 Berdasarkan sifat virus sebagai :

 Bahan kimia yg kompleks  dihitung secara

kimiawi / alami.
 Mikroorganisme hidup  dihitung berdasarkan
akibat interaksinya dengan sel hidup
(infektivitas)

• Penghitungan secara kimiawi dan alami

1. Dihitung langsung dengan mikroskop elektron
 tidak membedakan antara partikel virus
infeksius dng yg non infeksius.
2. Hemagutinasi  untuk virus yg mengaglutinasi
sel eritrosit manusia, ayam dll. Misalnya :
miksovirus, poxvirus.
Hemaglutinasi disebabkan hemaglutinin dari
virus  sehingga dapat jumlah partikel virus
dapat ditentukan.
• Penghitungan berdasarkan infektivitas
Kekuatan virus dalam menginfeksi ditentukan oleh
jumlah virus yg terkandung dalam suatu bahan untuk
menimbulkan respon yg spesifik dari host.
Penentuan secara kuantitatif kekuatan virus disebut
titrasi.
Pada titrasi virus  dapat ditentukan sejumlah kecil
virus yg dapat menimbulkan gejala atau perubahan yg
spesifik pada host.
Untuk menilai daya infeksi  Infeksius Unit (IU)
IU dinyatakan dalam :
 ID50 (Infective Dose 50)
 EID50 (Egg Infective Dose 50)
 TCID50 (Tissue Culture Infective Dose 50)
ID50  dosis minimal yg masih dapat menginfeksi
50% dari TAB, perbenihan jaringan atau ikan coba/uji
 LD50  bila infeksi berakhir dengan kematian
TCID50  infeksi yg positip berupa adanya efek
sitopatik pada sel-selnya dari perbenihan jaringan.

Titer virus dengan menghitung secara langsung

jumlah plaque yg terbentuk dan pengenceran
virus  dinyatakan dalam Plaque Forming Unit
(PFU)
Metode Dilution End Point (DEP)  menentukan
titik akhir.
DEP  pengenceran tertinggi yg masih dapat
menimbulkan reaksi positip pada hewan / ikan
percobaan, TAB, perbenihan jaringan
Caranya :
 Virus yg akan dititrasi  diencerkan dengan berbagi
pengenceran kelipatan 10, misalnya :
10-1, 10-2, 10-3 dst dengan pelarut PBS (phosphat
buffer saline) atau larutan PZ (NaCl physiologis)
dengan pH netral.
 Tiap-tiap pengenceran disuntikkan pada hewan/ikan
percobaan, TAB atau perbenihan jaringan.
 Diinkubasi  dihitung reaksi yang positip dan negatip.
 50% DEP ditentukan dengan rumus Reed & Muench
atau Spearman - Karber
Pengenceran CPE Jumlah Ratio + %
Virus pos
+ - + -
 
10-1 4 0 13 0 13/13 100
10-2 4 0 9 0 9/9 100
10-3 3 1 5 1 5/6 83
10-4 2 2 2 3 2/5 40
10-5 0 4 0 7 0/7 0
 (% pos pd pengenceran > 50% - (50%)
PD = --------------------------------------
(% pos pengenceran > 50%) – (% pos < 50%)
83 – 50 33
PD = ------------ = ----- = 0,77
83 – 40 43

50% DEP = 10-3-0,77 = 10-3,77 / vol. inokulum

TCID50 = 50% DEP x dosis
= 10-3,77 x 10-1 ml
= 10-4,77 ml
1 ml mengandung 104,77 TCID50 atau
Titer virus = 104,77 TCID50 / ml
 Cara Spearman – Karber

Pengencera CPE Proporsi Reaksi

n Virus + - +
10-1 4 0 4/4 = 1
10-2 4 0 4/4 = 1
10-3 3 1 3/4 = 0,75
10-4 2 2 2/4 = 0,5
10-5 0 4 0/4 = 0
Log TCID50 = L – d (s – 0,5)
L = log pengenceran terendah
d = perbedaan log pengenceran
s = jumlah proporsi positip

Log TCID50 = -1 -1 (3,25 – 0,5)

= -1 – 2,75
= -3,75
TCID50 = 10-3,75 / vol. inokulum
Titer virus = 103,75 TCID50 / vol. inokulum
 Soal
Suspensi 10 % dari jaringan ginjal ikan mas yang
terinfeksi SVCV dititer pada sel FHM dengan
menimbulkan CPE sebagai berikut :
10-3 10-4 10-5 10-6
5/5 4/5 2/5 1/5
Dosis inokulum = 0,1 ml
Berapa kandungan virus dalam tiap gram jaringan ?
(Kerjakan perhitungan titer virus berdasarkan
rumus dari Reed and Muench serta rumus dari
Karber)
 Suspensi 10% dari jaringan ovari ikan lele
yang terinfeksi virus CCV dititer pada telur
ayam berembrio dan memberikan hasil
sebagai berikut:
10-1 10-2 10-3 10-4
4/4 4/4 2/4 0/4
Berapa EID50 yang terkandung dalam tiap
gram jaringan, bila dosis inokulum 0,1 ml?
(Kerjakan perhitungan titer virus berdasarkan
rumus dari Reed and Muench serta rumus
dari Karber)