan fase gerak yang lebih rendah dipompa
melalui kolom dengan laju alir 2,0 mL/ menit di kepala ke arah ekor
(fase terbalik), sedangkan kolom adalah diputar pada 600 rpm
Efluen dipantau terus menerus pada 254 nm dan secara otomatis
dikumpulkan dalam tabung tes per 5 menit menggunakan BSZ-100
fraksi kolektor
Setelah pemisahan selesai, retensi fase diam diukur dengan
mengumpulkan isi kolom menjadi silinder lulus setelah memaksa
mereka keluar dari kolom dengan gas nitrogen bertekanan
Puncak fraksi dianalisis dengan HPLC. Retensi fase diam adalah 34%.
Hasil dan Pembahasan (1)
a. Analisis Hasil (LC/MS)
Ekstrak kasar yang diperoleh dari daun teratai pertama kali
dianalisis dengan HPLC / ESI-MSn. Deteksi HPLC/UV dan
jumlah ion kromatogram (TIC) ditunjukkan pada Gambar 1.
b. pH-daerah pemisahan penyulingan CCC
Bagian kedua dari penelitian ini berfokus pada pemisahan senyawa
target dengan pH-zona pemurnian CCC.
Optimalisasi sistem pelarut biphasic sangat penting untuk
pemisahan CCC sukses.
Menurut aplikasi yang ada pH-zona pemurnian CCC untuk alkaloid,
sistem pelarut dua fase yang sesuai yang harus memberikan
koefisien partisi ideal (K) nilai-nilai di kedua asam (Kasam<< 1) dan
dasar (Kbasa>> 1) kondisi serta kelarutan yang baik sampel dalam
sistem pelarut dianggap perlu.
Kami pertama dievaluasi dua fase sistem pelarut biner yang terdiri
dari MtBE- CH3CN-air (2:2:3, v/ v), yang telah banyak digunakan
dalam mode pH-zona penyulingan.
Penentuan kuantitatif dari alkaloid pada bunga teratai
(Kuncup bunga dari Nelumbo nucifera) dan aktivitas
penghambat melanogenesis
a. Prosedur Eksperimental Umum
Kondisi eksperimental berikut digunakan untuk kromatografi
(CC): biasa-fase kromatografi kolom silika gel, silica gel 60N
(Kanto Chemical Co, Tokyo, Jepang; 63-210 mesh, bulat, netral);
reverse-fase silika gel CC, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia
Kimia, Aichi, Jepang; 100-200 mesh); fase-normal TLC, pra-dilapisi
TLC piring dengan silika gel 60F254 (Merck, Darmstadt, Jerman;
0,25 mm); fase terbalik TLC, pra-dilapisi pelat TLC dengan silika
gel RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); fase terbalik HPTLC, pra-
dilapisi TLC piring dengan silika gel RP-18 WF254S (Merck, 0,25
mm), deteksi dilakukan dengan menyemprotkan 1% Ce (SO4)2-
10% air H2SO4 pada lempeng, diikuti dengan pemanasan.
b. Bahan Tanaman

Kuncup bunga dari teratai dikumpulkan di Nakhon Ratchasima, Thailand, pada

tahun 2011, dan disingkat sebagai berikut: NN-1 (seluruh bunga), NN-2
(kelopak), NN-3 (wadah), dan NN-4 (benang sari). Kuncup bunga dari N.
nucifera dikumpulkan di Taiwan, pada tahun 2011, dan sebagai berikut: NN-5
(seluruh bunga), NN-6 (kelopak), NN-7 (wadah), dan NN-8 (yang benang sari).
Sampel lainnya (NN-9-12) dibeli melalui Tochimoto Tenkaido Co, Ltd, Osaka,
Jepang, pada 2013 dan disingkat sebagai berikut: NN-9 [daun dikumpulkan
dari Provinsi Shandong, Cina, pada tahun 2010 (Lot. No 1111C129201)], NN-
10 [buah dikumpulkan dari provinsi Hunan, Cina, pada tahun 2012 (Lot. No
1212C026701)], NN-11 [buah dikumpulkan dari provinsi Hunan, Cina, pada
tahun 2011 (Lot. Tidak ada . 1206C026701)], dan NN-12 [embrio dikumpulkan
dari provinsi Jiangxi, Cina, pada tahun 2010 (Lot. No. 1207128901)]. Bahan
tanaman ini diidentifikasi oleh salah satu penulis (MY), dan spesimen voucher
dari mereka berada di file dalam laboratorium kami. Materi udara kering di
ruang bawah naungan selama lebih dari sebulan.
c. Ekstraksi Dan Isolasi
Kuncup kering dari bunga N. nucifera (NN-1, 1,98 kg) diekstraksi
empat kali dengan metanol (10 L) pada suhu kamar selama 24 jam.
Penguapan dari ekstrak gabungan di bawah tekanan akan
mengakibatkan ekstrak methanol berkurang (182,75 g, 9,22%). Larutan
(168,51 g) dari ekstrak metanol dipartisi menjadi campuran EtOAc dan
3% asam tartarat berair (1:1, v/v) untuk memberikan suatu fraksi asam
EtOAc-larut (52,69 g, 2,88%) dan larutan asam. Larutan berair
disesuaikan dengan pH 9 dengan air Na2CO3 jenuh dan kemudian
diekstraksi dengan CHCl3.
d. Preparasi Sampel
Sampel serbuk bubuk (ca. 2 g, konversi dengan susut pengeringan)
diekstraksi dengan 20 mL tiga sistem pelarut (metanol, 50% metanol,
atau air) di bawah dua kondisi yang berbeda (refluks selama 120 menit
atau sonikasi selama 30 menit, masing-masing dua kali), masing-
masing. Setelah sentrifugasi ekstrak pada 3000 rpm selama 5 menit,
supernatan digabungkan dan diencerkan sampai 100 mL dengan
pelarut ekstraksi. Sebuah alikuot (1 ml) larutan ekstrak dipindahkan ke
dalam labu volumetrik 5 mL dan dibuat untuk volume dengan metanol.
Larutan disaring melalui jarum suntik ke dalam penyaring (0,45 m), dan
aliquot dari 5.0 uL menjadi sasaran analisis LC-MS. Solusi ekstraksi
yang tersisa (90 mL) diuapkan didalam kondisi vakum untuk
menghitung hasil ekstraksi.
Hasil dan Pembahasan (2)
a. Isolasi Alkaloid Principal (1-10) dari Lotus
Flower
Untuk mendapatkan alkaloid utama (1-10), prosedur isolasi
dari bahan tanaman ini baru dikembangkan dalam penelitian
ini dengan memodifikasi metode yang dilaporkan sebelumnya.
Dengan demikian, kuncup bunga kering dari N. nucifera
diekstraksi dengan metanol di bawah refluks untuk
mendapatkan ekstrak metanol (9.22% dari bahan kering)
b. Analisis Kuantitatif Simultan 10 Alkaloid (1-10) di Bunga Lotus
Untuk memberikan kemurnian yang cukup untuk analisis kuantitatif,
hidroklorida alkaloid ini (1-10) disusun dengan metode dilaporkan.
Seperti ditunjukkan dalam Gambar 2, ciri kromatogram LC-MS untuk
campuran larutan standar di bawah UV (260 nm) dan deteksi MS oleh
electrospray ionisasi (ESI) MS di bawah modus positif menunjukkan
pemisahan dasar yang baik untuk semua puncak.
Setiap puncak diamati pada waktu retensi berikut dan quasimolecular ion
puncak ([M + H] +) (tR:1 (43.1 menit, m/z 296), 2 (39,5 menit, m/z 282), 3
(29,7 min, m/z 282), 4 (21,3 menit, m/z 268), 5 (13,9 menit, m/z 312), 6
(16,9 menit, m/z 314), 7 (15,9 menit, m/z 300 ), 8 (9,9 menit, m/z 300), 9
(8,3 min, m/z 286), dan 10 (18,8 menit, m/z 286)).
Puncak tersebut jelas ditugaskan oleh perbandingan waktu retensi mereka
dengan orang-orang yang otentik spesimen spesimen otentik.
Kesimpulan
HPLC/ESI-MSn diterapkan untuk menganalisis ekstrak daun teratai
dan komponen kecil dengan berat molekul 299 ditemukan
Metode CCC pH-zona-pemurnian berhasil diterapkan untuk
mengisolasi target, yang diidentifikasi sebagai N-
demethylarmepavine
Sementara itu, dua senyawa struktural mirip - nuciferine dan
roemerine - juga dipisahkan dari ekstrak daun teratai
Hasil menunjukkan bahwa pH-zona-pemurnian CCC adalah teknik
yang efektif tidak hanya untuk pemisahan komponen utama tetapi
juga untuk pemisahan komponen minor.
Untuk memperjelas khasiat analisis kuantitatif yang ditetapkan dari
10 alkaloid sebagai kontrol kualitas untuk bunga teratai, korelasi
antara total isi alkaloid dan kegiatan melanogenesis penghambatan
ekstrak yang sesuai diperiksa
Akibatnya, korelasi tepat dan tegas antara metode analisis ini dan
kegiatan melanogenesis penghambatan dicapai.
Daftar Pustaka
Dalimartha, 2007, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 4, Puspa Swara, Jakarta

Pelawi Jhon Franta, 2009, Isolasi Senyawa Alkaloid Dari Buah Biji Pala (Myristicae
fragrans Houtt), Skripsi, Universitas Sumatera Utara

Morikawa et al, 2016, Quantitative Determination of Alkaloids in Lotus Flower

(Flower Buds of Nelumbo nucifera) and Their Melanogenesis Inhibitory Activity,
Junal Molecules Volume 21 halaman 930, online (http://www.mdpi.com/1420-
3049/21/7/930)

Widodo Nanang, 2007, Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Alkaloid Yang

Terkandung Dalam Jamur Tiram Putih (Pleurotus ostreatus), Skripsi, Universitas
Negeri Semarang

Xia Xu et al, 2011, LC/MS Guided Isolation of Alkaloids from Lotus Leaves by pH-
Zone-Refining Counter-Current Chromatography, Jurnal Molecules Volume 16
halaman 2551-2560, online (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21441860)