LAPORAN PRAKTIKUM

Biofarmasetika
Biofarmasetika dan Farmakokinatika
Farmakokinatika

Uji Difusi

Dosen :

Tim Dosen Praktikum BFFK

Di Susun Oleh: Kelompok 2B

Aulia Wardahani (1113102000054)

Anggi Indah (1113102000041)

Thalita Amanda (1113102000032)

Berliana Novianita (1113102000050)

M Rizal Rosyidi (1113102000008)

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

OKTOBER / 2016
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1.Latar Belakang
Terdapat berbagai macam rute dalam pengaplikasian obat untuk tubuh. Salah satu
rute tersebut adalah melalui kulit. Kulit merupakan lapisan atau jaringan yang menutup
seluruh tubuh dan melindungi tubuh dari bahaya yang datang dari luar. Dikarenakan
fungsinya untuk melindungi tubuh, maka pada kulit terdapat berbagai macam lapisan
yang memiliki berbagai fungsi dan salah satunya adalah sebagai pelindung (barrier 
(barrier ).
).
Lapisan tersebut terdiri atas stratum
atas  stratum corneum,
corneum, epidermis dan dermis (S. Wibowo, Daniel,
2008).
Untuk dapat memberikan efek terapi, obat harus dapat melewati barrier kulit. Obat
melewati barrier kulit melalui proses difusi. Jumlah obat yang berpenetrasi ke kulit dapat
dipengaruhi oleh berbagai faktor. Jumlah obat yang berdifusi melalui kulit haruslah tetap
sesuai dengan dosis terapeutik yang diperlukan sehingga diperlukan suatu metode yang
dapat menghitung berapa jumlah obat yang terdapat di dalam sistem sirkulasi setelah
 berdifusi ke dalam kulit. Dalam praktikum kali ini, mahasiswa akan mempelajari metode
 perhitungan jumlah obat yang berdifusi ke dalam kulit dan juga faktor-faktor yang
mempengaruhi difusi obat melalui kulit.

1.2.Tujuan Praktikum
Setelah melakukan praktikum, mahasiswa diharapkan mampu:
1. Mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi difusi obat melalui kulit.
2. Menghitung jumlah obat dalam tubuh setelah difusi obat melalui kulit.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Kulit
Kulit merupakan lapisan pelindung tubuh yang sempurna terhadap pengaruh luar
(Aiache, 1993). Kulit berfungsi sebagai sistem epitel pada tubuh untuk menjaga keluarnya
substansi-subtansi penting dari dalam tubuh dan masuknya subtansi-subtansi asing ke
dalam tubuh (Chien, 1987). Meskipun kulit relatif permeabel terhadap senyawa-senyawa
kimia, namun dalam keadaan tertentu kulit dapat ditembus oleh senyawa-senyawa obat
atau bahan berbahaya yang dapat menimbulkan efek terapetik atau efek toksik baik yang
 bersifat setempat maupun sistemik (Aiache, 1993). Dari suatu penelitian diketahui bahwa
 pergerakan air melalui lapisan kulit yang tebal tergantung pada pertahanan
p ertahanan lapisan stratum
corneum yang berfungsi sebagai rate-limiting barrier pada kulit (Swarbirck dan Boylan,
1995).
Kulit mengandung sejumlah bentukan bertumpuk dan spesifik yang dapat mencegah
masuknya bahan-bahan kimia. Hal tersebut disebabkan oleh adanya lapisan tipis lipida
 pada permukaan lapisan tanduk dan lapisan epidermis malfigi. Sawar kulit terutama
disusun oleh lapisan tanduk (stratum corneum), namun demikian cuplikan lapisan tanduk
(stratum corneum) terpisah mempunyai permeabilitas yang sangat rendahdengan kepekaan
yang sama seperti kulit utuh. Lapisan tanduk saling berikatan dengan kohesi yang sangat
kuat merupakan pelindung kulit yang paling efisien (Aiache, 1993). Secara mikroskopik,
kulit tersusun dari berbagai lapisan yang berbeda, berturut-turut dari luar kedalam yaitu
lapisan epidermis, lapisan dermis yang tersusun atas pembuluh darah dan pembuluh getah
 bening dan lapisan dibawah kulit yang berlemak atau yang disebut hipodermis (Aiache,
1993). Struktur kulit yang terdiri dari lapisan epidermis, dermis dan hipodermis dapat
dilihat pada gambar 1.
 Gambar 1. Struktur kulit, terdiri dari epidermis, dermis dan hypodermis

2.2. Absorpsi Perkutan

Absorpsi perkutan adalah masuknya molekul obat dari luar kulit ke dalam jaringan di
 bawah kulit, kemudian masuk ke dalam sirkulasi darah dengan mekanisme difusi pasif
(Chien, 1987). Mengacu pada Rothaman, penyerapan (absorpsi) perkutan merupakan
gabungan fenomena penembusan suatu senyawa dari lingkungan luar ke bagian kulit
sebelah dalam dan fenomena penyerapan dari struktur kulit ke dalam peredaran darah dan
getah bening. Istilah perkutan menunjukkan bahwa penembusan terjadi pada lapisan
epidermis dan penyerapan dapat terjadi pada lapisan epidermis yang berbeda (Aiache,
1993).
Fenomena absorpsi perkutan (atau permeasi pada kulit) dapat digambarkan dalam
tiga tahap yaitu penetrasi pada permukaan stratum corneum, difusi melalui stratum
corneum, epidermis dan dermis, masuknya molekul kedalam mikrosirkulasi yang
merupakan bagian dari sirkulasi sistemik. Mekanisme penghantaran obat melalui
transdermal digambarkan pada gambar 2. (Chien, 1987).
Gambar 2. Mekanisme Penghantaran Obat melalui Transdermal mulai dari pelepasan

obat menuju jaringan target (Chien, 1987)

Penetrasi melintasi stratum corneum dapat terjadi melalui penetrasi transepidermal

dan penetrasi transappendageal. Pada kulit normal, jalur penetrasi obat umumnya melalui
epidermis (transepidermal), dibandingkan penetrasi melalui folikel rambut maupun
melewati kelenjar keringat (transappendageal). Jumlah obat yang terpenetrasi melalui jalur
transepidermal berdasarkan luas permukaan pengolesan dan tebal membran. Kulit
merupakan organ yang bersifat aktif secara metabolik dan kemungkinan dapat merubah
obat setelah penggunaan secara topikal. Biotransformasi yang terjadi ini dapat berperan
sebagai faktor penentu kecepatan (rate limiting step) pada proses absorpsi perkutan
(Swarbrick dan Boylan, 1995).
a. Penetrasi
Transappendageal Rute transappendageal merupakan rute yang sedikit
digunakan untuk transport molekul obat, karena hanya mempunyai daerah yang kecil
(kurang dari 0,1% dari total permukaan kulit). Akan tetapi, rute ini berperan penting
 pada beberapa senyawa polar dan molekul ion hampir tidak berpenetrasi melalui
stratum corneum (Moghimi dkk, 1999).
Rute transappendageal ini dapat menghasilkan difusi yang lebih cepat, segera
setelah penggunaan obat karena dapat menghilangkan waktu yang diperlukan oleh
 obat untuk melintasi stratum corneum. Difusi melalui transappendageal ini dapat
terjadi dalam 5 menit dari pemakaian obat (Swarbrick dan Boylan, 1995).
b. Penetrasi transepidermal
Sebagian besar penetrasi zat adalah melalui kontak dengan lapisan stratum
corneum. Jalur penetrasi melalui stratum corneum ini dapat dibedakan menjadi jalur
transelular dan interseluler. Prinsip masuknya penetran kedalam stratum corneum
adalah adanya koefisien partisi dari penetran. Obat-obat yang bersifat hidrofilik akan
 berpenetrasi melalui jalur transeluler sedangkan obat-obat lipofilik akan masuk
kedalam stratum corneum melalui rute interseluler. Sebagian besar difusan
 berpenetrasi ke dalam stratum corneum melalui kedua rute tersebut, hanya kadang-
kadang obat-obat yang bersifat larut lemak berpartisipasi dalam corneocyt yang
mengandung residu lemak. Jalur interseluler yang berliku dapat berperan sebagai rute
utama permeasi obat dan penghalang utama dari sebagian besar obat-obatan
(Swarbrick dan Boylan, 1995).

2.3. Perlintasan Membran

Membran dalam kajian formulasi dan biofarmasi merupakan suatu fase padat,
setengah padat atau cair dengan ukuran tertentu, tidak larut atau tidak tercampurkan
dengan lingkungan sekitarnya dan dipisahkan satu dan lainnya, umumnya oleh fase cair.
Dalam biofarmasi, membran padat digunakan sebagai model pendekatan membran
 biologis. Membran padat juga digunakan sebagai model untuk mempelajari kompleks atau
interaksi antara zat aktif dan bahan tambahan serta proses pelepasan dan pelarutan (Aiache,
1993).
Dalam studi pelepasan zat aktif yang berada dalam suatu bentuk sediaan digunakan
membran padat tiruan yang berfungsi sebagai sawar yang memisahkan sediaan dengan
cairan disekitarnya. Teknik pengukuran laju pelepasan yang tidak menggunakan membran
akan mengalami kesulitan karena perubahan yang cepat dari luas permukaan sediaan yang
kontak dengan larutan uji. Pengadukan pada media reseptor sangat berperan untuk
mencegah kejenuhan lapisan difusi yang kontak dengan membran (Aiache, 1993).
Perlintasan membran sintetik umumnya berlangsung dalam dua tahap. Tahap awal
adalah proses difusi zat aktif menuju permukaan yang kontak dengan membran. Pada tahap
 ini daya difusi merupakan mekanisme pertama untuk menembus daerah yang tidak diaduk,
dari lapisan yang kontak dengan membran. Tahap kedua adalah pengangkutan. Tahap ini
dapat dibagi atas dua bagian. Bagian yang pertama adalah penstabilan gradien konsentrasi
molekul yang melintas membran sehingga difusi terjadi secara homogen dan tetap. Bagian
kedua adalah difusi dalam cara dan jumlah yang tetap. Hal ini menunjukkan bahwa
 perbedaan konsentrasi tidak berubah sebagai fungsi waktu. Dalam hal ini diasumsikan
 bahwa interaksi zat aktif-pelarut dan pelarut-pelarut tidak berpengaruh terhadap aliran zat
aktif. Difusi dalam jumlah yang tetap dinyatakan dengan hukum Fick I.

Dimana J adalah fluks atau jumlah Q linarut yang melintasi membran setiap satuan
waktu t, A adalah luas permukaan efektif membran, Cd dan Cr adalah konsentrasi pada
kompartemen awal dan dalam kompartemen reseptor, h adalah tebal membran dan D’
adalah tetapan dianalisa atau koefisien permeabilitas (Aiache, 199 3).

2.4. Penghantaran Obat melalui Transdermal

Sebagian besar obat-obat yang diberikan melalui kulit berpenetrasi dengan
mekanisme difusi pasif (Aiache, 1993; Swarbrick dan Boylan, 1995). Difusi didefinisikan
sebagai suatu proses perpindahan massa molekul suatu zat yang dibawa oleh gerakan
molekular secara acak dan berhubungan dengan adanya perbedaan konsentrasi aliran
molekul melalui suatu batas, misalnya suatu membran polimer. Perjalanan suatu zat
melalui suatu batas bisa terjadi karena permeasi molekular sederhana atau gerakan melalui
 pori dan lubang (saluran) (Martin dkk, 1993). Laju penyerapan melalui kulit tidak segera
mencapai keadaan tunak, tetapi selalu teramati adanya waktu laten (gambar 3). Waktu
laten ditentukan oleh tebal membran dan tetapan difusi obat dalam stratum corneum
(Aiache,1993). Obat akan mengalami difusi sesuai gradien konsentrasi dengan gerakan
yang acak (Swarbrick dan Boylan, 1995).
 Gambar 3. Profil penyerapan molekul yang berdifusi melalui kulit (Aiache, 1993).

Kecepatan penetrasi obat menembus epidermis untuk mencapai lapisan papilar di

dermis dapat dinyatakan dengan hukum Fick’s I dengan persamaan berikut (Aiache, 1993;
Chien, 1987):

Dimana Cd dan Cr adalah konsentrasi zat yang berpenetrasi melalui kulit dalam
kompartemen donor (konsentrasi obat pada permukaan stratum corneum) dan dalam
kompartemen reseptor (tubuh). Ps adalah koefisien permeabilitas jaringan kulit. Koefisien
 permeabilitas dapat dinyatakan dengan persamaan (Chien, 1987):

Dimana K adalah koefisien partisi molekul, D adalah koefisien difusi penetran

melalui jaringan kulit pada keadaan tunak dan h adalah tebal jaringan kulit (Chien, 1987).
Koefisien difusi melalui jaringan kulit dapat dipengaruhi oleh viskositas. Semakin tinggi
viskositas maka koefisien difusinya rendah, sehingga pelepasan obatnya akan kecil, seperti
yang dinyatakan pada persamaan Stokes-Einstein dengan persamaan berikut (Martin dkk,
1993):

Dimana Dv adalah koefisien difusi, K adalah konstanta boltzman, T adalah

temperatur, η adalah viskositas, dan π bernilai 3,14.
2.5. Keuntungan Penghantaran Obat Secara Transdermal
Penghantaran obat secara transdermal didasarkan pada absorpsi obat ke kulit setelah
aplikasi topikal. Rute transdermal untuk penghantaran obat secara sistemik telah banyak
diakui dan dimanfaatkan. Penghantaran obat secara transdermal memberikan banyak
keuntungan dibanding dengan bentuk pemberian obat yang lain. Perbedaan dengan
 pemberian secara oral, senyawa masuk ke dalam tubuh melewati kulit sehingga
menghindari terjadinya first-pass metabolism di hati dan sering kali menghasilkan
 bioavailabilitas yang lebih tinggi. Penghantaran obat secara transdermal dapat digunakan
untuk pasien dengan nausea, sedikit dipengaruhi oleh pemasukan makanan dan dapat
dengan mudah dihilangkan. Perbedaan dengan penghantaranobat secara intravena,
 pemberian obat secara transdermal tidak invasif dan resiko terjadinya infeksi sangat kecil.
Selain itu, penggunaan sediaan transdermal relatif memudahkan pasien untuk
menggunakan dan melepaskannya. Penghantaran obat secara transdermal memberikan
 penghantaran obat secara kontinyu, frekuensi dosis obat bolus dengan t ½ yang pendek
dihindari, sehinggasebagai hasilnya efek samping atau variabilitas efek terapetik pada
 puncak dan konsentrasi obat pada plasma yang terlihat pada pemberian obat melewati
 bolus dapat diminimalisasi (Phipps dkk, 2004).
Penghantaran obat secara transdermal harus mampu mengatasi hambatan pada kulit.
Kulit melindungi tubuh dari lingkungan secara efektif dan umumnya hanya permeabel
untuk obat yang kecil dan lipofilik. Sistem penghantaran transdermal tidak hanya bertujuan
untuk memberikan obat ke kulit pada kondisi yang stabil, tetapi juga harus
memberikanpeningkatan permiabilitas kulit secara lokal untuk senyawa obat yang
 besar,bermuatan dan hidrofilik dengan meminimalkan terjadinya iritasi (Phipps dkk, 2004).

2.6. Gel
Gel adalah sistem padat atau setengah padat dari paling sedikit dua konstituen yang
terdiri dari massa seperti pagar yang rapat dan diselusupi oleh cairan. Jika matrik yang
saling melekat kaya akan cairan, maka produk ini seringkali disebut jelly (Martin dkk,
1993).
Gel mempunyai kekakuan yang disebabkan oleh jaringan yang saling menganyam
dari fase terdispers yang mengurung dan memegang medium pendispersi. Perubahan dalam
 temperatur dapat menyebabkan gel tertentu mendapatkan kembali bentuk sol atau bentuk
cairnya. Juga beberapa gel menjadi encer setelah pengocokan dan segera menjadi setengah
 padat atau padat kembali setelah dibiarkan tidak terganggu untuk beberapa waktu tertentu,
 peristiwa ini dikenal sebagai tiksotropi (Ansel,1989).
Penyerapan senyawa pada pemberian transdermal berkaitan dengan pemilihan bahan
 pembawa sehingga bahan aktif dapat berdifusi dengan mudah ke dalam struktur kulit.
Bahan pembawa dapat mempengaruhi keadaan dengan mengubah permeabilitas kulit
dalam batas fisiologik dan bersifat reversibel terutama dengan meningkatkan kelembaban
kulit (Aiache, 1993).
Basis pada sediaan gel dapat digunakan hydroxypropyl methilcellulose (HPMC)
merupakan serbuk putih atau putih kekuningan, tidak berbau dan berasa, larut dalam air
dingin, membentuk cairan yang kental, praktis tidak larut dalam kloroform, etanol (95%)
dan eter. HPMC biasanyadigunakan dalam sediaan oral dan topikal, HPMC biasanya
digunakan sebagai emulgator, suspending agent dan stabilizing agent dalam sediaan salep
dan gel topikal (Harwood, 2006).

2.7. Parasetamol
Parasetamol (Acetamenophen) adalah turunan dari senyawa sintetis dari p-
aminofenol yang merupakan metabolit aktif dari fenasetin, namun tidak memiliki sifat
karsinogenik (menyebabkan kanker) seperti halnya fenasetin. Khasiatnya analgetis dan
antipiretis, tetapi tidak anti radang. Dewasa ini pada umumnya di anggap sebagai zat anti
nyeri yang paling aman, juga untuk swamedikasi (pengobatan mandiri). Tetapi jika
senyawa ini bila dikombinasikan dengan obat anti inflamasi non steroid (NSAID) atau obat
 pereda nyeri opioid, dapat digunakan untuk mengobati nyeri yang lebih parah. (Tan dan
Kirana, 2002; Hardman, 2001)
 Namun senyawa obat parasetamol ini tidak seperti obat pereda nyeri lainnya (aspirin
dan ibuprofen), tidak digolongkan ke dalam obat anti inflamasi non steroid (NSAID)
karena memiliki khasiat anti inflamasi yang relatif kecil karena itu dianggap aman. Tapi
 pada dosis tinggi dapat menyebabkan kerusakan hati. Risiko kerusakan hati ini diperparah
apabila pasien juga meminum alkohol. (Hardman, 2001; Foye, 1995)
 Parasetamol memiliki sebuah cincin benzena, tersubstitusi oleh satu gugus hidroksil
dan atom nitrogen dari gugus amida pada posisi para. Senyawa ini dapat disintesis dari
senyawa asal fenol yang dinitrasikan menggunakan asam sulfat dan natrium nitrat.
Parasetamol dapat pula terbentuk apabila senyawa 4-aminofeno l direaksikan dengan
senyawa asetat anhidrat (Hardman, 2001).

2.7.1. Struktur Parasetamol

 Nama Kimia : N-acetyl-p-aminophenol atau p-asetamedofenol atau 4’-

hidroksiasetanilida

Rumus Empiris : C8H9NO2

Berat Molekul : 151,16

Pemerian : Kristal putih tidak berbau atau serbuk kristalin dengan rasa
 pahit, jarak lebur atau titik lebur pada 169°-172°C

Kelarutan : 1 g dapat larut dalam kira-kira 70 ml air pada suhu 25°C, 1

g larut dalam 20 ml air mendidih, dalam 7 ml alkohol,
dalam 13 ml aseton, dalam 50 ml kloroform, dalam 40 ml
gliserin, dalam 9 ml propilenglikol, dan larut dalam arutan
alkali hidroksida. Tidak larut dalam benzen dan eter.
Larutan jenuh mempunyai pH kira-kira 6. pKa= 9

(Connors, 1992; Ditjen POM, 1995)

2.7.2. Mekanisme Kerja

Mekanisme kerja yang sebenarnya dari parasetamol masih menjadi bahan
 perdebatan. Parasetamol menghambat produksi prostaglandin (senyawa penyebab
 inflamasi), namun parasetamol hanya sedikit memiliki khasiat anti inflamasi. Telah
dibuktikan bahwa parasetamol mampu mengurangi bentuk teroksidasi enzim
siklooksigenase (COX), sehingga menghambatnya untuk membentuk senyawa
 penyebab inflamasi. Sebagaimana diketahui bahwa enzim siklooksigenase ini
 berperan pada metabolisme asam arakidonat menjadi prostaglandin H2, suatu
molekul yang tidak stabil, yang dapat berubah menjadi berbagai senyawa pro-
inflamasi. Kemungkinan lain mekanisme kerja parasetamol ialah bahwa parasetamol
menghambat enzim siklooksigenase seperti halnya aspirin, namun hal tersebut terjadi
 pada kondisi inflamasi, dimana terdapat konsentrasi peroksida yang tinggi. Pada
kondisi ini oksidasi parasetamol juga tinggi, sehingga menghambat aksi anti
inflamasi. Hal ini menyebabkan parasetamol tidak memiliki khasiat langsung pada
tempat inflamasi, namun malah bekerja di sistem syaraf pusat untuk menurunkan
temperatur tubuh, dimana kondisinya tidak oksidatif. (Hardman, 2001; Munaf, 1994;
Departemen Farmakologi dan Terapeutik, 2007)

2.7.3. Metabolisme
Metabolisme parasetamol terjadi di hati. Metabolit utamanya meliputi senyawa
sulfat yang tidak aktif dan konjugat glukoronida yang dikeluarkan lewat ginjal.
Hanya sedikit jumlah parasetamol yang bertanggung jawab terhadap efek toksik
(racun) yang diakibatkan oleh metabolit NAPQI (N-asetil-p-benzo-kuinon imina).
Bila pasien mengkonsumsi parasetamol pada dosis normal, metabolit toksik NAPQI
ini segera didetoksifikasi menjadi konjugat yang tidak toksik dan segera dikeluarkan
melalui ginjal. Namun apabila pasien mengkonsumsi parasetamol pada dosis tinggi,
konsentrasi metabolit beracun ini menjadi jenuh sehingga menyebabkan kerusakan
hati (Hardman, 2001).

2.7.4. Efek Samping

Efek samping adalah hal yang bukan tidak jarang terjadi pada
 penggunaan/konsumsi senyawa obat, begitu pula dengan parasetamol. Parasetamol
menimbulkan efek sampin seperti; reaksi hipersensitivitas dan kelainan pada darah
(anemia hemolitik). Pada penggunaan kronis dari 3-4 g sehari dapat terjadi kerusakan
 hati, reaksi alergi: jarang terjadi, berupa eritem, urtikaria, atau bila lebih berat dapat
timbul demam dan lesi mukosa (Tan dan Kirana, 2002).

2.8. Uji Penetrasi Secara I n vitro 

 Menggunakan Sel Difusi Franz
Studi penetrasi kulit secara in vitro berhubungan dengan mengukur kecepatan dan
 jumlah komponen yang menembus kulit dan jumlah komponen yang tertahan pada kulit.
Salah satu cara untuk mengukur jumlah obat yang terpenetrasi melalui kulit yaitu
menggunakan sel difusi franz. Sel difusi franz terbagi atas dua komponen yaitu
kompartemen donor dan kompartemen reseptor. Membran yang digunakan dapat berupa
kulit manusia atau kulit hewan. Membran diletakkan di antara kedua kompartemen,
dilengkapi dengan o-ring untuk menjaga letak membran. Gambar alat sel difusi franz dapat
dilihat pada Gambar 4.

Gambar 4. Kompartemen sel difusi franz

(Particle Science Drug Development Service Vol. 10, 2009)

Kompartemen reseptor diisi dengan larutan penerima. Suhu pada sel dijaga dengan
sirkulasi air menggunakan water jacket   disekeliling kompartemen reseptor. Sediaan yang
akan diuji diaplikasikan pada membran kulit. Pada interval waktu tertentu diambil
 beberapa ml cairan dari kompartemen reseptor dan jumlah obat yang terpenetrasi melalui
kulit dapat dianalisis dengan metode analisis yang sesuai. Setiap diambil sampel cairan
dari kompartemen reseptor harus selalu digantikan dengan cairan yang sama sejumlah
volume yang terambil (Anggraeni, 2008).
2.9. Spektrofotometri UV-Vis
Spektrofotometri serap merupakan pengukuran interaksi antara radiasi
elektromagnetik panjang gelombang tertentu yang sempit dan mendekati monokromatik,
dengan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Hal ini didasarkan pada kenyataan bahwa
molekul selalu mengabsorbsi cahaya elektromagnetik jika frekuensi cahaya tersebut sama
dengan frekuensi getaran dari molekul tersebut. Elektron yang terkait dan elektron yang
tidak terkait akan tereksitasi pada suatu daerah frekuensi, yang sesuai dengan cahaya
ultraviolet dan cahaya tampak (UV-Vis) (Henry, Suryadi, Yanuar 2002).
Spektrum absorbsi daerah ini adalah sekitar 220 nm sampai 800 nm dan dinyatakan
sebagai spektrum elektron. Suatu spektrum ultraviolet meliputi daerah bagian ultraviolet
(190-380 nm), spektrum Vis (Visibel) bagian sinar tampak (380-780 nm) (Henry, dkk.,
2002).
Instrumentasi dari spektrofotometer UV-Vis ini dapat diuraikan sebagai berikut :
a. Suatu sumber energi cahaya yang berkesinambungan yang meliputi daerah spektrum
yang mana alat tersebut dirancang untuk beroperasi.
 b. Suatu monokromator, yakni sebuah piranti untuk memencilkan pita sempitpanjang
gelombang dari spektrum lebar yang dipancarkan oleh sumber cahaya.
c. Suatu wadah untuk sampel (dalam hal ini digunakan kuvet)
d. Suatu detektor yang berupa transduser yang merubah energi cahaya menjadi suatu
isyarat listrik.
e. Suatu amplifier (pengganda) dan rangkaian yang berkaitan yang membuat isyarat
listrik itu memadai untuk dibaca.
f. Suatu sistem baca dimana diperagakan besarnya isyarat listrik yang ditangkap.

(Henry, dkk., 2002)

Spektrofotometri UV-Vis digunakan terutama untuk analisa kuantitatif, tetapi dapat

 juga untuk analisa kualitatif. Penggunaan untuk analisa kuantitatif didasarkan pada hukum
Lambert-Beers yang menyatakan hubungan empirik antara intensitas cahaya yang
ditransmisikan dengan tebalnya larutan (Hukum Lambert/Bouger), dan hubungan antara
intensitas tadi dengan konsentrasi zat (Hukum Beers) (Henry, dkk., 2002).
 Hukum Lambert-Beer dapat dijelaskan dengan persamaan berikut :

A = Log Io/It = Ɛ. b. c = a. b. c

Di mana :

A = serapan;

Io = intensitas sinar yang datang;

It = intensitas sinar yang diteruskan (ditransmisikan);

Ɛ = absorbtivitas molekuler / konstanta ekstingsi (L.mol-1. Cm-1);

a = daya serap (L.g-1.cm-1);

 b = tebal larutan / kuvet (cm);

c = konsentrasi (g.L-1 , mg. mL-1)

( Henry, Suryadi, Yanuar 2002)

Panjang gelombang yang digunakan untuk melakukan analisis kuantitatif suatu zat
 biasanya merupakan panjang gelombang di mana zat yang bersangkutan memberikan
serapan pada umumnya landai sehigga perubahan yang tidak terlalu besar pula (dapat
diabaikan) (Henry, dkk., 2002).
Serapan yang optimum untuk pengukuran dengan spektrofotometri Uv-Vis ini
 berkisar antara 0,2-0,8. Namun menurut literature lain, serapan sebesar 2-3 relatif masih
memberikan hasil perhitungan yang cukup baik untuk campuran, walaupun disarankan
agar serapan berada dibawah 2 untuk hasil yang lebih baik, dengan cara mengencerkan
larutan zat yang akan di ukur (Henry, dkk., 2002).
 BAB III
Metodologi

3.1. Alat
1) Penangas air
2) Cawan porselen
3) Franz Diffusion Cells
4) Syringe dan selang
5) Batang pengaduk
6) Timbangan analitik
7) Membran (kertas Whatman no. 1)

3.2. Bahan
1) Larutan Spangler, terbuat dari :
a. Asam palmitat 10%
 b. Asam oleat 15%
c. Asam stearat 5%
d. Minyak kelapa 15%
e. Parafin 10%
f. Lilin putih 15%
2) Gel PCT dengan formula :
a. Paracetamol 1%
 b. Karbopol 940 1,2%
c. TEA 1,2%
d. Etanol 95% 10%
e.  Natrium benzoat 0,3%
f. Aquadest ad to 100%
3) Cairan Buffer NaOH 0,1 M
3.3. Prosedur Kerja
1) Membuat larutan spangler; semua bahan dilebur di atas cawan porselen yang
diletakkan di atas penangas air. Bahan diaduk hingga homogen.
2) Membran dicelupkan ke dalam larutan spangler yang masih cair selama 10 menit,
kemudian segera dikeringkan dengan dryer . % impregnasi dihitung dengan
 persamaan :
  
  

Bo = Bobot awal sebelum diimpregnasi (g)
Bt = Bobot setelah diimpregnasi (g)

3) Gel PCT dibuat sesuai formula diatas; semua bahan dicampurkan dan diaduk hingga
homogen.
4) Membran diletakkan di alat uji difusi Franz Diffusion Cells, dan di atas membran
dioleskan gel PCT yang telah dibuat sebanyak 1 gram.
0
5) Suhu sistem 370,5 C dengan cairan sirkulasi NaOH 0,1 M sebanyak 70 ml. Proses
uji difusi dilakukan selama 3 jam.
6) Cuplikan diambil dari cairan reseptor dalam gelas kimia sebanyak 5 ml dan setiap
 pengambilan selalu diganti dengan aquabidestilata sebanyak 5 ml (selang waktu
 pengambilan 10, 20, 30, 40, dan 50 menit).
7) Larutan yang dicuplik diencerkan dengan pelarut campur dalam labu takar 10 ml
(pengenceran 100x); yakni dengan cara mengencerkan 100µL cairan dengan NaOH
0,1 dalam labu takar 10 mL.
8) Serapan diukur dengan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum PCT.
L ampir an Gambar 

M embran U ji yang telah di celu pkan ke dalam laru tan Spangler

Seperangkat alat uj i difu si F ranz Dif fu sion Cell s

Proses pencupl ik an cair an setelah meni t k e-5 proses uji dif usi ber lan gsun g
Pengganti an cairan difu si yang telah dicuplik sejuml ah 5 mL
 BAB IV

HASIL dan PEMBAHASAN

4.1 HASIL

4.1.1 Hasil % impregnasi membran


 % impregnasi kelas A =  x 100%



=  x 100%



=  x 100%


= 511,64%


 % impregnasi kelas C =  x 100%



=  x 100%



=  x 100%


= 425,05%
 
 % impregnasi kelas B =  x 100%



=  x 100%



=  x 100%


= 351,45%


 % impregnasi kelas D =  x 100%



=  x 100%



=  x 100%


= 329,04%

4.1.2 Hasil absorbansi

Hasil absorbansi kelas A

kurva absorbansi kelas A
0.25 y = 0.0028x + 0.0568
R² = 0.9751
Waktu Absorbansi    i
   s
0.2
   n
 pengambilan    a 0.15
    b
   r
10 menit 0,096    o
   s 0.1 Y-Value 1
    b
20 menit 0,100    a 0.05 Linear (Y-Value 1)
50 menit 0,193 0
60 menit 0,237 0 20 40 60 80
waktu
Hasil absorbansi kelas C kurva absorbansi kelas C
0.2
Waktu Absorbansi
   i
 pengambilan    s 0.15 y = -0.0011x + 0.1242
   n
   a
10 menit 0,082     b
   r 0.1 R² = 0.1653
   o
   s Series1
20 menit 0,123     b
   a 0.05
30 menit 0,145 Linear (Series1)
0
40 menit 0,043
0 20 40 60
50 menit 0,069
waktu

Hasil absorbansi kelas D

kurva absorbansi kelas D
0.2
Waktu Absorbansi    i
y = 0.0013x + 0.0867
   s
 pengambilan    n
0.15 R² = 0.2965
   a
    b
10 menit 0,076    r 0.1
   o
   s
30 menit 0,163     b
   a
0.05
40 menit 0,156 Series1
0
50 menit 0,118 0 20 40 60 Linear (Series1)
waktu

Hasil absorbansi kelas B

Waktu Absorbansi kurva absorbansi kelas B

 pengambilan
0.2 y = 0.0024x + 0.0985
5 menit 0,076    i
   s
0.15 R² = 0.1471
10 menit 0,163    n
   a
    b
15 menit 0,156    r 0.1
   o
   s Series1
20 menit 0,118     b
   a
0.05
Linear (Series1)
0
0 10 20 30
waktu
 kurva standar paracetamol kelompok
1&2 A
0.8
y = 0.0743x - 0.008
0.7
R² = 0.9999
   i
0.6
   s
   n 0.5
   a
    b
   r 0.4
   o
   s Series1
    b 0.3
   a
0.2 Linear (Series1)
0.1
0
0 5 10 15
waktu

Untuk mencari kadar obat (x) , dimasukkan hasil absorbansi yang diperoleh kedalam persamaan
y = 0.0743x - 0.008 dengan mensubstitusi y dengan absorbansi yang diperoleh tiap menit
 pengambilan sampel.
4.1.3 Hasil konsentrasi paracetamol dari 4 formula gel yang berbeda

Kelas A dengan basis karbopol formula 1

Waktu Konsentrasi(mg)
 pengambilan
10 menit 0.203
20 menit 0.207
50 menit 0.300
60 menit 0.344
kelas C dengan basis HPMC formula 1

Waktu Konsentrasi (mg)

 pengambilan
10 menit 0.189
20 menit 0.230
30 menit 0.252
40 menit 0.150
50 menit 0.176
Kelas D dengan basis HPMC formula 2

Waktu Konsentrasi(mg)
 pengambilan
10 menit 0.183
30 menit 0.270
40 menit 0.263
50 menit 0.225
Kelas B dengan basis karbopol formula 2

Waktu Konsentrasi(mg)
 pengambilan
5 menit 0.183
10 menit 0.270
15 menit 0.263
20 menit 0.225

4.2 Pembahasan

Pada praktikum kali ini dilakukan pengamatan untuk mengukur konsentrasi obat yang
terdifusi kedalam kulit dan mengetahui factor-faktor yang mempengaruhi difusi obat melalui
kulit. Pengujian difusi ini dilakukan untuk pengujian pada sediaan transdermal.
Pemberian secara transdermal menghasilkan pelepasan obat ke dalam tubuh melalui kulit
(shargel, 1988). Untuk mencapai tempat kerja suatu obat di jaringan atau organ, obat tersebut
harus melewati berbagai membran sel. Membran sel mempunyai struktur lipoprotein yang
 bertindak sebagai membran lipid yang semipermeabel. Kelarutan molekul obat dalam lipid inilah
yang merupakan faktor utama absorbsi obat dalam tubuh. Difusi yang terjadi merupakan difusi
 pasif yaitu suatu proses perpindahan masa dari tempat yang berkonsentrasi tinggi ke tempat yang
 berkonsentrasi rendah tanpa membutuhkan energi. Membran difusi tiruan ini berfungsi sebagai
sawar yang memisahkan sediaan dengan cairan disekitarnya.

Pada praktikum kali ini, dilakukan uji difusi suatu obat dengan menggunakan metode
Flow Through. Yang merupakan percobaan pada uji difusi terhadap suatu zat tertentu dimana
dibuat suatu mekanisme kerja layaknya difusi didalam membran sel tubuh manusia. Adapun
sediaan yang diuji menggunakan bahan aktif parasetamol dalam bentuk sediaan gel dengan
konsentrasi bahan aktif 1 %. Kemudian dihitung konsentrasi obat yang terabsorbsi pada
membran, dimana obat yang terabsorbsi seolah-olah menembus membran sel yang ada didalam
tubuh.

Pada metode flow through langkah pertama adalah pembuatan membran difusi dengan
menggunakan kertas whatman no. 1 yang diimpregnasikan terlebih dahulu dengan cairan
spangler. Adapun komposisi cairan spangler ini meliputi berbagai minyak dan lemak seperti
asam palmitat, asam oleat, asam stearat, minyak kelapa, paraffin cair, Cairan spangler disini
dianggap sebagai komposisi kandungan yang terdapat pada kulit yang terdapat banyak lemak.
Sebelum diimpregnasikan dengan cairan spangler, bobot kertas whatman ditimbang terlebih
dahulu untuk menentukan persentase impregnasi dari kertas whatman.

Pemilihan sediaan yang akan diuji adalah menggunakan sediaan gel, karena sediaan gel
lebih mudah digunakan saat percobaan dengan cara mengolesi sediaan pada membran yang telah
dibuat dibanding sediaan-sediaan lain seperti sediaan cair atau sediaan padat lainnya.

Mekanisme kerja dari  flow through  ini adalah membran diletakkan diantara kedua
kompartemen, dilengkapi dengan dua tabung penjepit untuk menjaga letak membran.
Kompartemen donor diisi dengan larutan penerima. Suhu pada sistem dijaga yaitu 37˚C±0,5˚C
dengan sirkulasi air sebanyak 70 ml. Pompa peristaltik menghisap cairan donor dari gelas kimia
kemudian dipompa ke sel difusi mengabsorbsi zat obat diatas membran. Kemudian cairan
dialirkan ke reseptor dengan membawa cairan yang mengabsorbsi zat obat. Pada interval waktu
10 menit, 20menit, 30 menit, 40 menit, 50 menit, 60 menit, masing-masing diambil sebanyak 5
ml cairan dari kompartemen reseptor yang kemudian diencerkan sebanyak 100 kali dalam labu
ukur 10 ml untuk dianalisa. Dalam praktikum ini metode analisis yang digunakan adalah
spektrofotometer UV-Vis sehingga didapat nilai absorbansi dari setiap cairan yang kemudian
 baru dapat dihitung konsentrasi obat yang terlarut dalam cairan tersebut. Setiap sampel cairan
 pada interval waktu tertentu yang diambil dari kompartemen reseptor harus selalu digantikan
dengan cairan yang sama sejumlah volume yang terambil, pada praktikum kali ini dengan NaOH
0,1 N

Berdasarkan data percobaan yang didapat pada kelas A nilai absrobansi yang diperoleh
sudah sesuai yaitu semaikn lama waktu pengambilan maka absorbansinya semakin besar hal ini
menunjukkan konsentrasinya juga semakin besar seiring dengan bertambahnya waktu , begitu
 pula dengan kelas C namun pada menit 40 dan 50 konsentrasinya mengalami penurunan,
kemudian pada kelas D konsentrasinya juga semakin besar seiring dengan bertambahnya waktu
namun pada menit ke 50 konsentrasninya mengalami penurunan, pada kelas B konsentrasi yang
diperoleh juga mengalai peningkatan namun juga mengalami penurunan pada menit ke 20.
Berdasarkan data yang diperoleh diatas konsentrasinya tidak berbanding lurus untuk setiap
masing-masing interval waktu. Karena seharusnya konsentrasi rata – rata obat yang dapat
menembus membran berbanding lurus dengan konsentrasi dari parasetamol. Konsentrasi
 parasetamol yang dapat menembus membran berbanding lurus dengan waktu, dimana semakin
lamanya waktu maka semakin besar jumlah ataupun konsentrasi yang dapat menembus
membran, hingga mencapai puncak dimana konsentrasi obat yang terabsorbsi mengalami
 penurunan yang sebanding dengan konsentrasi parasetamol yang ada jika digambarkan dalam
grafik akan terlihat seperti puncak parabola.

 Namun hal ini tidak sesuai dengan hasil pengamatan yang diperoleh, hal ini mungkin
disebabkan oleh kesalahan pada saat praktikum,Kesalahan yang terjadi diantaranya membran
difusi yang diletakkan dalam kondisi miring sehingga zat-zat tidak terabsorbsi secara konstan
dalam interval waktu tertentu. Atau dikarenakan cairan NaOH yang dimasukkan kurang sesuai
sehingga kadang terabsorbsi secara berlebihan dan kadang tidak terabsorbsi sama sekali. Cairan
dapar fosfat yang digunakan dibuat dari pagi sejak awal praktikum sehingga kemungkinan sudah
terjadi penurunan PH dari dapar tersebut ketika digunakan pada siang dan sore hari.

Berdasarkan kurva kalibrasi yang didapat dari masing-masing absorbansi terhadap

interval waktu, nilai regresi linear adalah 0.3960025. Nilai ini jauh mendekati angka 1, dan
konsentrasi yang didapat berdasarkan persamaan y = a + bx tidak menunjukkan data yang baik.
Kesalahan-kesalahan pada percobaan ini banyak disebabkan oleh berbagai faktor baik dari
 prosedur kerja maupun praktikan. Kecepatan penetrasi obat dikulit melalui mekanisme difusi
sehingga terjadi sesuai dengan hukum fick.


    (Cs –  C)


Keterangan :

J= fluks per satuan luas

K= koefisien partisi obat dalam membran dan pembawa

h = tebal membrane

D = koefisien difusi obat

Cs = konsentrasi obat dalam pembawa

C = konsentrasi obat dalam medium reseptor

Faktor yang mempengaruhi difusi zat melalui kult :

sifat fisiko kimia dari zat aktif (bobot molekul, kelarutan, koe fisien partisi)

 Karakteristik sediaan
 Karakteristik basis
 Zat-zat tambahan dalam sediaan
 BAB V

PRNUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil praktikum kali ini didapatkan kesimpulan sebagai berikut :

  Nilai regresi linear dari kurva kalibrasi yang didapat adalah 0.3960025.
  Nilai regresi linear dari kurva yang didapat jauh dari angka 1
 Konsentrasi yang didapat berdasarkan persamaan y = a + bx tidak menunjukkan data
yang baik.

Hal ini mungkin terjadi karena kesalahan pada saat praktikum, seperti :

 Membran difusi yang diletakkan dalam kondisi miring sehingga zat-zat tidak
terabsorbsi secara konstan dalam interval waktu tertentu.
 Cairan NaOH yang digantikan, kurang sesuai sehingga kadang terabsorbsi secara
 berlebihan dan kadang tidak terabsorbsi sama sekali.
 Cairan dapar fosfat yang digunakan dibuat dari pagi sejak awal praktikum sehingga
kemungkinan sudah terjadi penurunan PH dari dapar tersebut ketika digunakan pada
siang dan sore hari.

5.2 Saran

Berdasarkan kejadian yang telah kami alami saat praktikum, diharapkan pada praktikum
selanjutnya praktikan lebih berhati-hati dalam melakukan langkah-langkah dalam tiap tahap pada
metode kerja sesuai prosedur yang telah diarahkan sebelumnya. Adapun untuk cairan pendukung
 praktikum, seperti NaOH dan dapar fosfat lebih baik untuk dibuat dalam keadaan baru (fresh),
agar didapatkan hasil sesuai dengan yang diharapkan.
 DAFTAR PUSTAKA

Aiache, 1993, Farmasetika 2: Biofarmasi, terjemahan Widji Soeratri, Airlangga University

Press, Surabaya, 156-177, 213-224, 450-470.

Anggraeni, Citra Ayu. 2008. Pengaruh Bentuk Sediaan Krim, Gel dan Salep Terhadap Penetrasi
 Aminofilin Sebagai Antiselulit Secara In Vitro Menggunakan Sel Difusi Franz . Skripsi
Sarjana Farmasi : FMIPA UI.

Ansel, H.C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, diterjemahkan oleh Ibrahim, F., UI
Press, Jakarta,392.

Chien, Y.W., 1987, Novel Drug Delivery, Marcel Dekker Inc., New York, 301-375.

Connors, K.A. 1992. Stabilitas Kimiawi Sediaan Farmasi. Semarang : IKIP. Semarang Press.
Hal. 197.

Departemen Farmakologi dan Terapeutik. 2007. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta :

Fakultas Kedokteran UI. Hal. 235-239

Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV . Jakarta : DEPKES RI. Hal. 649.

Foye, William O. 1995. Principle Medical Chemistry Fourth Edition. New York : Williams and
Wilkins Publisher. Page. 544-545.

Hardman, J.G. 2001. The Pharmacological Basis of Therapeutics 10th E dition. New York :
McGraw Hill Publisher. Page. 687-731.

Harwood, R.J., 2006, Hydroxypropyl Methylcellulose in Handbook of Pharmaceutical

 Excipients, Fifth Edition, Rowe, R.C., P. J., Sheskey, P. J., Owen, S.C, Pharmacutical
Press, London, 252-255.

Henry, Arthur dkk. 2002. Analisis Spektrofotometri UV-Vis Pada Obat Influenza Dengan
 Menggunakan Aplikasi Sistem Persamaan Linier . Jakarta : KOMMIT UGM
th
Martin, A., Bustamante, P., dan Chun, A.H.C., 1993, Physical Pharmacy, 5  Edition, Lea and
Febiger, Washington, Philadelpia, 1083-1096, 324.

Moghimi, H.R., Barry, B.W., dan Williams, A.C., 1999, Stratum Corneum and Barrier
 Performance (A Model Lamellar Approach) dalam Percutaneous Absorption Drug
Cosmetics Mechanism Methodology, Bronaugh, R.L., dan Maibach, H.I, Marcell Dekker
Inc, New York, 515-545.

Munaf, Sjamsuir. (1994). Catatan Kuliah Farmakologi Bagian II. Jakarta : Penerbit Buku
Kedokteran EGC. Hal. 183-184.