Diagnosis trikomoniasis secara tradisional bergantung pada pengamatan mikroskopis protozoa motil

dalam vagina atau sekret serviks, prosedur yang pertama kali dijelaskan oleh Donne' in 1836 (85).
Trichomonads dapat dibedakan berdasarkan motilitas karakteristik mereka. Sensitivitas teknik ini
bervariasi dari serendah 38% hingga setinggi 82% (Hulka, B. S., and J. F. Hulka. 1967. Dyskaryosis in
cervical cytology and its relationship to trichomoniasis therapy. A double blind study. Am. J. Obstet.
Gynecol. 98:180–187; Martin, R. D., R. H. Kaufman, and M. Burns. 1963. Trichomonas vaginalis: a
statistical evaluation of diagnostic methods. Am. J. Obstet. Gynecol. 87:1024–1027. ; McCann, J. S.
1974. Comparison of direct microscopy and culture in the diagnosis of trichomoniasis. Br. J. Vener. Dis.
50:450–452).

Metode ini tentu saja merupakan tes diagnostik yang paling hemat biaya, metode ini jauh dari optimal
dalam hal keandalannya karena memiliki kepekaan yang rendah. Ini mungkin karena hilangnya motilitas
khas setelah protozoa telah dihapus dari suhu tubuh (DINO PETRIN, KIERA DELGATY, RENUKA BHATT,
AND GARY GARBER. 1998. Clinical and Microbiological Aspects of Trichomonas vaginalis. American
Society fo Mikrobiology Journals, vol 11, no 2, 300-317)

pemeriksaan dengan mikroskopis

Cara pengambilan specimen (Maryati, 2009) :

a. Sekret vagina
1) Menjelaskan prosedur yang akan dilakukan.
2) Mempersiapkan alat dan bahan.
3) Mencuci tangan dengan sabun dan air mengalir.
4) Gunakan sarung tangan.
5) Buka labia mayor dengan ibu jari dan jari telunjuk.
6) Mengambil sekret vagina dengan kapas lidi.
7) Menghapuskan sekret vagina pada objek glass yang disediakan.
8) Kemudian diperiksa.
b. Sampel Urine
1) Menyiapkan wadah untuk menampung urin.
2) Bersihkan labia dengan air bersih.
3) Selama proses ini berlangsung, labia harus tetap terbuka.
4) Keluarkan urine, aliran urine yang pertama dibuang. Aliran urine selanjutnya ditampung dalam
wadah steril yang telah disediakan.

Cara pemeriksaan spesimen :

A. Sampel sekret vagina

1. Sediaan Langsung (Sediaan Basah)
Lidi kapas dicelupkan ke dalam 1 cc garam fisiologis, dikocok. Satu tetes larutan tersebut
diteteskan pada gelas objek, kemudian ditutup dengan kaca penutup. Spesimen pada ujung
sengkelit dimasukkan pada satu tetes garam fisiologis yang telah diletakkan pada kaca objek.
Sebelum diamati sediaan dipanaskan sebentar dengan hati-hati, untuk meningkatkan
pergerakan Trichomonas vaginalis. Pada pemeriksaan diperhatikan pula jumlah leukosit (Soper,
2004). Pemberian beberapa tetes KOH 10 – 20 % pada cairan vagina yang diperiksa, dapat
menimbulkan bau yang tajam dan amis pada 75% wanita yang positif Trichomoniasis dan infeksi
 bacterial vaginosis. Tetapi tidak pada mereka yang menderita vulvo vaginal Candidiasis untuk
menyingkirkan Bacterial vaginosis dari infeksi Trichomoniasis dapat diketahui dengan
memeriksa konsentrasi lactobacillus yang jelas berkurang pada Trichomoniasis dan pH vagina
yang basa (Ompungsu, 2004).
2. Pengecatan Giemsa (Machfoedz, 2007. Metodologi Penelitian Bidang Kesehatan, Yogyakarta.
Fitramaya) :
a) Membuat sedian apus dari sampel sekret vagina pada objek glass.
b) Fiksasi dengan metanol selama 1 menit.
c) Sebelum melakukan pengecatan buat pengenceran cat giemsa 1:1 (1 ml giemsa solution + 1
ml buffer phosphate).
d) Tempatkan sediaan pada rak pengecatan dan tuangi dengan cat giemsa yang sudah
diencerkan, diamkan selama 10 menit.
e) Cuci dengan air mengalir hapus dan bersihkan bagian bawah obyek glass kemudidan
letakkan pada rak pengering, biarkan kering.
f) Setelah kering sediaan diamati secara mikroskopis dengan obyektif 100 kali dan minyak
imersi.
B. Sampel urin :
1. Cara langsung ( cara basah ) (Machfoedz, 2007) :
a) Pindahkan urin dari pot penampung ke dalam tabung untuk disentrifus dengan kecepatan
rendah selama 5 menit.
b) Sesudah disentrifus buang supernatannya.
c) Dengan memakai pipet pastur, teteskan sehingga endapan bercampur (dengan cara
menghisap dan mengeluarkan).
d) Tuangkan 1 tetes endapan yang homogen pada obyek glass kemudian tutup dengan cover
glass.
e) Periksa secara mikroskopis dengan obyektif 10 kali. Perhatikan adanya organisme kecil,
transparan seukuran dengan sel darah putih, bergerak cepat, menyentak-nyentak bergerak
melingkar.
f) Periksa memakai obyektif 40 kali untuk mengamati Trichomonas vaginalis.
2. Pengecatan Giemsa:
a) Tempatkan 1 tetes endapan urin yang homogen pada obyek glass.
b) Buat paparan tipis dan biarkan kering.
c) Fiksasi dengan metanol selama 1 menit.
d) Sebelum melakukan pengecatan buat pengenceran cat giemsa 1:1 (1 ml giemsa solution + 1
ml buffer phosphate).
e) Tempatkan sediaan pada rak pengecatan, dan tuangi dengan cat giemsa yang sudah
diencerkan, diamkan selama 10 menit.
f) Cuci dengan air mengalir hapus dan bersihkan bagian bawah obyek glas, kemudian letakkan
pada rak pengering, biarkan kering.
g) Setelah kering sediaan diamati secara mikroskopis dengan obyektif 100 kali dan minyak
imersi.
Metode kultur kaldu adalah "standar emas" untuk diagnosis trikomoniasis karena mudah ditafsirkan dan
membutuhkan sedikitnya 300 hingga 500 trichomonad/ml inokulum (Garber, G. E., L. Sibau, R. Ma, E. M.
Proctor, C. E. Shaw, and W. R. Bowie. 1987. Cell culture compared with broth for detection of
Trichomonas vaginalis. J. Clin. Microbiol. 25:1275–1279) untuk memulai pertumbuhan dalam budaya.
Namun, ada yang melekat keterbatasan diagnosis kultur (Fouts, A. C., and S. J. Kraus. 1980. Trichomonas
vaginalis: reevaluation of its clinical presentation and laboratory diagnosis. J. Infect. Dis. 141:137– 143.).
Masa inkubasi 2 hingga 7 hari biasanya diperlukan untuk mengidentifikasi T. vaginalis dalam kultur,
selama waktu itu pasien yang terinfeksi dapat terus menularkan infeksi (Moldwin, R. M. 1992. Sexually
transmitted protozoal infections. Trichomonas vaginalis, Entamoeba histolytica, and Giardia lamblia.
Urol. Clin. North Am. 19:93–101). Juga, tidak ada sistem kultur yang tersedia secara luas untuk dokter.
Untuk meningkatkan penerimaan diagnosis dengan budaya, metode amplop plastik dirancang, yang
memungkinkan baik pemeriksaan langsung maupun budaya dalam diri sendiri sistem (Beal, C., R.
Goldsmith, M. Kotby, M. Sherif, A. el-Tagi, A. Farid, S. Zakaria, and J. Eapen. 1992. The plastic envelope
method, a simplified technique for culture diagnosis of trichomoniasis. J. Clin. Microbiol. 30: 2265–2268.
(Erratum, 31:174, 1993.)). Hasilnya sebanding dengan teknik persiapan basah dan kultur (Beal, C., R.
Goldsmith, M. Kotby, M. Sherif, A. el-Tagi, A. Farid, S. Zakaria, and J. Eapen. 1992. The plastic envelope
method, a simplified technique for culture diagnosis of trichomoniasis. J. Clin. Microbiol. 30: 2265–2268.
(Erratum, 31:174, 1993.)). Mirip dengan metode amplop plastik, sistem InPouch adalah tas dua bilik
yang memungkinkan seseorang untuk melakukan pemasangan basah langsung dengan pemeriksaan
mikroskopis melalui tas, serta kultur. Levi et al. (. Levi, M. H., J. Torres, A. Winston, C. Pina, and R. S.
Klein. 1996. Comparison of the InPouch system [IP] to Diamonds modified medium [DMM] for the
isolation of Trichomonas vaginalis [Tv]. abstr. C-110, p. 20. In Abstracts of the 96th General Meeting of
the American Society for Microbiology 1996. American Society for Microbiology, Washington, D.C.)
menunjukkan bahwa sistem InPouch setidaknya sama sensitif sebagai media modifikasi Diamond untuk
mendeteksi T. vaginalis. Borchardt et al. (41) menunjukkan bahwa sistem ini adalah secara signifikan
lebih sensitif daripada salah satu modifikasi Diamond medium atau media Trichosel. Teknik kultur sel
menggunakan berbagai garis sel untuk memulihkan T. vaginalis dari spesimen klinis (118, 164, 240).
Garber et al. (101) menggunakan sel McCoy untuk budidaya T. vaginalis dari spesimen klinis dan
menunjukkan metode ini menjadi lebih unggul dari kultur kaldu dan persiapan wet-mount sejak itu
mampu mendeteksi T. vaginalis pada konsentrasi serendah 3 organisme/ml. Namun, kultur sel tidak
dilakukan secara rutin, karena mahal dan tidak nyaman untuk cepat Diagnosis. Karena metode budidaya
relatif lambat dan persiapan wetmount kurang sensitivitas, pewarnaan parasit di apusan tetap dan tidak
tetap diperkenalkan. Teknik pewarnaan seperti jeruk acridine (92), Leishman (179), asam periodikSchiff
(250), dan Fontana (224) telah diperkenalkan untuk meningkatkan sensitivitas mikroskop langsung.
Papanicolaou (Pap) Pewarnaan memiliki daya tarik yang cukup besar dalam diagnosis trikomoniasis
karena secara rutin digunakan dalam skrining ginekologi untuk kelainan sitologi, terutama pada populasi
dengan prevalensi PMS yang tinggi (38, 179, 269). Perl (235), namun, melaporkan kesalahan 48,4%
dalam diagnosis karena positif palsu dan temuan negatif palsu ketika Pap smear digunakan sebagai satu
satunya kriteria untuk diagnosis dan pengobatan infeksi T. vaginalis. Teknik pewarnaan memiliki
keterbatasan sejak T. Vaginalis tidak selalu muncul dalam bentuk buah pir yang khas dengan flagela. Ini
sering muncul sebagai bentuk bulat menyerupai leukosit polimorfonuklear, dan kadang-kadang
karakteristik morfologis yang khas hilang selama fiksasi dan pewarnaan,
membuat identifikasi etiologi menjadi sulit (235).

Keterbatasan metode kultur dan mikroskop untuk

deteksi T. vaginalis mendorong kemajuan lebih banyak

metode canggih yang dapat mendeteksi antigen, antibodi, atau

asam nukleat dalam eksudat uretra atau vagina.

Teknik kultur kaldu telah menjadi standar emas untuk T vaginalis

selama 40 tahun terakhir. Ukuran inokulum yang dibutuhkan hanya pada

kisaran 102 organisme/mL dan pertumbuhan organisme adalah

mudah ditafsirkan. Kaldu standar adalah media TYI Diamond

dalam tabung gelas (Garber GE, Sibau L, Ma R, Proctor EM, Shaw CE, Bowie WR. Cell culture compared
with broth for detection of Trichomonas vaginalis. J Clin Microbiol 1987;25:1275-9). Masa inkubasi mulai
dari dua hingga

tujuh hari diperlukan untuk mengidentifikasi T vaginalis dalam kultur.

Kontaminasi dengan bakteri adalah masalah utama, bahkan dengan

Kultur kaldu dibubuhi antibiotik untuk menghilangkan flora vagina.

Perjalanan kultur setelah dua hingga tiga hari untuk mengurangi kontaminasi bakteri mungkin
diperlukan untuk mengidentifikasi secara definitif

budaya T vaginalis. Organisme memiliki kapasitas untuk masuk

pertumbuhan lag dan, bahkan dalam budaya axenic yang mapan, dapat

kadang-kadang telah melemahkan pertumbuhan selama 24 jam hingga 48 jam sebelumnya

membangun kembali pertumbuhan log/hari karakteristiknya. Karena

biaya, teknik budaya belum tersedia

tetapi akan menjadi cara paling efektif untuk membangun yang benar

epidemiologi T vaginalis, terutama di mana klinik IMS berada

jauh dari laboratorium klinis. Untuk menghindari masalah ini, sistem InPouch (BioMed Diagnostics, USA)
dan

Sistem kultur serupa telah dikembangkan di mana spesimen dimasukkan ke dalam kantong dua bilik,
memungkinkan pengambilan sampel untuk

Mikroskop dan inkubasi dudukan basah segera untuk kultur

(14). Dalam beberapa penelitian (14), ini telah terbukti setidaknya sebagai

efektif sebagai media Diamond dalam botol kaca. T vaginalis adalah

organisme anaerob yang tumbuh lebih lambat dalam kondisi aerobik. Dengan demikian, inkubasi CO2
telah direkomendasikan untuk

pemulihan optimal.

Budidaya pada kultur sel lebih sensitif, memungkinkan

pengamatan T vaginalis dari inokulum yang mengandung sesedikit mungkin

sebagai 3 organisme/mL. Namun, kultur sel mahal, tidak nyaman dan bahkan lebih rentan terhadap
kontaminasi bakteri vagina. Teknik ini membutuhkan pretreatment spesimen

dengan antibiotik menggunakan media TYI Diamond sebagai transfer

sedang, diikuti oleh bagian selanjutnya ke kultur sel.

Kombinasi TYI dan media kultur sel (2:1) mendukung

baik pertumbuhan monolayer dan T vaginalis. Meskipun tinggi

sensitivitas, metode ini belum digunakan di luar terbatas

jumlah studi (13).

Untuk meningkatkan sensitivitas evaluasi mikroskopis dan

Kecepatan dibandingkan dengan hasil kultur, teknik pewarnaan telah digunakan. Penggunaan acridine
orange dan periodic

asam-Schiff, di antara teknik-teknik lain, telah terbukti

lebih sensitif di tangan beberapa penyelidik. Laboratorium lainnya

belum menemukan teknik ini bermanfaat (15). Si

Papanicolaou smear juga memiliki daya tarik yang cukup besar karena

secara rutin digunakan dalam skrining ginekologis dan terutama di

Wanita dengan riwayat terpapar menular seksual

Patogen.

Namun, organisme T vaginalis sebagian besar

ditemukan di vagina dan, oleh karena itu, endocervix bukanlah

lokasi optimal untuk pengambilan sampel. Teknik ini penuh dengan

baik hasil positif palsu maupun negatif palsu. Kesulitan

dengan teknik pewarnaan termasuk penghapusan motilitas

karena fiksatif dan fakta bahwa T vaginalis tidak selalu

memiliki bentuk buah pir yang khas. Dengan demikian, pewarnaan di sebagian besar

Kasing paling baik digunakan bersamaan dengan pengamatan motilitas gunung basah langsung (16).