I. ALAT DAN BAHAN 8. Botol kecil b.

Tambahkan aquadest sebanyak 324 ml lalu aduk

A. Persiapan, Pengambilan dan Pengiriman Sampel 9. Lampu spirtus hingga larut
Alat : 10. Korek api c. Pindahkan dalam tabung reaksi sejumlah 36 tabung
1. Alat makan : Piring, gelas, sendok, garpu, wajan, 11. Masker @9 ml lalu tutup menggunakan kapas
panci 12. Handscoon d. Sterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121C selama
2. Lidi kapas steril 13. Timbangan analitik 15 menit
3. Gunting 14. Inkubator
4. Lampu spirtus 15. Autoklaf 3. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
5. Korek api 16. Kapas a. Timbang NA 15,12 gram lalu masukkan erlenmeyer
6. Formulir pengambilan sampel 17. Alumunium foil b. Tambahkan aquadest sebanyak 540 ml lalu aduk, bila
7. Alat tulis 18. Kertas coklat tidak larut maka panaskan di atas kompor hingga larut
8. Masker 19. Tali rami c. Tutup menggunakan kapas dan alumunium foil
9. Handscoon 20. Etiket d. Sterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121C selama
10. Cool box Bahan : 15 menit
11. Es batu / dry ice 1. Alkohol 70%
12. Etiket 2. Nutrient Agar 4. Teknik Pengambilan Sampel Usap Alat Makan /
3. Aquadest Masak
Bahan : a. Spesimen/sampel diambil dari alat yang siap untuk
1. Alkohol 70% II. LANGKAH KERJA dipergunakan atau yang selesai dicuci
2. Kapas A. Pengambilan Sampel Usap Alat Makan / Masak b. Gunakan sarung tangan steril sebelum pengambilan
3. Media transport (NaCl 0,9%) dalam botol kecil 1. Pembuatan Media Transport (Larutan NaCl 0,9%) spesimen/sampel.
4. Sabun Desinfeksi a. Timbang NaCl 0,63 gram lalu masukkan dalam c. Tiap TPM, diambil maksimal 5 usap alat, meliputi
beaker glass usap alat piring, gelas, sendok, garpu, dan wajan
B. Pemeriksaan Sampel Alat Makan / Masak dan Rectal b. Tambahkan aquadest sebanyak 70 ml lalu aduk d. Tiap jenis alat masak/ makan yang akan diperiksa,
Swab hingga larut diambil 4-5 buah secara acak.
Alat : c. Pindahkan dalam botol kecil @10 ml lalu tutup e. Gunakan 1 lidi kapas steril untuk setiap kelompok
1. Tabung reaksi d. Sterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121C selama jenis alat tersebut
2. Pipet ukur 15 menit f. Sebagai cairan usap alat masak/makan dan media
3. Pipump / filler transport, digunakan larutan NaCl 0,9% steril
4. Petridish 2. Pembuatan Media Pengencer (Larutan NaCl 0,9%) bervolume 10 ml
5. Labu ukur a. Timbang NaCl 2,916 gram lalu masukkan dalam g. Masukkan lidi kapas steril kedalamnya.
6. Erlenmeyer beaker glass
7. Spatula
h. Lidi kapas steril dalam botol ditekan ke dinding untuk
membuang cairannya, lalu diangkat untuk melakukan
usapan
i. Cara melakukan usapan :
 Cangkir dan gelas : usapan dilakukan dengan
mengelilingi permukaan luar dan dalam bagian bibir
setinggi 6 mm, dilakukan sebanyak 3x.
 Sendok : Usapan dilakukan pada seluruh permukaan
luar dan dalam mangkok sendok sebanyak 3x.
 Garpu : usapan dilakukan pada seluruh permukaan
luar dan dalam alat penusuk. (usap bagian depan
permukaan penusuk lalu sela-sela penusuk depan
kemudian garpu dibalik dan usap bagian belakang
penusuk lalu sela-sela penusuk belakang) dilakukan
sebanyak 3x.
 Piring : Usapan dilakukan pada bagian permukaan
dalam dengan cara melakukan 2 (dua) usapan yang
satu sama lainnya saling menyilang siku-siku dari
bagian tepi piring, dilakukan sebanyak 3x. Dalam
praktikum ini menggunakan jendela swab ukuran 7 x
7 cm.
 Panci : Usapan dilakukan pada bagian permukaan
dalam dengan cara melakukan 2 (dua) usapan yang
satu sama lainnya saling menyilang siku-siku dari
bagian tepi panci, dilakukan sebanyak 3x. Dalam
praktikum ini menggunakan jendela swab ukuran 7 x
7 cm.
 Wajan : Usapan dilakukan pada bagian permukaan
dalam dengan cara melakukan 2 (dua) usapan yang
satu sama lainnya saling menyilang siku-siku dari
bagian tepi wajan, dilakukan sebanyak 3x. Dalam
praktikum ini menggunakan jendela swab ukuran 7 x
7 cm.
j. Pengusapan pada setiap bidang permukaan seperti
tersebut diatas dilakukan 3 (tiga) kali berturut-turut.
Satu lidi kapas dipergunakan untuk 1 (satu) kelompok
jenis alat yang terdiri dari 4-5 buah.
k. Pada perabot lainnya pengusapan dilakukan pada
bidang seluas 7 x 7 cm persegi atau ± 49 cm²
sebanyak 3 (tiga) kali berturut-turut. Pada 1 (satu)
kelompok jenis alat, usapan dilakukan pada luas
permukaan sebanyak 5 (lima) tempat sehingga
mencapai luas keseluruhan sebesar 5 x 7 x 7 cm
persegi = 245 cm2 luas permukaan
l. Setiap selesai mengusap 1 (satu) alat berasal dari 1
(satu) kelompok jenis alat, lidi kapas harus
dimasukkan ke dalam botol berisi larutan NaCl 0,9%,
diputar-putar dan ditekankan ke dinding untuk
membuang cairannya, lalu diangkat dan digunakan
untuk mengusap alat berikutnya.
m. Lakukan berulang-ulang sampai seluruh alat dalam 1
kelompok/ jenis alat diambil usapnya.
Dengan demikian, maka 1 (satu) kelompok jenis alat
hanya menggunakan 1 (satu) lidi kapas.
B. Pengambilan Sampel Usap Dubur (Rectal Swab)
1. Pembuatan Media EC Broth
a. Timbang EC Broth 0,37 gram lalu masukkan beaker
glass
b. Tambahkan aquadest sebanyak 10 ml lalu aduk
hingga larut
c. Lalu masukkan dalam dalam 2 tabung reaksi pendek
@5 ml lalu tutup menggunakan kapas
d. Sterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121C selama
15 menit
2. Pembuatan Media Eosyn Methylene Blue
(EMB)
a. Timbang EMB 1,62 gram lalu masukkan Erlenmeyer
b. Tambahkan aquadest sebanyak 45 ml lalu aduk
hingga larut
c. Tutup menggunakan kapas dan alumunium foil
d. Sterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121C selama
15 menit
3. Teknik Pengambilan Sampel Dubur / Rectal Swab
a. Persiapkan sarung tangan , botol berisi media
transport (larutan NaCl 0,9%), lidi kapas steril, alat
tulis, gunting, lampu spirtus, termos es, alkohol, sabun
desinfeksi.
b. Gunakan sarung tangan dengan rapi.
c. Penderita diambil usap duburnya dengan posisi
menungging, ke-2 tangan memegang masing-masing
pinggul, atau dengan cara tengkurap.
d. Pemeriksa berdiri di samping kiri (bagi yang kidal
sebaliknya) dari penderita
e. Tangan kiri pemeriksa memegang dan melebarkan
lubang anus ke arah samping kiri kanan dengan
meregangkan dengan jari tangan kiri. Kemudian
tangan kanan bersiap dengan lidi kapas steril (yang
telah dibasahi dengan medium transport) dan
dimasukkan ke dalam anus.
f. Memasukkan lidi kapas steril sepanjang 1 inchi/ 2,5
cm ke dalam sfingter (berkas otot seperti cincin yang
menutupi saluran alami ) anus. Secara hati-hati, putar
lidi kapas pada kripte anus searah jarum jam dan
ditarik dengan terus memutar ke arah yang sama
sampai lidi kapas keluar.
g. Setelah lidi kapas diluar, segera ambil dan segera
masukkan ke dalam botol yang berisi larutan NaCl
0,9%, semua dilakukan secara steril.
h. Gunting kelebihan lidi setinggi tutup botol, flambir
bibir tutup botol dengan api spirtus, lalu ditutup
rapat.
i. Beri kode sesuai dengan lembar formulir
Data-data sampel dalam formulir meliputi :
Kode Pengambilan Sampel
Nama Pengirim
Alamat Pengirim
Tanggal/ jam pengambilan sampel
Tanggal pengiriman sampel
Jenis sampel
Lokasi pengambilan sampel
Jenis pemeriksaan
Tanda tangan pengirim
Pemeriksaan spesimen / sampel dilakukan dengan
tujuan untuk mengisolasi Escherichia coli patogen.
j. Masukkan botol sampel ke dalam termos dan kirim
segera ke laboratorium untuk pemeriksaan lebih
lanjut.
C. Teknik Penanganan dan Pengiriman Sampel
1. Setelah semua kelompok/ jenis alat makan/masak dan
rectal swab selesai diusap, lidi kapas dimasukkan
kembali ke dalam botol yang berisi larutan NaCl
0,9%, ujung lidi dipatahkan, bibir botol diflambir
dengan api spirtus, lalu botol ditutup.
2. Beri label pada botol dengan menempelkan kertas
cellotip yang telah ditulis dengan spidol,
mencantumkan :
 Jenis specimen/sampel (nama alat masak/makan)
 Nama TPM
 No / Kode Specimen
 Tanggal & Waktu Pengambilan Specimen/Sampel
 Petugas Pengambil Sampel
3. Pengiriman specimen/ sampel dilakukan dalam suhu
dingin pada hari yang sama (suhu ≤ 4C)
4. Wadah tabung atau botol tersebut dimasukkan lagi
dalam wadah lain yang tidak mudah pecah dan tidak
bocor dengan diberi penyangga berupa kertas, serbuk
kayu dll
5. Bungkus wadah tersebut dan cantumkan alamat yang
dituju dengan jelas
6. Pengiriman specimen dilakukan dengan
memperhatikan sungguh-sungguh syarat pengiriman
spesimen.
7. Spesimen dikirim dengan disertai surat pengantar.
D. Pemeriksaan Sampel Usap Alat Makan/Masak dan
Rectal Swab
1. Pemeriksaan Angka Kuman Alat Makan/Masak
Spesimen/ sampel hendaknya segera diperiksa dalam
waktu < 30 menit setelah pengambilan untuk
menghindari bertambahnya jumlah kuman atau
matinya beberapa kuman dalam larutan NaCl 0,9%
tersebut.
Cara Pemeriksaan :
a. Sediakan 6 tabung reaksi berisi larutan NaCl 0,9%
dalam rak tabung. Beri tanda 10ˉ¹, 10ˉ², 10ˉ³, 10ˉ4, 10ˉ
5
dan kontrol sebagai kode pengenceran dan tanggal
pemeriksaan
b. Siapkan 6 petridish steril. Enam petridish diberi tanda
di bagian belakangnya, 1 petri diberi tanda “kontrol”
c. Kocok bahan spesimen/sampel sampai homogen.
Ambil 1 ml masukkan dalam tabung pertama dengan
pipet, dibuat sampai homogen.
d. Pindahkan 1 ml bahan dari tabung pertama ke dalam
tabung kedua dengan pipet, dibuat sampai homogen.
e. Demikian seterusnya dilakukan sampai tabung ke-5.
Pengenceran yang diperoleh pada ke-5 tabung adalah
10ˉ¹, 10ˉ², 10ˉ³, 10ˉ4, 10ˉ 5 sesuai dengan kode
pengenceran yang telah tercantum sebelumnya.
f. Dari masing-masing tabung diatas dimulai dari tabung
ke-5, dengan menggunakan pipet steril diambil 1 ml
dimasukkan kedalam masing-masing petridish steril,
sesuai dengan kode pengenceran yang sama.
g. Kemudian ke dalam masing-masing petridish dituang
Nutrient Agar yang telah dipanaskan dalam waterbath
± 45ºC sebanyak 15-20 ml. Masing-masing petridish
digoyang perlahan-lahan hingga tercampur merata
dan biarkan hingga dingin dan membeku.
h. Masukkan dalam inkubator 37ºC selama 2 x 24 jam
dalam keadaan terbalik.
i. Pembacaan dilakukan setelah 2 x 24 jam dengan cara
menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada tiap
petridish dengan alat koloni konter.
j. Catat hasilnya dan masukkan dalam rumus :
(Σ koloni – kontrol) x Pengenceran
.
Σ pengenceran x Σ alat yang diusap x Luas alat yang
diusap
2. Pemeriksaan Sampel Usap Dubur (Rectal Swab)
dengan Parameter Escherichia coli
a. Sterilkan meja yang akan digunakan untuk menanam
sampel pada media
b. Siapkan media EC Broth
c. Masukkan sampel dari media transport ke media EC
Broth sebanyak 2 mata ose, kontrol tidak diberi
perlakuan.
d. Lalu inkubasi pada inkubator selama 1 x 24 jam
e. Setelah 1 x 24 jam periksa media yang sudah ditanam
oleh sampel, apabila berwarna keruh maka lanjutkan
penanaman pada media EMB.
f. Tuang media EMB pada petridish steril sebanyak 15
ml
g. Lalu biarkan membeku
h. Dari EC Broth yang berwarna keruh ambil 1 mata ose
lalu goreskan ke media EMB
i. Lalu inkubasi pada inkubator selama 1 x 24 jam
j. Setelah 1 x 24 jam amati bila koloni yang tumbuh
berinti gelap disertai kilap logam berwarna hijau
metalik berarti sampel diduga positif bakteri E. coli
k. Setiap langkah harus dilakukan secara steril