ANALISIS KADAR DENGAN KROMATOGRAFI GAS

PRAKTIKUM ANALISIS FARMASI II

KROMATOGRAFI GAS

 Pemisahan campuran senyawa dengan kromatografi gas didasarkan pada partisi

komponen-komponen di antara fase gerak berupa gas dan fase diam berupa zat padat atau
cairan yang tidak mudah menguap yang melekat pada bahan pendukung inert.
 Komponen-komponen yang dipisahkan harus mudah menguap pada suhu pemisahan yang
dilakukan, sehingga suhu operasi biasanya lebih tinggi dari suhu kamar.
 Untuk senyawa-senyawa yang tidak mudah menguap seperti asam lemak perlu dilakukan
suatu preparasi dengan melakukan derivatisasi. Dalam analisis asam lemak, mula-mula
lemak/minyak dihidrolisis menjadi asam lemak, kemudian ditransformasikan menjadi
bentuk esternya melalui reaksi esterifikasi sehingga bersifat lebih mudah menguap.
 KROMATOGRAFI GAS
 Fase gerak : Berupa gas (disebut gas pembawa =
carrier gas). • Tanpa disebut lain 
Contoh carrier gas: He, N2 dll. GC = GLC
• Jika digunakan kolom
Fase diam :
- cair  disebut kromatografi gas cair (Gas
kapiler  capillary GC
 High Resolution Gas
liquid chromatography= GLC)
Chromatography
- padat  disebut kromatografi gas padat
(HRGC)
Gas solid chromatography = GSC)
INSTRUMEN GC

Kromatograf gas terdiri dari:

 Tabung gas pembawa;
 Gerbang suntik (Injector, inlet)
 Kolom
 detektor
 Oven
 rekorder / PC
DIAGRAM KROMATOGRAF GAS
 Gas Chromatograph
Injection Port

Detector
Capillary Column

Data System
or Recorder

Carrier Gas Oven

Supply
Gas Chromatograph
Inlet
Kolom GC
(kapiler)
Detektor FID
( Flame Ionization Detector)
KROMATOGRAM
Data :
 tR: waktu retensi
tR-1
Respon Detektor

(parameter kualitatif)
tR-2  Luas peak = Peak area
 Kromatogram  parameter kuantitatif
 Peak height (tinggi peak)
waktu
parameter kuantitatif
 Width = lebar peak
 INJEKTOR (INLET)
 Fungsi: Untuk memasukkan sampel bentuk cair atau
gas ke dalam aliran gas pembawa
 Temperatur injektor diatur cukup tinggi, sehingga
sampel dalam bentuk cair (larutan) secara cepat diubah
menjadi bentuk gas
 Temperatur injektor yang terlalu tinggi  terjadi
peruraian komponen sampel
Split/splitless
Injector
DETEKTOR GC
Berperan menghasilkan signal untuk suatu kromatogram
 Contoh Detektor GC
 TCD (Thermal Conductivity Detector)
 FID (Flame Ionization Detector)  untuk senyawa organik
yang mengandung ikatan C-H
 Nitrogen Phosphorus Detector  sensitif untuk senyawa yang
mengandung N dan P
 Electron Capture Detector (ECD)  sensitif untuk senyawa
yang berhalogen
 Mass Spectrometer (MS)
INJEKSI SPLIT

 Digunakan analisis analit konsentrasi relatif besar (major component)  hanya sebagian
sampel yang masuk ke dalam kolom
 Contoh Split ratio 1: 50 berarti hanya seper limapuluh bagian dari sampel masuk ke
dalam kolom
ANALISIS KADAR ATROPIN DALAM SEDIAAN TETES MATA
DENGAN KROMATOGRAFI GAS
 The method involves extraction of atropine and a homatropine internal standard from the aqueous
phase, which is rendered alkaline by the addition of ammonia, followed by trimethylsilylation with N,O-
bistrimethylsilyl acetamide (BSA).
 In the calculation using the results of this experiment, it is better to use amount rather than concentration
as a standard measure. The reason for this is, after the initial accurate volume, for the addition of the
standard and internal standard to the calibration solution (Solution 1) and for the addition of the internal
standard to a fixed volume of eyedrops, the volumes need only be measured approximately
ANALISIS KADAR ATROPIN DALAM SEDIAAN TETES MATA
DENGAN KROMATOGRAFI GAS
ANALISIS KADAR ATROPIN DALAM SEDIAAN TETES MATA
DENGAN KROMATOGRAFI GAS

These are: a calibration standard containing more or less equal amounts of a pure standard and an internal
standard (Solution 1); an extract of the sample containing no internal standard to check for interference from
the formulation matrix (Solution 2); and an extract from the sample containing the same amount of internal
standard as Solution 1 (Solution 3).
PREPARASI SAMPEL

 Solution 1 is prepared from exactly 5 ml of 0.4092% w/v atropine sulphate

solution and exactly 1 ml of 2.134% w/v homatropine hydrobromide solution.
The solution is basified and extracted; the solvent is removed and the residue is
treated with 2 ml of BSA and then diluted to 50 ml with ethyl acetate. Solution 3
is prepared from exactly 2 ml of eyedrops and exactly 1 ml of 2.134% w/v
homatropine hydrobromide solution. The solution is basified and extracted; the
solvent is removed and the residue is treated with 2 ml of BSA and then diluted to
50 ml with ethyl acetate.
HASIL DATA
PERHITUNGAN
ANALISA DATA
 DATA UNTUK PRAKTIKUM  VOLUME SAMPEL UNTUK DIANALISIS = 2 ml

DATA LARUTAN 1 LARUTAN 3

1 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120520 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 119511
PEAK AREA ATROPIN TMS :152721 PEAK AREA ATROPIN TMS :147652
2 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 121120 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120989
PEAK AREA ATROPIN TMS :148113 PEAK AREA ATROPIN TMS :148174
3 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 119420 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 118976
PEAK AREA ATROPIN TMS :145990 PEAK AREA ATROPIN TMS :146739
4 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 117987 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 117899
PEAK AREA ATROPIN TMS :146823 PEAK AREA ATROPIN TMS :146101
5 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120102 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120006
PEAK AREA ATROPIN TMS :149390 PEAK AREA ATROPIN TMS :150021
6 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 118347 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 118761
PEAK AREA ATROPIN TMS :148712 PEAK AREA ATROPIN TMS :148651
7 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120119 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 120333
PEAK AREA ATROPIN TMS :151725 PEAK AREA ATROPIN TMS :151621
8 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 119003 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 119109
PEAK AREA ATROPIN TMS :149087 PEAK AREA ATROPIN TMS :149071
9 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 128754 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 127981
PEAK AREA ATROPIN TMS :150873 PEAK AREA ATROPIN TMS :150761
10 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 127849 PEAK AREA HOMATROPIN TMS : 126548
PEAK AREA ATROPIN TMS :148619 PEAK AREA ATROPIN TMS :148028
LAPORAN PRAKTIKUM

 BERDASARKAN PREPARASI SAMPEL YANG SAMA, DIHITUNG KADAR ATROPIN DALAM SEDIAAN
TETES MATA DAN APAKAH KADARNYA MELEBIHI 1%
TUGAS

 JELASKAN PRINSIP DASAR INSTRUMEN KROMATOGRAFI GAS

 KOLOM JENIS APAKAH YANG DAPAT DIGUNAKAN PADA INSTRUMEN KROMATOGRAFI GAS
 SAMPEL SEPERTI APAKAH YANG DAPAT DIANALISIS DENGAN KROMATOGRAFI GAS
 SEBUTKAN BEBERAPA FASE GERAK YANG DIGUNAKAN DALAM INSTRUMEN KROMATOGRAFI
GAS
 JELASKAN BAGAIMANA CARA MENGINJEKSIKAN DENGAN BENAR PADA INSTRUMEN
KROMATOGRAFI GAS
DAFTAR PUSTAKA