Spektrofotome

tri
Fluoresensi
Kimia Analitk Terapan
 Isi Makalah
1. Pengertian dan latar Belakang Spektrofotometri Fluoresensi
2. Prinsip dasar Spektrofotometri Fluoresensi
3. Hukum Spektrofotometri Fluoresensi
4. Jenis-jenis Spektrofotometri Fluoresensi
5. Komponen – komponen dalam Spectrometri Fluoresensi
6. Kelebihan dan Kelemahan Metode Fluoresensi
7. Penerapan Fluoresensi dalam Analisis Kimia
8. Prinsip Kerja
9. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif
 1
Pengertian & Latar
Belakang
 Latar belakang Don't
f orget

...

1. Spektrofotometri merupakan suatu metode analisis kuantitatif

yang pengukurannya berdasarkan banyaknya radiasi yang
dihasilkan atau yang diserap oleh spesi atom atau molekul
analit
2. Salah satu jenis spektrofotometri adalah spektrofotometri
fluoresensi. Spektroskopi Fluoresensi merupakan suatu
metode yang didasarkan pada penyerapan energi oleh suatu
materi sama seperti metode spektroskopi
 Pengertian Don't
f orget

...
1. Fluoresensi adalah emisi cahaya setelah penyerapan sinar
ultraviolet (UV) atau cahaya tampak oleh molekul fluoresensi
atau substruktur disebut fluorophore
2. Fluoresensi adalah proses pemancaran radiasi cahaya oleh
suatu materi setelah tereksitasi oleh berkas cahaya berenergi
tinggi. Emisi cahaya terjadi karena proses absorbsi cahaya
oleh atom yang mengakibatkan keadaan atom tereksitasi
3. Fluoresensi merupakan proses perpindahan tingkat energi
dari keadaan atom tereksitasi (S1 atau S2) menuju ke keadaan
stabil (ground states).
Diagram Don't
Jablonski f orget

...
 Molekul Don't
Tereksitasi f orget

...

Molekul tereksitasi akan kembali ke keadaan dasar S0 mengikuti

dua langkah berturut-turut
1. Molekul di Sn kembali ke keadaan tereksitasi terendah S1
dengan menghilangkan sebagian darinya energi di lingkungan
sekitarnya. Fenomena ini biasanya disebut internal konversi
2. Dari keadaan tereksitasi S1, molekul akan mencapai keadaan
dasar S0 melalui perbedaan proses kompetitif
 2
Prinsip Dasar
 Prinsip Dasar Don't
f orget

...

Pada saat suatu molekul pada keadaaan energi dasar

mengabsorpsi cahaya UV, molekul tersebut akan berpindah ke
keadaan tereksitasi. Pemancaran kembali sinar yang
diabsorpsi terjadi dan molekul kembali ke tingkat energi dasar
karena molekul dalam keadaan tereksitasi cendrung tidak
stabil. Energi yang tidak stabil dalam molekul tadi akan
dilepaskan ke tingkat energi dasar dengan melepaskan energi
atau tidak, dimana energi yang dilepaskan tersebut sebagai
emisi cahaya
 3
Hukum
 Hukum Don't
f orget

...

Intensitas fluoresensi adalah jumlah foton yang

diemisikan per unit waktu (s) per unit volume larutan (l)
dalam mol atau ekivalensinya dalam Einstein. Intensitas
fluoresensi tergantung pada konsentrasi. Sesuai dengan
hukum Beer, fraksi cahaya yang ditransmisikan adalah:
 Hukum Don't
f orget

...

Dimana :
P0 = intensitas cahaya masuk
P = intensitas cahaya yang ditransmisikan
b = ketebalan sampel
c = konsentrasi.
 Hukum Don't
f orget

...

Fraksi cahaya yang terabsorpsi menjadi

Atau
Jika (P0 – P) dikalikan terhadap efisiensi kuantum
fluoresensi (ϕ) akan diperoleh intensitas fluoresensi
 Hukum Don't
f orget

...

Untuk larutan encer , cahaya yang diabsorpsi lemah ≥ 0,05 sehingga

F = kc
k= tetapan instrumen
jadi untuk tujuan praktis, larutan encer intensitas fluoresensi sebanding
dengan konsentrasi.
 4
Jenis-jenis
Fluoresensi
 Jenis-jenis

1. Fluoresensi atom
Metode untuk analisis kualitatif
dan kuantitatif zat menggunakan
panjang gelombang dan intensitas
garis spektrum fluoresensi atom
 Jenis-jenis

2. Fluoresensi molekuler
Fluoresensi molekuler merupakan proses emisi yang
mana molekul dieksitasikan karena menyerap
radiasi elektromagnetik (REM).
Molekul yang tereksitasi selanjutnya melepaskan
kelebihan energinya dan mengalami relaksasi ke
level dasar ground state
 5
Komponen
Komponen
 6
Kelebihan &
Kelemahan
 Kelebihan

1. Karakteristik flouresensi spektrometri adalah

sensitivitas yang tinggi (LOD kecil)
2. Kisaran liniernya lebih luas
3. Selektifitas tinggi
 Kelemahan

1. Dapat terjadi eksitasi sampingan

2. Banyak senyawa yang meredupkan pendar,
sehingga harus dipisahkan terlebih dahulu
3. Bila suhu makin tinggi maka efisiensi kuantum
fluoresensi makin berkurang.
 PRINSIP KERJA SPEKTROMETRI
FLUORENSI

Flourensence biasanya diukur pada sudut yang berasal dari eksitasi untuk meminimalisasi
berkumpulnya cahaya yang tersebar, digunakan rotasi prisma Pellin-Broca yang terdapat
pada meja kemudi. Selain itu, fungsi prisma untuk memisahkan cahaya menjadi spektrum-
spektrum agar lebih mudah dianalisis nantinya. Nantinya cahaya yang melewati filter dan
pemogokan sampel. Sebagian dari cahaya tersebut diserap oleh sampel dan beberapa
molekul di antaranya akan berpendar di dalam sampel. Beberapa lampu neon yang
dipancarkan akan melewati filter kedua untuk mencapai detektor (biasanya pada suhu 90 o)
 ANALISIS KUALITATIF & KUANTITATIF
Spektroflurometri dapat digunakan untuk:
a. Analisa kualitatif , Perbandingan spektrum fluoresensi dapat
membantu pengenalan senyawa. 
b. Analisa kuantitatif, Pengukuran dapat dilakukan pada kadar yang
sangat rendah dengan ketepatan, keterulangan, dan kepekaan tinggi.
Misalnya pengukuran kadar vitamin E.
Bila panjang gelombang emisi dan eksitasi telah dipilih, maka dapat
dibuat hubungan antara intensitas fluoresensi dengan konsentrasi
senyawa.
Intensitas fluoresensi tergantung dari tingkat konsentrasi senyawa.
ANALISIS KUANTITATIF
Pada larutan dengan konsentrasi tinggi, sebagian besar cahaya
diserap lapisan larutan yang paling dulu kontak dengan radiasi
eksitasi, sehingga fluoresensi hanya terjadi pada bagian yang
menyerap cahaya tersebut. Dengan demikian, pada analisis
kuantitatif harus digunakan larutan yang encer (serapan tidak lebih
dari 0,02) supaya dapat memenuhi persamaan fluoresensi:

F = 2,3IoQabc atau F = kc

Keterangan:
F = fluoresensi
k = konstan = 2,3Ioabc
Io = intensitas sumber cahaya
Q = efisiensi fluoresensi
a = daya serap
b = tebal larutan
c = konsentrasi
  
Penerapan Spektroskopi fluoresensi
Dalam Analisis Kimia
Analisis spektrofluorimetri dapat digunakan untuk analisis kuantitatif dengan kadar rendah
karena analisis ini mempunyai kepekaan yang tinggi. Metode ini dapat digunakan untuk analisis
unsur atau senyawa ,organik dan senyawa an organik.
Analisis untuk senyawa anorganik yang berbentuk kation atau anion dapat dianalisis secara
spektrofluorimetri setelah dikomplekskan dengan reagen pengompleks.
Hanya terdapat sedikit ion anorganik yang berpendar, yang paling dikenal adalah ion uranil,
UO22+. Kebanyakan analisis fluorometrik melibatkan molekul anorganik. Terdapat beberapa
senyawa kelat logam yang berpendar yang memberikan metode-metode yang peka untuk
beberapa ion logam. Seringkali kelat logam itu diekstrak dari dalam larutan berair menjadi suatu
pelarut organik sebelum pengukuran, suatu proses yang sekaligus memisahkannya dari ion-ion
pengganggu dan mengkonsentrasikan spesies yang berpendar. Misalnya, banyak banyak
terdapat reagensia fluorometrik untuk aluminium dan berilium. Logam- logam yang lebih berat
seperti Fe3+, CO2+, Ni2+, Cu2+ sebaliknya, cenderung mematikan fluoresens yang diperagakan
oleh banyak zat pengkelat itu sendiri, hadirnya logam itu dalam kompleks mendorong
dibuangnya energi yang diserap itu secara tak radiaif.