ISOLASI DNA KROMOSOMAL BAKTERI dan AMPLIFIKASI DNA MELALUI

PCR
Rr. Bhintarti Suryohastari1), Maulana Malik Assayyidin2), Puri Dwi2),
Aditya Rizky Maulana, Alfathan Lutfi, Eka Novia Mahesti, Marita Yuni Fitriadi.
Rahma Qurrotu A’yun 3).
1)
Dosen Praktikum Biologi Molekular UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2)
Asisten Dosen Praktikum Biologi Molekular UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3)
Mahasiswa Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Abstrak

DNA (Deoxyribose Nucleic Acid) adalah master molecul (molekul utama) yang mengkode semua informasi
yang dibutuhkan untuk proses metabolisme dalam setiap organisme. tujuan dari praktikum yaitu untuk
mengetahui cara melakukan isolasi DNA kromosomal pada bakteri Bacillus cereus dan Acetobacter xylinum.
Selain itu untuk mengetahui cara kerja PCR terhadap amplifikasi DNA dan untuk mengetahui deteksi DNA
melalui elektroforesis. Alat dan bahan yang digunakan antara lain refrigerated sentrifuge, elektroforesis,
transilluminator, thermocycler, mikropipet, tabung, mikrotube, microwave, vortex, Parafilm, waterbath, tip
Kristal, tip putih, tip kuning, tip biru, incubator, freeze, Bahan yang digunakan adalah Acetobacter xylinum,
Bacillus cereus, insta gen matrik, aquabidestilata ddH2O, buffer TAE 1x, DNA template, gen rRNA 16s (kit
Dream taq Green 2x master mix + dye), nucleus free water, 10 µM Primer 27 F, 10µM Primer 1492 R, PCR
tube. Cara kerjanya pertama dilakukan isolasi DNA, selanjutnya amplifikasi DNA dengan PCR, dan dilakukan
elektroforesis. Hasilnya terlihat jelas pita-pita pada DNA dan jarak migrasi terjauh terletak pada ukuran DNA
(bp) 500 yaitu 52 mm serta jarak migrasi terdekat terletak pada ukuran DNA (bp) 10000 yaitu 23 mm.
Kesimpulannya yaitu kerusakan pada gel agarosa dapat mempengaruhi hasil dari elektroforesis. Jarak migrasi
terjauh terletak pada ukuran DNA (bp) 500 yaitu 52 mm serta jarak migrasi terdekat terletak pada ukuran DNA
(bp) 10000 yaitu 23 mm.

Kata kunci : DNA, Elektroforesis, PCR.

PENDAHULUAN amplifikasi DNA secara in vitro. PCR

DNA (Deoxyribose Nucleic Acid)
adalah master molecul (molekul utama)
yang mengkode semua informasi yang
dibutuhkan untuk proses metabolisme
dalam setiap organisme. DNA ini tersusun
atas 3 komponen utama yaitu gula
deoksiribosa, basa nitrogen dan fosfat yang
tergabung membentuk nukleotida. Struktur
molekul DNA pertama kali diungkapkan
oleh James Watson dan Francis Crick pada
tahun 1953 berdasarkan foto difraksi sinar
x yang dibuat oleh Rosalind Franklin dan
Maurice Wilkins. Struktur DNA tersebut
dikenal dengan untai ganda (double helix)
DNA yang tersusun oleh dua rantai
polinukleotida yang berpilin (Zubaidah,
2004).
Polymerase Chain Reacton (PCR)
adalah suatu teknik sintesis dan
merupakan teknik yang melibatkan
beberapa tahap yang berulang (siklus) dan
pada setiap siklus terjadi duplikasi jumlah
target DNA untai ganda. Untai ganda
DNA templat (unamplified DNA)
dipisahkan dengan denaturasi termal dan
kemudian didinginkan hingga mencapai
suatu suhu tertentu untuk memberi waktu
pada primer menempel (anneal primers)
pada daerah tertentu dari target DNA.
Polimerase DNA digunakan untuk
memperpanjang primer (extend primers)
dengan adanya dNTPs (dATP, dCTP,
dGTP dan dTTP) dan buffer yang sesuai.
Umumnya keadaan ini dilakukan antara 20
– 40 siklus (Newton, 1994).
Salah satu alat yang digunakan
untuk mengisolasi DNA adalah
elektroforesis. Elektroforesis adalah suatu
proses migrasi molekul bermuatan di
dalam suatu media yang bermuatan listrik,
dimana kecepatan migrasinya tergantung
pada muatan, ukuran dan bentuk setiap
molekul yang terlibat. Saat arus listrik
diberikan, molekul bermigrasi melalui
media (gel), molekul yang kecil akan
bermigrasi lebih cepat daripada yang
besar, sehingga akan terjadi pemisahan.
Hasil dari pemisahan ini berupa fragmen
berupa pita – pita DNA (Seow, 2012).
Selain itu transluminator UV juga
merupakan instrumen molekular penting
untuk mengvisualisasi DNA setelah proses
elektroforesis. Prinsip kerja UV
transiluminator adalah sinar UV
dipancarkan dan akan memendarkan
Ethidium bromide (EtBr) yang membuat
khelat dengan molekul DNA, sehingga
DNA dapat dilihat oleh mata manusia.
Visualisasi DNA ini dapat diamati pada
Gel Documentation System (Gel doc),
yaitu transiluminator UV yang dilengkapi
dengan kamera dan komputer sehingga
pita DNA dapat diamati pada layar
komputer (Seow, 2012).
Adapun tujuan dari praktikum
yaitu untuk mengetahui cara melakukan
isolasi DNA kromosomal pada bakteri
Bacillus cereus dan Acetobacter xylinum.
Selain itu untuk mengetahui cara kerja
PCR terhadap amplifikasi DNA dan untuk
mengetahui deteksi DNA melalui
elektroforesis.
MATERIAL DAN METODE
Alat dan bahan
Alat yang digunakan pada
praktikum ini refrigerated sentrifuge,
elektroforesis, transilluminator,
thermocycler, mikropipet, tabung,
mikrotube, microwave, vortex, Parafilm,
waterbath, tip Kristal, tip putih, tip kuning,
tip biru, incubator, freezer.
Bahan yang digunakan adalah
Acetobacter xylinum, Bacillus cereus,
insta gen matrik, aquabidestilata ddH2O,
buffer TAE 1x, DNA template, gen rRNA
16s (kit Dream taq Green 2x master mix +
dye), nucleus free water, 10 µM Primer 27
F, 10µM Primer 1492 R, PCR tube.
Cara Kerja
Isolasi DNA Bakteri
Tahapan awal dari praktikum ini
yaitu bakteri Acetobacter xylinum dan
Bacillus cereus diambil dan diresuspensi
dalam 1 µl aquabidestilata (ddH2O)
kemudian dimasukan kedalam refrigerated
sentrifuge dan disentrifugasi selama 1
menit dengan kecepatan 12000 rpm dan
suhu 4° sampai terbentuk pellet, kemudian
diambil cairan dan pellet jangan sampai
terambil, kemudian dimasukan 100µl , lalu
diikubasi de waterbath pada suhu 56°C
selama 30 menit, kemudian di vortex
selama 10 detik kemudian diletakan
kedalam waterbath selama 8 menit,
setelah itu divortex selama 8 detik dan
dilanjutkan dengan sentrifugasi selama 3
menit dengan kecepatan 12 rpm dalam
suhu 4°C, kemudian dipindahkan dalam
tabung baru dan disimmpan pada suhu
-20°C.
Amplifikasi DNA dengan Metode PCR
Gen rRNA 16s (kit Dream taq
Green 2x master mix + dye) digunakan
pada praktikum ini dengan cara
memasukan gen tersebut kedalam tabung
A dengan komposisi 2x dream taq green
RM + dye sebanyak 12,5, dan 10 µM
Primer 27 F sebanyak 1,5 µl , 10µM
Primer 1492 R 1,5 µl. tabung B
Komposisi 2x dream taq green RM + dye
sebanyak 12,5 µl, DNA template 20 µl, 10
µM Primer 27 F sebanyak ,5 µl , 10µM
Primer 1492 R 0,5 µl, dan nuclease free
water sebanyak 10 µl. kemudian masing-
masing dibuat stock 6x dan dibagi kedalam
12 PCR tube Bc 1a, Bc 1b, Bc 2a, Bc 2b,
Bc 3a, Bc 3b, , Ax 4a, Ax 4b, Ax 5a, Ax
5b, Ax 6a, Ax 6b. kemudian dimasukan
PCR tube kedalam thermocycler dan diatur
reaksi polimerisasi berantau sebanyak 40
siklus, kemudian disiapkan wadah tabung
PCR berisi amplikan apabila tidak
langsung dilakukan elektroforesis.
Elektroforesis gel agarose
Pembuatan gel agarose 0,25 g dan
25 ml buffer TAE 1x dimasukan kedalam
tabung, dan dibuat gel agarose 1% diats
permukaan rata supaya gel agar terbentuk
merata kemudian dimasukan
microwave selama 30 detik dan dimasukan
1µl peq green pada suhu 50°C kemudian
dicetak gel dengan sisir pada 8 dan 15
dengan formulasi marker : marker 1µl
ditambah loading dye 1 µl ditambah 4 µl
air, dan formulasi ekstrasi 5 µl sampel
ditambah loading dye 5µl. setelah agar
mengeras kemudian sample diletakan pada
elektorforesis yang telah diberika air
Susunan sisir 8 pada elektroforesis dari kiri
ke kanan M, , Bc 1b,Bc 2b, Bc 3b, Ax 4b,
Ax 5b, Ax 6b untuk sisir 15 Bc 1a, Bc 2a,
Bc 3a, Ax 4a, Ax, 5a, Ax 6a, Bc 1, Bc 2,
Bc 3, Ax 4, Ax 5, Ax 6. Kemudian gel
agar diruning pada tegangan 80 v, 400 mA
selama 45 menit, setelah itu dilihat band
yang terbentuk di transilluminatr UV
kemudian difoto.
Sisir 8 8 7 6 5
Sisir 15 15 14 13 12
HASIL DAN PEMBAHASAN
Deoxyribonucleic acid
merupakan polimer dari asam
(polinukleotida) yang tersusun
sistematis sebagai pembawa informasi
yang diturunkan kepada keturunannya. Isolasi
DNA merupakan tahap pertama dari berbagai
teknologi analisis DNA. DNA dapat
ditemukan baik pada kromosom inti maupun
pada organel, yaitu pada mitokondria dan
kloroplas (Toha, A.H.A. 2001).
Dalam praktikum ini dilakukan
preparasi DNA bakteri, penggandaan DNA
dengan metode PCR, pembacaan hasil
DNA dengan Elektroforesis gel Agarose
dan pemvisualisasian gel mengunakan
ke transluminator. Bakteri yang digunakan
adalah Bacillus cereus merupakan bakteri
gram positif, aerob fakultatif dan dapat
membentuk spora. Bakteri ini adalah jenis
bakteri penyebab keracunan makanan
(Istanti,1999).
Preparasi DNA bakteri Bacillus
cereus ini menggunakan kit Instagene
Matriks. Instagene matriks memungkinkan
persiapan mudah dan cepat metode PCR.
DNA amplifiable dengan menghilangkan
padatan fenol/kloroform menggunakan
langkah ekstraksi. Langkah awal pada
preparasi DNA Bacillus cereus dengan
meresuspensi DNA dalam aquades steril.
Hal ini bertujuan agar sel bakteri lisis. Sel
bakteri Bacillus cereus termasuk ke dalam
bahan yang lunak sehingga dapat dengan
mudah diresuspensi dengan buffer non
osmotic yaitu aqudes steril (Istanti,1999)
4 3 2 1
11
10
9 8 7 6 5 4 3 2 1
0
Sampel yang telah diresuspensi
(DNA)
dengan aquades steril kemudian
nukleat disentrifugasi selama 3 menit dengan
secara keepatan 12.000 rpm. Salah satu prinsip
genetik isolasi DNA yaitu dengan sentrifugasi.
Sentrifugasi merupakan teknik untuk
memisahkan campuran berdasarkan berat
molekul komponennya. Molekul yang
mempunyai berat molekul besar akan
berada di bagian bawah tabung dan
molekul ringan akan berada pada bagian
atas tabung. Hasil sentrifugasi akan
menunjukkan dua macam fraksi yang
terpisah, yaitu supernatan pada bagian atas
dan pelet pada bagian bawah. Pelet yang
didapat kemudian ditambahkan Instagen
Matriks. Instagene matriks harus dicampur
dengan kecepatan sedang pada magnetic
stirrer untuk menjaga matriks dalam
suspensi. Kemudian dihomogenkan dan
diinkubasi dalam waterbath 56 oC selama 8
menit kemudian dihomogenkan. Setelah
itu DNA diinkubasi kembali dalam
waterbath denan suhu 100 oC selama 8
menit. Hal ini bertujuan agar sel bakteri
lisis. Inkubasi di dalam waterbath ini
disebut dengan metode boiling. Metode ini
dimungkinkan karena matriks dapat
menyerap sel yang lisis dengan efisien
yang dapat menganggu proses amplifikasi
PCR. Setelah sel mengalami lisis,
remukan-remukan sel harus dibuang,
pembuangan remukan sel dengan cara
dilakukan sentrifugasi kembali dengan
kecepatan 12.000 rpm selama 3 menit.
Kemudian supernatant diambil dan
disimpan pada suhu -20 oC. penyimpanan
pada suhu tersebut sangatlah penting agar
sampel dapat terjaga kemurniannya
sebelum dilakukan PCR dengan
menggunakan alat Thermal Cycler
(Susanto, 2009).
Teknik PCR merupakan suatu
metode enzimatik untuk memperbanyak
(amplifikasi) DNA secara in vitro
(ekstraselular) (Pherson,2006). Prinsip
kerja PCR yaitu menggunakan reaction
mixture  serta memanfaatkan DNA
polymerase  yang bersifat termostabil dan
fragmen DNA yang pendek disebut
primer. Primer berfungsi untuk
mensintesis secara langsung sekuens DNA
target spesifik dari DNA template. Reaksi
sintesis tersebut terus berulang sehingga
membentuk suatu siklus. Produk dari
siklus sintesis sebelumnya dapat berfungsi
sebagai template atau cetakan bagi siklus
selanjutnya. Hasilnya ialah amplifikasi
eksponensial dari sekuens DNA target.
Siklus yang berulang tersebut dapat
berlangsung karena penggunaan Taq
polymerase. Taq polymerase ialah sebuah
enzim polymerase bersifat termostabil
yang diisolasi dari bakteri termofilik yaitu
Thermus aquaticus (Pherson,2006).
Hal yang harus dilakukan sebelum
melakukan teknik PCR adalah Optimasi.
Optimasi perlu dilakukan dengan tujuan
untuk mendapatkan hasil PCR yang
optimal. Secara umum optimasi proses
PCR dapat dilakukan dengan cara
memvariasikan kondisi yang digunakan
pada proses PCR tersebut. Optimasi
kondisi berkaitan erat dengan faktor-faktor
seperti jenis polimerase DNA, suhu,
konsentrasi, PCR bufer, dan waktu.
Pemilihan suhu pada proses PCR sangat
penting karena suhu merupakan salah satu
faktor yang menentukan keberhasilan
suatu PCR. Dalam hal ini suhu berkaitan
dengan proses denaturasi DNA templat,
annealing dan elongasi primer. Suhu
tergantung pada panjang DNA templat
yang digunakan dan juga pada panjang
fragmen DNA target. Suhu denaturasi
yang terlalu tinggi akan menurunkan
aktivitas polimerase DNA yang akan
berdampak pada efisiensi PCR. Selain itu
juga dapat merusak DNA templat,
sedangkan suhu yang terlalu rendah dapat
menyebabkan proses denaturasi DNA
templat tidak sempurna. Pemilihan waktu
yang digunakan berkaitan dengan proses
denaturasi DNA templat, annealing dan
elongasi primer (Handoyo,2000).
 Pada praktikum ini, dilakukan panjang primer 18 – 22 basa cukup dengan
teknik PCR gen 16S rRNA dengan 30 detik (Handoyo, 2000). Pada tahapan
formula dream taq green RM dye DNA ini, digunakan suhu 51 oC selama 30 detik.
template sebanyak 10µL, 10 µM primer 27
Proses selanjutnya adalah elongasi
forward sebesar 1.25 µL, 10 µM primer
atau ekstensi, yaitu proses pemanjangan
1492 reverse sebesar 1.25 µL. yang
untai baru DNA, dimulai dari posisi primer
keseluruhan berjumlah 12.5 µL. proses
yang telah menempel di urutan basa
PCR dimulai dengan pra-denaturasi
nukleotida DNA target yang akan bergerak
dengan suhu 95oC selama 5 menit. Pra
dari ujung 5’ menuju 3’. Pemilihan waktu
denaturasi ini bertujuan untuk pemanasan
elongasi primer tergantung pada panjang
(hot start) sebelum memasuki proses inti
fragmen DNA yang akan diamplifikasi.
denaturasi, annealing dan elongasi. Setelah
Secara umum untuk mengamplifikasi
pra denaturasi adalah tahapan denaturasi
setiap satu kilo basa DNA diperlukan
dengan suhu 95 oC selama 30 detik.
waktu 30 – 60 detik (Handoyo, 2000).
Denaturasi untai anda merupakan langkah
Pada tahapan ini suhu yang digunakan
yang kritis selama proses PCR. Suhu yang
sebesar 72 oC selama 2 menit. Ketiga
tinggi pada awal proses menyebabkan
proses di atas akan berulang sampai 30-35
pemisahan untai ganda DNA. . Waktu
siklus DNA. Dan siklus tersebut akan
denaturasi yang terlalu lama akan merusak
diakhiri dengan tahapan ekstensi akhir
templat DNA dan sekaligus dapat
dengan suhu 72 oC selama 10 menit.
menurunkan aktivitas polimerase DNA.
Setelah sampai tahapan ekstensi akhir
Sedangkan waktu denaturasi yang terlalu
didapatkan hasil berupa DNA yang
pendek dapat menyebabkan proses
berjumlah banyak dengan ditandai hasil
denaturasi tidak sempurna (Fatchiyah,
PCR yang keruh. Setelah itu hasil
2011).
amplifikasi DNA disimpan pada suhu 40C.
Tahapan selanjutnya adalah
Elektroforesis merupakan proses
annealing yaitu proses
bergeraknya molekul bermuatan pada
penempelan/pengenalan primer cetakan
suatu medn listrik. Kecepatan yang
DNA. Penegenalan DNA target tergantung
bergerak pada meda listrik tergantung pada
pada panjang untai, banyaknya kandungan
muatan, bentuk, dan ukuran. Dengan
GC dan konsentrasi primer itu sendiri.
demikian eketroforesis dapat digunakan
Optimalisasi suhu anneling dimulai dengan
untuk pemisahan makromolekul (seperti
menghitung melting temperature (Tm) dari
protein dan asam nukleat) (Gaffar, S.
ikatan primer dan cetakan DNA(Fatchiyah,
2007. ). Elektroforesis untuk
2011). Suhu annealing yang digunakan
makromolekul memerlukan matriks
dapat dihitung berdasarkan (Tm – 5) 0C
penyangga untuk mencegah terjadinya
sampai dengan (Tm + 5) 0C. Suhu
difusi karena timbulnya panas dari arus
annealing yang digunakan perlu
listrik yang digunakan. Gel agarosa
diperhatikan karena suhu annealing
merupakan matriks penyangga yang
berkaitan dengan adanya mispriming pada
banyak dipakai untuk pemisahan protein
daerah target dan nontarget, serta
dan asam nukleat. Matriks ini sebagai
keberhasilan praktikum PCR. Penentuan
tempat bermigrasinya molekul DNA yang
waktu untuk proses annealing berkaitan
sebelumnya telah dilakukan isolasi serta
dengan panjang primer. Untuk panjang
diperbanyak rantai DNA nya. Metode
primer lebih besar dari 22 basa diperlukan
standar yang digunakan untuk identifikasi,
waktu annealing 60 detik, sedangkan untuk
pemisahan dan purifikasi fragmen DNA lalu ditunggu hingga membeku
adalah menggunakan elektroforesis gel membentuk gel agarosa. Ketika gel yang
agarose (Facthiyah, dkk. 2005). sudah terbentuk, sampel yang telah dibuat
dimasukan pada sisir 8 pada 3 banjar yaitu
Pembuatan gel agarosa 1% yang
marker, ekstraksi dan sampel. Proses
dilakukan dengan menambahkan 0,25 g
pemasukkannya dilakukan dengan hati-
dan 25 ml buffer TAE 1x kemudian
hati agar tidak merusak gel serta sampel,
dimasukkan kedalam microwave selama
marker dan ektraksi dapat diletakkan
30 menit, proses ini bertujuan untuk
dengan baik pada gel agarosa. Selanjutnya
melarutkan serta mengencerkan hingga
elektroforesis di running selama 45 menit
membentuk suatu larutan. Selanjutnya
pada tegangan 80 v, 400 mA yang
ditambahkan 1 mikroliter peq green pada
kemudian di lihat dengan menggunakan
suhu 50oC, penambahkan ini akan
transluminator.
menyebabkan larutan tersebut akan
membentuk gel secara sempurna. Larutan
tersebut kemudian dicetak dengan 2 sisir
Gambar 1. Pola Pita Elektroforesis DNA Kromosomal Isolat Bakteri
penentuan konsentrasi gel agarosa dengan
konsentrasi gelnya sehingga menyebabkan

Terlihat pada gambar tersebut, dari

sampel yang dilakukan elektroforesis yaitu
sampel hasil Polymerase Chain Reaction
(PCR) terlihat sangat jelas dengan pita-pita
DNA. Hal lain terlihat pada marker yang
di elektroforesis tidak tampak jelas. Hal ini
dapat disebabkan karena kerusakan pada
gel agarosa serta kesalahan dalam
 molekul pada marker tidak teridentifikasi,
terpisahkan dan terpurifikasi secara
sempurna. Literatur menjelaskan bahwa
migrasi elektroforesis menggunakan gel
agarosa dipengaruhi oleh faktor ukuran
dan konformasi molekul DNA, konsentrasi
agarosa, arus listrik dan suhu. Molekul
DNA yang bermuatan negatif saat
elektroforesis pada gel agarosa berbanding
terbalik dengan konsentrasi gelnya.
Migrasi struktur molekul yang besar akan
lebih lambat dibandingkan struktur
molekul yang kecil dalam proses melewati
pori-pori gel (Wibowo, M.S. 2008).

Tabel 1. Jarak Migrasi Pita DNA

Ukuran DNA (bp) Jarak Migrasi (mm)
10000 23
8000 25
6000 27
5000 28
4000 30
3500 31
3000 33
2500 35
2000 38
1500 41
1000 45
750 48
500 52
250  

10000 Gambar 2. Kurva Standar

DNA Ladder

1000

100
0 2 4 6 8 10 12 14 16

Ukuran DNA (bp)

Exponential (Ukuran DNA (bp))

Pita-pita DNA yang tampak pada
layar transluminator dapat dilakukan
perhitungan dengan melakukan
pengukuran DNA (bp) dan jarak migrasi
(mm). Pengukuran ini dapat dilakukan
dengan menggunakan alat ukur seperti
penggaris dan lain sebagainya. Pengukuran
ini bertujuan untuk mengetahui atau
membuat kurva standar DNA ladder. Jarak
migrasi terjauh terletak pada ukuran DNA
(bp) 500 yaitu 52 mm serta jarak migrasi
terdekat terletak pada ukuran DNA (bp)
10000 yaitu 23 mm. Kuantitas DNA
sampel juga dapat diketahui dengan
membandingkan pendaran pita DNA
sampel yang dianalisis dengan pendaran
pita DNA penanda kuantitas (Pratiwi, R.
2001). Pita-pita yang berpendar sangat
baik terletak pada sampel ekstraksi dan
sampel DNA hasil PCR (Polymerase
Chain Reaction) sehingga timbul garis-
garis berwarna yang tampak pada
transluminator. Hal lain terlihat pada
marker yang tidak tampak sehingga tidak
dapat dilakukan pengukuran terhadap jarak
migrasi pita DNA yang dapat disebabkan
oleh kerusakan pada gel sehingga proses
migrasi tidak dapat berlangsung.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum yang
telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa
kerusakan pada gel agarosa dapat
mempengaruhi hasil dari elektroforesis.
Jarak migrasi terjauh terletak pada ukuran
DNA (bp) 500 yaitu 52 mm serta jarak
migrasi terdekat terletak pada ukuran DNA
(bp) 10000 yaitu 23 mm.
DAFTAR PUSTAKA
Facthiyah, dkk. 2005. Biologi Molekular.
Erlangga. Jakarta
Gaffar, S. 2007. Buku Ajar Biologi
Molekuler. Fakultas
MIPA.Universitas Padjajaran
Handoyo, D & A. Rudiretna. 2000.
General principles and
implementation of polymerase
chain reaction.
http://repository.ubaya.ac.id/35/1/A
RT002: 129 hlm. http://www.bio-
rad.com/LifeScience/pdf/Bulletin_
9289.pdf Instagen Matriks diakses
pada 26 November 2016 pukul
14.52.
Istanti, Annie. 1999. Biologi Sel. Biologi
FMIPA UM, Malang.
Newton, C.R. and A. Graham. 1994. PCR.
UK: Bios Scientific Publisher.
Pratiwi, R. 2001. Mengenal Metode
Elektroforesis. Oseana. 26, (1), 25-
31.
Pherson Mc, M.J. & S.G. Moller. 2006.
PCR. Taylor & Francis Group, US
Seow V. L and A.R. Bahaman. 2012.
Discriminatory Power of Agarose
Gel Electrophoresis in DNA
Fragments Analysis. In: Magdeldin
S. Gel Electrophoresis – Principles
And Basics. In Tech. Croatia. Hal
41-56.
Susanto, Agus Hery. 2012. Bahan Ajar
Biologi Molekuler. Fakultas
 Biologi Universitas Jenderal
Soedirman, Purwokerto.
Toha, A.H.A. 2001. Deoxyribo Nucleic
Acid. Keanekaragaman, Ekspresi,
Rekayasa & Efek pemanfaatnnya.
Alfabeta. Bandung
Wibowo, M.S. 2008. Electrophoresis.
Farmasi ITB. Bandung
Zubaidah, 2004. Isolasi dan karakterisasi
Gen Perbaikan DNA Baru pada
Bakteri Radioresisten Deinococcus
radiodurans. Prosiding Seminar
Nasional Sains dan Teknik Nuklir,
Bandung.
.