Praktikum

Praktikum III
III
PENGARUH AKTIVATOR, INHIBITOR
DAN KADAR ENZIM
PADA REAKSI ENZIMATIK
Untuk mengetahui pengaruh aktivator,
inhibitor dan kadar enzim terhadap
reaksi enzimatik, dilakukan berbagai
percobaan:
1. dengan aktivator
2. tanpa aktivator
3. dengan inhibitor
4. dengan kadar enzim yang lebih
besar
A
15 ml lar.buffer pH 6,5
3 ml lar.substrat
6 ml lar.NaCl
B
15 ml lar.buffer pH 6,5
3 ml lar.substrat
6 ml lar.aquadest
C 1
15 ml lar.buffer pH 6,5
3 ml lar.substrat
5 ml lar.aquadest
D
15 ml lar.buffer pH 6,5
3 ml lar.substrat
6 ml lar.aquadest
5 tts lar.HgCl2 1%
 4 ABD : 1 ml lar.enzim
C : 2 ml lar.enzim
Nyalakan stopwatch !

Pipet 1 ml
Kocok 3 5 6 7 8
sebentar

2
10 ml HCL

0’ 5’ 10’ 15’ 20’

9
 9

+ 1 ml larutan KI – KIO3
campur baik-baik, tunggu 5-10 menit

10

tentukan intensitas warna dengan spektrofotometer

11

hitung : absorbance waktu t

% subtrat yang dicerna= 100%- x 100%
absorbance waktu t0

12
isi tabel hasil
buat grafik percobaan
Larutan substrat (S):
polisakarida yang berwarna biru bila bereaksi
dengan yodium
ex: amilum, glikogen, sellulosa
Larutan enzim (E):
enzim yang mencerna polisakarida
ex: amilase, ptyalin
Product:
disakarida yang tidak berwarna bila bereaksi
dengan yodium
ex: maltosa
Jadi jumlah substrat yang tersisa dari reaksi
enzimatik dapat diketahui dengan mengukur
intensitas warnanya pada spektrofotometer

Fungsi HCl:
- melepaskan I2 dari KI-KIO3 untuk bereaksi
dengan sisa substrat yang belum dicerna
- memeberi suasana asam, menghentikan kerja
enzim karena denaturasi
Yang dapat mempengaruhi aktivitas reaksi
enzimatik:
- pH
- suhu
- kadar S
- kadar E
- modifier: aktivator, inhibitor
Gambar grafik paling atas :
-aktivator A
-kadar enzym >> C
-tanpa aktivator B
-inhibitor D
A:
- yang bertindak sebagai aktivator adalah Cl-
yang berasal dari NaCl, merangsang active site
pada enzim sehingga kecepatan reaksi enzimatik
menjadi lebih cepat dengan adanya aktivator
tersebut > kurva A lebih tinggi dari C
B:
- pada dasarnya reaksi enzimatik hanya
memerlukan unsur E dan S
- sebagai pembanding terhadap reaksi lainnya
C:
- kadar enzim > maka mampu mencerna
substrat lebih banyak
- penambahan aquadest hanya 5 ml, penambahan
enzim 2 ml
D:
- Hg++ sebagai inhibitor non kompetitif irreversibel
NaCl:
- Aktivator reaksi
- Yang berperan sebagai aktivator adalah Cl-
- Peningkatan laju reaksi enzimatik oleh karena
penambahan aktivator lebih besar daripada
penambahan kadar enzim

HgCl2:
- Ion logam berat Hg++ dapat mengubah
konformasi molekul enzim sehingga tidak dapat
mengikat substrat = inhibitor non kompetitif
irreversibel
Pembagian inhibitor

Berdasarkan sifat ikatan:

1. inhibitor reversibel
2. inhibitor irreversibel

Berdasarkan sifat kinetik:

1. inhibitor kompetitif
2. inhibitor non kompetitif
Inhibitor kompetitif:
- penghambat laju reaksi enzimatik dengan cara
menghalangi terikatnya substrat pada enzim
sehingga efeknya dapat dikurangi/ditiadakan
dengan peningkatan kadar substrat
- sifatnya selalu reversibel
Inhibitor non kompetitif:
- penghambat laju reaksi enzimatik dengan cara
menghambat proses katalisa (menurunkan Vmax)
dan efeknya tidak dapat dikurangi/ditiadakan
dengan peningkatan kadar substrat
- dapat bersifat reversibel maupun irreversibel
Inhibitor non kompetitif reversibel:

- Dapat berikatan dengan E atau kompleks ES

- Berikatan dengan E pada tempat yang tidak sama
dengan S
- Strukturnya tidak sama dengan S
Inhibitor non kompetitif irreversibel:

- Menghambat reaksi enzimatik dengan cara

berikatan dengan E secara irreversibel
- Mengubah konformasi seluruh E atau merubah
konfigurasi active site sehingga enzim menjadi
inactive
- Menurunkan kadar E aktif, sisa E yang tidak
berikatan dengan inhibitor tetap aktif
- Sebagian besar merupakan ion logam berat: Hg,
Ag, Ba
Pengaruh kadar enzim terhadap suatu reaksi
enzimatik:
- Kadar enzim mempengaruhi kecepatan initial
- Kadar enzim berbanding lurus dengan kecepatan
awal, tetapi kecepatan reaksi rata-rata tidak
berbanding lurus dengan kadar enzim
- Semakin tinggi kadar enzim, semakin banyak
substrat yang dicerna
- Misalnya peningkatan kadar enzim menjadi 2x
lipat, maka V max’ = 2 x Vmax