SINTESIS DAN BIOAKTIVITAS SENYAWA TURUNAN KLOROKALKON DARI

PREKURSOR 4-METOKSI BENZALDEHIDA DAN 2-HIDROKSI-5-KLORO

ASETOFENON

Wulan Nur Safitri1,*, Vina Maulidya1, Laode Rijai1,2

1)
Laboratorium Penelitian dan Pengembangan Kefarmasian "Farmaka Tropis",
Fakultas Farmasi, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia
2)
Kelompok Bidang Ilmu Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Mulawarman,
Samarinda, Indonesia
*Email: wulan_nursafitri@yahoo.co.id

Abstrak

Senyawa kalkon merupakan senyawa yang banyak memiliki aktivitas biologis, namun
ditemukan dalam jumlah yang sedikit pada tumbuhan. Sintesis senyawa turunan kalkon
dilakukan untuk mendapatkan senyawa kalkon dalam jumlah besar dalam waktu yang relatif
singkat. Senyawa turunan kalkon 2’-hidroksi-5’-kloro-4-metoksikalkon berhasil disintesis
dengan metode Claisen-Schmidt selama 72 jam dalam suasana basa dan didapat rendemen
84,54%. Senyawa ini telah dikarakterisasi menggunakan IR, MS, 1H-NMR dan 13C-NMR.
Hasil uji bioaktivitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) menunjukkan
senyawa tersebut memiliki nilai LC50 75,07 ppm, uji aktivitas antioksidan dengan metode 2,2
diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) menunjukkan nilai IC50 45,99 ppm.

Kata kunci: sintesis, klorokalkon, bioaktivitas

Abstract

Chalcones is a compound that has many biological activities, but found in small amounts in
plants. The synthesis of chalcones derived compounds was performed to obtain large amounts
of chalcones compound in a relatively short time. In this research, an analog chalcone of 2'-
hydroxy-5'-chloro-4-methoxichalcones was successfully synthesized by Claisen-Schmidt
method for 72 hours in base situation and obtained a yield of 84,54%. These compounds have
been characterized using IR, MS, 1H-NMR and 13C-NMR. The result of bioactivity test by
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method showed that the compound had LC 50 value 75,07
ppm, antioxidant activity test by 2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) method showed IC50
value of 45,99 ppm.

Keywords: synthesis, chlorochalcones, bioactivity

PENDAHULUAN Senyawa kalkon yang terdapat pada

Senyawa kalkon (1,3-difenil-2- tanaman merupakan prekursor dari
propen-1-on) merupakan senyawa yang senyawa flavonoid [1]. Beberapa jenis
sangat penting di alam. Kalkon senyawa kalkon memperlihatkan aktivitas
mengandung dua cincin aromatis (A dan B) biologi seperti antimalaria,
dan satu atom karbon α, β tak jenuh. antituberkulosis, anti-inflamasi, sitotoksik,
antioksidan, analgesik, antiviral dan
antimikroba[2].
Kalkon sangat sulit diisolasi dari
tanaman karena adanya enzim kalkon
sintetase (CSH) yang dengan mudah
mengubah kalkon menjadi flavonoid.
Selain itu, senyawa kalkon hanya
ditemukan pada beberapa golongan
tumbuhan dan dalam jumlah yang sangat
sedikit. Hal ini merupakan kendala bagi
perkembangan senyawa kalkon. Mengingat
keperluan kalkon dalam jumlah yang
banyak dan membutuhkan struktur yang
bervariasi, sehingga perlu ada upaya untuk
mendapatkan kalkon dengan cara sintesis.
Membuat kalkon dengan cara sintesis ini
menguntungkan, baik dari segi biaya dan
waktu yang relatif singkat [3].
Senyawa kalkon yang tersubtitusi
halogen sulit dijumpai di alam, sehingga
diperlukan pengembangan sintesis senyawa
kalkon yang mengandung gugus halogen,
salah satunya adalah dengan membuat
kalkon yang mempunyai gugus kloro pada
salah satu cincin aromatiknya.[4].
METODE PENELITIAN
Sintesis Kalkon
Sebanyak 5 mmol (0,8525 g) 2-
hidroksi-5-kloro asetofenon dimasukkan ke
dalam labu alas bulat 100 mL. Kemudian
ditambahkan 20 mL metanol. Campuran
tersebut kemudian diaduk pada temperatur
25oC hingga 2-hidroksi-5-kloro asetofenon
terlarut. Kemudian ditambahkan 5 mmol
(0,6807 g) 4-metoksibenzaldehida.
Selanjutnya ditambahkan 5 mL NaOH 40%
(b/v) bertetes-tetes dan diaduk selama 72
jam. Setiap beberapa jam, larutan di KLT
untuk memastikan bahwa senyawa yang
diinginkan telah terbentuk, dengan
membandingkan nilai Rf pada masing-
masing senyawa prekursornya. Setelah
noda di KLT menunjukkan nilai Rf yang
berbeda, maka senyawa dapat dikristalisasi.
Kristalisasi dilakukan dengan
mendinginkan larutan dalam wadah yang
berisi es. Kemudian ditambahkan HCl 10%
setetes demi setetes sehingga terbentuk
padatan kristal. Penambahan HCl 10%
dihentikan saat larutan mencapai pH 7.
Selanjutnya padatan tersebut disaring dan
dicuci dengan es akuades hingga pH
larutan saringan mencapai pH 7. Produk
yang dihasilkan dikeringkan dalam
desikator selama 24 jam. Dilakukan
pemurnian senyawa menggunakan metode
kolom kromatografi. Senyawa hasil kolom
yang bernama senyawa WNS kemudian
ditimbang untuk mendapatkan persen
rendemen. Senyawa WNS kemudian
dianalisis strukturnya menggunakan
spektroskopi inframerah, spektroskopi
massa, 1H-NMR dan 13C-NMR.
Pengujian Toksisitas
Senyawa hasil sintesis sebanyak 100 mg
dilarutkan dalam 1000 mL air laut (1000
ppm). Kemudian disiapkan vial yang telah
dikalibrasi 10 mL dan dimasukkan 10 ekor
larva udang pada masing-masing vial.
Setelah itu dimasukkan larutan stok
sebanyak 200 µL, 400 µL, 600 µL, 800 µL
dan 1000 µL dimasing-masing vial yang
telah dikalibrasi 10 mL, dibuat sebanyak
lima replikasi. Kemudian ditambahkan air
laut hingga tanda batas vial dan diperoleh
variasi konsentrasi yang berbeda yakni 20
ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100
ppm. Tingkat toksisitas senyawa diukur
dengan menghitung jumlah larva udang
yang masih hidup dalam selang waktu 24
jam. Data yang diperoleh dianalisis
menggunakan Reed and Muench untuk
menentukan nilai LC50 senyawa hasil
sintesis.
Pengujian Aktivitas Antioksidan
Sebanyak 0,1g senyawa WNS
dilarutkan dalam 100 mL metanol (Merck)
(1000 ppm). Kemudian dibuat 5 seri
konsentrasi yaitu 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm,
80 ppm, dan 100 ppm. Larutan seri
konsentrasi masing-masing dimasukkan Kemudian ditambahkan basa NaOH
sebanyak 2 mL ke dalam tabung reaksi sebagai katalis dan dilakukan pengadukan
bertutup dibuat sebanyak 3 replikasi. menggunakan magnetik stirrer. Setelah itu,
Selanjutnya, dibuat larutan stok DPPH 40 ditambahkan 4-metoksibenzaldehida yang
ppm dengan menimbang 4 mg DPPH yang telah dilarutkan metanol dan diaduk hingga
dilarutkan dengan metanol dalam labu ukur tercampur.
gelap 100 mL, Larutan stok DPPH Senyawa 2-hidroksi-5-
kemudian dimasukkan 2 mL ke dalam kloroasetofenon yang kehilangan satu atom
tabung reaksi berisi larutan seri H karena bereaksi dengan ion -OH dari
konsentrasi, didiamkan selama 30 menit basa NaOH akan membentuk ion enolat.
dan diukur absorbansinya menggunakan NaOH bertindak sebagai katalis karena
Spektrofotometri UV-Vis pada panjang mempercepat terjadinya reaksi
gelombang 516 nm. Selanjutnya dihitung pembentukan senyawa kalkon dengan
% Aktivitas antioksidan dan ditentukan membentuk ion enolat. Ion enolat yang
nilai IC50. terbentuk kemudian mengalami reaksi
adisi dengan karbonil pada senyawa 4-
HASIL DAN PEMBAHASAN metoksibenzaldehida dan diakhiri dengan
pelepasan molekul air, sehingga
Sintesis Senyawa Klorokalkon membentuk senyawa WNS. Mekanisme
Sintesis senyawa klorokalkon reaksi pembentukan senyawa klorokalkon
diawali dengan melarutkan senyawa 2- dapat dilihat pada Gambar 1.
hidroksi-5-kloroasetofenon terlebih dahulu
dengan metanol absolut.

OH OH
H
OH H2O
CH2 CH2
Cl Cl

O O
OCH3
O
O H H
OH OCH3 H
OH

CH2 H
Cl
Cl
H H
O O
OCH3 O OCH3
OH
H
OH OH
-H2O

Cl Cl
H H
O O

Gambar 1. MekaniseReaksi Pembentukan Senyawa Klorokalkon

 Setelah dilakukan sintesis senyawa
kalkon dari bahan dasar 2-hidroksi-5-
kloroasetofenon dengan 4-metoksikalkon
diperoleh senyawa kalkon 2’-hidroksi-5’-
kloro-4-metoksikalkon yang dihitung
persentase rendemennya. Perhitungan
persentase rendemen didapatkan dari berat
hasil sintesis yaitu 1,22 gram dan berat
hasil sintesis secara teori yaitu 1,443 gram.
Identifikasi senyawa baru hasil
sintesis dari senyawa 2-hidroksi-5-
kloroasetofenon dan 4-
metoksibenzaldehida menggunakan pelarut
n-heksana dan etil asetat 11:1
menunjukkan dua spot noda. Spot dengan
nilai Rf (Retardation factor) = 0,59
merupakan spot yang berbeda dengan
bahan dasar. Hal ini menunjukkan bahwa
senyawa hasil sintesis merupakan senyawa
baru yang berbeda dengan bahan dasar.
Sedangkan spot kedua merupakan sisa dari
senyawa 4-metoksi benzaldehida yang
belum habis bereaksi dengan senyawa 2-
hidroksi-5-kloro asetofenon. Spot ini tidak
hilang meskipun dilakukan pengadukan
lebih lama, hal ini bisa disebabkan karena
sifat fisik antara 4-metoksi-benzaldehida
yang berupa minyak dan 2-hidroksi-5-kloro
asetofenon yang berupa serbuk, sehingga
mol saat penimbangan berlebih dan tersisa
saat bereaksi dengan mol 2-hidroksi-5-
kloro asetofenon. Oleh karena itu,
dilakukan pemisahan senyawa antara
senyawa WNS dan 4-metoksi benzaldehida
menggunakan metode Kromatografi
Kolom. Pemisahan ini menggunakan eluen
n-heksana dan etil asetat (11:1) dan didapat
spot tunggal yang merupakan senyawa
WNS. Setelah dilakukan perhitungan,
diperoleh persentasi rendemen senyawa
WNS hasil sintesis sebesar 84,54 %.
Spektroskopi IR digunakan untuk
mengidentifikasi jenis ikatan atau gugus
fungsi yang terdapat dalam senyawa WNS.
Ikatan O-H umumnya menunjukkan pola
yang jelas dengan absorbsi yang luas antara
3200-3500 cm-1, senyawa WNS memiliki
ikatan O-H yang terletak di bilangan
gelombang 3263 cm-1. Ikatan karbonil
C=O biasanya berada pada 1600-1800 cm-
1
, hasil data spektra IR menunjukkan satu
puncak pada bilangan 1604 cm-1 yang
merupakan ikatan C=O. Ikatan C=C
aromatik umumnya terdapat pada 1450-
1600 cm-1, hasil spektra IR juga
menunjukkan terdapat puncak pada
bilangan gelombang 1558 yang merupakan
C=C aromatik. Ikatan C=C trans
merupakan penanda penting pada senyawa
WNS karena ikatan ini dapat terbentuk
apabila telah terjadi reaksi Claisen-schmidt
antara senyawa keton dengan aldehida.
Ikatan C=C trans berada pada pada
bilangan gelombang 675-995 cm-1. Hasil
data spektra IR menunjukkan satu puncak
pada bilangan gelombang 972 cm-1 yang
merupakan ikatan C=C trans dari senyawa
WNS. Data hasil analisis menunjukkan
bahwa senyawa kalkon telah terbentuk jika
dilihat dari jenis ikatan yang terbaca saat di
spektrum IR. Berat molekul senyawa
ditunjukkan oleh spektrum massa
menggunakan spektroskopi massa dengan
puncak molekul 288 m/z.
Selanjutnya dilakukan analisis
senyawa menggunakan 1H-NMR Dan 13C-
NMR yang datanya disajikan di Tabel 1.
Gambar 2. Senyawa 2’-hidroksi-5’-kloro-
4-metoksikalkon
 Tabel 1. Data analisis senyawa menggunakan 1H-NMR Dan 13C-NMR

Nomor Pergeseran Kimia Integrasi dan Pergeseran Kimia

1 13
Atom H-NMR Tipe C-NMR
(ppm) Multisiplitas (ppm)
1 - - 128,8
2/6 7,64 (J = 9,2 Hz) 2H, d 131,9
3/5 6,95 (J = 8,4 Hz) 2H, d 114,7
4 - - 116,9
1’ - - 120,8
2’ - - 162,4
3’ 6,97 (J = 8,8 Hz) 1H, d 120,3
4’ 7.42 (J = 2,6 Hz; 8,8 Hz) 1H, dd 146,5
5’ - - 127,1
6’ 7.85 (J =2,4 Hz) 1H, d 136,0
Cα 7.44 (J= 15.2 Hz) 1H, d 123,5
Cβ 7.92 (J = 16 Hz) 1H, d 162,4
C=O - - 192,8
OCH3 3.87 3H, s 55,59
OH 12.85 1H, s -
Hasil spektra 1H-NMR pada masing proton karbon akan mengalami
pergeseran 7,92 ppm memiliki tetapan pergeseran yang berbeda tergantung
kopling 16 Hz. Pada pergeseran 7,44 ppm dengan gugus atau subtituen tempat
didapatkan tetapan kopling 15,2 Hz. Hal ini berikatan, semakin besar subtituen
membuktikan bahwa senyawa kalkon telah elektronegatif tempat berikatan maka
terbentuk karena ikatan α, β tak jenuh telah semakin besar pula pergeserannya. Hasil
1
terkonfirmasi oleh data H-NMR. spektra 13C-NMR menunjukkan terdapat 12
Kemudian pada pergeseran 3,87 ppm, sinyal, dimana senyawa WNS memiliki 14
terdapat puncak singlet yang memiliki 3 atom karbon yang dua diantaranya
atom H jika dilihat dari hasil integral. merupakan karbon ekuivalen, sehingga
Diperkirakan puncak ini berasal dari atom hanya menunjukkan 12 sinyal proton
H yang terikat pada gugus metoksi di karbon saat dilakukan analisis dengan
posisi para. Diketahui bahwa atom H yang menggunakan 13C-NMR. Pergeseran 55,59
terikat pada gugus metoksi (-OCH3) berada ppm diperkirakan merupakan atom karbon
pada pergeseran 3,7-4,3 ppm. Pada pada metoksi yang terikat di cincin A
pergeseran 12,85 ppm terdapat puncak aromatik. Diketahui bahwa pergeseran
singlet dengan hasil integrasi senilai 1 proton C sp3 adalah 10-30 ppm pergeseran
proton diperkirakan merupakan proton menjadi lebih besar karena atom C terikat
pada gugus hidroksil yang terikat pada pada atom O, sehingga lebih tidak
cincin B kalkon. terlindungi oleh elektron dan menyebabkan
Selanjutnya dilakukan pula analisis proton bergeser lebih besar. Pada
menggunakan 13C-NMR. Analisis proton pergeseran 114,3-162,4 ppm terdapat 10
karbon digunakan untuk melihat berapa sinyal yang merupakan sinyal karbon dari
banyak jumlah C yang terdapat dalam cincin A, cincin B dan dua karbon yang
senyawa. Hasil analisis spektra 13C-NMR membentuk ikatan α, β tidak jenuh, karena
berupa sinyal tunggal (singlet). Masing- menurut teori yang ada atom C sp2
memiliki pergeseran 110-175 ppm. Pada
pergeseran 192,7 ppm terdapat sinyal yang
diduga merupakan C karbonil. Ciri khas
dari C karbonil pada gugus keton adalah
berkisar antara 190-220 ppm.
Berdasarkan hasil analisis
spektroskopi IR, spektroskopi massa, dan
Nuclear Magnetic Resonance (NMR) yang
telah dihubungkan dengan teori yang ada,
maka senyawa WNS merupakan senyawa
klorokalkon dengan nama trivial 2’-
hidroksi-5’-kloro-4-metoksikalkon.
Aktivitas Toksisitas
Hasil uji toksisitas senyawa 2’-
hidroksi-5’-kloro-4-metoksikalkon
diperoleh menggunakan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap
Artemia salina Leach dan dianalisis
menggunakan metode Reed and Muench.
Berdasarkan hasil pengujian, senyawa
WNS mempunyai nilai LC50 sebesar 75,07
ppm. Diketahui bahwa suatu senyawa
murni dengan nilai LC50 < 200 ppm
menandakan bahwa senyawa tersebut
memiliki potensi sebagai antikanker,
antibakteri, antijamur, antioksidan dan
sebagainya.
Aktivitas Antioksidan
Berdasarkan pengujian antioksidan
menggunakan metode DPPH, senyawa 2’-
hidroksi-5’-kloro-4-metoksikalkon
memiliki potensi sebagai antioksidan
sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 45,99
ppm. Senyawa 2’-hidroksi-5’-kloro-4-
metoksikalkon memiliki gugus metoksi,
hidroksil dan subtituen Cl. Senyawa kalkon
mengandung gugus etilen keto (-CO-
CH=CH-) yang reaktif. Adanya gugus
tersebut menyebabkan molekul kalkon
mempunyai berbagai macam aktivitas
biologi.
KESIMPULAN
Telah disintesis senyawa
klorokalkon dengan nama trivial 2’-
hidroksi-5’-kloro-4-metoksikalkon yang
merupakqan hasil sintesis dari senyawa 2-
hidroksi-5-kloroasetofenon dan 4-
metoksibenzaldehida dengan rendemen
sebanyak 84,54 %. Hasil pengujian
bioaktivitas dan antioksidan menggunakan
metode BSLT (Brine Shrimp Lethality
Test) dan metode DPPH (2,2 diphenyl-1-
picrylhydrazyl) disimpulkan bahwa
senyawa klorokalkon memiliki aktivitas
antioksidan sangat kuat dengan nilai LC 50
75,07 ppm dan IC50 45,99 ppm.
.
UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terimakasih saya haturkan
kepada Laboratorium Riset dan
Pengembangan Kefarmasian FARMAKA
TROPIS Fakultas Farmasi Universitas
Mulawarman, Laboratorium Kimia
Organik FMIPA UGM Yogyakarta, dan
Lembaga Penyakit Tropis UNAIR
Surabaya yang telah membantu
menganalisis senyawa hasil sintesis.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Belsare, D.P., Pal S.C., Kazi, A.A.,
Kankate, R.S., and Vanjari S.S., 2010,
Evaluation of Antioxidant Activity of
Chalcones and Flavonoids. Journal of
Chemistry Technology Research. 2 (2).
1080-1089.
[2] Sridhar, S., Dinda, S.C., and Prasad,
Y.R. 2011. Synthesis and Biological
Evaluation of Some New Chalcones
Containing 2,5-Dimethylfuran Moiety.
E-Journal of Chemistry, 8(2) :541-546.
[3] Ningsih, Indah F., Balatif, Nur., dan
Jasril. 2014. Sintesis Kalkon Turunan
Piridin dari Asetiltiopen dan
Piridinkarbaldehid serta Uji
Antioksidan Menggunakan Metode
DPPH. JOM FMIPA, 1(2) :105-111.
[4] Perdana, F., 2013, Sintesis dan Uji
Toksisitas Beberapa Senyawa Analog
Kalkon Turunan Metoksi. Skripsi.
Universitas Riau, Pekanbaru.