GAMBARAN AKTIVITAS ENZIM LAKTAT

DEHIDROGENASE (LDH) PADA JARINGAN KELOID

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk

memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN

OLEH :

Raeiza Olyvia Rachman

NIM :1111103000057

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1435 H/2014
ii
LEMBAR PENGESAHAN

iii
iv
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur peneliti panjatkan kepada Allah SWT, atas berkah dan
rahmat-Nya sehingga peneliti dapat menyelesaikan laporan penelitian ini. Peneliti
menyadari, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, maka penelitian ini
tidak akan terselesaikan. Oleh karena itu, ucapan terima kasih peneliti haturkan
kepada:
1. Prof. Dr (hc). dr. M.K Tadjudin, SpAnd, dr. M. Djauhari Widjajakusumah,
DR. Arif Sumantri, S.KM, M.Kes, Dra. Farida Hamid, MA selaku Dekan dan
Wakil Dekan FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. dr. Witri Ardini, M.Gizi, SpGK selaku Ketua Program Studi Pendidikan
Dokter FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Ibu Endah Wulandari, M.Biomed selaku pembimbing 1 yang telah
memberikan masukan dan nasihat serta meluangkan waktu, pikiran, dan
tenaga dalam membimbing peneliti.
4. dr. Ahmad Azwar Habibi, M.Biomed selaku pembimbing 2 yang telah
memberikan motivasi serta mencurahkan waktu, pikiran, dan tenaga untuk
membimbing peneliti dalam melakukan penelitian dan menyusun laporan
penelitian ini.
5. dr. Flori Ratna Sari, Ph.D selaku penanggung jawab modul Riset yang selalu
mengarahkan dan mengingatkan peneliti untuk segera menyelesaikan
penelitian.
6. Kedua orang tua peneliti, Arief Rachman dan Azizah, terima kasih untuk kasih
sayang dan doa yang terus menerus dipanjatkan, serta pengorbanan yang
penuh keikhlasan dan keridhoan yang menjadikan kelancaran dalam setiap
langkah hidup peneliti.
7. Adik tersayang, Shelly Monica Rachman, terima kasih untuk doa dan
dukungan yang selalu diberikan.
8. Ibu Ayi selaku laboran di Laboratorium Biokimia FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang telah membantu dan mendampingi peneliti selama
melakukan penelitian dan pengambilan data.

v
9. Mbak Suryani, selaku laboran di Laboratorium Biologi FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta yang telah membantu peneliti selama pengambilan data
penelitian.
10. Teman kelompok riset, Zulfahmi Siregar, dan teman-teman PSPD angkatan
2011. Terima kasih atas kerja sama, dukungan, dan semangat yang diberikan.
11. Hafizh Nizham, terima kasih atas motivasi dan keceriaan yang selalu
diberikan.
12. Muflikha Mayazi, Afiati, Helvia, Silmi, teman-teman kost VLDL, Yofara,
Tiara, Madina, Cut Neubi Getha, Nadisha, Herlina, Hania, dan Leily . Terima
kasih atas doa, dukungan, semangat dan canda tawa yang diberikan. Semoga
kekompakan kita menjadi awal untuk kesuksesan kita selanjutnya.

Peneliti menyadari bahwa laporan penelitian ini masih jauh dari kata
sempurna. Oleh karena itu, kritik dan saran yang membangun sangat peneliti
harapkan. Demikian laporan penelitian ini peneliti susun, semoga dapat
memberikan sumbangsih bagi kemajuan ilmu pengetahuan.

Ciputat, September 2014

Peneliti

vi
 ABSTRAK

Raeiza Olyvia Rachman. Program Studi Pendidikan Dokter. Gambaran Aktivitas

Enzim Laktat Dehidrogenase (LDH) pada Jaringan Keloid. 2014.

Keloid terjadi akibat ketidakseimbangan antara sintesis dan degradasi kolagen

pada penyembuhan luka. Sebagai jaringan yang mengalami proliferasi berlebih,
maka keloid menempuh jalur glikolisis dan fosforilasi oksidatif sebagai jalur
alternatif tambahan untuk memenuhi kebutuhan energinya. Tujuan dari penelitian
ini adalah untuk mengetahui peran laktat dehidrogenase (LDH) dalam mekanisme
peralihan metabolisme glikolisis ke fosforilasi oksidatif dalam upaya memenuhi
pasokan energi pada pembentukan jaringan keloid. Penelitian ini bersifat
deskriptif dengan desain cross sectional. Sampel jaringan keloid diperoleh dari
biopsi sepuluh jaringan keloid pasien dari beberapa rumah sakit dan sebagai
kontrol adalah sampel kulit normal yang berasal dari preputium sepuluh pasien
sirkumsisi massal di FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Aktivitas laktat
dehidrogenase (LDH) tiap sampel diuji dan dianalisa dengan uji t independen,
kemudian dibandingkan. Hasil penelitian menunjukkan terdapat perbedaan
bermakna antara aktivitas LDH jaringan keloid dengan kontrol. (p = 0.023)

Kata kunci : keloid, aktivitas laktat dehidrogenase

ABSTRACT

Raeiza Olyvia Rachman. Medical Education Study Programme. The Desription of

Lactate Dehydrogenase Enzyme Activity (LDH) in Keloids Tissue. 2014.

Keloids are formed as a result of the imbalancy between the synthesis and
degradation of collagen at the wound healing process. As an over-proliferated
tissue, keloids will pass through the glycolysis and oxidative phosphorylation as
an alternative pathways in order to full fill the energy. Aim of this study was to
determine the role of lactate dehydrogenase (LDH) in the transition mechanism of
glycolytic metabolism to oxidative phosphorylation in an effort to full fill energy
supply in the formation of keloids tissue. This is descriptive study using cross-
sectional design. Keloids tissue samples were taken from the biopsies of ten
patients from several hospitals and a control samples is a normal skin that were
derived from prepuce of ten patients who were circumcised at mass circumcision
in FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. The activity of lactate dehydrogenase
(LDH) of each sample were tested and analyzed by independent t test, and then
compared. The results showed there were significant differences between keloids
tissue LDH activity with controls. (p = 0.023)

Keywords: keloids, the activity of lactate dehydrogenase

vii
 DAFTAR ISI

LEMBAR JUDUL ............................................................................................. i

LEMBAR PERNYATAAN .............................................................................. ii
LEMBAR PERSETUJUAN ............................................................................. iii
LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................. iv
KATA PENGANTAR ....................................................................................... v
ABSTRAK ......................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL.............................................................................................. x
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xi
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xii

BAB I PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2.Rumusan Masalah ......................................................................................... 3
1.3.Hipotesis ........................................................................................................ 3
1.4.Tujuan Penelitian .......................................................................................... 3
1.4.1. Tujuan Umum ..................................................................................... 3
1.4.2. Tujuan Khusus .................................................................................... 3
1.5.Manfaat Penelitian ........................................................................................ 4
1.5.1. Bagi Peneliti ....................................................................................... 4
1.5.2. Bagi Institusi ....................................................................................... 4
1.5.3. Bagi Masyarakat ................................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1.Penyembuhan Luka ....................................................................................... 5

2.2.Keloid ............................................................................................................ 7
2.2.1. Epidemiologi ...................................................................................... 9
2.2.2. Etiologi ............................................................................................... 10
2.2.3. Patogenesis dan Patofisiologi Keloid ................................................. 10
2.2.4. Sifat dan Karakteristik Keloid ............................................................ 11
2.3.Aktivitas Metabolisme Sel ............................................................................ 12
2.3.1. Glikolisis ............................................................................................. 12
2.3.2. Fosforilasi Oksidatif ........................................................................... 13
2.4.Aktivitas Metabolisme Keloid ...................................................................... 13
2.4.1. Laktat Dehidrogenase (LDH) ............................................................. 15
2.4.2. Peningkatan Aktivitas Laktat Dehidrogenase Pada Keloid ................ 16
2.5.Perkembangan Terapi Untuk Keloid Saat Ini ............................................... 17
2.6.Kerangka Teori.............................................................................................. 18
2.7.Kerangka Konsep .......................................................................................... 19
2.8.Definisi Operasional...................................................................................... 19

viii
BAB III METODE PENELITIAN

1.1.Jenis dan Desain Penelitian ........................................................................... 20

1.2.Waktu dan Tempat Penelitian ....................................................................... 20
1.3.Sampel ........................................................................................................... 20
1.4.Alat dan Bahan Penelitian ............................................................................. 21
1.4.1. Alat Penelitian .................................................................................. 21
1.4.2. Bahan Penelitian ............................................................................... 21
1.5.Cara Kerja Penelitian .................................................................................... 22
1.5.1. Pengambilan Sampel ........................................................................ 22
1.5.2. Pembuatan Homogenat..................................................................... 22
1.5.3. Pengukuran Aktivitas Laktat Dehidrogenase ................................... 22
1.6.Alur Penelitian .............................................................................................. 23
1.7.Pengolahan dan Analisis Data ....................................................................... 23

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1.Karakteristik Sampel ..................................................................................... 24

4.2.Pengukuran Aktivitas Laktat Dehidrogenase ................................................ 25

BAB V SIMPULAN DAN SARAN

5.1.Simpulan ....................................................................................................... 29
5.2.Saran.............................................................................................................. 29

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 30

LAMPIRAN ....................................................................................................... 32

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Perbedaan Epidemiologi, Klinis dan Histologis antara Keloid dan
Hypertrophic Scars............................................................................ 7
Tabel 2.2. Keadaan yang Memengaruhi Aktivitas LDH Total ........................... 15
Tabel 4.1. Perbedaan Rerata Aktivitas Laktat Dehidrogenase antara Jaringan
Keloid dan Kontrol ............................................................................ 26
Tabel 4.2. Hasil Uji Normalitas Distribusi.......................................................... 26
Tabel 4.3. Deskripsi Hasil Uji T Independen Perbedaan Aktivitas LDH antara
Jaringan Keloid dengan Kontrol ........................................................ 27

x
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Proses Penyembuhan Luka ............................................................. 6

Gambar 2.2. Gambaran Klinis Keloid dan Hypertrophic Scar ........................... 9
Gambar 2.3. Perbedaan Proses Metabolisme Glukosa antara Jaringan Normal
dengan Jaringan Proliferatif dan Sel Tumor .................................. 14
Gambar 4.1. Gambaran Aktivitas Laktat Dehidrogenase Jaringan Keloid ......... 25

xi
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Persetujuan Etik ............................................................................... 32

Lampiran 2 Alat dan Bahan Penelitian ............................................................... 33
Lampiran 3 Dokumentasi Penelitian ................................................................... 35
Lampiran 4 Daftar Riwayat Hidup ...................................................................... 37

xii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Keloid merupakan manifestasi dari sintesis dan deposit kolagen yang tidak
terkontrol pada lokasi utama luka yang terjadi selama fase penyembuhan luka.
Keloid timbul melebihi batas asli luka.1,2 Dilaporkan bahwa sekitar 5-15%
terjadinya luka, pada akhir proses pemulihan akan terbentuk suatu jaringan parut
yang nantinya akan berkembang menjadi keloid. Insidensi timbulnya keloid
terbanyak terjadi pada usia 10-30 tahun. Setiap tahunnya di negara berkembang,
terdapat 100 juta pasien dengan keluhan timbul jaringan parut di mana 55 juta
diantaranya merupakan dampak dari pembedahan elektif dan 25 juta kasus lainnya
merupakan hasil pembedahan dari kasus trauma.2,3,4 Nemeth (1993), menyebutkan
angka kejadian keloid antara 4,5-16% telah dilaporkan terjadi pada populasi yang
didominasi ras kulit hitam dan Hispanik, dan 16% diantaranya terjadi pada ras
kulit hitam Afrika. Angka kejadian keloid di Hawai, ditemukan lima kali lebih
banyak pada orang-orang keturunan Jepang dan tiga kali lebih banyak pada orang
keturunan Cina dari orang kulit putih (Polinesia). Pada penduduk Cina kejadian
keloid lebih sering dari pada penduduk India dan Malaysia.5 Di Indonesia sendiri,
berdasarkan hasil penelitian observasional yang dilakukan di RSU dr. Soetomo
Surabaya, pada 30 kasus keloid, diperoleh data bahwa 76.67% penderita keloid
berusia 10-30 tahun dan terbanyak pada wanita.6 Hingga saat ini etiologi keloid
belum diketahui. Keloid akan muncul setelah terjadi cedera pada kulit, misalnya
bila terjadi luka pada pasca operasi, laserasi, abrasi pada kulit, vaksinasi, jerawat
dan lain-lain.2,3,4

Keloid secara estetika, merupakan permasalahan yang serius dimana

keberadaannya dinilai sangat mengganggu, terutama bila ukurannya besar dan
lokasinya terdapat di daerah telinga atau wajah. Hal ini cenderung menimbulkan
penurunan kepercayaan diri pada penderita di lingkungan sosialnya. Keloid
diduga memiliki keterkaitan erat dengan faktor genetik.3 Oleh sebab itu, individu
yang memiliki riwayat keluarga dengan bakat keloid memiliki peluang timbul

1
 2

keloid lebih besar dibanding yang tidak memiliki riwayat keluarga dengan keloid.
Dalam hal ini, individu yang memiliki riwayat keluarga dengan keloid tentunya
akan memiliki kekhawatiran bila suatu saat terjadi luka pada dirinya akan timbul
jaringan keloid pada akhir proses penyembuhan lukanya.2

Pada pembentukan keloid terjadi peningkatan produksi jaringan ikat

terutama kolagen yang tidak terkontrol. Jaringan ikat kolagen tersebut dihasilkan
oleh sel fibroblas. Peningkatan produksi jaringan ikat yang ditimbulkan pada saat
pembentukan keloid tersebut, diikuti pula dengan peningkatan kebutuhan energi
(ATP). Pada sel kulit yang normal, ATP disintesis di mitokondria melalui
fosforilasi oksidatif. Namun, pada tumor dan jaringan proliferatif seperti keloid,
memiliki kecenderungan untuk melakukan glikolisis daripada fosforilasi oksidatif
dalam menghasilkan ATP, fenomena ini dikenal dengan Warburg effect. Sebagian
besar glukosa dikonversi menjadi piruvat, 85% piruvat diantaranya diubah
menjadi laktat. Glikolisis yang terjadi kurang efisien daripada fosforilasi oksidatif
dalam menghasilkan ATP. Oleh karena itu, keloid juga melakukan fosforilasi
oksidatif dengan menambah substrat respirasi untuk menghasilkan ATP.7

Laktat dehidrogenase (LDH) merupakan enzim intraseluler yang terdapat

pada hampir semua sel yang bermetabolisme. Aktivitas LDH total dalam serum
dapat meningkat pada hampir semua keadaan kerusakan organ atau jaringan atau
bila terjadi destruksi sel. Pada glikolisis, LDH berperan dalam mengkatalisis
konversi piruvat menjadi laktat. Oleh karena 85% piruvat pada keloid di konversi
menjadi laktat, maka aktivitas LDH pada keloid meningkat. Dengan demikian,
LDH diduga memiliki peran dalam mendukung pembentukan keloid. 7,8,9

Kemble dan Brown (1976) telah melakukan penelitian mengenai aktivitas

enzim pada jaringan parut, hypertrophic scar dan keloid kulit manusia.
Pengamatan dilakukan secara histokimia untuk melihat aktivitas nicotinamide
adenine dinucleotide diaphorase, lactate dehydrogenase, acid phosphatase, -D
glucoronidase dan alkaline phosphatase. Hasilnya didapatkan peningkatan semua
aktivitas enzim kecuali alkaline phosphatase pada hypertrophic scar. Pada
penelitian tersebut disebutkan terdapatnya peningkatan aktivitas laktat
dehidrogenase pada hypertrophic scar bila dibandingkan dengan non-
 3

hypertrophic scar dan kulit normal.10 Tetapi pada penelitian tersebut tidak
menjelaskan peningkatan laktat dehidrogenase pada jaringan keloid.

Dari hasil latar belakang di atas, pada penelitian ini diharapkan

mengetahui aktivitas LDH dalam mekanisme pembentukan keloid dengan
membandingkan aktivitas LDH jaringan keloid dan jaringan kontrol. Jaringan
kontrol yang digunakan dalam penelitian adalah sampel kulit normal yang berasal
dari preputium.

1.2. Rumusan Masalah

Bagaimana gambaran aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) pada jaringan

keloid ?

1.3. Hipotesis

Aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) pada jaringan keloid lebih tinggi

bila dibandingkan dengan kontrol (preputium).

1.4. Tujuan
1.4.1. Tujuan Umum

Mengetahui aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) dalam mekanisme

peralihan metabolisme glikolisis ke fosforilasi oksidatif dalam upaya memenuhi
pasokan energi pada pembentukan jaringan keloid.

1.4.2. Tujuan Khusus

Mengukur aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) pada jaringan keloid dan

kontrol (preputium).
 4

1.5. Manfaat Penelitian

1.5.1. Bagi Peneliti
1. Mendapatkan pengalaman dalam melakukan penelitian di bidang
kesehatan.
2. Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran di
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
1.5.2. Bagi Institusi
1. Penelitian ini dapat menambah referensi penelitian di Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Penelitian ini dapat menjadi dasar bagi penelitian selanjutnya dalam upaya
mencari mekanisme pencegahan dengan target terapi yang lebih tepat
untuk keloid di masa yang akan datang
3. Penelitian ini dapat digunakan sebagai referensi untuk melakukan
penelitian lebih dalam bagi peneliti lain.
1.5.3. Bagi Masyarakat
1. Sebagai pengetahuan mengenai tanda dan gejala yang timbul pada keloid.
 5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Penyembuhan Luka

Luka adalah suatu keadaan dimana terjadi kerusakan kontinuitas jaringan,

baik disebabkan oleh trauma, zat kimia, listrik, maupun radiasi. Proses alami yang
terjadi selama terjadinya luka dibagi menjadi 3 fase:11,12

- Fase inflamasi atau lag phase

Berlangsung hingga hari kelima. Akibat luka, terjadi perdarahan, trombosit

dan sel-sel radang ikut keluar. Trombosit mengeluarkan mediator inflamasi sepeti
prostaglandin, tromboksan, substansi kimia dan asam amino tertentu yang
berpengaruh terhadap proses pembekuan darah dan kemotaksis terhadap leukosit.
Terjadi vasokonstriksi dan proses penghentian perdarahan. Mediator inflamasi
keluar dari pembuluh darah secara diapedesis dan menuju daerah luka secara
kemotaksis. Sel mast mengeluarkan serotonin dan histamin yang meningkatkan
permeabilitas kapiler, terjadi eksudasi cairan. Dengan demikian, timbul tanda-
tanda inflamasi seperti kalor, dolor, dan rubor. Leukosit, limfosit, dan monosit
mendestruksi dan memfagositosis debris dan mikroorganisme. Pertautan luka
pada fase ini hanya dilakukan oleh fibrin, belum ada kekuatan pertautan luka
sehingga disebut fase lag (tertinggal).

- Fase proliferasi atau fase fibroplasia

Berlangsung dari hari keenam. Terjadi proses proliferasi dan pembentukan

fibroblas yang berasal dari sel-sel mesenkim. Fibroblas menghasilkan
mukopolisakarida dan serat kolagen yang terdiri dari asam-asam amino glisin,
prolin, dan hidroksiprolin. Mukopolisakarida mengatur deposisi serat-serat
kolagen yang akan mempertautkan tepi luka. Serat-serat baru, dibentuk dan sel
yang tidak diperlukan dihancurkan sehingga luka dapat mengerut dan mengecil.
Pada fase ini, luka diisi oleh sel-sel radang, fibroblas, serat-serat kolagen, dan
kapiler-kapiler baru, sehingga terbentuk suatu jaringan yang tampak kemerahan,
dengan permukaan tidak rata, yang disebut jaringan granulasi. Epitel sel basal
 6

pada tepi luka terlepas dari dasarnya dan pindah menutupi dasar luka, tempatnya
diisi oleh hasil mitosis sel lain. Proses migrasi epitel hanya berjalan ke permukaan
yang rata atau lebih rendah, tidak dapat naik. Pembentukan jaringan granulasi
berhenti setelah seluruh permukaan luka tertutup oleh epitel dan mulailah proses
maturasi dari penyembuhan luka.

- Fase maturasi / remodeling

Dapat berlangsung berbulan-bulan. Dikatakan berakhir bila tanda-tanda

inflamasi sudah tidak nampak. Parut disekitarnya berwarna pucat, tipis tidak ada
rasa sakit maupun gatal. Disini proses kontraksi parut kelihatan dominan.

Keloid Luka pulih

Eosinophilic collagen bundles

Gambar 2.1. Proses Penyembuhan Luka12

Sumber : Kumar, 2007 dan http://commons.wikimedia.org

 7

2.2. Keloid

Keloid merupakan manifestasi dari sintesis dan deposit kolagen yang tidak
terkontrol pada lokasi utama luka yang terjadi selama fase penyembuhan luka.
Keloid timbul melebihi batas asli luka.1,2 Keloid dapat dikatakan pula sebagai
tumor jinak jaringan ikat kulit yang umumnya timbul akibat trauma. Keloid terjadi
akibat mekanisme proliferasi berlebihan dari jaringan ikat dalam merespon luka
atau trauma pada kulit. Berdasarkan luasnya jaringan, terdapat perbedaan antara
keloid dengan hypertrophic scar, yaitu pada hypertrophic scar, peningkatan
jaringan hanya terbatas pada lokasi asal cedera. Sedangkan pada keloid, luasnya
peningkatan jaringan dapat melebihi lokasi asal cedera atau melebihi garis batas
luka awal, menginvasi kulit normal disekitarnya dan sering terjadi perpanjangan
seperti cakar (clawlike extensions).3,13,14,15

Tabel 2.1. Perbedaan Epidemiologi, Klinis dan Histologis antara Keloid dan
Hypertrophic Scars, 16,17

Keloid Hypertrophic scar

Insidensi 6-16% pada populasi 40-70% terjadi setelah
Afrika pembedahan, 91% terjadi
setelah luka bakar.
Insidensinya sama baik
pada laki-laki maupun
perempuan. Insidensi
tertinggi terjadi pada usia
20-30 tahun.
Predileksi Dada bagian anterior, Bahu, leher, presternum,
telinga, pipi, lengan atas, tungkai bawah.
bahu.
Waktu terjadi Keloid membutuhkan Hypertrophic scar dapat
waktu dalam hitungan tumbuh dalam waktu 4
bulan sampai tahun untuk hingga 6 minggu pasca
tumbuh dan berkembang. trauma. Regresi spontan
 8

Tidak mengalami regresi dalam beberapa tahun.

spontan. Memungkinkan untuk
Dapat kambuh/ tumbuh dilakukan eksisi tanpa
kembali setelah dilakukan menimbulkan kekambuhan.
eksisi
Karakteristik Secara Luka minor dapat Ukuran sama dengan luka
Makroskopik menghasilkan asli. Bekas luka hipertrofik
pertumbuhan keloid yang tetap dalam batas luka asli,
luas. Keloid dapat tumbuh cenderung linier sepanjang
membesar dan melebar bekas luka.
melampaui tepi luka,
bentuknya irregular.
Karakteristik Secara Berkas kolagen umumnya Terjadi peningkatan
Mikroskopik lebih besar dan irregular. kepadatan fibroblast.
Jaringan ikat kolagen Ukuran pembuluh darah
tersusun tidak teratur dan kecil.
longgar.
Terjadi peningkatan
kolagen tipe I dan kolagen
tipe III.
Pembuluh darah pada area
keloid mengalami
penyempitan atau bahkan
oklusi total.
Sumber : (Gauglitz G, et al., 2011) dan (Dan Vincent, Annette S, 2009), tabel telah diolah kembali
 9

A B

Gambar 2.2. Gambaran Klinis Keloid dan Hypertrophic Scar.

(A) Keloid pada bagian dada seorang laki-laki, yang tumbuh perlahan dalam
waktu 15 tahun pasca trauma; (B) Hypertrophic scar pada tungkai bawah.16
Sumber : (Kelly A Paul, 2009) dan (Gauglitz et al, 2011)

2.2.1. Epidemiologi Keloid

Dilaporkan sekitar 5-15% dari bekas luka, pada akhir proses pemulihan
akan terbentuk suatu jaringan parut yang nantinya akan berkembang menjadi
keloid. Keloid secara estetika, merupakan permasalahan yang serius dimana
keberadaannya dinilai sangat mengganggu, terutama bila ukurannya besar dan
lokasinya terdapat di daerah telinga atau wajah. Insidensi timbulnya keloid
terutama terjadi pada anak-anak dan dewasa muda, puncaknya antara usia 10-30
tahun. Namun dapat juga terjadi pada semua usia dengan insidensi yang sama
pada laki-laki dan perempuan. Umumnya terjadi pada ras kulit hitam dengan
insidensi 15 kali lebih sering daripada ras kulit putih dan terjadi pada orang
dengan golongan darah A. Orang Afro-Karibia merupakan golongan yang sangat
rentan mengalami keloid, meskipun setiap kelompok etnis dapat terkena. 2,3,4

Angka kejadian keloid antara 4,5 hingga 16 persen telah dilaporkan pada
populasi yang didominasi ras kulit hitam dan Hispanik, dan sampai 16% pada
random sampling ras kulit hitam Afrika. Di Hawaii, keloid yang ditemukan lima
kali lebih sering pada orang-orang keturunan Jepang dan tiga kali lebih sering
pada orang keturunan Cina dari orang kulit putih. Pada penduduk Cina kejadian
keloid lebih sering daripada penduduk India dan Malaysia.5
 10

Indonesia, berdasarkan hasil laporan dari penelitian observasional yang

dilakukan di RSU dr. Soetomo Surabaya, pada 30 kasus keloid, diperoleh data
bahwa 76.67% penderita keloid berusia 10-30 tahun dan terbanyak pada wanita.
Dari hasil tersebut diperkirakan bahwa pada rentang usia 10-30 tahun, kasus
trauma lebih sering dialami dan laju sintesis kolagen lebih besar pada rentang usia
tersebut. Angka kejadian keloid lebih besar terjadi pada wanita daripada pria, hal
tersebut kemungkinan berhubungan dengan tradisi menindik telinga pada wanita
dan mayoritas pasien yang datang berobat adalah wanita untuk kepentingan
estetika.6

2.2.2. Etiologi Keloid

Etiologi pasti keloid belum diketahui, keloid umumnya muncul mengikuti

cedera pada kulit, misalnya bekas luka operasi, laserasi, abrasi pada kulit,
cryosurgery, dan elektrokoagulasi serta vaksinasi, jerawat dan lain lain. Keloid
juga diduga memiliki disposisi familial yang erat dimana telah dilaporkan genetik
keloid dapat terjadi baik secara autosomal dominan maupun resesif dan berkaitan
dengan Human Leukocyte Antigen (HLA) faktor B14, B21, BW16, BW35, DR5,
DQW3, dan golongan darah A.2,3,4

2.2.3. Patogenesis dan Patofisiologi Keloid

Pembentukan keloid melibatkan ekspresi transforming growth factor-

(TGF-) oleh sel-sel endotel neovaskular dengan berikutnya produksi autokrin
TGF- oleh fibroblas yang berdekatan. Ekspresi gen kolagen tipe I dan VI juga
ditingkatkan dalam jaringan keloid. Meskipun aktivitas kolagenase juga
meningkat pada keloid, peningkatan sintesis kolagen melampaui jumlah destruksi,
menghasilkan kelebihan bersih deposisi jaringan ikat. Jaringan ikat kolagen
tersebut dihasilkan oleh sel fibroblas. Pada mikroskop cahaya, keloid menyerupai
jaringan parut hipertrofik, tetapi perbedaan morfologi dapat dilihat pada level
ultrastruktural.5
 11

Kegiatan sintesis yang terganggu ini dimediasi oleh perubahan ekspresi

growth factor. Ekspresi TGF- lebih tinggi pada hypertrophic scar. Baik
hypertrophic scar maupun keloid berasal dari kemampuan fibroblast dalam
merespon tingginya konsentrasi TGF- daripada growthfactor-1 normal yang
dapat mengurangi aktivitas kolagenase mRNA dan meningkatkan mRNA
prokolagen tipe I dan II. Banyak yang menyimpulkan terdapat keterlibatan sel
imun pada hypertrophic scar dan keloid. Contohnya baik pada hypertrophic scar
maupunkeloid, sel keratinosit mengekspresikan HLA-2 dan reseptor ICAM-1,
dimana keduanya tidak terdapat dalam keratinosit jaringan parut normal. Keloid
juga memiliki peningkatan deposisi immunoglobulin, diantaranya IgG, IgA, dan
IgM, dimana formasinya berhubungan dengan level serum IgE. Antibodi
antinuklear melawan fibroblast, sel epitelial, dan sel endotelial dapat ditemukan
pada keloid, tetapi tidak pada hypertrophic scar. Terdapat pula peningkatan
jumlah sel mast.5

2.2.4. Sifat dan Karakteristik Keloid

Keloid dapat juga muncul secara spontan, tanpa riwayat cedera, biasanya
pada daerah presternal. Gejala umumnya asimptomatik, namun dapat juga terasa
gatal dan nyeri jika di sentuh.3 Lesi yang masih awal biasanya kenyal,
permukaannya licin, seperti karet dan sering disertai rasa gatal. Sedangkan pada
lesi yang lanjut biasanya sudah mengeras, hiperpigmentasi, dan asimptomatik.

Pada pemeriksaan fisik didapatkan lesi dengan karakteristik mulai dari

papul, nodul sampai lesi tuberous besar. Umumnya dapat tampak seperti warna
kulit normal, dapat juga merah muda, merah terang bahkan ada juga yang
kebiruan. Dapat terjadi linear setelah cedera traumatik atau bedah. Keloid dapat
tumbuh menjalar memanjang melebihi garis batas asal luka dan dapat pula
membentuk nodular (tumor-like). Pada palpasi dapat teraba jaringan keloid lunak
hingga keras, mungkin juga lembut dengan permukaan yang tampak halus.14
Secara histopatologi tampak susunan jaringan fibrosa yang masih muda dan
fibroblas yang tersusun tidak beraturan, eosinofilik dan terdapat pita-pita jaringan
 12

kolagen. Gambaran lainnya menunjukkan adanya hialinisasi serabut kolagen yang

tersusun melingkar.14

2.3. Aktivitas Metabolisme Sel

2.3.1. Glikolisis

Setiap sel dalam tubuh manusia dapat menghasilkan ATP dari glikolisis.
Glikolisis merupakan suatu jalur dimana glukosa mengalami oksidasi dan
pemecahan menjadi piruvat. Glikolisis yang berlangsung di sitosol, secara
langsung menghasilkan ATP melalui pemindahan fosfat berenergi tinggi dari zat
antara pada jalur tersebut ke ADP (fosforilasi tingkat substrat). Dalam proses ini,
NAD+ tereduksi menjadi NADH. Bila sel memiliki kapasitas oksidatif yang cukup
tinggi (jumlah mitokondria, enzim mitokondria, dan oksigen yang adekuat),
ekuivalen reduksi pada NADH dapat dipindahkan ke rantai transport elektron
mitokondria, dan piruvat dapat dioksidasi secara sempurna menjadi CO 2 dalam
siklus asam trikarboksilat. Oksidasi aerob glukosa menjadi piruvat dan oksidasi
piruvat menjadi CO2 menghasilkan 36-38 mol ATP per mol glukosa.8

Pada kondisi di mana kapasitas oksidatif sel terbatas oleh kapasitas

mitokondria atau ketersediaan oksigen, NADH yang dihasilkan dari glikolisis
mengalami reoksidasi melalui perubahan piruvat menjadi laktat yang dikatalisis
oleh laktat dehidrogenase. Perubahan glukosa menjadi laktat disebut glikolisis
anaerob, yang artinya dalam proses ini tidak memerlukan molekul oksigen. Energi
yang dihasilkan dari glikolisis anaerob adalah 2 mol ATP per mol glukosa atau
jauh lebih kecil daripada hasil glikolisis aerob. Dengan demikian, glikolisis
anaerob harus berlangsung sekitar 19 kali lebih cepat daripada oksidasi glukosa
aerob untuk menghasilkan ATP dalam jumlah yang sama per satuan waktu.
Fungsi utama jalur glikolitik adalah pembentukan ATP yang diatur secara umpan-
balik oleh ATP dan metabolit terkaitnya yaitu AMP.8

Dalam jalur glikolitik, satu mol glukosa dipecah menjadi 2 mol senyawa
3-karbon piruvat. Pada fase persiapan awal glikolisis, glukosa mengalami
fosforilasi oleh ATP dan diuraikan menjadi 2 triosa fosfat. Dalam fase kedua atau
fase pembentukan ATP, satu buah triosa fosfat (gliseraldehida 3-fosfat) dioksidasi
 13

oleh NAD+ dan mengalami fosforilasi dalam suatu reaksi yang menggunakan
fosfat inorganik. Reaksi ini dan reaksi selanjutnya akan menyusun ulang fosfat
tersebut dapat dipindahkan ke ADP untuk membentuk ATP. Hasil bersihnya
adalah 2 mol ATP, 2 mol NADH, dan 2 mol piruvat per mol glukosa.8

2.3.2. Fosforilasi Oksidatif

Respirasi berawal dari oksidasi bahan bakar dalam jalur metabolik dengan
memindahkan elektron ke NAD+ dan FAD. Pada fase kedua respirasi, energi yang
tersedia dari reoksidasi NADH dan FAD(2H) oleh O2 diubah menjadi ikatan fosfat
berenergi tinggi pada ATP melalui proses fosforilasi oksidatif. Fosforilasi
oksidatif terjadi di mitokondria. ATP yang disintesis dilepaskan ke dalam matriks
mitokondria. ATP dipindahkan secara aktif ke sitosol oleh protein transport yaitu
ATP/ADP translokase. Hasil akhir dari fosforilasi oksidatif adalah 3 mol ATP per
mol NADH yang dioksidasi, atau 2 mol ATP per mol FAD(2H) yang dioksidasi.
Penyakit genetik dan masalah lain pada transport elektron menyebabkan
peningkatan kadar NADH. Peningkatan konsentrasi NADH dapat menghambat
siklus asam trikarboksilat dan menyebabkan masuknya piruvat serta asam lemak
ke dalam siklus tersebut. Akibatnya, piruvat diubah menjadi laktat yang muncul
dalam darah, dan asam lemak akan tertimbun dalam jaringan sebagai trigliserida.8

2.4. Aktivitas Metabolisme Keloid

Keloid merupakan suatu bentuk tumor jinak, dimana seperti kebanyakan

sel tumor, diduga memiliki aktivitas metabolisme yang meningkat dibanding
jaringan kulit yang normal pada umumnya. Pada keloid, terjadi peningkatan
produksi kolagen oleh sel fibroblas. Dalam memenuhi kebutuhan energi pada
produksi kolagen tersebut, ATP dihasilkan sebagian besar melalui glikolisis.
Proses metabolisme glukosa yang terjadi pada keloid dan kebanyakan sel dengan
aktivitas proliferasi yang tinggi, berlangsung tanpa dipengaruhi oleh
ketersediaannya oksigen. Fenomena ini dikenal sebagai Warburg effect.7,9 Selain
melakukan glikolisis, keloid juga dapat melakukan fosforilasi oksidatif sebagai
upaya menghasilkan ATP tambahan, dengan menambahkan substrat respirasi.
 14

Kemampuan ganda yang dimiliki keloid dengan lebih mengutamakan glikolisis,

memungkinkan keloid dapat berkembang biak dan bertahan hidup meskipun
dalam lingkungan yang hipoksik.7

Gambar 2.3. Perbedaan proses metabolisme glukosa antara jaringan normal

dengan jaringan proliferatif dan sel tumor.9

Sumber : Heiden W, 2009

Menurut hasil penelitian yang dilakukan oleh Ozawa di Jepang pada tahun
2006 didapatkan adanya peningkatan kecepatan metabolisme glukosa yang
diamati melalui Positron Emission Tomography (PET) dengan fluorine-18-
fluorodeoxyglucose (FDG) yang disuntikkan secara intravena pada 5 pasien
dengan keloid, hasilnya dikalkulasi dengan Standardized Uptake Value (SUV=
konsentrasi jaringan/ aktivitas injeksi per KgBB), maka didapatkan jaringan
keloid memiliki serapan yang lebih besar terhadap FDG bila dibandingkan
jaringan sehat disekitarnya dengan SUV jaringan keloid berkisar antara 1.0 hingga
2.74, dengan rata-rata 1.79. Hal tersebut mengindikasikan adanya peningkatan
kecepatan metabolisme glukosa.18 Konsumsi glukosa yang lebih tinggi dari
normal pada keloid juga terlihat dengan adanya peningkatan aktivitas dari enzim
glikolitik seperti heksokinase, gliseraldehid-3-fosfat, dan laktat dehidrogenase
(LDH).7
 15

2.4.1. Laktat Dehidrogenase (LDH)

Laktat dehidrogenase (LDH) adalah enzim intraseluler yang terdapat pada

hampir semua sel yang bermetabolisme, dengan konsentrasi tertinggi yang
ditemukan di jantung, otot rangka, hati, ginjal, otak dan sel darah merah.
Peningkatan kadar LDH ditemukan pada infark miokard akut, CVA, kanker (paru,
tulang, hati, usus, payudara, serviks, testis, ginjal, lambung, melanoma kulit),
leukimia akut, infark pulmonal akut, anemia, defisiensi asam folat, dan hepatitis
akut serta akibat pemakaian obat jenis narkotik (kodein, morfin, meperidin). Laktat
dehidrogenase mengkatalisis proses reduksi piruvat menjadi laktat dan
menghasilkan NADH. Reaksi ini berlangsung di sitosol.7 Aktivitas LDH dapat
diperiksa dengan menggunakan metode flourometer dan kolorimeter dengan
menggunakan spektrofotometer. Pada metode kolorimeter yang diukur adalah
jumlah perubahan konsentrasi NADH. Hasil pengukuran dinyatakan dengan U/L
yang setara dengan (mol/menit dari reaksi NADH per liter sampel yang diukur). 19

Tabel 2.2. Keadaan yang Mempengaruhi Aktivitas LDH Total20

KEADAAN YANG MEMENGARUHI AKTIVITAS LAKTAT DEHIDROGENASE

(LDH) TOTAL
Peningkatan mencolok ( 5 kali normal)
Anemia megaloblastik
Karsinomatosis luas, terutama metastasis hati
Syok septik dan hipoksia
Hepatitis
Infark ginjal
Purpura trombositopenik trombotik
Peningkatan sedang (3-5 kali normal)
Infark miokardium
Infark paru
Keadaan hemolitik
Leukemia
Mononukleosis infeksiosa
Delirium tremens
Distrofi otot
Peningkatan ringan (sampai 3 kali normal)
Sebagian besar penyakit hati
Sindrom nefrotik
Hipotiroidisme
Kolangitis
Sumber : Sacher, 2004
 16

2.4.2. Peningkatan Aktivitas Laktat Dehidrogenase pada Keloid

Enzim laktat dehidrogenase (LDH) memainkan peran sebagai katalisator

konversi piruvat menjadi laktat pada proses metabolisme glukosa. Keloid sebagai
jaringan dengan aktivitas proliferasi sel fibroblas yang tinggi dalam memproduksi
kolagen, didapatkan aktivitas enzim laktat dehidrogenase (LDH) yang meningkat,
hal ini disebabkan pada proses metabolismenya sebagian besar glukosa (85%)
melalui glikolisis diubah menjadi piruvat, kemudian dikonversi menjadi laktat
dengan bantuan LDH. Sehingga pada keloid juga akan terjadi akumulasi laktat.

Kemble dan Brown (1976) telah melakukan penelitian mengenai

peningkatan kadar beberapa enzim pada hypertrophic scar. Pengamatan dilakukan
secara histokimia untuk melihat aktivitas nicotinamide adenine dinucleotide
diaphorase, lactate dehydrogenase, acid phosphatase, -D glucoronidase dan
alkaline phosphatase. Sampel diperoleh dari 55 biopsi jaringan pasien dengan
hypertrophic scar, 24 sampel non-hypertrophic scar, dan sampel kulit normal
didapatkan dari 20 pasien yang menjalani reduksi abdomen, payudara, dan telinga
yang prominen. Hasilnya didapatkan peningkatan semua kadar enzim kecuali
alkaline phosphatase pada hypertrophic scar. Pada penelitian tersebut didapatkan
hasil dimana pada non-hypertrophic scar terjadi peningkatan aktivitas laktat
dehidrogenase (LDH) dalam ukuran sedang (N+1) bila dibandingkan dengan kulit
normal. Sedangkan aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) pada hypertrophic scar
didapatkan sangat meningkat baik pada dermis (N+3) dan epidermis (N+2).10
Namun, pada penelitian ini tidak menjelaskan adanya peningkatan aktivitas LDH
pada keloid.

Pada studi yang dilakukan oleh Ueda dkk. tahun 2004, didapatkan adanya
akumulasi laktat pada jaringan keloid. Ueda membandingkan antara jaringan
keloid, hypertrophic dan atrophic scars dengan cara mengeksisi jaringan untuk
kepentingan kosmetik, jaringan yang diambil tersebut diamati jumlah pembuluh
darah darahdan lumennya secara immunohistopatologi serta konsentrasi laktat,
dan didapatkan bahwa pada jaringan keloid terdapat pembuluh darah yang lebih
sedikit dan pada internal area keloid tampak pembuluh darah dengan ukuran yang
lebih kecil dan menyempit serta tekanan oksigen jaringan yang rendah yang
 17

diduga karena mengalami blokade oleh serat kolagen yang tebal dan
ditemukanjuga adanya akumulasi laktat. Pada penelitian tersebut didapatkan kadar
laktat pada keloid 39 (13.5) mmol/g dari protein, red scars 23.8 (7.5); pink scars
23.8 (7.6), dan white scars 13.3 (7.3). Hasil tersebut mengindikasikan bahwa
penurunan serta penyempitan lumen pembuluh darah pada keloid dapat
mengurangi perfusi oksigen. Akumulasi laktat menggambarkan bahwa terjadi
peningkatan aktivitas LDH serta ATP diproduksi melalui glikolisis.21

2.5. Perkembangan Terapi untuk Keloid Saat ini

Selama ini terapi yang diberikan untuk keloid adalah preparat
kortikosteroid, yaitu dengan menginjeksikan triamsinolone secara intralesi dengan
dosis 10-40 mg/mL setiap bulan. Terapi ini berguna untuk mengurangi gejala
pruritus atau sensitivitas dari lesi serta mengurangi volumenya. Terapi ini dinilai
cukup efektif untuk hypertrophic scar, tetapi kurang efektif untuk keloid. Oleh
karena itu, terapinya dapat dikombinasikan dengan krioterapi dimana lesi aslinya
dibekukan dengan nitrogen cair, setelah membeku, lesi menjadi edematous dan
lebih mudah untuk diinjeksi.3

Terapi keloid lainnya adalah dengan dieksisi. Namun, lesi yang dieksisi
dengan pembedahan lebih sering terjadi kekambuhan bahkan dapat timbul lesi
yang lebih besar dari lesi semula. Eksisi yang dilakukan sesegera mungkin setelah
radioterapi pascabedah, mungkin lebih menguntungkan. Terapi lainnya adalah
dengan menggunakan krim silikon dan gel silikon secara topikal, dimana
keduanya tidak nyeri saat digunakan dan tidak bersifat invasif. 3
 18

2.6. Kerangka Teori

Luka pada kulit

Penyembuhan Faktor
luka
Fase inflamasi
Tahap Eksternal Internal
penyembuhan Fase proliferasi
Penanganan Usia, genetik,
luka
luka, sosial ras, personal
Fase maturasi ekonomi, hygiene, status
lingkungan gizi

Terjadi Penyimpangan proses Neovaskular

keseimbangan penyembuhan luka endothelial
antara sintesis
hasilkanTGF-
dan degradasi
kolagen Ekspresi gen
Fibroblast kolagen tipe I,
Kekuatan luka III, dan VI dan
mencapai 80% mRNA masing-
kulit normal kolagen yang di sintesis masing kolagen
> degradasi

luka sembuh

keloid Hypertrofic
Kulit kembali scar
normal

Gejala : Proliferasi sel ATP

pruritik, nyeri fibroblastberlebih
tekan

Kebutuhan
kortikosteroid Eksisi pasokan energi
LDH
intralesi

Glikolisis glukosa piruvat laktat

simptomatik rekurensi

Fosforilasi Transport siklus asam

Kurang efektif oksidatif elektron trikarboksilat
 19

2.7. Kerangka Konsep

Penyembuhan
Fibroblas >>Kolagen Keloid
luka abnormal
Aktivitas
Glikolisis LDH

Fosforilasi
oksidatif ATP

2.8. Definisi Operasional

No. Variabel Definisi Alat ukur Cara Ukur Skala

1. Aktivitas Aktivitas enzim Spektrofotometer Absorban di ukur Numerik
LDH laktat dehidrogenase pada panjang
mengkatalisis gelombang 400 nm
konversi piruvat sesuai prosedur kit
menjadi laktat. LDH FS DGKC dan
di baca pada menit
ke 1, 2, dan 3
 20

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1. Jenis dan Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan jenis penelitian deskriptif menggunakan desain

potong lintang (cross sectional) dengan kadar aktivitas LDH sampel kulit normal
berupa jaringan preputium sebagai kontrol. Sampel diambil dari hasil biopsi
sampel jaringan keloid pasien. Sampel kemudian dilakukan uji aktivitas enzim
LDH untuk mengetahui aktivitas LDH dalam mekanisme peralihan metabolisme
glikolisis ke fosforilasi oksidatif guna memenuhi pasokan energi pada
pembentukan jaringan keloid.

3.2. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan pada bulan Januari 2014 September 2014 di

Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, Jalan Kertamukti No.05 Kelurahan Pisangan Barat, Ciputat,
Tangerang Selatan.

3.3. Sampel

Dalam penelitian ini, sampel yang digunakan oleh peneliti berupa sampel
jaringan yang telah diolah menjadi bentuk supernatan. Pengambilan sampel telah
disetujui melalui izin komisi etik FK UI dalam lingkup penelitian pembimbing.
Sampel penelitian ini merujuk kepada Kashiyama et.al (2012). Kashiyama
menggunakan sembilan sampel jaringan keloid yang didapatkan dari delapan
pasien berkewarganegaraan Jepang yang berbeda, yang diambil saat pasien
melakukan operasi (pembedahan). Sedangkan sampel jaringan kulit normal
diperoleh dari sembilan sukarelawan berkewarganegaraan Jepang. Pada penelitian
ini, sampel jaringan keloid diperoleh dari biopsi jaringan keloid pada sepuluh
pasien dari beberapa rumah sakit berbeda, antara lain RS Cipto Mangunkusumo
 21

Salemba, RS Jakarta Islamic Hospital Pasar Rebo, RS Sari Asih Pamulang, RS

Mitra Keluarga Kelapa Gading, RS Prima Medika Bintaro, dan RS Hermina
Ciputat. Jaringan kulit preputium sebagai kontrol normal diperoleh dari sepuluh
pasien sirkumsisi massal yang diadakan di FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
pada bulan Juni 2013.

3.4. Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1. Alat Penelitian

Alat yang digunakan pada penelitian ini antara lain, Spektrofotometer UV-
Visible Hitachi U2910, seperangkat komputer (Hp, Windows Xp), vortex,
timbangan analitik, sentrifuge, tabung mikro, mikropipet (2-20 l, 20-200 l, dan
100-1000 l), kuvet, tip (putih, kuning, dan biru), tabung reaksi, rak tabung
reaksi, gelas ukur, bekker glass, sarung tangan, dan masker.

3.4.2. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain, sampel jaringan
keloid dan preputium, pelumat jaringan Potter-Elvehjehm, NaCl 9 g/L, akuades,
dan Kit LDH FS DGKC yang terdiri dari :

- Reagen 1 : Phosphate buffer pH 7.5 64 mmol/L

Pyruvate 0.08 mmol/L

- Reagen 2 : Goods buffer pH 9.6

NADH 1.0 mmol/L

 22

3.5. Cara Kerja Penelitian

3.5.1. Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan tanpa acak dengan consecutive sampling.

Pada penelitian ini, banyaknya jumlah sampel jaringan kulit preputium adalah
sepuluh jaringan yang diperoleh dari pasien sirkumsisi massal dan banyaknya
jumlah jaringan keloid adalah sepuluh jaringan yang diperoleh melalui biopsi
jaringan keloid. Pada pengujian ini dilakukan secara duplo dan antar jaringan
keloid saling dibandingkan.

3.5.2. Pembuatan Homogenat

Jaringan keloid dan kontrol yang diperoleh segera disimpan dalam suhu
o
21 C, pada saat akan dibuat homognenat langsung ditimbang dalam kondisi segar
atau beku sebanyak 50 mg dalam tabung mikro (berukuran 1,5 mL). Kemudian
ditambahkan akuades ke dalam tabung pada suhu 15-25oC (menggunakan es)
sebanyak 1 mL. Selanjutnya dilakukan homogenisasi dengan menggunakan
pelumat jaringan Potter-Elvehjehm menggunakan microspestle. Hasil dari
homogenat tersebut disentrifugasi, kemudian supernatan kedua jaringan tersebut
diukur aktivitas laktat dehidrogenasenya.

3.5.3. Pengukuran Aktivitas Laktat Dehidrogenase

Sampel dalam bentuk supernatan diambil sebanyak 20 L lalu

ditambahkan dengan reagen 1, kemudian diinkubasi selama 5 menit dengan
temperatur 25C. Setelah itu, ditambahkan dengan reagen 2, setelah 1 menit,
absorban dibaca dengan spektrofotometer (= 400 nm) dan dilakukan pembacaan
kembali pada menit ke 2 menit, dan menit ke 3, kemudian hasil pengukuran
absorban dibandingkan dengan kontrol dan antar sesamanya.
 23

3.6. Alur Penelitian

Jaringan

Keloid Preputium

U/L Aktitivitas LDH

Analisis Statistik

3.7. Pengolahan dan Analisis Data

Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan program SPSS versi

16.0. Adapun rancangan analisis statistik yang digunakan adalah analisis bivariat.
Data yang diperoleh terdistribusi normal, maka dilakukan pengujian dengan uji t
independent. Penyajian data dilakukan dalam bentuk teks, grafik, dan tabel.
 24

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Karakteristik Sampel

Penelitian ini menggunakan dua kelompok uji, yaitu kelompok uji jaringan
keloid dan kontrol untuk mengetahui gambaran aktivitas laktat dehidrogenase
pada kedua jaringan tersebut pada subyek yang berbeda. Dalam proses
pengambilan sampel, digunakan metode non-random, karena jarang sekali pasien
dengan keloid bersedia untuk diambil jaringan keloidnya sebagai bahan
penelitian. Sampel keloid pasien yang diambil bukan berasal dari pasien dengan
diagnosis utama keloid. Namun, berasal dari pasien yang sedang menjalani
operasi yang secara kebetulan memiliki keloid dan bersedia untuk dilakukan
pengangkatan jaringan keloid. Pada penelitian ini tidak dilakukan pengambilan
data sekunder mengenai lokasi keloid dan usia keloid. Preputium digunakan
sebagai kontrol jaringan normal karena relatif mudah diperoleh dan tidak
bertentangan dengan etik di Indonesia. Preputium lebih mudah didapatkan karena
di Indonesia mayoritas penduduknya beragama Islam, dimana terdapat sekitar 8.7
juta anak laki-laki dengan rentang usia 5-12 tahun melakukan sirkumsisi setiap
tahunnya.21,22 Sirkumsisi juga merupakan tindakan bedah minor yang paling
banyak dikerjakan di seluruh dunia, baik oleh dokter, paramedis ataupun oleh
dukun sunat. Spesimen jaringan keloid maupun kontrol yang digunakan peneliti
sudah diolah dalam bentuk supernatan. Supenatan yang telah jadi disimpan di
dalam freezer (dibekukan) agar kualitas sampel terjaga.
 25

4.2. Pengukuran Aktivitas Laktat Dehidrogenase (LDH)

Gambaran Aktivitas LDH Jaringan Keloid

2,480
2,470
2,460
2,450
Aktivittas LDH

2,440
2,430
2,420
2,410
2,400
2,390
2,380
K U1 U2 U3 U4 U5 U6 U7 U8 U9 U10
Kontrol Keloid
U/L 2,419 2,429 2,421 2,439 2,428 2,442 2,431 2,417 2,470 2,426 2,436

Gambar 4.1. Gambaran Aktivitas Laktat Dehidrogenase (LDH) Jaringan Keloid

Pada penelitian ini aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) diukur

menggunakan metode kolorimetri dengan spektrofotometer UV-Vis. Berdasarkan
hasil pengukuran, pada gambar 4.1., didapatkan peningkatan aktivitas laktat
dehidrogenase pada semua sampel keloid dibandingkan dengan aktivitas rerata
kontrol (preputium). Hasil penelitian ini sesuai dengan Hoopes (1971) dalam studi
yang dilakukan Ueda tahun 2004, yang melaporkan adanya aktivitas LDH yang
tinggi pada keloid dibandingkan dengan hypertrophic scar dan kulit normal
dengan teknik flourometrik. LDH yang tinggi ini berkaitan dengan sintesis piruvat
menjadi laktat.19 Peningkatan aktivitas LDH tertinggi didapatkan pada U8 (sampel
jaringan keloid ke 8) yaitu 0.051 U/L atau 2.1 % lebih tinggi dari kontrol.
Tingginya aktivitas LDH pada keloid diantaranya berkaitan dengan lama waktu
timbulnya keloid. Pada keloid yang baru timbul, akan didapatkan aktivitas LDH
yang lebih tinggi dibandingkan dengan keloid yang sudah lebih dahulu tumbuh,
 26

karena pada jaringan keloid yang masih baru, laju metabolisme sel relatif masih
tinggi. Namun, pada penelitian ini tidak menggunakan data sekunder pasien
sehingga tidak diketahui usia keloid pasien.

Tabel 4.1. Perbedaan Rerata Aktivitas Laktat Dehidrogenase antara Jaringan

Keloid dan Kontrol

Nama Variabel N Kadar LDH (U/L)

Rerata SB
Jaringan keloid 10 2.433 0.014
Kontrol 10 2.418 0.013

Dari Tabel 4.1. didapatkan perbedaan aktivitas laktat dehidrogenase

(LDH) antara jaringan keloid dengan rerata 2.433 U/L dan kontrol dengan rerata
2.418 U/L. Rerata aktivitas LDH jaringan keloid 0.015 U/L lebih tinggi daripada
rerata aktivitas LDH kontrol.
Peneliti ingin mengetahui seberapa besar perbedaan aktivitas laktat
dehidrogenase (LDH) antara jaringan keloid dan kontrol, maka dari itu dilakukan
analisis bivariat dengan menggunakan uji komparatif dua kelompok tidak
berpasangan (uji t independen). Jika p > 0.05, maka Ho diterima, dan jika p <
0.05, maka Ho ditolak. Uji ini memiliki ketentuan yaitu data harus terdistribusi
normal, oleh karena itu perlu dilakukan uji normalitas terlebih dahulu (Saphiro-
Wilk).

Tabel 4.2. Hasil Uji Normalitas Distribusi

Nama Variabel Nilai p Normalitas distribusi

Kadar Aktivitas LDH 0.35 Terdistribusi Normal
 27

Berdasarkan hasil uji statistik, diketahui p value aktivitas LDH sebesar

0.35 pada taraf signifikansi 0.05, maka p value > , dengan kata lain sebaran data
dalam penelitian ini telah teruji kenormalannya.

Tabel 4.3. Deskripsi Hasil Uji T Independen Perbedaan Aktivitas LDH antara
Jaringan Keloid dengan Kontrol

Pengukuran (U/L) n Rerata SB Perbedaan IK 95% p value*

Rerata
Jaringan keloid 10 2.433 0.014 0.015 0.002 - 0.028 0.023
Kontrol 10 2.418 0.013
*Uji T Independen

Berdasarkan analisis statistik untuk uji hipotesis dengan menggunakan uji

t independen (Tabel 4.3.) pada taraf signifikansi 0.05, didapatkan p value sebesar
0.023, yang berarti p value < 0.05. Hasil analisis statistik tersebut menunjukkan
bahwa terdapat perbedaan bermakna antara rerata aktivitas LDH jaringan keloid
dengan kontrol. Dengan kata lain, hipotesis nol ditolak.

Tujuan dari identifikasi data ini sebenarnya adalah untuk membandingkan

adanya perbedaan antara aktivitas LDH antara jaringan keloid dengan kontrol.
Hasilnya membuktikan bahwa pada jaringan keloid terjadi peningkatan aktivitas
LDH daripada kontrol.

Pada studi yang dilakukan Vincent tahun 2008 dikemukakan gagasan

bahwa fibroblas keloid manusia menunjukkan karakteristik biologis sama dengan
sel tumor. Dibandingkan dengan sel-sel fibroblas normal, ATP dari fibroblas
keloid utamanya berasal dari glikolisis, serta aktivitas heksokinase, dehidrogenase
3-fosfat, dan laktat dehidrogenase (LDH) secara signifikan lebih tinggi dari sel
fibroblast yang normal. Aktivitas heksokinase, gliseraldehida 3-p dehidrogenase,
dan LDH diukur dalam ekstrak dari fibroblas normal dan fibroblas keloid yang
mengandung 0.03 mg protein. Fluoresensi NADH dan NADPH diamati pada
panjang gelombang 464 nm dalam spektrofotometer luminescence (Perkin Elmer-
 28

LS55) dan aktivitas enzim dinyatakan sebagai peningkatan fluoresensi NADH

atau NADPH per menit per mg protein. Aktivitas heksokinase, gliseraldehida-3-
fosfat dehidrogenase, dan LDH, dinyatakan sebagai nmol NAD atau NADPH per
menit per mg protein diantaranya 1.8.0.51, 343.128.3, dan 554.312.1, masing-
masing, pada lima sampel normal. Keloid secara signifikan berbeda (p<0.05)
dengan sampel normal, antaralain didapatkan aktivitas masing-masing 130, 63,
dan 35% lebih tinggi.7
 29

BAB V
PENUTUP

5.1. Simpulan

Pada penelitian didapatkan peningkatan kadar laktat dehidrogenase (LDH)

pada jaringan keloid secara bermakna dibandingkan kadar LDH pada jaringan
preputium. Hal ini menunjukkan peningkatan aktivitas LDH dalam mekanisme
peralihan metabolisme glikolisis ke fosforilasi oksidatif dalam upaya memenuhi
pasokan energi pada pembentukan jaringan keloid.

5.2. Saran

Diperlukan penelitian lanjutan mengenai asam laktat pada jaringan keloid

dan penelitian lanjutan melalui intervensi terhadap aktivitas LDH pada jaringan
keloid sehingga memungkinkan dapat menekan terjadinya timbulnya keloid.
 30

DAFTAR PUSTAKA

1. Kempf W, et.al. Dermatopathology. Springer. Jerman. 2008. p238.

2. Wolff, Klaus., Richard Allen Johnson, and Dick Surmond. Fitzpatricks:

Color Atlas and Synopsis of Clinical Dermatology 5 th Edition.
Massachusetts: The McGraw-Hill Companies. 2007.

3. Van De Water, Thomas R and Hinrich S. Otolaryngology: Basic Science

and Clinical Review. New York: Thieme Medical Publishers Inc. 2006.
p20.

4. Jansen, David A., et.al. Keloids. Medscape. 2012. Diakses dari :

http://emedicine.medscape.com/article/1298013-overview#aw2aab6b3

5. Nemeth, Albert J. Keloids and Hypertrophic Scars. Journal of

Dermatology Surgery and Oncology. 1993; 19: 738-746.

6. Pratiwi KD, Perdanakusuma D. Hubungan antara Golongan Darah dengan

Timbulnya Keloid Pasca Luka. Airlangga University Press. Surabaya.
2009: 1-8.

7. Vincent A, Muhopadhyay A, et.al. Human Skin Keloid Fibroblasts

Display Bioenergetics of Cancer Cells. J Invest Dermatol. 2008; 128: 702-
709.

8. Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. Biokimia Harper, edisi 27. EGC.
Jakarta. 2009.

9. Heiden M, Cantley L, Thompson C. Understanding the Warburg Effect:

The Metabolic Requirements of Cell Proliferation. Science Journals. 2009;
324:1029-1033

10. Kemble, J.V Harvey dan R.V. R Brown. Enzyme Activity in Human Scars,
Hyperthrophic Scars, and Keloids. British Journal of Dermatology. 1976;
94: 301-305.

11. Sukasah, Chaula. Penggunaan Silicone Gel Sheet pada Keloid dan Jaringan
Parut Hipertrofik. Maj Kedokt Indon. 2007; 57: 60-62.

12. Kumar, Cotran, Robbins. Buku Ajar Patologi Robbins. EGC. Jakarta.
2007.

13. Siregar, RS. Atlas Berwarna Saripati Penyakit Kulit. EGC. Jakarta. 2004.
 31

14. Gawkrodger, David J dan Michael R. Ardern-Jones. Dermatology: An

Illustrated Color Text 5th Edition. Philadelphia: Elsevier. 2012. p95.

15. Harahap, Marwali. Ilmu Penyakit Kulit. Hipokrates. Jakarta. 2000.

16. Gauglitz G, Korting H, Pavicic T, et al. Hypertrophic scarring and

keloids: pathomechanisms and current and emerging treatment strategies.
Mol Med. 2011;17:113-125.

17. Dan Vincent, Annette S. Metabolic Parameters Involved In Keloid

Formation. Departement of Boichemistry. National University of
Singapore, 2009; 14.

18. Ozawa, Toshiyusi. Accumulation of glucose in keloids with FDG-PET.

Annals of Nuclear Medicine. 2006; 1: 41-44

19. Rahaju, Minto. Uji Diagnostik Pemeriksaan LDH dalam Cairan Tubuh
Untuk Penetuan Klasifikasi Transudat dan Eksudat Dibandingkan dengan
Klasifikasi Konvensional. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Semarang. 2003: 20.

20. Sacher, Ronald dan Richard. Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan

Laboratorium. EGC. Jakarta. 2004. p345-355.

21. Koichi U, Yoshiko Y, Eisuke F, Sosuke O. Inadequate Blood Suply

Persists in Keloids. Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg. 2004; 38:
267271.

22. Kashiyama K, et.al. miR-196a Downregulation Increases the Expression

of Type I and III Collagens in Keloid Fibroblasts. J Invest Dermatol.
2012; 132: 15971604.

23. Benson dan Martin. Buku Saku Obstetri dan Ginekologi Ed. 9. EGC.
Jakarta. 2009. p256.

24. Syamsuhidajat, Wim de Jong. Buku Ajar Ilmu Bedah. EGC. Jakarta. 2004.
 32

LAMPIRAN

LAMPIRAN 1

(Persetujuan Etik)
 33

LAMPIRAN 2

(Alat dan Bahan Penelitian)

Spektrofotometer UV Hitachi U-2910 Mikropipet

Tabung reaksi dan rak tabung Tip

Vortex Kuvet
 34

Rak tube sample Sampel jaringan berupa supernatan

Reagen LDH FS DGKC

 35

LAMPIRAN 3

(Dokumentasi Penelitian)

Contoh tube sampel jaringan kontrol (P) Tahap persiapan: Labeling tabung
reaksi untuk kelompok keloid (U)
dan kelompok kontrol (P)

R1 dimasukkan ke dalam tabung reaksi Proses mengambil sampel uji

 36

Proses homogenisasi dengan vortex Kuvet berisi absorban dimasukkan ke

dalam spektrofotometer untuk dibaca

Gambaran hasil pembacaan absorbansi oleh

spektrofotometer yang tertera pada layar komputer
 37

LAMPIRAN 4

(Daftar Riwayat Hidup)

DAFTAR RIWAYAT HIDUP

Nama : Raeiza Olyvia Rachman

Tempat, tanggal lahir : Bogor, 13 Februari 1993

Alamat : Lebak wangi RT 03/02 No. 61 Desa Parung,

Kecamatan Parung, Kabupaten Bogor

Telepon/Hp : 0251-8618921 / 085718175891

Email : raeizaolyvia@yahoo.com

Riwayat pendidikan

1. Tahun 1998 - 2004 : SD Negeri Durenseribu 04 Sawangan, Depok

2. Tahun 2004 - 2007 : SMP Negeri 2 Depok
3. Tahun 2007 - 2010 : SMA Negeri 5 Depok
4. Tahun 2011 - sekarang : Pendidikan Dokter UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta