Kris Cahyo Mulyatno

ITD UA

Pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE)

Pewarnaan ini digunakan untuk mewarnai jaringan.
Prinsip: inti yang bersifat asam akan menarik zat/ larutan yang bersifat
basa sehingga akan berwarna biru. Sitoplasma bersifat basa akan menarik
zat /larutan yang bersifat asam sehingga berwarna merah.
Pada pewarnaan HE, ada beberapa tahapan yaitu
1. Deparafinisasi
Tujuan: untuk menghilangkan/ melarutkan parafin yang terdapat pada
jaringan.
Zat: xylol
2. Rehidrasi
Tujuan: untuk memasukkan air ke dalam jaringan. Air akan mengisi
rongga-rongga jaringan yang kosong.
Zat: alkohol absolut, alkohol 90 %, alkohol 80 %
3. Pewarnaan I
Tujuan: untuk memberi warna pada inti dan sitoplasma pada jaringan
Zat: hematoxylin
4. Differensiasi
Tujuan: untuk mengurangi warna biru pada inti dan menghilangkan warna
bitu pada sitoplasma
Zat: HCl 0,6%
5. Blueing

Kris Cahyo Mulyatno

ITD UA

Tujuan: untuk memperjelas warna biru pada inti sel

Zat: lithium carbonat 0,5%
6. Pewarnaan II
Tujuan: untuk memberi warna merah pada sitoplasma sel
Zat: eosin
7. Dehidrasi
Tujuan: untuk menghilangkan air dari jaringan
Zat: Alkohol 80 %, Alkohol 90 %, Alkohol 100 % (absolut)
8. Mounting
Tujuan: untuk mengawetkan jaringan yang telah diwarnai
Zat: entellan/ canada balsem
Jaringan yang akan diwarnai HE, sebelumnya telah mengalami
Processing Jaringan dan dipotong dengan menggunakan mikotrom.
Ketebalan jaringan antara 4-6 m. Jaringan yang telah dipotong sesuai
ukuran dilekatkan pada objek glass.
Berikut langkah kerja sebelum pewarnaan HE (persiapan jaringan):
1. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan
2. Keluarkan jaringan dari blok/kotak parafin
3. Potong jaringan dengan alat mikotrom dengan ketebalan antara 4-6 m
4. Ambil 1 slice potongan jaringan, masukkan ke dalam waterbath ( 30-40
C), untuk menghilangkan kerutan pada potongan dan mencairkan parafin.
5. Tempelkan dengan hati-hati potongan jaringan tersebut pada objek
glass.
6. Teteskan 1-2 tetes albumin di atas potongan jaringan, lalu dengan
menggunakan pinset, rapikan potongan (menghilangkan kerutan ) dengan

Kris Cahyo Mulyatno

ITD UA

hati-hati, jangan sampai sobek.

7. Setelah itu, panaskan objek glass yang telah ditempeli jaringan dengan
oven pada suhu 30-40 C, bila tidak ada oven, gunakan hotplate. Namun
objak glass hanya di gosok-gosokkan agar tidak pecah.
8. Lakukan pewarnaan HE.
No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

TAHAPAN
Deparafinisasi
Rehidrasi

Pewarnaan
Differensiasi
Blueing

Pewarnaan
Dehidrasi

Mounting

ZAT
WAKTU
Xylol I
2-3 celup
Xylol II
2-3 celup
Alkohol 100 %
10 celup
Alkohol 90%
10 celup
Alkohol 80 %
10 celup
AIR
1 menit
Hematoxylin
1-5 menit
AIR
1 menit
HCl 0,6 %
1-2 celup
AIR
1 menit
Lithium Karbonat 0,5 % 3 menit
AIR
1 menit
Alkohol 95 %
1-2 celup
Eosin
3 menit
Alkohol 80%
10 celup
Alkohol 90%
10 celup
Alkohol 100%
10 celup
Xylol I
2-3 celup
Xylol II
2-3 celup
Entelan
1-2 tetes

9. Setelah di beri entelan, tutup dengan cover glass dengan hati-hati agar
tidak terdapat gelembung.
10. Jaringan yang telah diwarnai, akan awet lebih dari 5 tahun.