Preparasi Fase

diam dan fase

gerak dalam
kromatografi

Fitokimia 2
Kromatografi

– Kromatografi Merupakan teknis pemisahan senyawa

dalam suatu ekstrak/fraksi
– Kromatografi secara umum terdiri atas fase diam dan
fase gerak
– Kromatografi merupakan teknik yang umum dipakai
dalam proses isolasi senyawa
Kromatografi

– Kromatografi Cair vakum (KCV)

– Kromatografi Kolom
– Kromatografi Lapis tipis Preparatif
KCV
Kolom
Teknis pemisahan Kromatografi Kolom dan KCV
Preparasi fase diam

– Pemilihan Fase Diam

1. Polar : Silica gel
2. Nonpolar : RP-18
– Pembuatan Fase diam
1. Kering : KCV
2. Basah : Kolom
Fase diam

– Dalam kromatografi Fase diam dimasukkan ke

dalam kolomnya dan harus homogen dan
dipadatkan,
– Fase diam yang tidak homogen dan padat akan
menganggu proses pemisahan senyawa.
Pembentukan Fase diam

– Metode Kering
1. Fase diam dimasukkan ke dalam Kolom
2. Fase diam dimasukkan dan kemudian
dipadatkan
3. Pada KCV Pemadatan fase diam dibantu
oleh pompa Vakum
Metode Basah

– Kolom disi dengan pelarut (Biasanya fase gerak/eluen

pertama)
– Fase diam disuspensi dengan pelarut yang sama
– Fase dalam bentuk cairan (suspense) dimasukkan ke
dalam kolom dan dihomogenkan
faktor-faktor yang mempengaruhi
optimasi pemisahan

– Kolom (panjang dan lebar)

– Fase diam
– Pemilihan fase gerak
Pemilihan fase gerak

– Profil KLT dari ekstrak/fraksi

– Volume fase gerak
– Studi literatur