CARA KERJA PRAKTIKUM STUDI ABSORBSI OBAT SECARA IN SITU

Percobaan kali ini menggunakan metode through and through, dimana dengan menggunakan metode ini
dapat ditentukan fraksi obat yang terabsorbsi, dilakukan dengan mengalirkan larutan obat melalui lumen intestine
yang panjangnya tertentu dengan kecepatan alir tertentu pula. Metode ini dilakukan secara in situ, sehingga
diharapkan dapat menggambarkan absorbsi obat sebenarnya pada usus halus dibanding metode in vitro, karena
hewan uji yang digunakan masih dalam keadaan hidup. Usus halus merupakan tempat absorbsi yang paling efektif
karena pada permukaannya memiliki fili dan mikrofili, oleh karena itu luas permukaannya sangat luas sehingga
absorbsi dapat berjalan secara efektif. Sebelum dilakukan pembedahan, tikus dianestesi terlebih dahulu
menggunakan uretan 40% dengan dosis 1mL/ 200g. Pembedahan pada rongga perut tikus dilakukan menurut arah
linea mediana dengan cutter listrik supaya luka yang dihasilkan kering. Kemudian dipasang selang pada usus,
dimana selang pertama (15 cm dari lambung) berfungsi untuk memasukkan larutan dapar maupun obat dengan
kecepatan 5cc per menit, dan selang kedua yang berjarak kurang lebih 20 cm dari selang pertama, dihubungkan
dengan penampung. Awalnya dialirkan buffer pH 1,2 hingga usus bersih dari kotoran, kemudian ditampung blanko
sebelum larutan diganti dengan larutan obat. Lalu diambil cuplikan larutan obat pada waktu 5, 10, 20,30, 40, 50, dan
60 menit, yang selanjutnya dilakukan preparasi sampel dengan mereaksikan 1 mL sampel dengan 2 mL seng sulfat
(ZnSO4) 5 % dan 2 ml barium hidroksida (Ba(OH)2). ZnSO4 digunakan untuk mengikat protein yang mungkin
terdapat dalam sampel sehingga tidak mempengaruhi absorbansi. Sedangkan Ba(OH)2 akan mengendapkan
kompleks tersebut sehingga terpisah dari obat. Hasil reaksi itu kemudian disentrifugasi selama 10 menit untuk
memisahkan pellet dan supernatan. Selanjutnya supernatan diambil menggunakan pipet tetes, lalu dibaca
absorbansinya pada panjang gelombang 233 nm. Maka diperoleh hasil pembacaan absorbansi yang kemudian
dimasukkan ke dalam kurva baku untuk perhitungan kadar.