IMOBILISASI
Immobilisasi artinya suatu usaha untuk
menjadikan enzim atau sel atau metabolit
sekunder yang semula bersifat mudah berubah
(mobile) menjadi tidak mudah berubah (mobile).
Immobilisasi dilakukan dengan menautkan enzim
atau sel atau metabolit sekunder tersebut pada
suatu bahan pendukung / support matrix
Alasan perlunya Immobilisasi :
 Penggunaan kembali (Reuse)
 Mempercepat waktu reaksi
 Meningkatkan produktivitas dan efisiensi
proses
 Melindungi produk enzim / sel / metabolit
agar tidak mudah rusak / terdenaturasi /
hilang aktivitasnya
Pemilihan matriks
 Kuat secara mekanis
 Dapat menahan enzim baik secara fisik atau
kimiawi (High enzyme capacity and retained
activity)
 Tidak bereaksi dengan substrat, produk,
ataupun enzim / sel / metabolit (Chemical
inertness)
TEKNIK ADSORBSI: Enzim / sel / metabolit secara
fisik nempel /adsorb pada permukaan adsorban
yang water-insoluble
TEKNIK IKATAN KOVALEN immobilisasi yang
ditandai dengan terbentuknya ikatan kovelen
antara carrier dan enzim / sel / metabolit.
TEKNIK PENJEBAKAN: Pada metode penjebakan
enzim / sel / metabolit tidak secara langsung
melekat pada permukaan bahan carrier, namun
terjebak dalam matriks polimer yang water-
insoluble.
TEKNIK IKATAN SILANG: Cross-linking melibatkan
terjadinya pengikatan silang antarmolekul enzim /
sel / metabolit dengan bahan matriks ataupun
tanpa bahan matriks.
IMMOBILISASI ENZIM didefinisikan sebagai sebuah
proses mengikat atau menahan molekul enzim
pada sebuah bahan pendukung padat tertentu
yang memungkinkan substrat dapat kontak
dengan enzim dan enzim dapat mengubahnya
menjadi produk.
IMMOBILISASI SEL  enzim langsung dihasilkan
oleh mikroba yang immobil selama mikroba hidup
atau mendapatkan akses terhadap substrat
enzim menjadi inaktif karena immobilisasi atau
isolasi dan purifikasi enzim memakan biaya tinggi.
SOLID STATE FERMENTATION (SSF) merupakan
salah satu metode fermentasi, dimana
mikroorganisme yang tumbuh pada substrat padat
dengan kadar air yang rendah. Substrat yang
digunakan dalam SSF biasanya merupakan
senyawa yang tidak larut dalam air, dan
mengandung komponen penting seperti C dan N.
 Kadar air : Kadar optimum tergantung pada
substrat, organisme dan tipe produk akhir.
Kisaran kadar air yang optimal adalah 50-75%.
Kadar air yang tinggi akan mengakibatkan
penurunan porositas, pertukaran gas, difusi
oksigen, volum gas, tetapi meningkatkan resiko
kontaminasi dengan bakteri
 Temperatur : Temperatur berpengaruh
terhadap laju reaksi biokimia selama proses
fermentasi
 Pertukaran gas :Pertukaran gas antara fase gas
dengan substrat padat mempengaruhi proses
fermentasi
Contoh (Fermentasi menggunkan A.niger untuk
memproduksi enzim hidrolisis pada bahan
makanan)
Prosedur
1. Bahan yang sudah digiling halus dicampur
dengan air (800 ml air untuk 1 kg bahan) dan
campuran mineral sebanyak 66,75 gam dengan
komposisi sebagai berikut : 3,6% (NH4)2SO4;
2% urea;0,75% NaH2PO4; 0,25% MgSO4 dan
0,75% KCl
2. Semua bahan dicampur sampaihomogen
kemudia dikukus selama 30 menit dan
didinginkan
3. Diinkubasi dengan spora A.niger sesuai dengan
perlakuan
4. Diinkubasi secara anaerobic dengan ketealan 2
cm pada baki plastic yang ditutupi dengan
 plastic dan disimpan pada suhu ruang (26°C)
selama 3 hari
5. Produk fermentasi diremas,
diaduk,dimampatkan,divakum dalam kantong
plastik dengan ukuran 2 kg.
6. Inkubasi secara enzimatis selama 3 hari
7. Dikeringkan lalu digiling
SUBMERGED FERMENTATION (SMF) merupakan
salah satu metode fermentasi dengan
menggunakan substrat cair. Penambahan maupun
penggantian nutrisi dalam media Submerged
Fermentation (SmF) berjalan kontinyu. Teknik
fermentasi ini paling cocok untuk mikroorganisme
seperti bakteri yang membutuhkan kadar air yang
tinggi.
Contoh (Pembuatan asam asetat dengan metode
fermentasi)
Prosedur
1. Umpan yang mengandung 8-12 % etanol
diinokulasi dengan Acetobacter acetigenum
2. Temperatur proses dipertahankan pada
rentang suhu 24-29 oC
3. Bakteri tumbuh di dalam suspensi antara
gelembung udara dan cairan yang difermentasi
4. Umpan di masukan melewati bagian atas tangki
5. Udara didistribusikan dalam cairan yang
difermentasi sehingga membentuk gelembung-
gelembung gas. Udara keluar tangki melewati
pipa pengeluaran di bagian atas tangki
6. Temperatur proses dipertahankan dengan
menggunakan koil pendingin stainless steel
yang terpasang di dalam tangki
7. Defoamer yang terpasang di bagian atas tangki
membersihkan busa yang terbentuk dengan
sistem mekanik
DIBANDINGKAN DENGAN SUBMERGED (SMF),
SOLID STATE FERMENTATION (SSF) lebih hemat
biaya, konsumsi air yang lebih rendah, mengurangi
biaya pengolahan air limbah dan konsumsi energi
yang lebih rendah, tingkat produktivitasnya tinggi,
tekniknya sederhana, recovery produknya lebih
baik, dan busa yang terbentuk sedikit. SSF lebih
cocok digunakan di negara-negara berkembang.
Faktor utama yang mempengaruhi sintesis
mikroba dalam sistem SSF meliputi; pemilihan
substrat yang cocok, jenis mikroorganisme, ruang
antar partikel dan luas permukaan substrat, kadar
air substrat, kontrol suhu fermentasi, kebutuhan
O2 dan lama fermentasi
KROMATOGRAFI AFINITAS: Pemisahan adsorptif
di mana molekul yang akan dimurnikan secara
khusus dan secara reversibel mengikat (adsorpsi)
ke zat pengikat komplementer (ligan) yang tidak
bergerak pada pendukung yang tidak larut
(matriks atau resin)
KROMATOGRAFI PENUKARAN ION
Prinsipnya adalah memisahkan berdasarkan
muatan "adsorpsi"
Protein bermuatan positif diadsorpsi secara
reversibel ke manik-manik/polimer bermuatan
negatif yang diimobilisasi
Protein bermuatan negatif diadsorpsi secara
reversibel ke manik-manik/polimer bermuatan
positif yang diimobilisasi
FILTRASI GEL ATAU PENGECUALIAN UKURAN
Molekul dipisahkan menurut perbedaan
ukurannya
Manik-manik polimer terdiri dari dekstran
(dekstrosa) yang terhubung silang yang sangat
berpori
Protein besar keluar lebih dulu (tidak muat di pori-
pori), protein kecil keluar terakhir (tertahan di
pori-pori)
HPLC merupakan jenis dari kromatografi kolom
dan bekerja dengan prinsip yang sama. Prinsip
utama dari kromatografi kolom adalah adanya
adsorbsi (penempelan permukaan) dari solut
(cairan sampel) ke dalam larutan melalui fase diam
yang menyebabkan adanya pemisahan solut
dengan larutan. Tingkat adsorbsi tergantung pada
afinitas dari fase diam dan fase gerak. Fase diam
terdiri dari adsorben seperti silika.
STRAIN IMPROVEMENT
Mutagenesis; perubahan yang terjadi pada urutan
DNA kita, baik karena kesalahan saat penyalinan
DNA atau akibat faktor lingkungan seperti sinar UV
dan asap rokok (paparan kondisi ekstrim)
Genome suffling: sebuah proses yang
menggabungkan keuntungan dari persilangan
multi-parental yang dimungkinkan oleh
pengocokan DNA dengan rekombinasi seluruh
genom yang biasanya terkait dengan pemuliaan
konvensional. (perkawinan secara seksual
Rekombinasi DNA: DNA rekombinan, yang sering
disingkat menjadirDNA, adalah untai DNA yang
dibuat secara artifisial yang dibentuk oleh
kombinasi dua atau lebih urutan gen. Kombinasi
baru ini mungkin atau mungkin tidak terjadi secara
alami, tetapi direkayasa secara khusus untuk
tujuan yang akan digunakan dalam salah satu dari
banyak aplikasi DNA rekombinan (spesifik cloning
bakterinya)
- Retriksi: memotong, mengetahui plasmid dan
gen interst
- Ligasi: merekatkan gen interet dengan
plasmid
- Insersi: memasukkan hybrid sel ke sel
kompeten (sel yang diinginkan)
- Seleksi: yang jelek akan mati dengan
sendirinya
Pada proses kontinyu ini akan didapat
keuntungan teknis baru yang tidak dapat dicapai
pada operasi batch seperti penggunaan ulang sel
serta pemisahan fase pertumbuhan sel dan fase
pembentukan produk fermentasi. Pada
percobaan batch tidak dilakukan penambahan
nutrien selama fermentasi. Oleh karena itu,
pertumbuhan eksponensial hanya berlangsung
selama beberapa generasi. Dengan sistem
kontinyu populasi mikroba dapat dipertahankan
dalam keadaan pertumbuhan eksponensial dalam
waktu lama. Setelah pertumbuhan dimulai,
medium segera dialirkan ke dalam tabung
fermentasi secara perlahan-lahan, dimana volume
dipertahankan konstan dengan dengan cara
mengalirkan keluar kelebihan volume dari tabung
fermentasi. Jika medium segar dialirkan dengan
kecepatan konstan ke dalam tabung fermentasi,
maka setelah periode penyesuaian beberapa
waktu tertentu densitas mikroba di dalam tabung
fermentasi juga konstan