DASAR MIKROBIOLOGI

METODE USAP PADA PERALATAN

SAFETY PRECAUTIONS

Dalam percobaan ini, praktian tidak mengetahui pasti bakteri apa saja yang
terkandung dalam sampel yang akan dikerjakan. Mungkin, beberapa
sampel dapat mengandung bakteri yang bersifat patogen untuk manusia,
berhati-hatilah dalam memperlakukan sampel dan limbah sisa praktikum.
Hati-hati dengan api spirtus atau api Bunsen !
Alkohol 70% merupakan bahan yang mudah terbakar (flammable)-jangan
menggunakan dekat dengan api. Jangan memipet menggunakan mulut.
Buang sisa sampel air dengan baik dan benar.

Tujuan Pembelajaran
1. Mahasiswa mampu melakukan usap pada peralatan memasak (pisau, talean, capit makanan,
dll)
2. Mahasiswa mampu melakukan usap pada peralatan penyajian makanan (sendok, garpu,
piring, gelas, dll)
3. Mahasiswa mampu menanam hasil swab ke media tanam
4. Mahasiswa dapat menghitung jumlah koloni mikroorganisme per cawan

Teori
Analisis mikrobiologi pada bahan pangan dapat menggunakan metode Angka Lempeng Total
(ALT) atau metode Angka Paling Memunkginkan (APM), sedangkan untuk mengetahui jumlah
mikroorganisme pada permukaan luar bahan pangan dapat menggunakan metode usap atau swab.
Teknik swab bertujuan untuk memperoleh meikroorganisme yang umumnya menempel pada
permukaan suatu benda baik benda dengan permukaan rata, maupun tidak rata. Alat umum yang
biasa digunakan pada metode usap adalah stik usap (cotton swab stick). Stik usap dapat langsung
ditanam pada media dengan metode gores ataupun dapat dimasukkan ke larutan pengencer agar
mikroorganisme homogen dengan larutan pengencer yang selanjutnya dapat ditanam ke media
tanam.

Perhitungan jumlah koloni bakteri berdasarkan luas penampang alat yang diperiksa per cm2
sebagai berikut

1

=

Keterangan:
Z Jumlah koloni per luar permukaan
X Jumlah koloni terhitung di cawan
d Pengenceran
l luas permukaan alat (cm2)

Alat dan Bahan

Alat: Bahan:
Tabung reaksi Alkohol 70%
Cawan petri Eosin methylene blue agar (EMBA)
Sendok/spatula Nutrient agar (NA)
Lampu spirtus Stik usap
Timbangan Peralatan masak (talenan, pisau,
penjapit makanan, dll)
Kaca arloji/kertas timbang Peralatan penyajian makanan
(sendok, garpu, gelas, dll)
Erlenmeyer 1000 ml
Hotplate stirrer
Autoclave
Oven
Inkubator
Batang pengaduk
Batang sebar

Cara Kerja
Sterilisasi Alat
1. Bungkus cawan petri menggunakan kertas, apabila menggunakan pipet, masukkan pipet ke
dalam tabung sterilisasi lalu masukkan ke dalam oven.
2. Setelah proses sterilisasi selesai, tunggu hingga cawan petri dan pipet dingin sebelum
digunakan.

Pembuatan Larutan Pengencer

1. Masukkan 9 ml air suling ke masing-masing tabung reaksi (pengenceran 100, penganceran
10-1, pengenceran 10-2, pengenceran 103). Tutup mulut tabung hingga rapat.
2. Sterilisasi larutan pengencer dengan autoclave.

Pembuatan Media
1. Timbang EMBA dan NA sesuai dengan kebutuhan.
2. Larutkan dengan air suling dengan volume yang dibutuhkan dan panaskan di atas hotplate
hingga mendidih, pastikan larut sempurna tidak ada gumpalan (aduk bila diperlukan).
3. Diamkan 5-10 menit. Lalu masukkan 15-20 ml ke dalam tabung reaksi. Tutup mulut tabung
hingga rapat.
4. Sterilisasi media dengan autoclave.

Usap Alat
1. Aseptis lingkungan kerja dan tangan yang akan bertugas untuk melakukan usap alat.
2. Siapkan 1 buah alat masak (pisau, talenan, penjepit makanan), 1-2 alat penyajian makanan
(sendok, gelas, piring) secara acak.
3. Usap seluruh permukaan alat yang kontak langsung dengan makanan dengan stik usap dan
masukkan ke larutan pengencer atau media agar.
4. Hitunglah luas permukaan alat yang diusap.
5. Beri label dan segera bawa ke laboratorium untuk penanaman.

Penanaman Sampel ke Media

1. Pindahkan stik usap ke dalam larutan pengencer steril, homogenkan dan tunggu 1-2 menit.
2. Cairkan media EMBA dan NA dengan water bath atau hotplate dan tuang ke cawan petri
steril.
3. Ambil 0,1 ml larutan pengencer, ratakan dengan batang sebar. Inkubasi sampel ke dalam
inkubator dengan suhu 350C.
4. Amati pertumbuhan mikroorganisme setelah 24 jam.

Hasil
(Tuliskan di logbook masing-masing)