Hemoglobin glikosilat atau HbA1C adalah substraksi dari hemoglobin A (Hb A) yang mengalami

proses glikolisasi. Hemoglobin A paling umum ditemukan pada orang dewasa dengan 91-95
% dari jumlah total hemoglobin. Hemoglobin A terdiri atas dua rantai α dan dua rantai β.
Sekitar 6% dari total HbA disebut HbA1. HbA1 terdiri atas tiga fraksi yaitu HbA1A, HbA1B, dan
HbA1C. Sebanyak 70% HbA1C memiliki bentuk terglikolisasi.Glikosilasi adalah proses ketika
satu gugus glukosa berikatan kovalen dengan valin N-terminal rantai β molekul hemoglobin
secara ireversibel dan terjadi secara spontan. Pada orang normal, hemoglobin akan ditemukan
terglikolisasi sebanyak 2-3 %. Jumlah hemoglobin yang terglikolisasi bergantung pada jumlah
glukosa darah yang tersedia. Jika kadar gula darah meningkat dalam waktu yang lama,
eritrosit akan tersaturasi dengan glukosa menghasilkan glikohemoglobin (HbA1c).
Ada 3 metode pengujian HbA1c utama yang saat ini tersedia di laboratorium klinis.
A.Uji HPLC berbasis kromatografi
b. Immunoassay berbasis antibodi
c. Pengujian enzimatik berbasis enzim
Metode kromatografi HPLC
Uji kromatografi menggunakan instrumen dan pertukaran ion HPLC atau kolom afinitas
untuk memisahkan molekul HbA1c dari molekul hemoglobin lain. Molekul HbA1c diukur
berdasarkan rasio luas puncak HbA1c terhadap total daerah puncak hemoglobin.
-Kromatografi afinitas boronat: Didasarkan pada penggunaan "interaksi biologis" untuk
pemisahan dan analisis analit spesifik dengan sampel. afinitas boronat kromatografi adalah
metode khusus glikasi berdasarkan boronat mengikat ke konfigurasi cis-diol unik yang
dibentuk oleh glukosa stabil ke Hb. Metode ini mengukur keempat spesies yang stabil.
Ukuran gabungan empat spesies stabil disebut sebagai "Total HbA1c" atau disebut juga
sebagai "True HbA1c". Karena hanya dua fraksi yang hadir dalam metode ini (terglikasi dan
tidak terglikasi), bagian terglikasi dibandingkan dengan total dan hasilnya dinyatakan
sebagai% HbA1c. kisaran linearitas untuk deteksi HbA1c adalah 5,3% hingga 17%.
-Metode peningkatan immunoassay lateks: interaksi antara molekul antigen (HbA1c) dan
antibodi spesifik HbA1c yang dilapisi partikel lateks. Reaksi pengait silang ini menghasilkan
perubahan kekeruhan larutan dan sebanding dengan jumlah antigen dalam sampel.
-Metode pengujian Enzymatic HbA1c: Inovasi terbaru yaitu Direct HbA1c Assay Enzymatic
yang menggunakan saluran tunggal untuk menguji dan melaporkan nilai% HbA1c secara
langsung, tanpa perlu terpisah anatara tes THb dengan langkah perhitungan
Prinsip Pengujian assay
Agen pengoksidasi dalam buffer lisis bereaksi dengan sampel darah untuk membuang
sinyal berat molekul rendah dan berat molekul tinggi zat yang mengganggu. Setelah lisis,
sampel darah mengalami proteolytic digestion. Proses ini melepas asam amino, termasuk
valin terglikasi, dari hemoglobin rantai beta. Enzymatic HbA1c Assay langsung berfungsi
sebagai substrat untuk fruktosil valin rekombinan Fructosyl valine oxidase(FVO). FVO
rekombinan secara khusus memotong N-terminal valin dan kemudianmenghasilkan
hidrogen peroksida dengan agen selektif. Ini diukur menggunakan horseradish peroxidase
(POD) reaksi yang dikatalisasi dan kromagen yang cocok. Sinyal yang dihasilkan dalam
reaksi digunakan untuk melaporkan secara langsung persentase HbA1c sampel
menggunakan kalibrasi linier yang sesuai kurva dinyatakan dalam% HbA1c.
 Direct Enzymatic HbA1c Assay memiliki semua keunggulan dari kedua metode HPLC dan
immunoassays dalam akurasi,spesifisitas, penerapan analisis kimia dan biaya efektif, lebih
sederhana dan gangguan lebih sedikit. Direct Enzymatic HbA1c Assay menggunakan 2
pereaksi stabil cair siap pakai.
Dengan itu tidak memerlukan pengukuran terpisah dari total hemoglobin konten dalam
sampel, Direct Enzymatic HbA1c Assay hanya membutuhkan saluran tunggal untuk
melakukan tes pada analisa kimia dibandingkan dengan beberapa immunoassay yang
membutuhkan pengukuran terpisah hemoglobin total dan membutuhkan dua saluran
untuk test pada analisis kimia.
Prosedur Direct Enzymatic HbA1c Assay sederhana dan mudah. Setelah penambahan
Reagen R1, sampel dan Reagent R2, hasil% HbA1c akan dilaporkan dalam 2 menit. Selain
itu, reagen tidak mengandung partikel lateks, dan karenanya tidak melapisi kuvet dan garis
analyzer. Yang paling penting, uji enzimatik HbA1c memiliki spesifisitas tertinggi di antara
semua Tes HbA1c. Metode HbA1c enzimatik langsung memiliki uji kisaran linearitas dari 4-
16%.
tes HbA1c enzimatik tidak terganggu oleh bahan kimia atau hemoglobin yang dimodifikasi
secara genetik. Oleh karena itu, tes HbA1c enzimatik adalah tes handal, tidak melaporkan
hasil yang salah terlepas dari hemoglobin pasien jenis varian. Singkatnya, Pengujian
Langsung Enzymatic HbA1c memiliki keunggulan berikut:
a. Dua reagen, stabil cair
b. Tidak perlu pengukuran total hemoglobin
c. Saluran tunggal pada penganalisa Lebih cepat, lebih sederhana dan lebih efektif biaya
d. Tidak ada gangguan dari varian hemoglobin
e. Lisis darah on-board dimungkinkan
f. Berlaku untuk sebagian besar penganalisa
g. Korelasi yang sangat baik dengan HPLC dan immunoassays

Elektroforesis kapiler
Pada dasarnya, ada dua kemungkinan untuk pemisahan HbA1c di elektroforesis kapiler (CE)
sesuai dengan rasio charge-to-mass. Analisis pertama sebagai kation dalam buffer asam pH
di bawah pI dari Hb, yaitu sekitar 7,0. Pemisahan hemoglobin A1C dan A0 terjadi karena
perbedaan energi yang berasal dari eliminasi satu kelompok amino bermuatan positif
dalam molekul HbA1c oleh bagian glukosa. Kedua, analisis Hb sebagai anion dalam kondisi
alkali dengan selektivitas terhadap HbA1c yang diinduksi oleh interaksi cis-diol dari unit
glukosa dengan anion borat dari background electrolyte (BGE).

Metode Prosedur Keuntungan Kekurangan

Pengujian
Chromatography a.Assay menggunakan Estimasi berlebihan a. Mengubah proses
based HPLC assay instrumen HPLC dan HbA1c menyebabkan glikasi yang normal
pertukaran ion atau kolom manajemen glukosa dari HbA ke A1C.
afinitas untuk memisahkan berlebihan, lebih b.Menyebabkan
antara molekul HbA1c dari sering menghasilkan puncak abnormal
molekul hemoglobin lain. hipoglikemik pada kromatografi,
 b. Berdasarkan rasio luas membuat estimasi
puncak HbA1c terhadap A1C tidak dapat
total daerah puncak diandalkan.
hemoglobin. c. Membuat sel darah
merah lebih banyak
rentan hemolisis,
sehingga waktu
glikosilasi menurun
dan menghasilkan
Hasil A1C rendah
palsu
Antibody based a.Metode khas Mengurangi a.Waktu yang
immunoassay menggunakan antibodi hamburan cahaya dibutuhkan untuk
spesifik (biasanya dan absorban menyelesaikan
monoclonal) ke glukosa 5 analisis.
sampai 10 pertama asam b.Keterampilan teknis
amino dari rantai β. diperlukan untuk
Antibodi ini dilapisi lateks penanganan.
b.Aglutinator bereaksi c.Harga reagen yang
dengan antibodi untuk tinggi.
memberi hamburan cahaya
dan peningkatan
absorbansi.
c. Dari ini jumlah HbA1c
dihitung, dan total
hemoglobin dapat
ditentukan oleh
pengukuran pada atau
dekat pita serapan
Sorethemoglobin (410 -
420nm) atau oleh metode
Drabkins (oksidasi dan
konversi menjadi
cyanmethemoglobin)
sekitar 540nm, atau
menggunakan alkali
hematin assay.
Enzyme based Sampel darah yang a.Uji enzimatik Kerugian enzimatik
enzymatic assay dilisiskan akan mengalami terbukti kuat dan Metode adalah
proteolytic digestion. andal biayanya yang relatif
Glycated valines dilepaskan untuk metode tinggi.
dan dijadikan sebagai pengukuran HbA1c
substrat untuk fruktosil cocok untuk rutin
valin oksidase. produksi praktek di
hidrogen peroksida diukur laboratorium kimia
menggunakan horseradish klinis
peroxidase-catalyzed b. Pengujian dirancang
reaction dengan kromogen untuk melaporkan
nilai% HbA1c langsung
tanpa perlu
pengukuran terpisah
dari total hemoglobin
dan tidak terpengaruh
oleh gangguan dari
hemoglobin varian di
sampel