TEKNOLOGI DNA

REKOMBINAN
Wayan M. Santika, S.Farm., M.Si., Apt
Departemen of Pharmacy, Faculty of MIPA,
Udayana University

http://www.free-powerpoint-templates-design.com
Overview Materi

PENGANTAR MATERI
A
DEOKSIRIBONYCLEOTIDE
B ACID (DNA)

C LATIHAN

D TEKNIK DNA REKOMBINAN

 PENGANTA
A
R MATERI
PROFIL GENETIK ORGANISME DAN DOGMA SENTRAL
1. PROFIL GENETIK TIAP ORGANISME DITENTUKAN OLEH INFORMASI GENETIK YANG
TEREKAM DI DALAM MOLEKUL ASAM NUKLEAT BERUPA DNA (DEOKSIRIBONUCLEO
ACID/ASAM DEOKSIRIBONUKLEAT) ATAU RNA (RIBONUCLEO ACID/ASAM
RIBONUKLEAT).
2. DOGMA SENTRAL : INFORMASI GENETIK MENGALIR DARI DNARNAPROTEIN
PROSES PROSES GENETIK
B DNA
 MONOMER ASAM NUKLEAT : NUKLEOTIDA
KOMPONEN PENYUSUN
NUKLEOTIDA
1. BASA NITROGEN
*PirimidinTimin, Sitosin,
Urasil
**Purin Adenin dan
Guanin
2. Gula
Deoksiribosa/Ribosa
3. Posfat
MOLEKUL DEOKSIRIBONUCLEIC ACID (DNA)
3. IKATAN
GULA
DEOKSIRIBOSA
DENGAN BASA
1. ARAH
NITROGEN
RANTAI DNA

2. IKATAN FOSFAT
DAN GULA
DEOKSIRIBOSA
STRUKTUR DNA UNTAI GANDA/dsDNA
DUA MOLEKUL DNA DAPAT MEMBENTUK 1 MOLEKUL DNA UNTAI GANDA MELALUI
IKATAN HIDROGEN
PERHATIKAN :
1. ARAH RANTAI DNA PADA
MOLEKUL dsDNA.
2. JUMLAH IKATAN HIDROGEN
ANTARA A DAN T (2 IKATAN) DAN
ANTARA G DAN C (3 IKATAN)
3. IKATAN HIDROGEN ANTAR 2
MOLEKUL DNA DAPAT LEPAS JIKA
SUHU DITINGKATKAN
4. HAMPIR SEMUA DNA BERBENTUK
DNA UNTAI GANDA (double
stranded DNA/dsDNA)
BENTUK DNA UNTAI GANDA/dsDNA
DNA DAPAT DIREPLIKASI
LAGING AND LEADING STRAND
 ARSITEKTUR GEN EUKARIOTIK

Terminator

5’ UTR
3’ UTR
PROSES TRANSKRIPSI
SEKUENS DNA PADA GEN DITERJEMAHKAN
MENJADI SEKUENS mRNA
TIGA TAHAP UTAMA TRANSKRIPSI :
A. INISIASI TRANSKRIPSISEKUENS
PROMOTOR, SEKUENS REGULATOR, SEKUENS
ENHANCER, FAKTOR-FAKTOR TRANSKRIPSI
(REGULATOR, REPRESOR, AKTIVATOR,
INHIBITOR), RNA POLYMERASE.
B. ELONGASI TRANSKRIPSIRNA POLYMERASE,
SEKUENS ORF (OPEN READING FRAMES), rNTPs
(rGTP, rATP, rCTP, rUTP)
C. TERMINASI TRANSKRIPSIRNA
POLYMERASE, SEKUENS TERMINATOR
TRANSKRIPSI
 TRANSLASI
TRANSLASI PENTERJEMAHAN SEKUENS/URUTAN
KODON PADA mRNA MENJADI SEKUENS/URUTAN
ASAM AMINO PADA PROTEIN.
TAHAPAN TRANSLASI :
1. INISIASI TRANSLASI = START KODON mRNA +
ANTIKODON tRNA-Met + FAKTOR INISIASI/EUKARIOTIK
INITIATION FACTOR/eIF (eIF 1-6) + RIBOSOM.
2. ELONGASI TRANSLASI = KODON mRNA +
ANTIKODON tRNA+ FAKTOR ELONGASI/ EUKARIOTIK
ELONGATION FACTOR/eEF (eEF1, eEF2) + RIBOSOM
(AMINOACYL/A-SITE, PEPTIDYL/P-SITE, EXIT/E-SITE)
3. TERMINASI TRANSLASI = STOP KODON mRNA +
FAKTOR RELEASE/ EUKARIOTIK RELEASE FACTOR/eEF
(eRF1, eRF3) + RIBOSOM (AMINOACYL/A-SITE,
PEPTIDYL/P-SITE, EXIT/E-SITE)
C LATIHAN
 LATIHAN SOAL.
BERIKUT ADALAH URUTAN DNA PADA RANTAI NUKLEOTIDA MASTER GEN “Y”
5’- AGGTGGATGGGCGTACGTTAGGGTGTTT -3’

TENTUKAN :
TEMPLAT TRANSKRIPSI :
3’- TCCACCTACCCGCATGCAATCCCACAAA-5’
URUTAN mRNA :
5M7G- AGGUGGAUGGGCGUACGUUAGGUGUUUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’
HEAD- 5 UTR - ORF KODON -STOP -3 UTR– POLY A TAIl
URUTAN PROTEIN
N’- MET-GLY-VAL-ARG- C’
 TEKNIK
DNA
D
REKOMBIN
AN
 TAHAPAN TEKNIK DNA REKOMBINA

01

PENYIAPAN DNA
PENYIAPAN DNA SISIPAN (GEN INSULIN, GEN T-PA, GEN
01 HORMON PPERTUMBUHAN dll) DAN PLASMID (EKSPRESI,
KLONING) DENGAN ENZIM ENDONUKLEASE RESTRIKSI
40% 80% 60% 50%
HIBRIDISASI DNA
02 PENGABUNGAN DNA SISIPAN DAN VEKTOR
02 (DNA REKOMBINAN) DENGAN ENZIM LIGASE

TRANSFORMASI
03 PEMASUKAN DNA REKOMBINAN KE HOST
SEL DAN PERBANYAKAN DNA REKOMBINAN.
04
03
SELEKSI DAN DETEKSI
04 SELEKSI SEL TRANSFORMAN YANG
MEMBAWA DNA SISIPAN YANG SESUAI
(UKURAN DAN URUTAN YANG BENAR)
1. DNA SISIPAN/INSERT

DNA SISIPAN  GENENDONUKLEASE RESTRIKSI

DAPAT DIPEROLEH MELALUI 3 CARA :

PRODUK PCR
PERBANYAKAN FRAGMEN DNA DENGAN METODE PCR

cDNA
PERBANYAKAN DNA DARI mRNA (manusia)

KROMOSOM
DNA YANG BERASAL DARI KROMOSOM LANGSUNG
(prokariotik)
1.PLASMID KLONING
 PLASMID cont….

ORIGIN OF REPLICATION MARKA SELEKSI

REPLIKASI PLASMID (SPESIFIK HOST)
-HIGH COPY NUMBER PLASMID
(VEKTOR KLONING)pMB1 ori
-MEDIUM/LOW COPY NUMBER
PLASMID (VEKTOR
EKSPRESI)pBR322 ori
Gen resistensi antibiotik
Contoh : bla (resistensi
ampisilin), tetR (resistensi
tetrasiklin).

MULTIPLE CLONING SITE MARKA SELEKSI TAMBAHAN

SEKUENS DNA UNTUK MENSISIPKAN MARKA SELEKSI BIRU-PUTIH, KASET
GEN INSERT. EKSPRESI (VEKTOR EKSPRESI).
-SITUS SITUS PENGENALAN ENZIM
RESTRIKSI
-PEMOTONGAN DENGAN ENZIM
RESTRIKSI
RESTRIKSI DAN LIGASI
2. HIBRIDISASI
3. TRANSFORMASI
4. SELEKSI
4. SELEKSI blue and
white
 4. SELEKSI
(sequencing)

UKURAN GEN

URUTAN DNA
 Thank You
Insert the Sub Title of Your Presentation