PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI

BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan

JAMUR Aspergillus niger

Responsi Daring Praktikum Biokimia II

Department of Chemistry

Faculty of Mathematics and Natural Science

University of Lampung

2020
 PENDAHULUAN

✎ Dalam mikrobiologi, medium/media adalah

suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi
atau zat-zat hara (nutrien) yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di
dalamnya (Waluyo, 2010).

✎Setiap media memiliki komposisi tertentu

(sumber nutrisi) berupa karbohidrat, mineral, dan
buffer yang berfungsi untuk mendapatkan enzim
tertentu dari bakteri tertentu juga.

✎Terdapat 3 jenis media berdasarkan ada tidaknya

zat pemadat (agar dan gelatin), antara lain :
1. Media padat
2. Media semi padat
3. Media cair

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 ➠PENDAHULUA
N

Media Cair

✎ Pada percobaan ini, media yang digunakan adalah jenis media cair. Media cair merupakan
media yang banyak digunakan untuk memperbanyak atau pembiakan bakteri dalam jumlah
besar.

✎ Media cair ini nantinya akan dibuat dalam bentuk media inokulum dan media fermentasi.
Kedua media tersebut memiliki komposisi yang sama, hanya saja medium inokulum
merupakan medium adaptasi sebelum dibiakkan dalam media yang lebih besar (media
fermentasi).

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 TUJUAN
PERCOBAAN

Untuk mengetahui cara

membuat media dan
inokulasi bakteri dan jamur
dalam jumlah besar

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis
Praktikum Biokimia ITBCCB148
II dan JAMUR Aspergillus niger
REFERENSI
SYARAT-SYARAT MEDIA
PUSTAKA

Media yang baik memiliki beberapa syarat, antara lain :

✔ Mengandung semua unsur hara yang diperlukan untuk

pertumbuhan dan pengembangbiakan mikroba
✔
Mempunyai tekanan osmotik, tegangan permukaan, dan
pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba
✔
Steril (sebelum ditanami, mikroba tidak ditumbuhi oleh
mikroba lain yang tidak diharapkan)

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 REFERENSI
➠ PUSTAKA JENIS-JENIS MEDIA

Media
padat

Media
semi padat

Media
cair

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 REFERENSI
➠ PUSTAKA JENIS-JENIS MEDIA
Media padat

Media ini mengandung tepung agar

sebanyak 12-15%.

Berdasarkan bentuk dan wadahnya, media

padat dibedakan menjadi 3 jenis :
● Media tegak
menggunakan tabung reaksi yang ditegakkan
sebagai wadahnya
● Media miring
menggunakan tabung reaksi yang
dimiringkan
● Media lempeng
menggunakan cawan petri sebagai wadahnya

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 REFERENSI
➠ PUSTAKA JENIS-JENIS MEDIA
Media semi padat

Media semi padat mengandung tepung agar sebanyak ± 0,3 – 0,4% sehingga
media menjadi lebih kenyal, tidak padat, dan tidak begitu cair.
Media ini digunakan untuk pertumbuhan mikroba yang banyak memerlukan
kandungan air dan hidup anaerob atau fakulkatif.

Media cair

Media cair adalah media yang berbentuk cair

karena tidak ada penambahan
zat pemadat.
Media ini dapat digunakan untuk berbagai
tujuan antara lain pembiakan mikroba
dalam jumlah besar, penelaahan, dan
berbagai uji.

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 REFERENSI
➠ PUSTAKA INOKULASI

Inokulasi adalah kegiatan pemindahan

mikroorganisme, baik berupa bakteri maupun jamur
dari sumber asalanya ke medium baru yang telah
dibuat dengan ketelitian dan aseptis.

Jarum inokulasi digunakan sebagai alat untuk

menginokulasi mikoba atau jamur, biasanya terbuat
dari nikrom atau platinum.

Untuk bakteri

Untuk jamur

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 REFERENSI
➠ PUSTAKA REMEMBER!

Media Inokulum : Media adaptasi sebelum dibiakkan

Media Fermentasi : Media produksi

Volume media inokulum Volume media fermentasi

lebih kecil dari

Keduanya memiliki komposisi bahan yang sama,

hanya volumenya yang berbeda

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 Alat :

• Neraca analitik PROSEDU

R KERJA
• Spatula besi
• Erlenmayer
• Gelas ukur
• Pengaduk gelas Bahan :
• Botol semprot • Akuades • CaCl2.5H2O
• Pipet tetes • Sampel pati • KH2PO4
• Hot plate • Ekstrak yeast • (NH4)SO4,
• Autoklaf • Glukosa • Kain kasa
• LAF (Laminar Air • Urea
Flow) • Kapas
• Selulosa •
• Tabung reaksi Alumunium foil
• Pepton •
• Gelas kimia Kertas
• KCl •
• Bunsen Karet
• MgSO4.7H2O CATATAN
• Jarum inokulasi m e yan g
Mikroorganis
lam
• Shaker digunakan da
i adalah
percobaan in
• Mikropipet gillus
jamur Asper
fumigatus
Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 JUMLAH KUANTITATIF BAHAN
YANG DIBUTUHKAN per 100 mL
PROSEDU
Media inokulum dan fermentasi Bacillus
No Nama bahan Jumlah
kuantitatif
R KERJA ➠
1 Sampel pati 0,5 %
2 Ekstrak yeast 0,5 %
3 MgSO4.7H2O 0,02 %
4 CaCl2.5H2O 0,01 %
5 KH2PO4 0,05 %
Media inokulum dan fermentasi
Aspergillus
No Nama bahan Jumlah No Nama Bahan Jumlah kuantitatif
kuantitatif
1 Urea 0,03 % 6 KH2PO4 0,2 %
2 Ekstrak yeast 0,2 % 7 (NH4)SO4 0,14 %
3 KCl 0,03 % 8 Pepton 0,2 %
4 MgSO4.7H2O 0,02 % 9 Glukosa 0,05 %

5 CaCl2.5H2O 0,03 % 10 Selulosa 0,1 %

Catatan :
Karena mikroorganisme yang digunakan dalam percobaan ini adalah jenis
jamur Aspergillus, maka digunakan estimasi jumlah kuantitatif bahan pada tabel
yang kedua (warna hijau) !
SKEMA UMUM DIAGRAM ALIR PERCOBAAN
PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI PROSEDU
R KERJA ➠
Media inokulum Dalam keadaan aseptis, media
ditanami biakan jamur inokulum yang telah di-
dalam keadaan aseptis.
Pembuatan shaker 24 jam, diambil
Sementara, media
media inokulum fermentasi tetap pada volumenya sebanyak 2%,
& kondisi steril dimasukkan ke media
media fermentasi fermentasi

HASIL

Media fermentasi
Media inokulum & Kedua media kemudian dibiarkan di atas shaker
media fermentasi dibiarkan di atas shaker
yang sudah dibuat selama 72 jam
selama 24 jam
kemudian disterilisasi

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 Untuk prosedur pembuatan media
inokulum dan fermentasi Bacillus

Bahan-bahan media inokulum dan fermentasi

PROSEDU
Bacillus
- dimbang dengan teliti R KERJA ➠
- dimasukkan dalam wadah (erlenmayer)
- dilarutkan dalam akuades sampai tanda batas 200 mL
- dipanaskan di atas hot plate hingga homogen
- dibagi dua volumenya dengan perbandingan 1 : 3 (misalnya, 50 mL untuk media inokulum dan 150 mL untuk
media fermentasi) dengan menuangkan sejumlah salah satu volume ke wadah (erlenmayer) yang baru

Media inokulum & media

fermentasi
- ditutup dengan sumbat kapas dan aluminium foil
- disterilisasi dalam autoklaf selama ± 15 menit pada suhu 121°C, tekanan 1 atm
- diangkat, didinginkan sebentar

Media
Media fermentasi
inokulum
- dibiarkan tetap - ditanami bakteri Bacillus subtilis ITBCCB148 dalam
dalam keadaan steril keadaan aseptis (dilakukan dalam LAF)

- di-shaker selama 24 jam

- diambil media inokulum sebanyak 2% (dari total volume media fermentasi) dalam keadaan aseptis
(dilakukan dalam LAF menggunakan mikropipet) dan dimasukkan dalam media fermentasi
- di-shaker kembali selama 72 jam

HASIL (untuk dilakukan uji

selanjutnya)
 Untuk prosedur pembuatan media
inokulum dan fermentasi Asperigillus
PROSEDU
Bahan-bahan media inokulum dan fermentasi Aspergillus
R KERJA ➠
-dimbang dengan teliti
-dimasukkan dalam wadah (erlenmayer)
-dilarutkan dalam akuades sampai tanda batas 200 mL Akuades diganti buffer fosfat (tergantung variasi pH)
-dipanaskan di atas hot plate hingga homogen
-dibagi dua volumenya dengan perbandingan 1 : 3 (misalnya, 50 mL untuk media inokulum dan 150 mL untuk
media fermentasi) dengan menuangkan sejumlah salah satu volume ke wadah (erlenmayer) yang baru
Media inokulum & media
fermentasi
- ditutup dengan sumbat kapas dan aluminium foil
- disterilisasi dalam autoklaf selama ± 15 menit pada suhu 121°C, tekanan 1 atm
- diangkat, didinginkan sebentar
Disimpan dalam LAF terlebih dahulu selama 24
Media
Media fermentasi
inokulum
- dibiarkan tetap - ditanami jamur Aspergillus fumigatus dalam keadaan
dalam keadaan steril aseptis (dilakukan dalam LAF)

- di-shaker selama 24 jam

- diambil media inokulum sebanyak 2% (dari total volume media fermentasi) dalam keadaan aseptis
(dilakukan dalam LAF menggunakan mikropipet) dan dimasukkan dalam media fermentasi
- di-shaker kembali selama 72 jam
Shaker tergantung kebutuhan (variasi waktu)
HASIL (untuk dilakukan uji
media inokulum dibuang saja
selanjutnya)
Data pengamatan &
pembahasan
Data pengamatan &
pembahasan
Data pengamatan &
pembahasan
Data pengamatan &
pembahasan
Data pengamatan & pembahasan
Data pengamatan & pembahasan
 Data pengamatan & pembahasan

Contoh hasil fermentasi pada media

MSM (Mineral Salt Medium)

Contoh hasil media fermentasi

Contoh hasil inokulasi pada media NB

(Nutrient Broth)
 Contoh video prosedur

http://youtu.be/xwXT1NUevO0

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 Referensi video lainnya

• Preparation of culture media

https://www.youtube.com/watch?v=fzk_-O2SDos

• Media Prep
https://www.youtube.com/watch?v=cneascR3OEc&feature=youtu.be

• Basic Techniques in Microbiology - Liquid media Cultures

https://www.youtube.com/watch?v=rydQVvo8rM0

• Basic Techniques in Microbiology - Glass pipettes

https://
www.youtube.com/watch?v=d6KuOQQC1KU&list=PL7OOsYZ23Ao8VogvziVkduwNGi_ce
ULJR&index=5

• How to pipette correctly – a short step-by-step introduction into proper pipetting

https://www.youtube.com/watch?v=QGX490kuKjg

• How to Use a Micropipette

https://www.youtube.com/watch?v=Jfqafjt4q6U
Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 DAFTAR PUSTAKA
Waluyo, L. 2010. Teknik dan Metode Dasar
Mikrobiologi. UPT Penerbitan Universitas
Muhammadiyah Malang. Malang.

Yandri, A.S. dkk. 2018. Buku Panduan Praktikum

Teknik Penelitian dan Rekayasa Biokimia.
Laboratorium Biokimia FMIPA Unila. Lampung.

Yusdiani, D. dkk. 2016. Bakteriologi Bidang Keahlian

Kesehatan untuk SMK/MAK. ECG. Jakarta.

Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger
 Than
k You
Any Questions?
Responsi Daring PEMBUATAN MEDIA CAIR DAN INOKULASI BAKTERI Bacillus subtilis ITBCCB148 dan JAMUR
Praktikum Biokimia II Aspergillus niger