LAPORAN RESMI

APLIKASI MIKROBIOLOGI INDUSTRI

“ISOLASI JASAD RENIK”

GRUP E
SESI C3

NABILAH PRATAMA PUTRI 19031010129

Tanggal Percobaan : 02 NOVEMBER 2021

LABORATORIUM PENGANTAR TEKNIK KIMIA II

PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA
FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS PEMBANGUNAN NASIONAL “VETERAN”
JAWA TIMUR
SURABAYA
2021
 ISOLASI JASAD RENIK

KATA PENGANTAR

Puji syukur penyusun panjatkan kepada Tuhan yang Maha Esa, atas berkat
dan rahmat-Nya, sehingga penyusun dapat menyelesaikan Laporan Resmi
Pengantar Teknik Kmia II dengan judul “Isolasi Jasad Renik”
Laporan Resmi ini merupakan salah satu tugas mata kuliah praktikum
Pengantar Teknik Kmia II yang diberikan pada semester V. Laporan ini disusun
berdasarkan pengamatan hingga perhitungan dan dilengkapi dengan teori dari
literatur serta petunjuk asisten pembimbing yang dilaksanakan pada tanggal 02
November 2021.
Laporan hasil praktikum ini tidak dapat tersusun sedemikian rupa tanpa
bantuan baik sarana, prasarana, pemikiran, kritik dan saran. Oleh karena itu, tidak
lupa penyusun ucapkan terima kasih kepada:
1. Ir. Caecilia Pudjiastuti, M.T. selaku Kepala Laboratorium Pengantar Teknik
Kimia II dan A.R Yelvin Sunarti, ST, MT selaku dosen pembimbing
praktikum.
2. Seluruh asisten dosen yang membantu dalam pelaksanaan praktikum
3. Rekan – rekan mahasiswa yang membantu dalam memberikan masukan-
masukan dalam praktikum.
Tidak ada gading yang tak retak, tidak ada sesuatu yang sempurna, kecuali
yang Maha Sempurna. Oleh karena itu, penyusun sangat menyadari dalam
penyusunan laporan ini masih banyak kekurangan. Maka dengan rendah hati,
penyusun selalu mengharapkan kritik dan saran, Seluruh asisten dosen yang turut
membantu dalam pelaksa kesempurnaan laporan ini. Akhirnya penyusun berharap
penyusun mengharapkan semua laporan praktikum yang telah disusun ini dapat
bermanfaat bagi kita semua khususnya bagi mahasiswa Fakultas Teknik
khususnya jurusan Teknik Kimia.
Jombang, 05 November 2021

Penyusun

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI i
 ISOLASI JASAD RENIK

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR............................................................................................................... i
DAFTAR ISI.......................................................................................................................... ii
DAFTAR TABEL .................................................................................................................. iv
DAFTAR GAMBAR............................................................................................................... v
BAB I...................................................................................................................................2
PENDAHULUAN ..................................................................................................................2
I.1 Latar Belakang ....................................................................................................2
I.2 Tujuan ................................................................................................................2
I.3 Manfaat ..............................................................................................................2
BAB II..................................................................................................................................3
TINJAUAN PUSTAKA ...........................................................................................................3
II.1 Secara Umum .........................................................................................................3
II.2 Fungsi dan Tujuan Isolasi Jasad Renik ................................................................3
II.2.1 Pengertian Biakan Murni ................................................................................3
II.2.2 Koloni Bakteri .................................................................................................4
II.2.3 Bentuk Koloni .................................................................................................4
II.2.4 Sifat-sifat Koloni .............................................................................................4
II.2.5 Identifikasi Bakteri ..........................................................................................6
II.2.6 Metode Isolasi Jasad Renik (buku) .................................................................7
II.2.7 Perhitungan TPC .............................................................................................8
II.2.8 Hal Hal Yang Harus Diperhatikan dalam Iaolasi Jasad Renik ...........................9
II.2.9 Aplikasi Isolasi Jasad Renik .............................................................................9
II.3 Faktor yang Mempengaruhi .............................................................................10
II.4 Sifat Bahan .......................................................................................................12
BAB III...............................................................................................................................15
PELAKSANAAN PRAKTIKUM .............................................................................................15
III.1 Waktu dan Tempat ...........................................................................................15
III.2 Bahan ...............................................................................................................15
III.3 Alat ...................................................................................................................15
III.4 Gambar Alat .....................................................................................................15

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI ii
 ISOLASI JASAD RENIK

III.5 Prosedur dan Diagram Alir Percobaan .............................................................17

III.5.1 Prosedur Percobaan .....................................................................................17
III.5.2 Diagram alir ..................................................................................................18
BAB IV ..............................................................................................................................19
HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................................................19
IV.1 Hasil Pengamatan .............................................................................................19
IV.2 Pembahasan .....................................................................................................19
BAB V ...............................................................................................................................22
KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................................................22
V.1 Kesimpulan ............................................................................................................22
V.2 Saran ......................................................................................................................22
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................................23
LEMBAR DATA ..................................................................................................................25
LAMPIRAN ........................................................................................................................28

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI iii

 ISOLASI JASAD RENIK

DAFTAR TABEL

Tabel IV. 1 Pengamatan Pembuatan Media .......................................................... 19

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI iv
 ISOLASI JASAD RENIK

DAFTAR GAMBAR

Gambar II. 1 Ukuran Koloni Bakteri .................................................................... 5

Gambar II. 2 Warna Pigmen Koloni ...................................................................... 5
Gambar II. 3 bentuk, pinggiran, elevasi koloni ....................................................... 6
Gambar II. 4 koloni bakteri yang transparan dan yang opaque ............................. 6

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI v
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI vi
 ISOLASI JASAD RENIK

BAB I
PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Banyak industri saat ini yang memerlukan peranan mikroba dalam kegiatan
produksinya. Namun, tentunya tidak semua mikroba yang dipergunakan hanya
mikroba dengan spesies tertentu saja. Sementara itu, mikroba yang terdapat di
alam semesta terdiri dari berbagai jenis. Identifikasi terhadap mikroba akan sulit
dilakukan apabila mikroba yang ingin diidentifikasi hidup dengan mikroba
dengan jenis lainnya. Persoalan tersebut dapat diatasi dengan teknik pemisahan.
Teknik pemisahan ini dikenal dengan teknik isolasi. Teknik isolasi merupakan
pengambilan mikroba dari campuran biakan sehingga menghasilkan kultur murni.
Salah satu industri yang menerapkan teknik isolasi adalah industri
pembuatan asam asetat. Industri pembuatan asam asetat memerlukan mikroba
yaitu bakteri asam asetat. Bakteri asam asetat dapat diambil dari isolasi bakteri
dari nipah. Isolasi bakteri asam asetat dari nipah dilakukan dengan metode teknik
kultur diperkaya. Oleh karena itu, percobaan isolasi jasad renik perlu dilakukan
agar praktikan dapat mengetahui proses isolasi jasad renik.

I.2 Tujuan
1. Untuk mengetahui cara pemurnian salah satu jasad renik
2. Untuk mengetahui bentuk mikroskopis dari jasad renik yang diisolasi
3. Untuk mengetahui morfologis makroskopik jasad renik yang diisolasi

I.3 Manfaat
1. Agar praktikan dapat mengetahui jenis jenis metode isolasi jasad renik

2. Agar praktikan dapat mengetahui pengaplikas ian isolasi jasad renik

3. Agar praktikan dapat mengetahui faktor yang mempengaruhi isolasi jasad

renik

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 2
 ISOLASI JASAD RENIK

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Secara Umum

Ada berbagai jenis mikroba yang ada di alam semesta. Mikroba ada yang
bermanfaat dan ada yang merugikan, untuk membedakan jenis mikroba yang
menguntungkan dan merugikan sangat sulit. Dalam kasus terssebut pemisahan
menjadi solusi. Pemisahan ini lebih dikenal dengan isolasi. Teknik isolasi
mikroba adalah upaya menumbuhkan mikroba di luar lingkungan alaminya.
Prinsip isolasi mikroba ialah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba
lain yang berasal dari campuran berbagai mikroba. Teknik ini bisa dilakukan
dengan menumbuhkannya di media padat, sel mikroba akan membentuk koloni
sel yang tetap di tempatnya. (Badaring, 2020).

II.2 Fungsi dan Tujuan Isolasi Jasad Renik

Isolasi mikroba bertujuan untuk memperoleh biakan murni dengan cara
memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya dari campuran
biakannya yang terdapat di alam . Fungsi dari isolasi jasad renik ini digunakan
untuk mengidentifikasi atau mengetahui sifat-sifat morfologi, biokimia,
molekuler dari bakteri (Putri, 2018).

II.2.1 Pengertian Biakan Murni

Biakan adalah mikroorganisme yang aktif tumbuh dalam media nutrient.
Biakan murni adalah sekumpulan mikroorganisme yang terdiri dari hanya 1
spesies yang rumbuh dalam media nutrient. Kultur murni ialah kultur yang
mikrobanya bersal dari pembelahan sel tunggal. Kultur murni dibutuhkan
untuk mempelajari morfologi dan fisiologi organisme. (Salle, 1943).

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 3
 ISOLASI JASAD RENIK

II.2.2 Koloni Bakteri

Koloni bakteri merupakan sekelompok bakteri yang dapat dilihat dengan
mata. Koloni bakteri dapat berbentuk bulat, tak beraturan, dengan permukaan
cembung, cekung atau datar serta tepi koloni rata atau bergelombang.
Morfologi koloni bakteri perlu diamati untuk mempermudah dalam proses
identifikasi bakteri karena sifat-sifat koloni bakteri dapat menentukan jenis
bakteri tersebut. (Holderman, 2017).

II.2.3 Bentuk Koloni

Menurut Pujiati pada tahun 2015 , bentuk koloni yang tumbuh pada agar
agar lempengan , pada agar-agar miring, dan pada tusukan gelatin antara
lain:
1. Bentuk koloni pada agar lempengan
Bentuk koloni diluksiskan sebagai titik-titik, bulat, berbenang, tidak
teratur.
2. Bentuk koloni pada agar miring
Bentuk dan tipe koloni dinyatakan seperti pedang, serupa duri, serupa
tasbih, serupa titik titik, serupa batang dan serupa akar.
3. Bentuk koloni tusukan dalam gelatin
Bentuk koloni yang tidak mengencerkan gelatin , dapat berupa pedang,
bertonjol-tonjol, serupa batang. Jika bakteri yang mampu
mengencerkan gelatin, bentuk koloninya berupa kawah, berupa
mangkuk, serupa corong, serupa pundi-pundi, berlapis.

II.2.4 Sifat-sifat Koloni

1. Ukuran Koloni
Ukuran koloni bermacam macam yaitu titik /punctiform, small (kecil),
moderate (sedang), large (besar).

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 4
 ISOLASI JASAD RENIK

Gambar II. 1 Ukuran Koloni Bakteri

2. Pigmentasi
Mikroorganisme dapat menghasilkan pigmen. Warna pigmen yang
dapat dihasilkan yaitu putih, kuning, merah, ungu.

Gambar II. 2 Warna Pigmen Koloni

3. Bentuk, pinggiran , elevasi

Bentuk koloni bakteri ada yang sirkuler (bulat bertepi) ireguler (tidak
beraturan, bertepi) dan yang rhizoid (berbentuk seperti akar dan
pertumbuhannya menyebar. Sedangkan dilihat dari tepi atau
pinggirannya, koloni bakteri ada yang memiliki tepi yang rata (entire),
tepi yang berlekuk (lobate). Tepi yang bergelombang (undulate), tepi
yang bergerigi (serrate) dan tepi yang menyerupai benang
(filamentous). Jika dilihat dari elevasi atau ketinggian pertumbuhan
koloni bakteri, maka bentuk koloni dapat dibedakan menjadi : Koloni
flat, jika ketinggian tidak terukur, nyaris rata dengan medium, raised :
ketinggian nyata terlihat, namun rata pada seluruh permukaan, convex,
peninggian koloni berbentuk cembung seperti tetesan air dan umbonate

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 5
 ISOLASI JASAD RENIK

jika peninggian koloni berbentuk cembung dibagian tengah lebih

menonjol.

Gambar II. 3 bentuk, pinggiran, elevasi koloni

4. Karakteristik Optik
Berdasarkan jumlah cahaya yang dapat ditembus koloni, maka koloni
ada yang bersifat opaque (tidak dapat ditembus cahaya) , translucent
(sebagian tembus cahaya) , transparan (bening).

Gambar II. 4 koloni bakteri yang transparan dan yang opaque

(Putri, 2017)
II.2.5 Identifikasi Bakteri
Proses identifikasi bakteri dapat dilakukan dengan cara mengamati
morfologi koloni secara mikroskopis dan makroskopis. Jika dilihat secara
makroskopis meliputi bentuk koloni, warna, tepi dan elevasi. Jika dilihat

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 6
 ISOLASI JASAD RENIK

secara mikrokopis diamati bentuk sel dn ukuran sel. Selain itu, proses
identifikasi bakteri juga dapat dilakukan dengan cara pewarnaan. Pewarnaan
ini didasarkan apakah dinding peptidoglikan bakteri tipis atau tebal.
Prinsipnya yaitu apabila bakteri gram positif maka ketika dilakukan
perwarnaan dengan kristal violet, bakteri akan menyerap zat warna tersebut
sehingga bewarna ungu. Hal ini dikarenakan bakteri gram positif memiliki
peptidoglikan yang tebal. Saat peluruhan dengan alkohol, pori-pori dinding
sel menyempit dan terjadi dekolorisasi sehingga dinding sel tetap menahan
kristal violet. Bakteri gram negative memiliki 3 dinding sel lapisan, sehingga
lipid akan tercuci bersamaan dengan pewarnaan kristal violet kemudian akan
menyerap zat warna akhir yaitu oleh pewarna safranin sehingga menghasilkan
warna merah (Putri, 2018).

II.2.6 Metode Isolasi Jasad Renik (buku)

Macam-macam metode mengisolasi mikroba :
1. Serial dilution
Pada teknik ini, isolasi didasarkan pengenceran bertingkat untuk
memperkecil jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan. Penentusn
banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah
mikroba dalam sampel. Digunakan perbandingan 1:9 untuk sampel dan
pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga untuk pengenceran
berikutnya mengandung 1/10 sel mikroba dari pengenceran sebelumnya.
2. Spread Plate Method
Teknik ini merupakan teknik isolasi mikroba dengan cara
mengmindahkan suspense bakteri secara aseptis ke permukaan media
yang telah memadat dalam cawan petri kemudian terbarkan kultur bakteri
tersebut secara merata dengan spreader.
3. Pour Plate
Teknik ini merupakan teknik isolasi untuk menyebarkan sel sel bakteri
tidak hanya pada permukaan medium agar saja melainkan sel terendam
dalam medium agar. Sel yang tumbuh di permukaan agar maka kaya

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 7
 ISOLASI JASAD RENIK

oksigen sedangkan sel yang tumbuh di dalam agar maka kandungan

oksigen sedikit. Teknik ini menggunakan media agar yang hangat atau
masih belum padat yang dituang bersama suspense bakteri ke petridish
kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat.
4. Streak Plate
Teknik ini dilakukan dengan cara menggoreskan suspensi bahan ynag
mengandung mikroorganisme ke permukaan medium yang agar.
Penggoresan sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Bakteri
yang memiliki flagella seringkali membentuk koloni yang menyebar
terutama bila digunakan medium basah. Pencehaga terjadinya
penyebaran koloni harus digunakan lempengan agar yang benar benar
kering. (Tim Dosen Mikrobiologi, 2020).
5. Single Cell
Metode isolasi sel tunggal dilakukan untuk mengisolasi sel
mikroorganisme berukuran besar yang tidak dapat diisolasi dengan
metode agar atau medium cair. Sel mikroorganisme dapat dilihat dengan
menggunakan perbesaran sebesar 100 kali. Sel kemudian dipisahkan
dengan menggunakan pipet kapilar atau micromanipulator secara aseptis.
6. Selective media
Isolasi meida selektif yaitu dengan menumbuhkan mikroba dalam media
selektif (media yang mengandung zat kimia tertentu yang dapat
menghambat pertumbuhan satu kelompok mikroba atau lebih tanpa
menghambat pertumbuhan bakteri yang diinginkan (Yunilas, 2017).

II.2.7 Perhitungan TPC

Total Plate Count adalah semua koloni yang tumbuh pada media NA
.Jumlah koloni bakteri yang dihitung pada cawan petri adalah berjumlah antara
25-250 koloni. Setelah itu jumlah yang diperoleh dikalikan dengan
pengencerannya. Cara perhitungan TPC yaitu : Jumlah bakteri pada cawan
petri x 1/ faktor pengenceran. Total Plate Count ini biasanya digunakan ketika
menggunakan metode isolasi serial dilute (Palawe, 2018).

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 8
 ISOLASI JASAD RENIK

II.2.8 Hal Hal Yang Harus Diperhatikan dalam Iaolasi Jasad Renik
1. Sifat setiap jenis mikroba yang akan diisolasi
2. Medium pertumbuhan yang sesuai
3. Cara menginokulasi mikroba
4. Cara menguji bahwa mikroba yang terisolasi telah dalam bentuk ultur
murni dan sesuai apa yang diinginkan
5. Cara mempertahankan mikroba yang diisolasi tetap murni
(Yunilas, 2017)

II.2.9 Aplikasi Isolasi Jasad Renik

Aplikasi isolasi jasad renik dapat diterapkan untuk memperoleh
bakteri asam asetat. Bakteri asam asetat merupakan sekelompok bakter
gram negative yang obligat aerobic. Bakteri ini biasanya ditemukan dalam
berbagai bahan yang mengandung gula. Bakteri asam asetat dapat
ditemukan pada campuran madu dengan lebahnya. Isolasi bakteri asam
asetat dapat menggunakan metode media selektif diperkaya. Sample
ditempatkan dalam media yang mengandung 0,5 % glukosa, 2 % gliserol,
1% ekstrak yeast, 1% pepton, 1,5 % ekstrak kentang, 4% ethanol. Setelah
itu dilakukan inkubasi selama 1 minggu pada suhu 37 ℃. Setelah itu,
isolate atau kultur murni diuji karakteristik morfologi, fisiologi, dan
biokimis menurut Bergey’s Manual of Dterminative Bacteriology
(Kappeng, 2009).

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 9
 ISOLASI JASAD RENIK

II.3 Faktor yang Mempengaruhi

Faktor yang mempengaruhi isolasi jasad renik sebagai berikut :

1. Nutrisi
Nutrisi merupakan substansi yang diperlukan untuk biosintesis dan
pembentukan energi.
2. pH
Peningkatan penurunan konsentrasi kation H menyebabkan ionisasi gugus
dalam protein, amno. karboksilat sehingga terjadi denaturasi protein.
3. Suhu
Suhu menentukan aktivitas enzim yang telibat, pada temperature yang
terlalu tinggi maka akan terjadi denaturasi protein sedangkan pada
temperature yang terlalu rendah bagi mikroorganisme aktivitas enzim akan
terhenti
4. Oksigen
Kebutuhan oksigen dapat dibagi menjadi 4 golongan yaitu aerob mutlak
oksigen sebagai syarat utama metabolisme, anaerob mutlak tidak
mentoleransi adanya oksigen atau akan mati bila ada oksigen, anaerob
fakultatif, mampu tumbuh baik dalam suasanan dengan atau tanpa
oksigen, mikroaerofilik hanya tumbuh baik pada oksigen yang rendah.
5. Tekanan Osmotik
Dalam larutan hipotonik air akan masuk ke dalam sel mikroorganisme,
sedangkan dalam larutan hipertonik air akan keluar dari dalam sel
sehingga terjadi plasmolysis dan menyebabkan sel secara metabolic tidak
aktif.
6. Tekanan Hidrostatis
Bakteri yang hidup pada tekanan akan mati, jika berada dalam
laboratorium selama beberapa jam pada tekanan atmosfer yang dinamakan
barophiles. Tekanan tinggi dibutuhkan untuk menjaga molekul enzim
dalam konfigurasi 3 dimensi yang sesuai. Tanpa adanya tekanan tinggi,

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 10
 ISOLASI JASAD RENIK

enzim akan kehilangan bentuk dan denaturasi sehingga organisme akan

mati.
7. Kandungan air
Semua sel yang aktif bermetabolisme membutuhkan lingkungan air.
Kebanyakan sel vegetative hanya hidup beberapa jam tanpa adanya
kelembaban.

(Black, 2005)

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 11
 ISOLASI JASAD RENIK

II.4 Sifat Bahan

II.4.1 Aquadest
A. Sifat fisika
1. Fase : cair
2. Warna : tidak berwarna
3. Spesific gravity :1
4. Titik lebur :0℃
5. Titik didih : 100 ℃
B. Sifat Kimia
1. Rumus molekul : H2O
2. Berat molekul : 18, 02 g/mol
(Perry,1997 “Water”)
C. Fungsi : sebagai pelarut dalam pembuatan media nutrient agar

II.4.2 Ethanol
A. Sifat Fisika
1. Fase : Cair
2. Warna : Tidak berwarna
3. Titik didih : 78,4 ºC
4. Titik lebur : -112 ºC
5. Specific gravity : 0,789
B. Sifat Kimia
1. Rumus molekul : CH3CH2OH
2. Berat molekul : 46,07 gr/mol
(Perry, 1997 “Ethyl alcohol”)
C. Fungsi : Sebagai bahan untuk sterilisasi alat

II.4.3 Ekstrak daging

A. Sifat fisika
1. Fase : padat
2. Warna : merah

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 12
 ISOLASI JASAD RENIK

B. Sifat Kimia
1. Kadar air : 65-80%
2. Kadar lemak : 1,5-13%
3. Kadar protein : 16-22%
4. Kadar karbohidrat : 0,5 %
5. Kadar nitrogen : 1,5 %
(Fausiah, 2018)
C. Fungsi : sebagai sumber protein

II.4.4 Pepton
A. Sifat fisika
1. Fase : Padat
2. Warna : Putih
B. Sifat Kimia
1. Kadar air : 8,95 %
2. Kadar abu : 5,26 %
3. Kadar protein : 74,36 %
4. Kadar lemak : 0,08 %
5. Kadar karbohidrat : 1-3%
(Barokah, 2017 )
C. Fungsi : sebagai sumber utama nitrogen

II.4.5 Agar-agar
A. Sifat fisika
1. Fase : padat
2. Viskositas : 2 - 10 mPa.s
3. Titik beku : 35-59 ℃
4. Titik lebur : 85-95 ℃
5. Kelarutan : larut dalam air mendidih
B. Sifat Kimia
1. Bobot molekul : 5000-150000

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 13
 ISOLASI JASAD RENIK

2. Stabilitas : stabil panas pada pH>5

(Rasyid, 2004)
C. Fungsi : sebagai bahan pemadat media

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 14
 ISOLASI JASAD RENIK

BAB III

PELAKSANAAN PRAKTIKUM

III.1 Waktu dan Tempat

Pelaksanaan percobaan” Isolasi Jasad Renik” dilaksanakan pada hari
Selasa, 02 November 2021 pada pukul 08.00 WIB sampai 16.00 WIB secara
daring di kediaman masing-masing.

III.2 Bahan
Bahan yang digunakan adalah aquadest, etanol, ekstrak daging, pepton,
agar-agar

III.3 Alat
Alat yang digunakan adalah pipet, neraca analitik, mortar, deck glass,
object glass, erlenmeyer, corong kaca, spatula, petridish, kaca arloji, autoclave,
ose, mikroskop, kompor listrik, inkubator, bunsen, laminar air flow.

III.4 Gambar Alat

Pipet tetes Mortar dan alu Deck glass Object glass

Erlenmeyer Corong kaca Spatula Petridish

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 15
 ISOLASI JASAD RENIK

Jarum ose Bunsen Mikroskop

Neraca analitik

Inkubator Kompor

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 16
 ISOLASI JASAD RENIK

Laminar air flow Autoclave

III.5 Prosedur dan Diagram Alir Percobaan

III.5.1 Prosedur Percobaan
1) Siapkan media yang sudah disterilkan dalam petridist yang steril.
2) Tunggulah media ini sampai cukup keras (padat) dengan suhu ± 37 ℃
3) Ambillah 1 ose suspensi dan campuran dan goreskanlah ke permukaan
media maksud goresan ini untuk mendapatkan deretan koloni yang kita
kehendaki serta memudahkan isolasi selanjutnya.
4) Inkubasikanlah selama 48 jam.
5) Amatilah koloni yang terjadi.
6) Isolasilah masing-masing koloni, dengan menanamnya pada masing-
masing petridist lagi.
7) Isolasi ini dikerjakan dua-tiga kali, sampai diperoleh culture murni.

Isolasi I : Petridist pertama

Isolasi II : Petridist kedua

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 17
 ISOLASI JASAD RENIK

8) Bila telah mendapatkan culture yang murni, transferlah kedalam media

agar miring dalam tabung.

III.5.2 Diagram alir

Sterilisasi ose dan petridish (berisi jasad renik)

Proses pengambilan suspensi

Sterilisasi media

Penggoresan suspensi ke media

Sterilisasi ose dan petridish

Inkubasi selama 48 jam

Pengamatan hasil koloni

Ulangi proses isolasi

kultur murni

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 18
 ISOLASI JASAD RENIK

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Pengamatan

Tabel IV. 1 Pengamatan Pembuatan Media

Isolasi Media Mikroorganisme Gambar Keterangan

Yeast Perbesaran
lensa objektif
40 x dan lensa
Isolasi 1 Media Agar
okuler 10 x,
berkoloni,
kokus

Perbesaran
lensa objektif
Isolasi 2 Media Agar Yeast 40 x dan lensa
okuler 10x,
kokus

IV.2 Pembahasan
Pada percobaan, isolasi jasad renik dilakukan dengan menggunakan teknik
gores. Pertama, sterilkan ose dan petridish berisi jasad renik, kemudian ambil 1
ose suspense lalu goreskan ke media agar yang sudah disterilisasi. Media yang
digunakan merupakan media agar. Media ini termasuk media umum bukan
media spesifik sehingga dalam pengaplikasiannya dalam isolasi yeast perlu

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 19
 ISOLASI JASAD RENIK

ditambahkan nutrisi seperti pepton dan ekstrak daging. Hal ini dilakukan agar
mikroba yang tumbuh hanya mikroba yang diinginkan saja yaitu yeast.
Selanjutnya sterilisasi dan simpan dalam keadaan petridish terbalik. inkubasi
dilakukan selama 48 jam dalam laminar air flow. Setelah inkubasi, hasil koloni
diamati dengan mikroskop dengan perbesaran lensa objektif 40 x dan lensa
okuler 10 x. Isolasi dilakukan kembali sebanyak 2-3 kali hingga diperoleh
kultur murni.
Berdasarkan tabel IV.1 diperoleh pengamatan secara mikroskopik terhadap
hasil isolat yaitu pada isolasi pertama berbentuk kokus dan berkoloni serta
pada isolasi kedua berbentuk kokus. Hasil ini menunjukkan bahwa pada
percobaan ini, proses isolasi berhasil memperoleh kultur murni yang dicirikan
dengan mikroba tampak mirip secara mikroskopik. Pengamatan morfologi
koloni selain bisa dilihat dari sudut pandang mikroskopik juga dapat dilihat
dari sudut pandang makroskopik. Berdasarkan hasil pengamatan secara
makroskopik dari isolate yeast yang telah diisolasi memilki warna koloni putih
susu, tepian rata atau halus, dan koloni bersifat opaque (tidak tembus cahaya).
Hasil pengamatan yang diperoleh dari percobaan telah sesuai dengan teori yang
dinyatakan oleh Simbolon pada tahun 2018. Untuk yeast, secara makroskopik
memiliki ciri ciri koloni berwarna putih susu atau putih kekuningan, memiliki
spora dan tidak berlendir. Selain itu, isolat yang telah diisolasi memiliki bentuk
bulat, dengan diameter 1mm, tepiannya rata atau halus, sudut elevasi konveks,
bentuk sel berantai. Sementara itu, secara mikroskopik, koloni berbentuk bulat,
oval pendek dan oval dengan ukuran sebesar 3-5 mikrometer.
Faktor faktor yang mempengaruhi hasil percobaan isolasi jasad renik
menurut (Black, 2005) yaitu nutrisi, pH, suhu, oksigen , sterilisasi, dan waktu
inkubasi. Nutrisi yang terkandung dalam media harus sesuai yang diperlukan
oleh mikroba. Dari nutrisi tersebut juga memudahkan proses isolasi karena
mikroba lain akan mati karena nutrisi yang ada tidak sesuai dengan
kebutuhannya. Suhu harus disesuaikan dengan mikroba yang digunakan,
apabila suhu terlalu rendah maka aktivitas enzim akan berlangsung lambat
sedangkan apabila suhu terlalu tinggi akan menyebabkan denaturasi. Oksigen

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 20
 ISOLASI JASAD RENIK

disesuaikan dengan kebutuhan mikroba apakah mikroba membutuhkan

oksigen, sedikit oksigen atau tidak membutuhkan sama sekali oksigen.
Sterilisasi ialah salah satu faktor terpenting karena proses ini mencegah
terjadinya kontaminasi pada hasil kultur murni. Waktu inkubasi juga
mempengaruhi hasil percobaan. Waktu inkubasi harus dilakukan selama waktu
optimalnya, pada yeast sebaiknya dilakukan selama 48 jam. Apabila waktu
inkubasi terlalu singkat maka pertumbuhan mikroba akan tidak mencapai
maksimumnya sedangkan apabila terlalu lama maka pertumbuhan mikroba
akan semakin menurun.

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 21
 ISOLASI JASAD RENIK

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

V.1 Kesimpulan
Berdasarkan data-data dari hasil percobaan yang diperoleh, maka dapat
disimpulkan sebagai berikut :

1. Proses isolasi jasad renik meliputi menyiapkan media yang sudah steril,
kemudian mikroba yang akan diisolasi digoreskan ke media, inkubasi
selama 48 jam, amati koloni, lakukan isolasi 2-3 kali hingga diperoleh
kultur murni
2. Hasil pengamatan secara mikroskopik terhadap hasil isolat yaitu pada
isolasi pertama berbentuk kokus dan berkoloni serta pada isolasi kedua
berbentuk kokus.
3. Hasil pengamatan secara makroskopik dari isolate yeast yang telah
diisolasi memilki warna koloni putih susu, tepian rata atau halus, dan
koloni bersifat opaque (tidak tembus cahaya).

V.2 Saran
1. Sebaiknya media yang digunakan dalam percobaan isolasi jasad renik
menggunakan media selektif agar diperoleh hasil isolasi yang maksimal
2. Sebaiknya alat yang digunakan sebelum dan setelah isolasi disterilisasi
untuk mencegah adanya kontaminan.

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 22
 ISOLASI JASAD RENIK

DAFTAR PUSTAKA

Badaring, D.R 2020,‟Identifikasi Morfologi Mikroba Pada Ruangan Water Closet

Jurusan Biologi Universitas Negeri Makassar‟, Prosiding Seminar
Nasional Biologi FMIPA

Black, J.G 2005, Microbiology Principles and Explorations 7th Ed, Willey Sons,
New York

Barokah, G.R 2017,‟Karakteristik Mikroenkapsul Pepton Ikan Hasil Tangkapan

Samoingan Multispesies Busuk dengan Metode Spray Drying‟, JPHPI,
Vol.20, No.2

Fausiah, A 2018,‟Karakteristik Kualitas Kimia Daging Sapi Bali di Pasar

Tradisional‟, Jurnal Ilmu Pertanian, Vol. 3, No.8

Holderman, M.V 2017,‟Identifikasi Bakteri Pada Pegangan Eskalator Di Salah

Satu Pusat Perbelanjaan di Kota Manado‟, Jurnal Ilmiah Sains, Vol.17,
No.1

Kappeng, K 2019,‟Isolation of acetic acif bacteria from honey‟,Mejo.Int.J. Sci.

Technol, Vol..3

Palawe, J 2018,‟ TPC (TOTAL PLATE COUNT), WAC (WATER

ADSORBTION CAPACITY) ABON IKAN SELAR DAN COOKING
LOSS DAGING IKAN SELAR (SELAROIDES LEPTOLESIS)‟, Jurnal
Ilmiah Tindalung , Vol.4, No.2

Perry, R.H 1997, Perry’s Chemical Engineering Handbook 7 th Ed, Mc Graw-

Hill, New York

Pujati, 2012, Mikrobiologi Umum, IKIP, Madiun

Putri , M.H 2017, Mikrobiologi Keperawatan, Kementrian Kesehatan RI, Jakarta

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 23
 ISOLASI JASAD RENIK

Putri, A.L 2018, „Isolasi dan identifikasi bakteri asam laktat dari pangan
fermentasi berbasis ikan (Inasua) yang diperjualbelikan di Maluku-
Indonesia‟, Jurnal Biologi Tropika, Vol.1, No.2

Rasyid, A 2004,‟ Beberapa Catatan Tentang Agar‟, Osean, Vol. XXIX, No. 2

Salle, A.J 1943, Fundamental Principles of Bacteriology, Mc Graw Hill, New

York

Simbolon, N.C 2018,‟Isolasi dan Karakteristik Khamir Potensial Penghasil

Bioetanol Dari Industri Arak di Karangasem Bsli‟, Jurnal Rekayasa dan
Manajemen Agro Industri, Vol.6 , No.4

Tim Dosen Mikrobiologi, 2020, Mikrobiologi Umum, UINMA, Malang

Yunilas, 2017, Mikrobiologi Peterrnakan, USU, Medan

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 24
 ISOLASI JASAD RENIK

LEMBAR DATA

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 25
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 26
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 27
 ISOLASI JASAD RENIK

LAMPIRAN

Yeast dalam media agar yang akan Yeast dalam media agar hasil isolasi 1
diisolasikan pada isolasi 1 yang akan diisolasikan pada isolasi 2

Proses pengambilan yeast hasil isolasi Proses pengamatan mikroskopi pada

untuk diamati yeast yang sudah diisolasikan

Hasil pengamatan mikroskopis isolasi 1 Hasil pengamatan mikroskopis isolasi 2

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 28
 ISOLASI JASAD RENIK

LITERATUR

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 29
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 30
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 31
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 32
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 33
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 34
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 35
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 36
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 37
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 38
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 39
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 40
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 41
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 42
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 43
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 44
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 45
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 46
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 47
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 48
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 49
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 50
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 51
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 52
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 53
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 54
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 55
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 56
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 57
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 58
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 59
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 60
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 61
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 62
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 63
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 64
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 65
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 66
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 67
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 68
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 69
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 70
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 71
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 72
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 73
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 74
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 75
 ISOLASI JASAD RENIK

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 76