PROTEIN DAN ASAM AMINO

PROTEIN DAN ASAM AMINO
LAPORAN PRAKTIKUM
disusun untuk memenuhi salah satu tugas mata kuliah Biokimia yang diampu oleh
Drs. H. Yusuf Hilmi Adisendjaja, M. Sc, Drs. Suhara, M. Pd, dan Dr. Mimin
Nurjhani Kusumastuti, M. Pd.
oleh:
Kelompok 4
Kelas A 2015
Lahmi Ladzdzatul Hikmah (1500106)

Najat Almardhiyyah (1503879)
Naufal Ahmad Muzakki (1505601)
Nurul Aulia Rahmi K. (1503737)
Qoriatul Zannah (1504984)
Wilda Robiatul Adawiyah (1302315)
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI

DEPARTEMEN PENDIDIKAN BIOLOGI
FAKULTAS PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PENDIDIKAN INDONESIA
BANDUNG
2016
A. Judul
Protein dan Asam Amino.
B. Waktu dan Tempat Pelaksanaan

1. Praktikum dan pengamatan Uji Ninhidrin, Uji Xanthoprotein, dan Uji
Millon dilaksanakan pada:
Hari, tanggal : Kamis, 15 September 2016
Waktu : Pukul 07.00-09.30 WIB
Tempat : Laboratorium Fisiologi, FPMIPA UPI.
2. Praktikum dan pengamatan Uji Komposisi Protein dan Uji Biuret
dilaksanakan pada:
3. Praktikum dan pengamatan Denaturasi Protein dilaksanakan pada:
C. Tujuan
1. Uji Ninhidrin bertujuan untuk menunjukkan adanya asam amino dalam
zat yang diuji.
2. Uji Xantoprotein bertujuan untuk mengetahui dan membuktikan asam
amino yang mengandung cincin aromatik.
3. Uji Millon bertujuan untuk menunjukkan adanya asam amino tirosin
pada zat yang diuji.
4. Uji Komposisi Protein bertujuan untuk membuktikan komposisi yang
ada dalam suatu protein.
5. Uji Biuret bertujuan untuk menguji adanya ikatan peptida pada protein.
6. Denaturasi protein oleh pH ekstrim, reagen asam dan logam berat
bertujuan untuk membuktikan proses denaturasi yang dapat terjadi
pada protein.
D. Landasan Teori
1. Uji Ninhidrin
Dalam uji ini digunakan larutan ninhidrin untuk mendeteksi semua
jenis asam amino. Ninhidrin (triketohidrinden hidrat) merupakan
pengoksidasi kuat, bereaksi dengan semua α-asam amino diantara pH
4-8 menghasilkan senyawa berwarna ungu. Asam amino prolin dan
hidroksi prolin juga bereaksi dengan ninhidrin, tetapi senyawa yang
dihasilkan berwarna kuning (Adisendjaja, dkk, 2016).
Asam amino bereaksi dengan ninhidrin membentuk aldehida
dengan satu atom C lebih rendah dan melepaskan molekul NH3 dan
CO2. Ninhidrin yang telah bereaksi akan membentuk hidrindantin
(Panji, 2013).
2. Uji Xanthoprotein
Uji xanthoprotein merupakan uji kualitatif pada protein yang
digunakan untuk menunjukkan keberadaan gugus benzene. Asam
amino yang mengandung cincin aromatic membentuk turunan nitro
yang berwarna kuning pada pemanasan dengan asam nitrat pekat.
Garam-garam dari turunan berwarna jingga (orange). Asam amino
yang menunjukkan reaksi positif untuk uji ini adalah tirosin, fenil
lalanin, dan triptofan.
3. Uji Millon
Pereaksi Millon adalah larutan merkuro dan merkuri nitrat dalam
asam nitrat. Uji millon umumnya digunakan untuk menunjukkan
adanya asam amino tirosin pada suatu zat. Uji millon bekerja terhadap
derivat-derivat monofenol seperti tirosin. Pereaksi yang digunakan
merupakan larutan merkuri (Hg) dalam asam nitrat (HNO3) (Panji,
2013).
Pada dasarnya reaksi ini positif untuk fenol-fenol karena
terbentuknya senyawa merkuri dengan gugus hidroksifenil yang
berwarna.Tetapi khusus untuk proteoso dan pepton secara langsung
akan menghasilkan larutan yang berwarna merah. Endapan yang
terbentuk berupa garam kompleks dari tirosin yang ternitrasi.
Tirosin akan ternitrasi oleh asam nitrat sehingga memperoleh
penambahan gugus N=O, gugus tersebut secara reversibel (bolak-
balik) dapat berubah menjadi N-OH (hidroksifenil). Merkuri dalam
pereaksi millon akan bereaksi dengan gugus hidroksifenil dari tirosin
membentuk warna merah.
4. Uji Komposisi Protein
Protein berasal kata protos dari bahasa Yunani yang berarti "yang
paling utama”. Protein adalah senyawa organik kompleks berbobot
molekul tinggi yang merupakan polimer dari monomer-monomer asam
amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida.
Molekul protein mengandung karbon, hidrogen, oksigen, nitrogen dan
kadang kala sulfur serta fosfor. Protein berperan penting dalam
struktur dan fungsi semua sel makhluk hidup dan virus.
Suatu protein merupakan untaian dari asam amino yang saling
berikatan melalui suatu ikatan peptida. Ikatan peptida merupakan suatu
kovalen antara gugus α-amino dari suatu asam amino dengan gugus α-
karboksilat dari asam amino lainnya. Penambahan sejumlah asam
amino menghasilkan rantai yang panjang dari gabungan asam-asam
amino yang dinamakan oligopeptida (mengandung sampai 25 residu
asam amino) dan polipeptida (mengandung > 25 residu asam amino).
5. Uji Biuret
Uji biuret digunakan untuk menunjukkan adanya ikatan peptida
dalam suatu zat yang diuji. Adanya ikatan peptida mengindikasikan
adanya protein, karena asam amino berikatan dengan asam amino yang
lain melalui ikatan peptida membentuk protein. Ikatan peptida
merupakan ikatan yang terbentuk ketika atom karbon dari gugus
karboksil suatu molekul berikatan dengan atom nitrogen dari gugus
amina molekul lain.
Kupri sulfat dalam suasana basa bereaksi dengan senyawa yang
mengandung dua ikatan peptide atau lebih memberikan senyawa
komplek berwarna ungu. Keadaan warna ungu menunjukkan jumla
ikatan peptide dalam protein. Reaksi menunjukkan hasil positif
terhadap senyawa yang mengandung dua gugus karbonil yang
dihubungkan melalui satu atom N atau C (Adisendjaja, 2016).
6. Denaturasi Protein
Panas dapat mempengaruhi sifat pada semua protein globular,
tanpa memandang ukuran atau fungsi biologisnya, walaupun suhu
yang tepat bagi fenomena ini mungkin bervariasi. Protein dalam
keadaan alamiahnya disebut protein asli (natif), dan setelah perubahan
menjadi protein terdenaturasi. Terdapat akibat kedua yang penting dari
denaturasi protein, protein yang bersangkutan hampir selalu
kehilangan aktivitas biologi khususnya.
Denaturasi protein dapat diakibatkan bukan hanya oleh panas,
tetapi juga oleh pH ekstrim, oleh beberapa pelarut organik seperti
alcohol atau aseton, oleh zat terlarut teretntu seperti urea, oleh
deterjen, atau hanya dengan cara pengguncangan intensif larutan
protein dan bersinggungan dengan udara sehingga terbentuk busa
(Suhara, 2008).
E. Alat dan Bahan

1. Alat dan Bahan Uji Ninhidrin
Tabel 1. Alat-alat yang digunakan
No. Alat Jumlah
1. Tabung reaksi 8 buah
2. Kertas label 8 buah
3. Rak tabung reaksi 1 buah
4. Pipet 1 buah
5. Water Bath 1 buah
Tabel 2. Bahan-bahan yang digunakan

No. Bahan Jumlah
1. Asam Amino A 2 ml
2. Asam Amino B 2 ml
3. Asam Amino C 2 ml
4. Asam Amino D 2 ml
5. Asam Amino E 2 ml
6. Asam Amino F 2 ml
7. Asam Amino G 2 ml
8. Asam Amino H 2 ml
9. Larutan Ninhidrin 5 tetes untuk setiap asam amino
2. Alat dan Bahan Uji Xanthoprotein
No. Alat Jumlah
2. Gelas Ukur 1 buah
3. Pipet 1 buah
4. pH Universal Secukupnya

No. Bahan Jumlah
1. Asam Amino A 0,5 ml
2. Asam Amino B 0,5 ml
3. Asam Amino C 0,5 ml
4. Asam Amino D 0,5 ml
5. Asam Amino E 0,5 ml
6. Asam Amino F 0,5 ml
7. Asam Amino G 0,5 ml
8. Asam Amino H 0,5 ml
9. HNO3 pekat 0,5 ml untuk setiap asam amino
10. NaOH 10 M Secukupnya
3. Alat dan Bahan Uji Millon

No. Alat Jumlah
4. Pipet 1 buah
5. Water bath 1 buah
No. Bahan Jumlah
1. Asam Amino A 1 ml
2. Asam Amino B 1 ml
3. Asam Amino C 1 ml
4. Asam Amino D 1 ml
5. Asam Amino E 1 ml
6. Asam Amino F 1 ml
7. Asam Amino G 1 ml
8. Asam Amino H 1 ml
9. Pereaksi Millon 5 tetes untuk setiap asam amino
10. Larutan Na-nitrit 5 tetes untuk setiap asam amino
4. Alat dan Bahan Uji Komposisi Protein

No. Alat Jumlah
No. Alat Jumlah
3. Kertas saring 1 buah
4. Penjepit tabung reaksi 1 buah
5. Korek api 1 buah
6. Pembakar Bunsen 1 buah
7. Pipet 1 buah

No. Bahan Jumlah
1. Serbuk Albumin Secukupnya
2. Lakmus merah 1 buah
3. Pb-asetat 2 tetes
5. Alat dan Bahan Uji Biuret

No. Alat Jumlah
4. Pipet 1 buah

No. Bahan Jumlah
1. Albumin 2 ml
2. Casein 2 ml
3. Gelatin 2 ml
4. Pepton 2 ml
5. CuSO4 5 tetes untuk setiap protein
6. NaOH 10 M 5 tetes untuk setiap protein
6. Alat dan Bahan Denaturasi Protein oleh pH ekstrim

No. Alat Jumlah
4. Pipet 1 buah

No. Bahan Jumlah
1. Albumin 1 ml
2. Casein 1 ml
3. Gelatin 1 ml
4. Pepton 1 ml
5. NaOH (Basa) 1 ml/secukupnya
6. HCl (asam) 1 ml/secukupnya
7. Alat dan Bahan Denaturasi Protein oleh Reagen Asam
No. Alat Jumlah
4. Pipet 3 buah
5. Gelas ukur 2 buah
6. pH Universal Secukupnya

No. Bahan Jumlah
1. Albumin 2 ml
2. Casein 2 ml
3. Gelatin 2 ml
4. Pepton 2 ml
5. Asam sulfosalisilat 10 tetes untuk setiap protein
6. Asam pikrat 10 tetes untuk setiap protein
7. Asam tanat 10 tetes untuk setiap protein
8. Asam trichlorasetat 10 tetes untuk setiap protein
9. Asam fosfotungstat 10 tetes untuk setiap protein
10. NaOH encer Secukupnya
8. Alat dan Bahan Denaturasi Protein oleh Logam Berat

No. Alat Jumlah
4. Pipet 3 buah
5. Gelas ukur 2 buah
6. pH Universal 12 helai

No. Bahan Jumlah
1. Albumin 2 ml
2. Casein 2 ml
3. Gelatin 2 ml
4. Pepton 2 ml
5. CuSO4 0,1 M 10 tetes
6. Pb-asetat 0,1 M 10 tetes
7. HgCl 0,1 M 10 Tetes
F. Langkah Kerja
1. Uji Ninhidrin
Gambar 1. Cara Kerja Uji Ninhidrin

(Kelompok 4, 2016)
a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

b. Larutan asam amino yang akan diuji dimasukkan kedalam tabung
reaksi masing-masing sebanyak 2 ml.
c. Kemudian kedalam masing-masing tabung ditambahkan 5 tetes
larutan Ninhidrin dan dipanaskan selama 2 menit.
d. Setelah itu diamati perubahan yang terjadi kemudian hasilnya
dicatat dan didokumentasikan.
Gambar 2. Langkah Kerja Uji Xanthoprotein

(Kelompok 4, 2016)
reaksi masing-masing sebanyak 0,5 ml.
c. Kemudian kedalam masing-masing tabung ditambahkan 0,5 ml
HNO3 pekat dan dipanaskan selama 2 menit.
d. Setelah itu tabung didinginkan dan ditambahkan tetesan NaOH 10
M sampai larutan didalam tabung menjadi basa, hasilnya dicatat
dan didokumentasikan.
3. Uji Millon
Gambar 3. Langkah Kerja Uji Millon

(Kelompok 4, 2016)

reaksi masing-masing sebanyak 1 ml.
larutan Millon dan dipanaskan selama 10 menit.
d. Setelah itu tabung didinginkan dan ditambahkan tetesan Na-nitrit,
hasilnya dicatat dan didokumentasikan.
Gambar 4. Langkah Kerja Uji Komposisi Protein

b. Albumin serbuk dimasukkan kedalam tabung reaksi yang kering.
c. Kemudian kertas lakmus dimasukkan tepat diatas serbuk albumin,
setelah itu pada bagian atas mulut tabung ditempatkan kertas saring
yang telah dibasahi Pb-asetat.
d. Tabung reaksi tersebut kemudian dipanaskan menggunakan
pembakar Bunsen secara perlahan.
e. Kemudian perubahan pada tabung reaksi diamati dan diidentifikasi.
5. Uji Biuret
Gambar 5. Langkah Kerja Uji

Biuret.
(Kelompok 4, 2016)
b. Larutan protein yang akan diuji dimasukkan kedalam tabung reaksi
masing-masing sebanyak 2 ml.
CuSO4 dan 5 tetes larutan NaOH.
d. Setelah itu larutan dikocok sampai tercampur sempurna dan
diamati perubahan yang terjadi pada tabung reaksi.
6. Denaturasi Protein oleh pH Ekstrim
Gambar 6. Langkah Kerja Denaturasi Protein oleh pH Ekstrim

(Kelompok 4, 2016)

b. Sebanyak 1 ml protein masing-masing dimasukkan ke dalam 8
tabung reaksi berlabel.
c. Kedalam 4 tabung reaksi pertama diteteskan NaOH sampai
terdenaturasi dan 4 tabung reaksi berikutnya diteteskan HCl sampai
terdenaturasi.
d. Dilihat perubahannya. Jika sudah terdenaturasi dengan tampak
perubahan (mengendap, keruh, atau berbuih) hasilnya dicatat dan
didokumentasikan.
7. Denaturasi Protein oleh Reagen Asam
Gambar 7. Langkah Kerja Denaturasi Protein oleh Reagen Asam

(Kelompok 4, 2016)
a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan

b. Sebanyak 2 ml protein masing-masing dimasukkan ke dalam 8
tabung reaksi berlabel.
c. Larutan protein kemudian ditetesi reagen asam sampai terjadi
pengendapan.
d. Secara perlahan-lahan diteteskan NaOH encer dan amati yang
terjadi sejalan dengan kenaikan pH (dari asam menjadi basa).
e. Kemudian setelah itu ditentukan pH akhirnya (setelah menjadi
basa).
f. Dilihat perubahannya kemudian hasilnya dicatat dan
didokumentasikan.
8. Denaturasi Protein oleh Logam Berat
Gambar 8. Langkah Kerja Denaturasi Protein oleh Logam Berat
(Kelompok 4, 2016)

b. Sebanyak 2 ml protein Albumin, Casein, Gelatin dan Pepton
dimasukkan kedalam tabung reaksi, masing-masing protein
dimasukkan kedalam 3 tabung berbeda.
c. Kemudian tabung reaksi yang berisi protein ditambahkan larutan
logam berat diantaranya CuSO4, Pb-asetat, dan HgCl masing-
masing sebanyak 10 tetes.
G. Hasil Pengamatan
1. Uji Ninhidrin
Tabel 17. Hasil Pengamatan Uji Ninhidrin
No. Larutan Reaksi Keterangan Gambar Hasil Pengamatan
1 Asam Amino A - Tidak berwarna
Gambar 9. Larutan A
(Dokumentasi kelompok 4,
2016)
2 Asam Amino B + Berwarna ungu
Gambar 10. Larutan B

2016)
3 Asam Amino C + Berwarna ungu
Gambar 11. Larutan C

2016)
4 Asam Amino D - Tidak berwarna
Gambar 12. Larutan D

2016)
5 Asam Amino E - Tidak berwarna
Gambar 13. Larutan E

2016)
6 Asam Amino F + Berwarna ungu
Gambar 14. Larutan F

2016)
7 Asam Amino G + Berwarna ungu
Gambar 15. Larutan G

2016)
8 Asam Amino H - Tidak berwarna
Gambar 16. Larutan H

2016)
Tabel 18. Gambar Hasil Pengamatan Uji Xanthoprotein
No. Perlakuan Gambar Hasil
1. Larutan asam amino dengan
tambahan tetesan HNO3 pekat
Gambar 17. Asam amino ditetesi HNO3

pekat
(Dokumentasi kelompok 4, 2016)
2. Larutan asam amino dengan
tambahan tetesan HNO3 pekat dan
NaOH
Gambar 18. Asam amino ditetesi HNO3

pekat dan NaOH
3. Larutan diukur menggunakan pH
universal
Gambar 19. Pengujian basa

Tabel 19. Hasil Pengamatan Uji Xanthoprotein

No Larutan HNO₃ NaOH pH Universal
1 Asam Amino A - 5 Tetes Basa
2 Asam Amino B + 5 Tetes Basa
3 Asam Amino C - 8 Tetes Basa
4 Asam Amino D - 15 Tetes Basa
5 Asam Amino E 10 Tetes Basa
6 Asam Amino F - 10 Tetes Basa
7 Asam Amino G - 10 Tetes Basa
8 Asam Amino H - 15 Tetes Basa
3. Uji Millon
Tabel 20. Hasil Pengamatan Uji Millon
1. Asam Amino A - Tidak berwarna
Gambar 20. Asam Amino A

2016)
2. Asam Amino B + Berwarna merah bata
Gambar 21. Asam Amino B

2016)
3. Asam Amino C - Tidak berwarna
Gambar 22. Asam Amino C

2016)
4. Asam Amino D - Tidak berwarna
Gambar 23. Asam Amino D

2016)
5. Asam Amino E - Tidak berwarna
Gambar 24. Asam Amino E

2016)
6. Asam Amino F - Tidak berwarna
Gambar 25. Asam Amino F

2016)
7. Asam Amino G - Tidak berwarna
Gambar 26. Asam Amino G

2016)
8. Asam Amino H + Berwarna merah bata
Gambar 27. Asam Amino H

2016)

Tabel 21. Hasil Pengamatan Uji Komposisi Protein
No. Variabel Sebelum Pembakaran Setelah Pembakaran
1. Serbuk Albumin Berwarna putih Berwarna hitam
2. Dinding tabung Kering Beruap
3. Kertas lakmus Merah Biru
4. Kertas saring Putih Abu-abu
5. Gambar
Gambar 28. Sebelum Gambar 29. Sesudah

pembakaran pembakaran
(Dokumentasi kelompok 4, (Dokumentasi kelompok 4,
2016) 2016)
5. Uji Biuret
Tabel 22. Hasil Pengamatan Uji Biuret
1. Albumin + Berwarna ungu
Gambar 30. Albumin

2016)
2. Casein + Berwarna keunguan
Gambar 31. Casein

2016)
3. Gelatin + Berwarna ungu
Gambar 32. Gelatin

2016)
4. Pepton + Berwarna ungu
Gambar 33. Pepton

2016)

Tabel 23. Hasil Pengamatan Denaturasi Protein olelh pH Ekstrim
No Larutan HCl 1M NaOH 1M
1 Albumin + +
2 Casein + +
3 Gelatin + +
4 Pepton - -
Tabel 24. Hasil Pengamatan Denaturasi Protein oleh Reagen Asam
No. Protein (2ml) Asam Asam Asam Asam Asam

Sulfosalisilat Pikrat (2) tanat (3) Trichlorasetat Fosfotungstat
(1) (4) (5)
1. Albumin (a)
Gambar 34. Albumin yang telah ditetesi asam

2. Casein (b)
Gambar 35. Casein yang telah ditetesi asam

3. Gelatin (c)
Gambar 36. Gelatin yang telah ditetesi asam

No. Protein (2ml) Asam Asam Asam Asam Asam
Sulfosalisilat Pikrat (2) tanat (3) Trichlorasetat Fosfotungstat
(1) (4) (5)
4. Pepton (d)
Gambar 37. Pepton yang telah ditetesi asam

Tabel 25. Hasil Pengukuran pH

No. Protein Asam Asam Asam tanat Asam Asam
(2ml) Sulfosalisilat Pikrat (2) (3) Trichlorasetat Fosfotungstat
(1) (4) (5)
1. Albumin 13 (10 tetes) 11 (10 tetes) 9 (10 tetes) 13 (10 tetes) 8 (10 tetes)
(a)
2. Casein (b) 14 (10 tetes) 11 (10 tetes) 9 (10 tetes) 13 (10 tetes) 14 (10 tetes)
3. Gelatin (c) 14 (10 tetes) 11 (10 tetes) 9 (10 tetes) 10 (10 tetes) 13 (10 tetes)
4. Pepton (d) 13 (10 tetes) 9 (10 tetes) 9 (10 tetes) 12 (10 tetes) 12 (10 tetes)
Gambar 38. Hasil Pengukuran pH

Tabel 26. Hasil Pengamatan Denaturasi Protein oleh Logam Berat
CuSO4 0,1 M Pb-asetat 0,1 M HgCl 0,1 M
No. Larutan Keadaan Denatur pH Keadaan Denatu pH Keadaan Denatu pH
Awal asi Awal rasi Awal rasi
1. Albumin Putih Keruh 5 Putih Keruh 7 Putih Keruh 7
2. Casein Bening Keruh 3 Bening Keruh 6 Bening keruh 6
3. Gelatin Tidak
Putih Keruh 5 Putih Keruh 6 Putih 6
keruh
4. Pepton Bening Bening Bening
Tidak
kekuning Keruh 4 kekuninga Keruh 6 kekuninga 6
keruh
an n n
Tabel 27. Gambar Hasil Pengamatan Denaturasi Protein oleh Logam Berat
No Protein Setelah ditetesi Logam Berat
1. Albumin
Gambar 39. Albumin setelah ditetesi logam berat

2. Casein
Gambar 39. Casein setelah ditetesi logam berat

3. Gelatin
Gambar 39. Gelatin setelah ditetesi logam berat

4. Pepton
Gambar 39. Pepton setelah ditetesi logam berat

H. Pembahasan
1. Uji Ninhidrin
Berdasarkan hasil pengamatan terhadap uji yang telah dilakukan
terlihat bahwa larutan asam amino B, C, F, dan G memberikan reaksi
positif sehingga warna larutan berubah menjadi ungu, sedangkan
larutan A, D, E, dan H memberikan reaksi negatif karena tidak
berwarna ungu.
Berdasarkan hasil pengamatan uji xanthoprotein yang telah
dilakukan terhadap asam amino B setelah ditambahkan HNO₃
menghasilkan warna oranye yang menandakan asam amino tersebut
mengandung cincin aromatik sedangkan asam amino lainnya tidak
berwarna (bening). Asam amino A, B membutuhkan 5 tetes hingga
menjadi basa, asam amino C membutuhkan 8 tetes hingga menjadi
basa, sedangkan asam amino E, F, G membutuhkan 10 tetes hingga
menjadi basa dan asam amino D, H membutuhkan 15 tetes hingga
menjadi basa.
3. Uji Millon
Berdasarkan hasil pengamatan uji millon yang telah dilakukan
terhadap larutan asam amino, larutan berlabel B dan H memiliki reaksi
yang positif karena larutannya berwarna merah bata, sedangkan larutan
selain B dan H memiliki reaksi yang negatif karena warna larutannya
tidak berwarna merah bata.
Setelah melakukan uji komposisi protein dengan pembakaran
serbuk albumin dalam tabung reaksi, perubahan yang timbul
diantaranya, serbuk menjadi hitam atau menjadi arang, kemudian
lakmus merah menjadi biru dan kertas saring berubah warna menjadi
abu-abu, serta tabung reaksi beruap. Hal tersebut membuktikan bahwa
protein memiliki unsur karbon, hydrogen, oksigen, nitrogen dan sulfur.
Adapun penjelasan mengenai indikator tersebut yaitu:
a. Indikator karbon: setelah dilakukan pembakaran, albumin yang
tadinya berwarna putih berubah menjadi arang, berwarna hitam.
b. Indikator hidrogen: selama proses pembakaran, terdapat uap air
pada dinding tabung reaksi.
c. Indikator oksigen: sama halnya dengan indikator hidrogen, karena
H dan O berikatan membentuk senyawa H2O (air).
d. Indikator Nitrogen: kertas lakmus merah yang berubah menjadi
biru. Sebenarnya kertas lakmus merupakan indikator basa, namun
dalam uji coba ini, apabila protein yang diuji bersifat basa maka
secara tidak langsung menandakan bahwa protein tersebut memiliki
unsur N, karena unsur N tersebut berikatan dengan unsur lain yaitu
NH4OH. Adanya OH- membuat lakmus merah menjadi biru (tanda
bersifat basa).
e. Indikator sulfur: berubahnya warna kertas saring yang sudah
ditetesi PbCOOH (Pb-Asetat) menjadi abu-abu kehitaman. Dalam
proses pembakaran, albumin akan mengeluarkan gas H2S kemudian
Pb pada PbCOOH (Pb-Asetat) akan berikatan dengan H2S tersebut
membentuk PbS + CH3COOH. Persamaan Reaksinya dapat
dituliskan sebagai berikut: PbCOOH + H2S  PbS + CH3COOH
5. Uji Biuret
Uji Biuret digunakan untuk mengetahui adanya ikatan peptida pada
suatu bahan. Terbentuknya warna ungu pada larutan sampel karena
terbentuk senyawa kompleks antara Cu2+ dan N dari molekul ikatan
peptida yaitu gugus peptida ( -CO-NH-). Makin banyak atau makin
panjang ikatan peptida dalam protein maka warna ungu akan makin
kuat intensitasnya. Reaksi biuret merupakan reaksi warna yang umum
untuk gugus peptida (-CO-NH-) dan protein. Reaksi positif ditandai
dengan terbentuknya warna ungu karena terbentuk senyawa kompleks
antara Cu2+ dan N dari molekul ikatan peptida. Banyaknya asam amino
yang terikat pada ikatan peptida mempengaruhi warna reaksi ini.
Senyawa dengan dipeptida memberikan warna biru, tripeptida ungu
dan tetrapeptida serta peptida kompleks memberikan warna merah.
Biuret memberikan warna violet dengan CuSO4. Reaksi ini disebut
dengan reaksi biuret, kemungkinan terbentuknya Cu2+ dengan gugus
CO dan –NH dari rantai peptida dalam suasana basa. Beberapa protein
yang mempunyai gugus –CS-NH-, -CH-NH- dalam molekulnya juga
memberikan tes warna positif dengan biuret (Bintang, 2010).
Hasil uji biuret yang telah dilakukan yaitu gelatin, albumin, pepton,
dan casein memberikan reaksi yang positif berdasarkan urutan protein
yang paling banyak mengandung ikatan peptida, saat melakukan
pengujian warna ungu protein gelatin dan albumin hampir tidak dapat
dapat dibedakan intensitasnya, kemudian karena massa molekul gelatin
itu lebih tinggi maka dibandingkan dengan albumin, ikatan peptida
gelatin lebih banyak.
Berdasarkan hasil pengamatan dapat diketahui bahwa pada larutan
albumin, casein, dan gelatin mengalami denaturasi dengan NaOH/HCl
meskipun ada beberapa sampel yang tidak begitu signifikan
perubahannya. Sedangkan pada larutan pepton tidak terdenaturasi
dengan HCl maupun NaOH, karena tidak nampak adanya perubahan.
Protein yang terdenaturasi terjadi bila susunan ruang atau rantai
polipeptida suatu molekul protein berubah. Sebagian besar protein
globuler mudah mengalami denaturasi. Jika ikatan-ikatan yang
membentuk konfigurasi molekul tersebut rusak, molekul akan
mengembang.
Pada dasarnya protein dapat membentuk struktur zwitter ion (tidak
bermuatan atau memiliki jumlah muatan positif dan negatif yang
sama). Protein juga memiliki titik isoelektrik dimana jumlah muatan
positif dan muatan negatif pada protein adalah sama. Pada saat itulah,
protein dapat terdenaturasi yang ditandai dengan membentuk
gumpalan dan larutannya menjadi keruh. Pada saat ini entalpi
pelarutannya akan menjadi tinggi, karena jumlah kalor yang
dibutuhkan untuk melarutkan sejumlah protein akan bertambah.
Mekanismenya adalah penambahan asam dan basa dapat mengacaukan
jembatan garam yang terdapat pada protein. Ion positif dan negatif
pada garam dapat berganti pasangan dengan ion positif dan negatif dari
asam ataupun basa sehingga jembatan garam pada protein yang
merupakan salah satu jenis interaksi pada protein, menjadi kacau dan
protein dapat dikatakan terdenaturasi.
Uji ini dilakukan untuk mengetahui bagaimana reaksi protein jika
diberikan reagen asam. Protein yang digunakan dalam uji ini adalah
albumin, kasein, gelatin dan pepton. Rekasi yang terjadi pada setiap
protein yang ditetesi reagen asam hampir sama. Pada larutan albumin
yang telah ditetesi asam sulfosalisilat dan NaOH, larutan tersebut
berwarna hitam. Sedangkan larutan albumin yang ditetesi asam pikrat
dan NaOH, menjadi berwarna jingga. Hampir sama dengan larutan
albumin dengan asam sulfosalisilat, pada larutan albumin yang ditetesi
asam tanat berwarna hitam pekat. Namun, pada larutan albumin
dengan asam trichlorasetat yang berwarna bening, terlihat endapan
berwarna putih. Sedangkan larutan albumin dengan asam
fosfotungstat, tidak menunjukan reaksi apapun dan tetap berwarna
bening.
Begitupun dengan larutan kasein, gelatin dan pepton. Reaksi yang
terjadi pada masing-masing larutan protein yang ditetesi asam
sulfosalisilat, asam pikrat, asam tanat, asam trichlorasetat serta asam
fosfotungstat, hampir sama dengan reaksi yang terjadi pada larutan
albumin. Tetapi, pada larutan gelatin dan pepton terlihat endapan
setelah ditetesi asam fosfotungstast dan berwarna bening setelah
ditetesi asam trichlorasetat.
Larutan protein yang ditetesi oleh asam sulfosalisilat memiliki pH
tertinggi dibandingkan dengan protein yang ditetesi oleh reagen asam
lainnya (pH larutan berkisar antara 13-14). Sedangkan larutan protein
yang dengan asam trichlorasetat dan asam fosfotungstat memiliki pH
yang bervariasi. Pada larutan protein yang ditetesi asam pikrat berkisar
pada pH 9 dan 11 dan asam tanat memiliki pH yang seragam dengan
pH 9.
Pada tabel hasil pengamatan denaturasi protein oleh reaksi
pengendapan dengan logam berat diketahui larutan yang ditetesi oleh
CuSO4 0,1 M, Pb-Asetat 0,1 M, dan HgCl 0,1 M dapat mengganggu
sifat protein sehingga kelarutannya tidak berfungsi lagi dan
mengendap. Hal ini ditunjukan dengan adanya pengendapan dan
merubah larutan menjadi keruh pada larutan protein setelah ditetesi
larutan logam berat tersebut. Hanya saja larutan protein pada Gelatin
dan pepton menunjukan tidak ada endapan dan tidak berubah menjadi
keruh setelah larutan tersebut ditetesi HgCl 0,1 M.
I. Kesimpulan
1. Uji Ninhidrin
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan
bahwa pada uji ninhidrin larutan B, C, F dan G mengandung asam
amino karena warna larutannya berubah menjadi ungu yang
menandakan bahwa larutan tersebut bereaksi positif dengan larutan
ninhidrin.
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan di atas, Asam
amino ditambah HNO₃ yang menujukkan reaksi positif untuk uji
xanthoprotein adalah asam amino B karena mengandung cincin
aromatik dan berwarna jingga (oranye).
3. Uji Millon
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan
bahwa pada uji millon larutan B dan H merupakan asam amino tirosin
karena warna larutannya berubah menjadi warna merah bata yang
menandakan bahwa larutan tersebut mengandung gugus radikal
hidroksi benzen yang bereaksi positif dengan reagen millon.
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan di atas dapat
diketahui bahwa protein tersusun atas unsur karbon, karena dapat
terlihat dari berubahnya warna putih pada albumin menjadi hitam,
mengandung oksigen terlihat dari dinding tabung yang mengandung
uap air, mengandung basa karena dapat membirukan lakmus merah,
sehingga basa tersebut menjadi indicator adanya unsur nitrogen,
mengandung unsur sulfur (belerang) nampak dari kertas saring
berubah menjadi hitam dan berbau.
5. Uji Biuret
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan di atas dapat
disimpulkan bahwa semakin pekat warna ungunya, maka semakin
banyak jumlah ikatan peptidanya. Semakin banyak jumlah ikatan
peptida, maka akan semakin banyak jumlah asam aminonya. Ikatan
peptida hanya akan terbentuk apabila ada dua atau lebih asam amino
esensial yang bereaksi. Adapun protein yang paling banyak
mengandung ikatan peptida secara berurutan yaitu gelatin, albumin,
pepton da casein.
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan diatas dapat
disimpulkan bahwa sebagian besar protein globuer mudah mengalami
denaturasi. Protein yang terdenaturasi terjadi bila susunan ruang atau
rantai polipeptida suatu molekul protein berubah. Apabila ikatan-
ikatan yang membentuk konfigurasi molekul tersebut rusak, molekul
akan mengembang dan terjadi denaturasi. Oleh karena itu dapat
dikatakan pepton juga mengalami denaturasi namun tidak terlihat
perubahan yang signifikan dikarenakan susunan ruang atau rantai
polipeptida suatu molekul protein tidak banyak mengalami perubahan.
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan diatas dapat
disimpulkan bahwa senyawa protein Albumin, Casein, Gelatin, dan
Pepton terdenaturasi oleh larutan logam berat CuSO4 0,1 M, dan Pb-
Asetat 0,1 M. Sedangkan larutan-larutan protein yang ditetesi HgCl 0,1
M tidak terjadi denaturasi karena tidak ada endapan ataupun tidak
berubah menjadi keruh, kecuali Albumin dan Casein yang ditetesi
HgCl 0,1 M berubah menjadi keruh dan ada sedikit endapan.
Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan terhadap uji yang
telah dilakukan, protein dapat terdenaturasi oleh reagen asam.
Denaturasi merupakan proses yang mengubah struktur molekul tanpa
memutuskan ikatan kovalen. Salah satu yang dapat menyebabkan
denaturasi pada protein adalah reagen asam. Hal ini dapat dilihat dari
endapan pada larutan protein serta perubahan warna yang terjadi.
Daftar Pustaka
Adisendjaja, dkk. (2016). Penuntun Kegiatan Laboratorium Biokimia. Bandung:

Universitas Pendidikan Indonesia.
Bintang, Maria. 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Bogor: Erlangga.
Suhara. (2008). Dasar-dasar Biokimia. Bandung: PRISMA PRESS.
Panji. (2013). Uji Ninhidirin. [Online]. Diakses dari:
http://www.edubio.info/2013/11/uji-ninhidrin.html. [4 Oktober 2016].
Panji. (2013). Uji Millon. [Online]. Diakses dari:
http://www.edubio.info/2013/12/uji-millon.html. [4 Oktober 2016].

PROTEIN DAN ASAM AMINO

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

PROTEIN DAN ASAM AMINO

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PROTEIN DAN ASAM AMINO

Lahmi Ladzdzatul Hikmah (1500106)

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI

B. Waktu dan Tempat Pelaksanaan

E. Alat dan Bahan

Tabel 2. Bahan-bahan yang digunakan

Tabel 4. Bahan-bahan yang digunakan

3. Alat dan Bahan Uji Millon

4. Alat dan Bahan Uji Komposisi Protein

Tabel 8. Bahan-bahan yang digunakan

5. Alat dan Bahan Uji Biuret

Tabel 10. Bahan-bahan yang digunakan

6. Alat dan Bahan Denaturasi Protein oleh pH ekstrim

Tabel 12. Bahan-bahan yang digunakan

Tabel 14. Bahan-bahan yang digunakan

8. Alat dan Bahan Denaturasi Protein oleh Logam Berat

Tabel 16. Bahan-bahan yang digunakan

Gambar 1. Cara Kerja Uji Ninhidrin

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

Gambar 2. Langkah Kerja Uji Xanthoprotein

Gambar 3. Langkah Kerja Uji Millon

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

Gambar 4. Langkah Kerja Uji Komposisi Protein

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

Gambar 5. Langkah Kerja Uji

Gambar 6. Langkah Kerja Denaturasi Protein oleh pH Ekstrim

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

Gambar 7. Langkah Kerja Denaturasi Protein oleh Reagen Asam

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan

a. Alat dan bahan untuk melakukan uji disiapkan.

1 Asam Amino A - Tidak berwarna

2 Asam Amino B + Berwarna ungu

Gambar 10. Larutan B

3 Asam Amino C + Berwarna ungu

Gambar 11. Larutan C

4 Asam Amino D - Tidak berwarna

Gambar 12. Larutan D

5 Asam Amino E - Tidak berwarna

Gambar 13. Larutan E

6 Asam Amino F + Berwarna ungu

Gambar 14. Larutan F

7 Asam Amino G + Berwarna ungu

Gambar 15. Larutan G

8 Asam Amino H - Tidak berwarna

Gambar 16. Larutan H

Gambar 17. Asam amino ditetesi HNO3

Gambar 18. Asam amino ditetesi HNO3

Gambar 19. Pengujian basa

Tabel 19. Hasil Pengamatan Uji Xanthoprotein

1. Asam Amino A - Tidak berwarna

Gambar 20. Asam Amino A

2. Asam Amino B + Berwarna merah bata

Gambar 21. Asam Amino B

3. Asam Amino C - Tidak berwarna

Gambar 22. Asam Amino C

4. Asam Amino D - Tidak berwarna

Gambar 23. Asam Amino D

5. Asam Amino E - Tidak berwarna

Gambar 24. Asam Amino E

6. Asam Amino F - Tidak berwarna

Gambar 25. Asam Amino F

7. Asam Amino G - Tidak berwarna

Gambar 26. Asam Amino G