Laporan Praktikum Genetika

PEMISAHAN BIOKIMIAWI PIGMEN MATA Drosophila melanogaster DENGAN Thin

Layer Chromatography (TLC)
Christyan Natanael Harvey Davika Ginting*, A. Priambodo, G.S. Putra, G.M.R. Wibowo, K. Tundang, N.
Azizah, P.E.A. Effendi, S.A. Irdianto, W. Fajira, R.S. Askandar, K.A. Putri.
Universitas Indonesia

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Departemen Biologi

November 2020

Abstrak
Sentral dogma merupakan aliran informasi genetik satu arah dari DNA yang ditranskripsi menjadi RNA kemudian
ditranslasi menjadi protein. Protein yang terdapat dalam gen sangat berpengaruh pada pembentukan pigmen mata Drosophila
melanogaster. Aktivasi gen mempengaruhi pembentukan fenotipe-fenotipe yang beragam pada mata Drosophila
melanogaster. Pigmen warna pada Drosophila melanogaster dapat diamati menggunakan metode thin layer
chromatography (TLC). TLC terdiri dari dua fase yaitu fase diam dan fase gerak, dan TLC memiliki kelebihan yang cukup
baik dan dipilih dalam pengamatan karena TLC lebih efisien dibandingkan kromatografi yang lain. Dalam pengamatan
kromatografi terdapat perbandingan-perbandingan antara titik sampel yang disebut sebagai rf. Tujuan dari praktikum adalah
untuk mengetahui dan memahami pengaruh mutasi terhadap fenotipe, mengetahui prinsip kerja thin layer chromatography
(TLC), mengetahui dan memahami teknik pemisahan mata Drosophila melanogaster, dan membandingkan kromatogram
wild type dan mutan.

Kata kunci: Aktivasi gen; Drosophila melanogaster; protein; rf; thin layer chromatography; sentral dogma.

I. Pendahuluan dalam produksi protein karena DNA merupakan kode

genetik yang sangat penting sehingga perlu dibuat
Sentral dogma merupakan aliran informasi genetik
salinannya, yaitu dengan proses transkripsi (Agus 2018 :
satu arah dari DNA yang ditranskripsi menjadi RNA
20). Terdapat dua tahapan dogma sentral sebagai berikut,
kemudian ditranslasi menjadi protein. Perlunya mRNA

*Kelompok A-2 Siang 1

pada tahapan pertama tahap transkripsi yaitu DNA
membentuk RNA, pada taha- ini kode atau informasi
genetik di dalam DNA dialihkan ke RNA. Tahap kedua
yaitu tahap translasi pada tahap ini RNA dengan kode
genetik yang diterima dari DNA membentuk protein.
Kromatografi adalah suatu metode pemisahan
fisik, di mana komponen-komponen yang dipisahkan
didistribusikan di antara dua fasa, salah satu fasa tersebut
adalah suatu lapisan stasioner dengan permukaan yang
luas, yang lainnya sebagai fluida yang mengalir lembut di
sepanjang landasan stasioner (Day & Underwood 2002:
487). Kromatografi terbagi menjai beberapa jenis yaitu
Adsorption chromatography, permeation
chromatography, ion exchange chromatography, dan
partition chromatography. Adsorption chromatography
merupakan kompetisi antara fase stasiones padat dengan
fase gerak cair contohnya adalah paper chromatography
(PC) dan thin layer chromatography (TLC), permeation
chromatography merupakan kompetisi anatara matriks
polimer dengan fase gerak cair contohnya gel permeation
chromatography (GPC), ion exchange chromatography
merupakan kompetisi antara fase resin penukar ion dengan
fase gerak cair contohnya ion exchange chromatography
(IEC), dan yang terakhir adalah partition chromatography
merupakan kompetisi antara fase stasioner cair dengan
fase gerak cair contohnya high performance liquid
chromatography (HPLC) dan gas-liquid chromatography
(GLC).
Pembentukan pigmen mata Drosophila
melanogaster terbagi menjadi dua jalur yaitu jalur
ommochrom dan jalur pteridine. Terjadi beberapa
*Kelompok A-2 Siang
perbedaan pada pembentukan pigmen mata Drosophila
melanogaster normal dan mutan. Pada pembentukan
pigmen mata Drosophila melanogaster normal terdapat
dua jalur utama yaitu jalur ommochrom yang
menghasilkan ommochrome pigment dan jalur pteridine
yang menghasilkan drosopterin kedua jalur kemudian
masuk ke transport system dan di akhir menghasilkan
mata red eye. Pembentukan pigmen selanjutnya pada
pigmen mata Drosophila melanogaster mutan white,
pembentukan pigmen mata pada mutan white terjadi
apabila pada jalur ommochrome dan pada jalur pteridine
terjadi gangguan atau mutasi, mutan white juga dapat
terjadi apabila terjadi gangguan pada ataupun mutasi pada
transport system. Pada pembentukan pigmen mata
Drosophila melanogaster mutan scarlet, mata scarlet
terjadi apabila salah satu jalur mengalami gangguan atau
mutasi dan menghasilkan mata scarlet apabila terjadi
gangguan atau mutasi pada jalur ommochrom dan
menghasilkan brown apabila terjadi gangguan dan mutasi
pada jalur pteridine.
Dapat teramati retention factor (RF) pada
praktikum kali ini. Retention factor merupakan parameter
yang digunakan untuk memisahkan molekul berdasarkan
karakteristik spesifiknya. Cara menghitung RF dapat
dilakukan dengan cara membagi jarak pergerakan sampel
yang dilihat dari titik baseline sampai titik pergerakan
sampel dengan jarak pergerakan larutan yang dihitung dari
titik baseline sampai solvent front.
Praktikum ini dilakukan dengan melakukan
pengamatan pada mata Drosophila melanogaster dengan
tujuan untuk mengetahui dan memahami pengaruh mutasi
2
terhadap fenotipe, mengetahui prinsip kerja thin layer suatu adsorben, kromatografi lapis tipis adalah salah satu
chromatography (TLC), mengetahui dan memahami metode pemisahan kromatografi yang fleksibel. Prinsip
teknik pemisahan mata Drosophila melanogaster, dan kromatografi lapis tipis yaitu pemisahan senyawa multi
membandingkan kromatogram wild type dan mutan. komponen dengan menggunakan dua fase yaitu fase diam
dan fase gerak. Kromatografi ini selesai atau berakhir
II. Metodologi
apabila fase gerak telah mencapai jarak tertentu dari ujung
Pada praktikum diperlukan alat dan bahan sebagai plat yang, senyawa-senyawa yang berbeda satu sama lain
berikut pengaduk kaca yang berfungsi untuk menggerus akan memiliki perbandingan jarak tempuh senyawa
mata sampel, botol selai sebagai tempat meletakkan terhadap jarak tempuh fase gerak yang berbeda pula, nilai
medium stasioner dan medium fase cair, sumber UV, perbandingan ini dianamakan (retardation factor)
kacamata pelindung UV, gunting, penggaris kuas, sonde, (Rubiyanto 2017: 27). Alasan penggunaan TLC pada
Drosophila melanogaster normal dan Drosophila praktikum dikarenakan thin layer chromatography
melanogaster mutan, campuran 28% ammonium memiliki kerapatan dan kecepatan yang tinggi. Selain itu
hidroksida (NH4OH) dan n-propil alkohol (1:1) sebagai thin layer chromatography memiliki sensitivitas yang
pelarut, kertas silika (TLC), dietil eter sebagai anestesi tinggi dibandingkan dengan paper chromatography.
untuk Drosophila melanogaster, dan kertas karbon untuk Keuntungan utama metode analisis kromatografi lapis
melindungi pigmen dari sinar UV. tipis dibandingkan metode analisis kromatografi cair

Langkah pertama yang harus dilakukan adalah kinerja tinggi adalah beberapa sampel dapat dilakukan

menyiapkan kertas kromatografi, selanjutnya mata secara simultan dengan menggunakan fase gerak dalam

Drosophila melanogaster digerus menggunakan jumlah kecil sehingga lebih hemat waktu dan biaya

menggunakan sonde, beri pelarut berupa campuran 28% analisis serta ramah lingkungan (Wulandari 2011: 1).

ammonium hidroksida (NH4OH) dan n-propil alkohol Memiliki banyak kelebihan dan keuntungan thin layer

(1:1) ke dalam botol selai, masukan kertas kromatografi ke chromatography juga memiliki kekurangan, salah satunya

dalam botol selai, tutup botol selai menggunakan kertas adalah thin layer chromatography memiliki harga yang

karbon dan disimpan selama 90 menit. Setelah ditunggu lebih mahal dibandingkan dengan paper chromatography.

selama 90 menit, kromatogram diamati di bawah sinar UV Thin layer chromatography juga dapat digunakan untuk

dan ditandai pergerakannya setelah dikeluarkan dari UV, mengidentifikasi hidrokuinon sebagai contoh pada sabun.

jarak pergerakan sampel dan jarak pergerakan larutan Hasil pengamatan menunjukan didapatkannya
diukur dengan penggaris untuk mencari Rf. perbedaan antara Drosophila melanogaster mutan sepia

III. Hasil dan Pembahasan dan Drosophila melanogaster mutan white. Pada
pengamatan Drosophila melanogaster mutan white
Thin layer chromatography adalah
terdapat 2 pigmen yaitu pigmen biopterin yang memiliki
kromatografi yang fase stasionernya berupa lapisan tipis

*Kelompok A-2 Siang 3

panjang 7,25 cm dan xanthopterin yang memiliki panjang
4,62 cm, jarak pelarut dari baseline sampai solvent front
sepanjang 8,28 sehingga saat dilakukan perhitungan rf
pada masing-masing pigmen ditemukan rf pada pigmen
biopterin yaitu 0,88 dan pada pigmen xanthopterin yaitu
0,56.
Pengamatan dan perhitungan dilakukan juga pada
Drosophila melanogaster mutan sepia, terdapat 4 pigmen
yaitu pigmen xanthopterin yang memiliki panjang sampel
3,55 cm, pigmen biopterin2-amino-4hydroxipteridine
yang memiliki panjang sampel 5,4 cm, pigmen biopterin
yang memiliki panjang 6,24 cm dan yang terakhir pigmen
isosepiapterin yang memiliki panjang sampel 7,33,
kemudian jarak pelarut dari baseline sampai solvent front
sepanjang 8,28. Dilakukan perhitungan rf pada masing-
masing pigmen dan ditemukan rf pada pigmen
xanthopterin yaitu 0,43 cm, rf pada pigmen biopterin2-
amino-4hydroxipteridine yaitu 0,65 cm, rf pada pigmen
biopterin yaitu 0,75 cm dan rf pada pigmen isosepiapterin
yaitu 0,89. Kebegeragaman pigmen tersebut terjadi karena
adanya mutasi, pada Drosophila melanogaster normal
atau wild type memiliki fenotipe mata yaitu red eye yang
disebabkan oleh pigmen pteridine
Pembentukan pigmen mata pada Drosophila
melanogaster dipengaruhi oleh gen dalam kromosom.
Perbedaan fenotipe-fenotipe yang terjadi pada mata
Drosophila melanogaster dikarenakan adanya aktivasi gen
yang terjadi saat pembentukan, perbedaan fenotipe juga
dapat terjadi akibat mutasi-mutasi dalam gen. Mutasi gen
disebabkan oleh adanya perubahan dalam urutan
nukleotida (warmadewi 2017: 16) Terdapat protein di
dalam gen pada Drosophila melanogaster, Ketika protein-
*Kelompok A-2 Siang
protein terganggu atau tidak berfungsi maka terbentuklah
beragam fenotipe pada Drosophila melanogaster mutan.
IV. Kesimpulan
1) Mutasi membuat perbedaan fenotipe pada
mata Drosophila melanogaster. Apabila
keberhasilan terjadi dalam pembentukan
pigmen dan tidak terjadi gangguan
maupun mutasi pada pembentukan
pigmen dan jalur metabolism maka akan
menghasilkan fenotipe mata red eye.
Namun, apabila terjadi kegagalan ataupun
mutasi pada jalur pembentukan akan
menghasilkan fenotipe Drosophila
melanogaster mutan seperti, mata white
eye, brown eye, scarlet, sepia, dsb.
2) Thin layer chromatography merupakan
pemisahan senyawa multi komponen
dengan menggunakan dua fase yaitu fase
diam dan fase gerak, kromatografi akan
berakhir dan dapat diamati apabila fase
gerak telah mencapai jarak tertentu, dan
muncul perbandingan antara satu dengan
yang lain komponen. Perbandingan ini
yang disebut dengan Rf yang dapat
dihitung dengan cara membagi jarak
sampel dengan jarak pergerakan larutan.
kromatografi ini merupakan yang
memiliki banyak kelebihan dibandingkan
kromatografi lain, salah satunya thin layer
chromatography merupakan kromatografi
yang fleksibel.
4
 3) Teknik pemisahan mata drosophila pada jalur ommochrom maupun pteridine,
melanogaster, dapat dilakukan dengan selain itu tidak terjadinya transport system
menganestesi terlebih dahulu Drosophila maka hal tersebut mengakibatkan
melanogaster, kemudian melakukan munculnya beragam fenotipe-fenotipe
pengambilan bagian mata, lalu mata mata pada Drosophila melanogaster
digerus menggunakan sonde dan diletakan mutan karena terjadinya mutasi seperti
pada kertas kromatografi untuk diamati white eye, scarlet, sepia, brown eye, dsb.
4) Dalam pembentukan pigmen mata pada
V. Daftar acuan
Drosophila melanogaster terdapat dua
jalur utama yaitu jalur ommochrom yang Agus, R. 2018. Dasar-dasar biologi molekuler. 1st
ed. CELEBES MEDIA PERKASA: ii +138 hlm.
menghasilkan ommochrome pigment
Day, R.A. & Underwood, A.L. 2002. Analisi kimia
(brown) dan jalur pteridine yang
kuantitatif. 6th ed. Erlangga, Jakarta: ix +682 hlm.
menghasilkan dsopterin kemudian masuk
Rubiyanto,D.2017. Metode kromatografi:prinsip
ke transport system dan menghasilkan dasar, praktikum dan pendekatan pembelajaran
mata red eye pada drosophila kromatografi. 1st ed. Deepublish, Yogyakarta: viii +144
hlm.
melanogaster wild type atau normal,
namun apabila terjadi gangguan atau tidak Wulandari, L.2011. Kromatografi Lapis Tipis. 1st
ed. Fakultas Farmasi universitas Jember, Jember: 184 hlm
berfungsinya salah satu jalur atau proses
Warmadewi, D.A. 2017. Buku ajar mutasi genetik.
dengan baik seperti terganggunya fungsi
1st ed. Universitas Udayana, Bali: iv +47 hlm.

*Kelompok A-2 Siang 5

Lampiran

Warna yang Nilai Kelompo Warna yang Nilai

Kelompok Sampel Sampel
teramati Rf k teramati Rf
ungu-biru 0,5 Biru tua 0,51

hijau-biru 0,79 Hijau-biru 0,79

Mutan Mutan
kuning 0,82 Kuning 0,83
scarlet scarlet
hijau-biru 0,86
Hijau 0,86
A1 B2

Orange 0,35

Kuning 0,73
Mutan
Tidak terdapat warna - Normal
brown
Biru 0,86

Biru 0,89
Biru 0,88
Mutan white Normal
Kuning 0,75
Hijau-biru 0,56
Orange 0,37
A2 B3
Hijau-biru 0,43
Kuning 0,89
Biru 0,65
Mutan sepia Mutan sepia Biru 0,75
Biru 0,75 Biru 0,66
Kuning 0,89 Hijau-biru 0,42
Orange 0,37 Oranye 0,32
Normal Kuning 0,74 Normal Kuning 0,62
Biru 0, 88 Biru 0,84
A3 C1 Hijau-biru 0,51
Mutan Biru 0,8
Tidak terdapat warna - Mutan white
brown

B1 Mutan Tidak terdapat warna - C2 Mutan Hijau-biru 0,86

*Kelompok A-2 Siang 6

 Kuning 0,82
brown scarlet Hijau-Biru 0,78
Ungu-Biru 0,5
Kuning 0,89
Hijau 0,55
Biru 0,76
Mutan white Mutan sepia
Biru 0,66
Biru 0,86
Hijau-Biru 0,42
Hijau kebiruan 0,42
Biru 0,66
Mutan sepia
Biru tua 0,75
C3 Kuning kehijauan 0,89

Mutan
Tidak terdapat warna -
brown

*Kelompok A-2 Siang 7