Nama : Tio Silvia Silitonga

NIM : 4163141050
Kelas : Pendidikan Biologi Reguler D 2016

Pengaruh Doxycycline pada Respon Kekebalan pada Tikus

AREZKI BELLAHSENE DAN ARNE FORSGREN *

Departemen Klinis Bakteriologi, Universitas ofLund, Malmo Rumah Sakit Umum, S-214 01
Malmo, Swedia

Menerima 1 November 1984 / Diterima 12 Februari 1985

Efek doksisiklin pada respon imun telah dipelajari pada tikus, imunitas
yang diperantarai sel dievaluasi dengan teknik allograft jantung terpisah. Durasi
kelangsungan hidup transplantasi jantung pada hewan yang diobati dengan
doksisiklin 2,5 mg per kg per hari dari hari transplantasi sampai penolakan sedikit
lebih lama secara signifikan daripada pada hewan yang tidak diobati, 18,8 hari (P
<0,05) dibandingkan dengan 14,5 hari. Pada hewan yang diobati doksisiklin,
respons antibodi aglutinating dan hemolitik terhadap eritrosit domba sedikit tetapi
menurun secara signifikan, meskipun tidak ada penghambatan produksi limpa
antibodi terhadap eritrosit domba (yang diukur dengan jumlah plak hemolisis
yang terdeteksi). Hasilnya menunjukkan respon imun pada tikus hanya sedikit
dihambat oleh doksisiklin. Relevansi percobaan pada tikus juga dibahas.

Doxycycline a-6-deoxytetracycline adalah antibiotik yang menghambat

sintesis bakteri protein dengan menghalangi fiksasi asam amino ke ribosom (17).
Studi terbaru di laboratorium kami telah menunjukkan bahwa doksisiklin juga
menghambat kemotaksis dan fagositosis leukosit neutrofil manusia, baik in vitro
dan in vivo (8, 9). Doksisiklin juga menahan respon limfoproliferatif yang
diinduksi mitogen dari limfosit perifer manusia (7). Tujuan dari penelitian ini
adalah untuk menyelidiki apakah doksisiklin menghambat respon imun in vivo.
Interaksi antara doksisiklin dan respon imun seluler dan humoral dipelajari secara
in vivo pada tikus. Respon imun seluler diselidiki dengan teknik allograft jantung
split, dan respon imun humoral diselidiki dengan uji sel pembentuk plak dan
respons aglutinating dan antibodi hemolitik terhadap eritrosit domba.

MATERIAL DAN METODE

Binatang. Tikus CBA / H (Anticimex AB, Evelund 19171 Sollentuna,

Swedia) digunakan. Mereka berusia 8 minggu ketika pertama kali dirawat. Hati
donor diperoleh dari tikus DBAI2J berusia 12-36-jam (Gl. Blomholtg'ard Ltd,
8680 Ry, Denmark).
 Antibiotik. Setiap pagi, hewan diberi doksisiklin (Vibramycin, Pfizer AB,
Taby Sweden) secara intraperitoneal (mis.) Dalam dosis 2,5 mg / kg (dosis terapi
manusia [HTD]), atau 3 x HTD (7,5 mg / kg). Penicillin (Benzylpenicillin, Kabi)
disuntikkan i.p. dalam dosis tunggal 200 mg / kg per hari.
Antigen dan imunisasi. Erythrocytes domba (SRBC) dikumpulkan dan
disimpan dalam larutan Alserver pada suhu 4 ° C selama 1 minggu sebelum
digunakan. Sel-sel dicuci 4 kali dalam larutan garam seimbang isotonik (BSS)
(pH 7,4), dan 0,2 ml suspensi 25% (vol / vol) disuntikkan i.p. (16)
Antibodi aglutinating. Antisera secara serial diencerkan dalam BSS,
masing-masing pengenceran dicampur dengan volume yang sama (25 [LI) dari
SRBC 2% yang dicuci. Tes dilakukan dalam pelat mikrotiter (Sterilin,
Teddington, Middlesex, Inggris), aglutinasi dibaca setelah 45 menit pada suhu 37
° C. Sera dari tikus yang diobati tetapi tidak diimunisasi digunakan sebagai
kontrol (16).
Antibodi hemolitik. Pengenceran serial antiserum di BSS diinkubasi
dengan volume yang sama (25, ul) dari 1,5% SRBC dan pelengkap marmut, dan
hemolisis ditentukan setelah 45 menit pada 37 ° C. Sera dari tikus yang diobati
tetapi tidak diimunisasi digunakan sebagai kontrol (16).
Sel yang memproduksi antibodi. Produksi limpa antibodi terhadap
SRBC diukur dengan uji sel pembentuk plak langsung, menggunakan modifikasi
metode Jerne-Nordin (6, 13). Dari limpa yang dikeluarkan 4 hari setelah imunisasi
dengan SRBC, limfosit disiapkan melalui jalur Millipore (Millipore Corp.,
Bedford, Mass.) Dan isolasi dengan sentrifugasi gradien kepadatan pada
limfoprep (Lymphoprep, Nyegaard dan Co A / S, Oslo, Norwegia ). Sebuah solusi
agar 0,5% (Bacto-Agar, Difco Laboratories, Detroit, Mich.) dan 0,5% DEAE-
dekstran (Pharmacia Fine Chemicals, Inc., Uppsala, Swedia) dalam BSS pada 46 °
C dicampur dengan 25 pl SRBC yang diencerkan 1: 5 dalam BSS, 25 mg serum
marmut (sebelumnya diserap dengan SRBC selama 20 menit pada suhu 4 ° C)
diencerkan 1: 4 dalam salin yang mengandung fosfat, dan 100, ul limfosit limpa
dalam konsentrasi 106 limfosit per ml. Tiga tetes 100 pd terpisah dari campuran
ditempatkan pada cawan petri, dan slip penutup kaca (24 kali 32 mm) segera
ditempatkan pada setiap tetes. Pelat diinkubasi selama 3 jam pada 37 ° C, dan plak
dihitung di bawah mikroskop stereo (Wild M5, Wild Heerburg, Inc., Heerburg,
Swiss). Plak representatif diperiksa untuk limfosit sentral.
Transplantasi. Cangkok jantung ditransplantasikan dengan modifikasi
metode Judd dan Trentin (14, 20). Jantung dari tikus DBA yang baru lahir
dipotong sepanjang septum ventrikel, masing-masing setengah kemudian
dimasukkan ke dalam kantong subkutan di bagian dorsal telinga tikus penerima
CBA. Kelangsungan hidup transplantasi dipantau dengan mengukur aktivitas
listrik, menggunakan Mingograf 61 yang dilengkapi dengan amplifier terintegrasi.
Aktivitas jantung tuan rumah juga dicatat. Kegiatan ini berbeda dari hati yang
ditransplantasikan dan tidak membingungkan pengukuran.
 Statistik. Student's t test dan Wilcoxon rank sum test digunakan untuk
memeriksa signifikansi statistik dari hasil.

HASIL

Toksisitas doksisiklin. Doksisiklin tampaknya ditoleransi dengan baik oleh

tikus ketika diberikan dalam HTD atau 3 x HTD. Durasi kelangsungan hidup
allografts. Tikus transplantasi yang tidak diobati digunakan sebagai kontrol.
Gambar 1 menunjukkan efek i.p. doxycycline pada durasi bertahan hidup
allografts split-heart dari tikus DBA pada tikus CBA. Baik untuk tikus yang diberi
perlakuan awal maupun yang tidak,
perawatan antibiotik harian diberikan
GAMBAR. 1. Persentase allografts DBA
split-heart yang bertahan pada tikus CBA
yang dirawat setiap hari dengan HTD
doxycycline (0) atau dengan HTD
benzylpenicillin (LI) dari hari
transplantasi hingga penolakan graft.
Tikus yang diobati untuk periode yang
sama dengan HTD doxycycline tetapi
juga diberikan perawatan selama 10 hari
dengan HTD doxycycline (D). Tikus
transplantasi yang tidak diobati (0)
digunakan sebagai kontrol. Jumlah
percobaan transplantasi diberikan di
bagian atas setiap kurva.

dari hari transplantasi sampai penolakan cangkok terdeteksi oleh

elektrokardiograf. Kelangsungan hidup cangkok sedikit diperpanjang pada tikus
yang diberi doksisiklin dalam dosis 2,5 mg / kg per hari (HTD) (Gambar 1).
Waktu kelangsungan hidup rata-rata (± standar deviasi) dari allografts
adalah 18,8 ± 4,7 hari pada tikus yang dirawat setiap hari dari hari transplantasi
sampai penolakan cangkokan, dibandingkan dengan 14,5 ± 3 hari pada kontrol
yang tidak diberi pengobatan antibiotik (P <0,05). Pada tikus yang juga dirawat 10
hari sebelum operasi, durasi kelangsungan hidup rata-rata allografts adalah 18,6 ±
3,8 hari (P <0,01). Penisilin diberikan i.p. dari hari transplantasi sampai penolakan
graft tidak memperpanjang kelangsungan hidup cangkok (rata-rata waktu bertahan
hidup = 15,9 + 3,9 hari) (Gbr. 1).
Sel yang memproduksi antibodi. Sel-sel pembentuk plak langsung dari
limpa tikus diimunisasi dengan SRBC dan diobati dengan doksisiklin atau
penisilin dari hari imunisasi (DO) hingga hari ke 3 (D3), dengan atau tanpa
pretreatment, dipelajari. Jumlah plak yang terdeteksi pada tikus yang diberikan 2,5
mg doksisiklin per kg per hari hanya sedikit lebih sedikit (17%; tidak signifikan)
dibandingkan pada tikus yang diimunisasi yang tidak diobati (Gbr. 2).
Pembentukan plak tidak dihambat dalam sel limpa dari hewan yang dirawat dari
hari 20 sebelum imunisasi (D - 20) sampai D3 atau dari D - 20 hingga D - 1.
Tikus diobati dengan doksisiklin dengan dosis 7,5 mg / kg per hari dari hari.
imunisasi memiliki respon antibodi primer normal terhadap SRBC (Gbr. 2).
Pemberian penisilin tidak mempengaruhi hasil uji.
Antibodi aglutinating dan hemolitik. Titer antibodi aglutinating dan
hemolitik pada tikus yang diimunisasi dengan SRBC dan diobati dengan
doksisiklin atau penisilin dibandingkan dengan tikus yang diimunisasi yang tidak
diobati (Tabel 1).

GAMBAR. 2. Sel pembentuk plak langsung dari limpa tikus yang diimunisasi dengan
SRBC dan diobati setiap hari dengan doksisiklin (HTD, 3 x HTD) atau benzylpenicillin
(HTD) dari hari imunisasi (DO) hingga hari ke 3 (D3), dengan atau tanpa pretreatment
(PT). Tikus yang dirawat setiap hari dengan doksisiklin (HTD) dari hari 20 (D - 20)
hingga hari 1 (D - 1) sebelum = hari imunisasi dimasukkan. Hasilnya (rata-rata ±
kesalahan standar) dinyatakan sebagai persentase dari mereka dalam kelompok kontrol.
Setiap kelompok terdiri dari 10 tikus.

Tabel menunjukkan titer antibodi

aglutinating dan hemolitik dari
serum tikus yang diimunisasi dengan
SRBC dan diobati setiap hari dengan
doksisiklin (HTD, 3x HTD) atau
benzylpenisilin (HTD) dari hari
imunisasi (DO), atau 1 hari setelah
imunisasi (D1) , hingga hari ke 3 (D3) dengan atau tanpa pretreatment (PT). Hasil untuk
tikus yang dirawat setiap hari dengan doksisiklin (HTD) dari hari 20 (D-20) hingga hari 1
(D-1) sebelum hari imunisasi juga dimasukkan.
Titer antibodi aglutinating dan hemolitik dari tikus yang diimunisasi yang tidak
diobati berperan sebagai referensi kontrol. Hasilnya dinyatakan sebagai titer rata-rata
(21og ± kesalahan standar). Setiap kelompok terdiri dari 10 tikus.
Empat hari setelah imunisasi, tikus yang diobati dengan HTD doxycycline (2,5
mg / kg per hari) dari DO hingga D3 memiliki konsentrasi yang lebih rendah (sekitar satu
langkah pengenceran) baik antibodi aglutinating dan antibodi hemolitik daripada kontrol;
serum dari tikus yang diperlakukan serupa tetapi juga diberikan perlakuan awal selama 20
hari memiliki titer aglutinasi yang lebih rendah secara signifikan (lebih dari dua langkah
pengenceran) daripada kontrol. Jadwal dosis doxycycline lainnya mengurangi respons
antibodi, tetapi penisilin tidak memiliki efek yang dapat dibuktikan pada respons antibodi
primer terhadap SRBC pada tikus yang diimunisasi (Tabel 1).

DISKUSI

Penelitian ini menunjukkan bahwa doksisiklin, dalam dosis 2,5 atau 7,5 mg / kg
per hari, hanya sedikit, meskipun secara signifikan, kelangsungan hidup allograft yang
lama. Respons antibodi primer terhadap SRBC, seperti yang diperkirakan dari titer
aglutinating dan antibodi hemolitik serologis, juga dihambat. Tidak ada efek signifikan
yang dapat dideteksi pada jumlah sel pembentuk plak. Investigasi in vitro telah
menunjukkan efek penghambatan doxycycline pada respon limfoproliferatif yang
diinduksi mitogen dari limfosit perifer manusia. Forsgren dan Banck tidak menemukan
transformasi limfosit dalam percobaan menggunakan phytohemagglutinin sebagai
mitogen dan doksisiklin-dalam konsentrasi 50 p.g / ml dan penghambatan pada
konsentrasi yang lebih rendah (7). Efek penghambatan limfosit yang ditandai juga
dikonfirmasi oleh Thong dan Ferrante (21) dan Potts et al. (18) Depresi tetrasiklin dari
respons yang dimediasi sel in vivo juga telah ditemukan (19, 22, 23).
Juga telah dilaporkan bahwa neutrofil, yang diinkubasi secara in vitro dengan
doksisiklin, menunjukkan penurunan kapasitas ragi dan bakteri fagositosis. Hal yang
sama berlaku untuk leukosit yang dipanen dari sukarelawan sehat setelah konsumsi
tetrasiklin (19). Doksisiklin juga secara efektif menghambat kemotaksis neutrofil manusia
dalam lempeng agarosa (1, 2, 8,12, 23). Baru-baru ini, Elewski et al. (3), menggunakan
teknik ruang kulit, menunjukkan penghambatan yang luar biasa dari kemotaksis leukosit
setelah pemberian tetrasiklin sistemik atau topikal kepada sukarelawan yang sehat.
Namun, Glette et al. (10, 11) telah menunjukkan bahwa doksisiklin tidak mengurangi
migrasi neutrofil in vivo ke kamar-kamar kulit dan telah mengindikasikan bahwa
gangguan fungsi neutrofil yang diukur secara in vitro mungkin disebabkan oleh foto
spesies oksigen toksik yang diinduksi foto atau efek pengkelat kation divalen dari
tetrasiklin, atau keduanya. Investigasi ini hanya menunjukkan sedikit efek in vivo dari
doksisiklin terhadap imunitas yang diperantarai sel dan humoral. Pengamatan in vivo dari
penelitian ini menunjukkan bahwa hasil in vitro yang dilaporkan sebelumnya mungkin
memiliki implikasi in vivo. Namun, harus ditekankan bahwa paruh doksisiklin pada tikus
adalah ca. 4 jam (4), dibandingkan dengan ca. 20 jam pada manusia (5). Ketika obat
sitotoksik diberikan berdasarkan berat badan, seperti dalam penelitian ini, tikus sering
mentoleransi dosis yang jauh lebih besar (10 hingga 20 kali lebih tinggi) daripada
manusia, menyiratkan bahwa efek antibiotik mungkin lebih jelas pada manusia daripada
yang dilaporkan di sini untuk tikus .

DASAR PUSTAKA

1. Belsheim, J. A., and G. H. Gnarpe. 1981. Antibiotics and granulocytes. Direct

and indirect effects on granulocyte chemotaxis. Acta Pathol. Microbiol. Scand.
Sect. C 89:217-221.
2. Belsheim, J., J. Gnarpe, and J. Lofberg. 1979. Granulocyte function during
prophylaxis and doxycycline. Scand. J. Infect. Dis. 11:287-290.
3. Elewski, B. E., B. A. J. Lamb, W. M. Sams, Jr., and W. R. Gammon. 1983. In
vivo suppression of neutrophil chemotaxis by systemically and topically
administered tetracycline. J. Am. Acad. Dermatol. 8:807-812.
4. English, A. R. 1967. oa-6-Deoxyoxytetracycline. III. Total and unbound
antibiotic serum concentrations after oral administration to mice. Proc. Soc. Exp.
Biol. Med. 126:487-491.
5. Farbre, J., J. S. Pitton, and J. P. Kunz. 1966. Distribution and excretion of
doxycycline in man. Chemotherapia 11:73-85.
6. Fauci, A. S., and K. R. Pratt. 1976. Polyclonal activation of bone-marrow derived
lymphocytes from human peripheral blood measured by a direct plaque-forming
cell assay. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 73:3676-3679.
7. Forsgren, A., and G. Banck. 1978. Influence of antibiotics on lymphocyte
function in vivo. Infection 6(Suppl. 1):91-97.
8. Forsgren, A., and D. Schmeling. 1977. Effect of antibiotics on chemotaxis of
human leukocytes. Antimicrob. Agents Chemother. 11:580-584.
9. Forsgren, A., D. Schmeling, and P. G. Quie. 1974. Effect of tetracycline on the
phagocytic function of human leukocytes. J. Infect. Dis. 130:412-415.
10. Glette, J., A. Halstensen, S. Sandberg, G. Hopen, K. B. Helium, and C. 0.
Solberg. 1982. Effect of doxycycline and PUVA light on human
polymorphonuclear leukocyte function, p. 33-39. In H. U. Eickenberg (ed.), The
influence of antibiotics on the host-parasite relationship. Springer-Verlag,
Heidelberg.
11. Glette, J., S. Sandberg, G. Hopen, and C. 0. Solberg. 1984. Influence of
tetracyclines on human polymorphonuclear leukocyte function. Antimicrob.
Agents Chemother. 25:354-357.
12. Gnarpe, H., and J. Belsheim. 1978. Tetracyclines and host defense mechanisms:
doxycycline polymethaphosphate sodium complex (DMSC) compared to
doxycycline with regard to influence on some host defence mechanisms.
Microbios 22:45-49.
13. Jerne, N. K., and A. A. Nordin. 1963. Plaque formation in agar by single
antibody producing cells. Science 140:405.
14. Judd, K. P., and J. J. Trentin. 1971. Cardiac transplantation in mice. 1. Factors
influencing the take and survival of heteropic grafts. Transplantation 11:298-302.
15. Juhlin, I. 1973. The determination of gentamycin concentration. Acta Pathol.
Microbiol. Scand. Sect. B 81(Suppl. 241):48-53.
16. Ljungstrom, I., and G. Huldt. 1977. Effect of experimental trichinosis on
unreleated humoral and cell mediated immunity. Acta Pathol. Microbiol. Scand.
Sect. C 85:131-141.
17. Otten, H., M. Plempel, and W. Siegenthaler. 1975. Tetracycline, p. 319-361. In
A. M. Walter and L. Heilmeyer (ed.), Antibiotika Fibel. 4. Auflage-Georg
Thieme Verlag, Stuttgart.
18. Potts, R. C., H. A. A. Hassan, R. A. Brown, A. MacConnachie, J. H. Gibbs, A. J.
Robertson, and J. Swanson Beck. 1983. In vitro effects of doxycycline and
tetracycline on mitogen stimulated lymphocyte growth. Clin. Exp. Immunol.
53:458-464.
19. Rjikers, G. T., R. Van Oosterom, and W. B. Van Muiswinkel. 1981. The immune
system of cyprinid fish. Oxytetracycline and the regulation of humoral immunity
in carp (Cyprinus Carpio). Vet. Immunol. Immunopathol. 2:281-284.
20. Svehag, S. E., and W. Schilling. 1973. Synergism between alloantibodies or
Fab'2 and prednisone in the survival of murine split heart allografts.
Transplantation 15:345-347.
21. Thong, Y. H., and A. Ferrante. 1979. Inhibition of mitogen-induced human
lymphocyte proliferative responses by tetracycline analogues. Clin. Exp.
Immunol. 35:443-446.
22. Thong, Y. H., and A. Ferrande. 1980. Effects of tetracycline treatment on
immunological responses in mice. Clin. Exp. Immunol. 39:728.
23. Van den Bogert, C., and A. M. Kroon. 1982. Effects of oxytetracycline on in vivo
proliferation and differentiation of erythroid and lymphoid cells in the rat. Clin.
Exp. Immunol. 50:327-335.