KELOMPOK 8 A
ANGGA GIAN PRATAMA 01311640000053
AVIANITA PUJI R. 01311640000007
BRILLIANCY P.P 01311640000027
RAFIKA T.P 01311640000069
GMO SEARCH
Contents 1 Pengertian 4 Contoh
2 Klasifikasi 5 Dampak
Metoode
3 6 Study kasus
Pembuatan
3
GMO
Genetically Modified Organism
Rekayasa genetika pada dasarnya adalah
seperangkat teknik yang digunakan untuk
memanipulasi komponen genetik, yakni
PENGERTIAN DNA genom atau gen yang dapat
(Sugianto, 2017)
Herbert Boyer and Stanley Cohen made the first genetically modified organism (GMO) in 1973. They took a gene from a
bacterium that provided resistance to the antibiotic kanamycin, inserted it into a plasmid and then induced another bacteria
to uptake the plasmid. The bacteria was then able to survive in the presence of kanamycin.
TUJUAN Tujuan utama pengembangan GMO adalah untuk
10
Klasifikasi
Klasifikasi GMO
Generasi Pertama Generasi Ketiga
satu sifat, tanaman mengandung elemen transgenik yang Pada generasi ketiga, tanaman disebut sebagai near-
umum digunakan, seperti cauliflower mosaic virus (CaMV), intragenics yang elemen transgenic tidak digunakan dalam
35Spromoter (CaMV35S-P), aminoglycoside tanaman transgenik lain. Transgenik yang dikonstruksi berasal
30phosphotransferase gene (nptII),phosphinothricin dari inang dan telah mengalami rekombinasi atau modifikasi
acetyltransferase gene(pat/bar), 5-enolpyruvylshikimate 3-
phosphate(CP4-epsp) gene, nopaline synthase promoter(nos- sehingga lebih sulit untuk dideteksi dibandingkan dengan
P), danterminator (nos-T). (Lu et al.,2010). generasi pertama ataupun kedua.
Generasi Kedua
hasil persilangan antara generasi pertama yang komersial.
GMO Generasi keempat
(Lin & Pan, 2016) tanaman yang digolongkan dalam intragenik dan cisgenik. Jika
Namun demikian, generasi kedua memiliki dua masalah yang gen donor dan seluruh regulator sequence transgenic dimiliki
besar yang muncul dalam mendeteksi kumpulan sifat pada oleh spesies tanaman yang sama atau dimiliki oleh spesies inang
tanaman transgenik, yaitu: analisis gen yang mendalam mungkin yang mampu disilangkan, maka akan menghasilkan cisgenik.
dibutuhkan untuk membedakan antara sifat tanaman yang Sementara itu, pada intragenik, cassettesgene insert
menumpuk dan yang tidak, dan membedakan dari campuran mengandung sekuens genetic spesifik yang berasal dari tanaman
peristiwa yang berasal dari single stack trait hanya mampu yang memiliki gene pool yang sama.
dideteksi dengan biji atau tanaman tunggal.
Metode Pembuatan GMO
Transfer Gen
untuk mendapatkan tanaman dengan komposisi genetik yang baru.
Transfer gen dapat dilakukan dengan metode transfer gen langsung atau
melalui vektor. Metode transfer gen melalui vektor dapat dilakukan dengan vektor
A. tumefaciens
Transformasi genetik memerlukan gen penanda untuk pengenalan sel-sel
yang tertransformasi.
dua tipe yaitu penanda :
•Penanda selectable : kanamisin dan higromisin.
•Penanda screenable:gen yang mengkode produk berupa enzim yang aktivitasnya
dapat dengan mudah di assay
The Power of PowerPoint | thepopp.com 15
VirDl/D2 mengenali
Fosforilasi VirA
urutan border 25 pb dan
pada VirG Transfer
Ekspresi gen VirA mendeteksi menghasilkan pembelahan
kemudian intermediet
diperantarai oleh Asetosiringone untaian tunggal
menyebabkan dimulai dengan
protein VirA dan mengakibatkan endonukleolitik pada
aktivasi menggenerasikan
VirG autofosforilasi untaian bawah setiap
transkripsi gen T-strand
border untuk
vir
menghasilkan T-strand
17
Tahapan Penyisipan Gen
19
20
Konstruk gen yang diintroduksi ke tanaman mengandung 3 elemen, yaitu
yang berfungsi untuk yang diintroduksi yang yaitu untuk menghentikan signal
mengaktifkan gen yang mengekspresikan sifat yang pembacaan dari sekuen gen yang
diintroduksi dalam proses
diintroduksikan, diinginkan
pembentukan protein
(Dhivya.,Et.al.,2016)
23
Cara untuk mendeteksi gen yang sudah tersisipkan dalam tanaman Teknik
molekuler yang biasa digunakan untuk deteksi gen asing pada tanaman hasil
tranformasi genetika adalah:
Golden rice
Proses rekayasa genetika ini bertujuan untuk menghasilkan sejumlah besar beta karoten, suatu provitamin yang oleh tubuh dikonversi menjadi vitamin A.
Perkiraan di tahun 2004 menunjukkan bahwa 500.000 anak-anak didunia akan menjadi buta karena kekurangan vitamin A. Solusinya adalah dengan
menambahkan nutrisi pada suplai makanan akan efisien dan efektif untuk mengatasi permasalahan tersebut (endik dkk., 2017).
Rekayasa genetika merupakan metode yang digunakan untuk produk golden rice. Hal ini disebabkan karena tidak ada plasma nutfah padi yang mampu
untuk mensintesis karotenoid. Pendekatan transgenic dapat dilakukan karena adanya perkembangan teknologi transformasi dengan agrobacterium dan
ketersediaan informasi molekuler biosintesis karatenoid yang lengkap pada bakteri dan tanaman. Dengan adanya informasi tersebut terdapat berbagai
pilihan cdna. Produksi prototype golden rice dengan menggunakan galur padi japonica (taipe 309), teknik transformasi menggunakan agrobacterium dan
beberapa gen penghasil beta karoten tanaman daffodil hingga bakteri
Contoh Produk GMO
29
Pada dasarnya produk-produk GMO sangat banyak dan
tersebar di berbagai bidang (pertanian, farmasi dan
kedokteran, industri, dan lingkungan) (Mae-Wan Ho, 2008).
Contoh Produk Contoh dari produk GMO yaitu :
Dampak
• Menimbulkan penyakit baru atau pun menjadi faktor pemicu bagi penyakit
lain.
• Berkurangnya kualitas dari makanan tersebut
39
Comparative performance of modified full-length and truncated Bacillus thuringiensis-
cry1Ac genes in transgenic tomato
HASIL:
Frekuensi transformasi rata-rata dan kandungan protein Bt-Cry 16,93 ± 2,10 dan 0,0020-0,0128% dari
total larut protein (TSP) diperoleh dengan vektor pRD400 (Trcry1Ac) sementara, nilai yang jauh lebih
rendah dari 9,30 ± 2,041 dan 0,0001 - 0,0026% dari TSP diamati dengan vektor pNBRI-1 (Flcry1Ac),
masing-masing. Tanaman transgenik Trcry1Ac T0 yang menjanjikan dan T1 mereka progeni memberikan
perlindungan penuh dari H. armigera. Meskipun gen Flcry1Ac menunjukkan frekuensi transformasi yang
lebih rendah dan ekspresi yang lebih rendah, itu menunjukkan toksisitas yang lebih tinggi untuk H.
armigera bila dibandingkan dengan gen Trcry1Ac terpotong.
42
Skrining tanaman tomat transgenik T0 dan T1 Trcry1Ac.A – C.)
PCR amplifikasi gen cry1Ac 995 bp.D – F.) 678 bp gen nptII
menggunakan primer spesifik gen dalam tiga puluh T0
transgenik.G-H.) Analisis RT-PCR dari sepuluh tanaman tomat
T0 transgenik yang dipilih secara acak dari cry1Ac yang
menunjukkan gen 995 bp cry1Ac dan 678 bp nptII transcript
gen. M - 100 bp DNA ladder (NEB, USA). -C - tanaman kontrol
non-transgenik, + C - plasmid DNA kontrol positif.I.) Analisis
waktu nyata untuk tingkat transkripsi Bt-cry1Ac di enam T0
tanaman tomat transgenik. TC - Tanaman transgenik dengan
ekspresi rendah Bt-toksin digunakan sebagai kontrol.J-O.) PCR
amplifikasi dari 995 bp gen cry1Ac dan 678 bp gen nptII
menggunakan primer spesifik gen inT1 progeni dari orangtua T0
yang menjanjikan. M −100 bp DNA ladder (NEB, USA). –C:
tanaman kontrol non transgenik, + C: kontrol positif DNA
plasmid. 43
Analisis dari Southern blot dan Western immunoblot dari transgenik T0 Trcry1Ac.A.) Analisis hibridisasi blot Selatan dari delapan T0 tanaman tomat
transgenik dari cry1Ac yang diperiksa dengan 1.841 bp fragmen BamHI-EcoRI berantai dari gen cry1Ac. + C fragmen gen 1,845 bp cry1Ac; −C Tanaman
kontrol tidak berubah.B.) Analisis imunoblot Barat dari sepuluh T0 tanaman transgenik, dengan ekstrak protein kasar; jalur 1: protein Cry1Ac yang
dimurnikan; jalur 12: protein tanaman pengendali yang tidak ditransformasi; jalur 2–11: sampel protein dari sepuluh tanaman transgenik. Sampel
transgenik memberikan band ~ 65 kDa, mirip dengan kontrol positif. –C: Pabrik kontrol yang tidak berubah.
44
Ekspresi gen Trcry1Ac pada tanaman transgenik. A.) Tiga Puluh T0. B.) Transgenik T1 terpilih. Bilah vertikal berarsir abu-
abu melambangkan kandungan rata-rata protein Bt-Cry1Ac. Kotak (persegi hijau) mewakili rata-rata status kematian%
H. armigera, ketika dikenai daun T0 dan tanaman tomat transgenik T1 masing-masing. ‘N’ adalah jumlah populasi
transgenik T1 dari masing-masing orang tua.
45
Karakterisasi molekuler tanaman tomat transgenik T0 Flcry1Ac. Upper Panel
A – C.) PCR amplifikasi 768 bp gen Flcry1Ac menggunakan primer spesifik
dalam tiga puluh T0 transgenik. D-F.) Analisis RT-PCR tanaman tomat
transgenik T0 menunjukkan 768 bp amplikon gen cry1Ac. M: 100 bp DNA
ladder (NEB, USA). -C: tanaman kontrol non-transgenik, + C: kontrol positif
plasmid DNA. Panel Bawah G-I.) PCR amplifikasi gen nptII 678 bp
menggunakan primer spesifik dalam transgenik T0. J-L.) Analisis RT-PCR
tanaman tomat transgenik T0 menunjukkan 678 bp amplikon gen nptII. M:
100 bp DNA ladder (NEB, USA). -C: tanaman kontrol non-transgenik, + C:
kontrol positif plasmid DNA.
46
Ekspresi gen Flcry1Ac pada tanaman transgenik. A.)
Tiga puluh T0 transgenik. BC.) T1 progeni FLAc 7 dan
11. Batang vertikal berarsir abu-abu melambangkan
kandungan rata-rata protein dan kotak Bt-Cry1Ac
(persegi hijau) mewakili rata-rata status
kematian% H. armigera, ketika dikenai daun T0
tanaman transgenik.
47
Karakterisasi molekuler dari T0 dan T1 progeni tanaman tomat transgenik FlAc7 dan
FlAc11.A.) Analisis PCR komparatif real-time dari transkrip di T0 Flcry1Ac tanaman
transgenik menunjukkan perubahan kali lipat dalam ekspresi sehubungan dengan
FlAC 9 (tanaman transgenik mengekspresikan rendah diambil sebagai referensi).
Kontrol: kontrol non-transgenik.B-C.) RT-PCR dan cDNA amplifikasi gen nptII 678 bp
dan gen Flcry1Ac 768 bp dari progeni T1 menggunakan primer spesifik. M: 100 bp
DNA ladder (NEB, USA). -C: tanaman kontrol non transgenik, + C: gen DNA plasmid
Flcry1Ac sebagai kontrol positif. D.) Southern blot diperiksa dengan 3.510 bp sinar
radiolabelled BamHI gen FlCry1Ac.E.) Uji imunoblot Barat dilakukan dengan ekstrak
protein daun mentah, lane1 protein toksin Cry1Ac yang dimurnikan, jalur 12: kontrol
yang tidak ditransformasi, jalur 2–11: ekstrak protein daun dari progeni T0 FlAc7
dan FlAc11. Pita protein ~ 130 kDa dalam tanaman transgenik menunjukkan
hibridisasi dengan antibodi Cry1Ac, serupa dengan kontrol positif
48
Comparative performance of modified full-length and truncated Bacillus thuringiensis-
cry1Ac genes in transgenic tomato
KESIMPULAN:
Gen cry1Ac full-length dapat didesain ulang agar ekspresi dan kinerja yang dihasilkan lebih
tinggi dalam dikot atau hibrida gen dapat dirancang supaya memiliki campuran strong receptor
dan menghasilkan karakteristik ekspresi stabil yang dapat meningkatkan toksisitas terhadap
serangga.
Prianto dan Yudasasmita. 2017. Tanaman Genetically Modified Organism (GMO) dan
perspektif hukumnya di Indonesia. Al – Kauniyah : Journal of Biology. Vol 10 (2) : 133
– 142