PERCOBAAN 3: ISOLASI KASEIN DARI SUSU

3.1. Kompetensi Yang Diharapkan

Setelah mengikuti percobaan ini, mahasiswa diharapkan mampu mengisolasi protein berdasarkan titik
isoelektriknya.

3.2. Dasar Teori

Seperti halnya asam-amino, protein juga bersifat amfolit. Protein juga memiliki pH isoelektrik
tertentu. Pada pH isoelektriknya protein tidak bermuatan sehingga dapat membentuk agregat dan
mengendap. Sebagian besar protein menunjukan kelarutan minimal pada pH isoelektriknya. Sifat ini
dapat digunakan untuk mengisolasi suatu protein.
Kasein merupakan suatu fosfoprotein, dimana rantai samping pada residu serinnya membentuk ikatan
ester dengan gugus fosfat. Kasein sering disebut sebagai protein susu karena merupakan komponen
utama di dalam susu dengan konsentrasi sekitar 35 g/L. Kasein memiliki pH isoelektrik 4,7 dan
bersifat tidak larut dalam etanol.

3.3. Alat dan Bahan

3.3.1. Alat:
Gelas kimia 500 mL Termometer 100oC
Hot plate pH meter/kertas lakmus universal skala 0,5
Batang pengaduk Corong kaca
Kertas saring Gelas arloji
Pipet tetes Erlenmeyer 250 mL

3.3.2. Bahan
1. Susu
2. Bufer asetat 0,2 M pH 4,7
3. HCl 0,2 M
4. Etanol 95%
5. Heksana
6. Akuades

3.4. Cara Kerja

1. Ukur pH susu mengunakan kertas indikator universal.
2. Tempatkan 100 mL susu di dalam gelas kimia 500 mL, hangatkan hingga suhunya mencapai
40oC.
3. Tambahkan secara perlahan-lahan sambil diaduk 100 mL buffer asetat 0,2 M pH 4,7.
4. Atur pH campuran dengan HCl 0,2 M hingga mencapai pH = 4,7.

Catatan: jika tidak tersedia pH meter, tambahkan setetes demi tetes HCl 0,2 M sambil diaduk
perlahan hingga terbentuk gumpalan kasein atau koloid susu berubah dari putih keruh menjadi
agak bening. Cek pH susu dengan kertas lakmus universal. Hentikan penambahan HCl jika pH
kira-kira mencapai 4,5.
5. Dinginkan suspensi ini pada temperatur kamar dan biarkan selama 5 menit.
6. Lakukan dekantasi untuk memperoleh endapan kasein, atau penyaringan utuk memperoleh
kembali endapan kasein yang terbuang selama dekantasi Perhatikan lipatan kertas saring yang
digunakan dan cara melakukan penyaringan yang benar.
7. Tambahkan sedikit air pada endapan yang diperoleh, lakukan dekantasi kembali.
8. Resuspensi endapan dengan 30 mL etanol.
9. Lakukan penyaringan menggunakan corong kaca, cucilah endapan dengan 20 mL campuran
etanol:heksana 1:1. cuci lagi endapan dengan 25 mL heksana.
10. Pindahkan endapan ke gelas arloji.
11. Keringkan, dan timbang tepung kasein kering yang diperoleh.
12. Amati juga warna kasein yang diperoleh.

3.5. Lembar Data Pengamatan

Pelajari video dalam link berikut: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s kemudian
lengkapi tabel berikut:

Hasil percobaan
Asal susu Susu sapi segar yang diambil langsung dari peternak sapi
Pujon 21-02-2021 Jam 17.00 kemudian disimpan di cold
room dengan suhu 5 oC.
Wujud susu Cair
Volume Sampel 50 mL
Susu pada pH isoelektrik kasein
Hasil dekantasi Filtrat:
Residu:
Hasil resuspensi dengan etanol Filtrat:
Residu:
Hasil pencucian dengan etanol:heksana Filtrat:
1:1 Residu:
Hasil pencucian dengan heksana Filtrat:
Residu:
Berat kertas saring + kasein (gr)
Berat kertas saring (gr)
Berat kasein (gr) 1,65 g

3.6. Diskusi
Diskusikan analisa prosedur tentang tujuan dan prinsip fisika/ kimiawi (disertai reaksi kimia) yang
terjadi pada setiap perlakuan.
Diskusikan analisa hasil tentang rendemen dan kemurnian kasein yang anda peroleh. Bandingkan
dengan rendemen secara teoritik! Tentukan pula rendemen rata-rata dan nilai standar deviasi kasein
yang diperoleh dari susu sapi segar (berdasarkan data kelas). Bandingkan sifat fisik kasein yang anda
peroleh dengan sifat fisik kasein secara teoritis. Analisis hasil yang Anda peroleh

Tugas Pendahuluan
1. Jelaskan prinsip percobaan ini!
3. Apa fungsi bufer asetat pH 4,7 dan HCl 0,2 M yang digunakan pada percobaan ini?

Daftar Pustaka
------------ 1995. Diktat Penuntun Praktikum Biokimia. Univeritas Brawijaya: Malang
Holum, J. R. 1978. Organic and Biological Chemistry. John Wiley & Sons: New York.
FORMAT RESUME VIDEO

ISOLASI PROTEIN KASEIN DARI SUSU SEGAR SAPI

KELOMPOK: ……………
ANGGOTA:
1. ……………
2. ……………
3. ……………
Link Video: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s
A. Pertanyaan

Berapa rendemen protein casein susu sapi segar yang diperoleh dari Peternak Sapi Pujon tanggal
21 Februari 2021 sesuai dengan prosedur yang ada di video?
B. Alat dan Bahan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

C. Tujuan Percobaan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

D. Prosedur
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

E. Hasil Percobaan
Tiga kali pengulangan isolasi menghasilkan massa casein yang sama ……….……………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

F. Analisis dan Kesimpulan

………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
G. Penjelasan
- Interpretasi ….…………………….……………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...
FORMAT RESUME VIDEO

ISOLASI PROTEIN KASEIN DARI SUSU SEGAR SAPI

KELOMPOK: ……………
ANGGOTA:
1. ……………
2. ……………
3. ……………
Link Video: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s
A. Pendahuluan

………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

B. Metode
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

C. Hasil Percobaan
Tiga kali pengulangan isolasi menghasilkan massa casein yang sama ……….……………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………

D. Pembahasan
- Interpretasi ….…………………….……………………………………………………………
- Penjelalsan/justifikasi …………….……………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...
E. Kesimpulan
………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………
…...