ISOLASI DAN KARAKTERISASI ENZIM -AMILASE DARI KECAMBAH KACANG

HIJAU
Fida Toyyibah, Ria Afrinata Simamora dan Yunia Audia Sari
Teknik Biokimia, Fakultas Sains dan Teknologi,
Universitas Jambi
e-mail : fida.thoyyibah@gmail.com
ABSTRACT
Mung bean sprout (Phaseolus radiatus) are kind of plant commonly used as food base
because it contains lots of protein and carbohydrates. These two biochemical matter is
also needed in germination in which carbohydrates is dissolved into simpler concentration
with the help of -amylase enzymes. Enzymes are effective biokatalisator, can work specifically
to speed up chemical reactions. One is the enzyme amylase. Amylase enzyme in extracts of green
beans is done by using two type of solvent is buffer acetat. The goal of this research are isolating
- amylase enzyme character in seed of mung bean and t o d et er mine char act er ist ic of -
amylase enzyme by FUWAs methode. Results obtained from the FUWA method on wavelength
(maks) 600nm the equations enzyme activity is y 0.0466x + 0.4739 and the correlation is R2 =
0.5282. The result show that the best of enzyme activity is in mung bean sprout on 7 days
because the enzyme activity is 10,447 x10-3 unit/L s for mung bean sprout in the dark condition,
and 8,9448 x10-3 unit/L s for for mung bean sprout with leefs in the light condition and also
9,5528 x10-3 unit/L sfor mung bean sprout without leefs in the light condition.

Keywords: Enzyme amylase, Mung bean sprout, FUWA method

ABSTRAK
Kacang hijau (Phaseolus radiatus) merupakan tanaman yang banyak dimanfaatkan
sebagai bahan pangan karena kandungan protein dan karbohidratnya yang sangat tinggi.
Protein dan karbohidrat juga diperlukan oleh biji dalam proses perkecambahannya. Saat
berkecambah, karbohidrat dalam biji dalam bentuk amilum diurai menjadi senyawa yang lebih
sederhana dengan bantuan enzim -amilase. Enzim merupakan biokatalisator yang efektif,
dapat bekerja secara spesifik yang dapat mempercepat reaksi kimia. Salah satunya adalah
enzim amilase. Enzim amilase pada ekstrak kacang hijau dilakukan dengan menggunakan
buffer asetat. Tujuan dari penelitian ini adalah mengisolasi dan mengetahui karakterisasi enzim
-amilase pada perkecambahan biji kacang hijau dan mengetahui aktivitas enzim amilase
dengan metode FUWA. Persamaan regresi dengan metode FUWA pada maks 600 nm yaitu y=
0.0466x + 0.4739 dengan nilai korelasinya R2 = 0.5282. Dari hasil analisis didapatkan hasil
bahwa aktivitas enzim -amilase yang paling baik adalah pada kecambah yang kacang hijau
yang berumur 7 hari karena pada ektrak kecambah ini memiliki aktivitas sebesar 10,447 x10-3
unit/L s untuk kondisi gelap dan 8,9448 x10-3 unit/L s untuk kondisi terang dengan daun dan
9,5528 x10-3 unit/L s untuk kondisi terang tanpa daun.

Kata Kunci : Enzim amilase, kacang hijau, metode FUWA

PENDAHULUAN
Pemanfaatan enzim banyak
diaplikasikan secara luas terutama dalam
proses pengolahan pangan komersial. Dewasa
ini sebagian besar kebutuhan enzim masih
dipenuhi dengan jalan impor. Hal tersebut
tidak menguntungkan dari segi devisa dan
pengembangan bioteknologi di Indonesia.
Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian
untuk menghasilkan enzim sehingga
kebutuhan dalam negeri dapat diatasi.
Enzim ini sangat berperan dalam
industri pembuatan roti dan sirup. Enzim -
amilase banyak terdapat pada kecambah
kacang- kacangan. Enzim -amilase dalam
biji dibentuk pada waktu awal
perkecambahan oleh asam giberilik. Asam
giberilik adalah suatu senyawa organik yang
sangat penting dalam proses perkecambahan
suatu biji karena bersifat sebagai pengontrol
perkecambahan tersebut (Setyono. 1982).
Kacang hijau dipilih sebagai sumber
enzim -amilase karena dalam bentuk
kecambah mengandung tokoferol (pro vitamin
E) 936,4 ppm, fenolik 11,3 ppm. Kacang hijau
(Phaseolus radiatus) merupakan tanaman
yang banyak dimanfaatkan sebagai bahan
pangan karena kandungan protein dan
karbohidratnya yang sangat tinggi. Senyawa
fenolik dengan antioksidan lainnya pada
konsentrasi rendah dapat melindungi bahan
pangan tersebut dari kerusakan oksidatif
(Cahyono. 2004). Selain itu, kacang hijau
memiliki kelebihan dari segi ekonomis
dan agronomis dibandingkan dengan
tanaman kacang-kacangan lainnya (Sumarno
dan Manwan, 1990).
Ada beberapa faktor yang
memengaruhi keberhasilan isolasi dan
pengujian aktivitas enzim yakni tergantung
pada macam serta kondisi sumber enzim,
letak enzim, kecermatan kerja, bahan dan
cara ekstraksi yang dipergunakan serta
pengertian sifat-sifat enzim tersebut (Rahayu,
1988). Enzim -amilase termasuk
ekstraselular, sehingga mengekstraknya
relatif mudah (Richana, et al., 1999).
Metode FUWA adalah metode yang
digunakan untuk menghitung pati yang tidak
terdegradasi oleh enzim -amilase yang
bereaksi dengan iodin. Penentuan aktivitas
enzim -amilase dengan metode Fuwa adalah
berdasarkan reaksi antara amilosa dengan
iodin. Dimana fungsi dari iodin ini agar dapat
bereaksi dengan pati-pati yang terdegradasi
oleh enzim -amilase dan menghasilkan
kompleks heliks dan memberikan warna biru
yang khas. Larutan iodin digunakan untuk
deteksi adanya amilase dalam medium atau
bahan dimana degradasi yang terjadi pada
pati diketahui dengan hilangnya material yang
terwarnai oleh iodine.
Absorbansi diukur pada panjang
gelombang 600 nm setelah inkubasi selama 10
menit. Aktifitas -amilase ditentukan dengan
mengetahui berkurangnya sejumlah enzim
pada panjang gelombang 600 nm dari 1,0
sampai 10 menit. Nilai absorbasi yang
dihasilkan ini merupakan nilai konsentrasi
dari pati yang tidak terdegradasi oleh enzim -
amilase atau substrat sisa dari hasil degradasi
-amylase ini.
Tujuan penelitian untuk mempelajari
pembuatan ekstrak enzim dari kecambah
kacang hijau dan penentuan aktivitas enzim
amilase dengan metode FUWA.
METODE PENELITIAN
Penelitian dimulai pada hari Jumat, 30
September 2016 sampai 21 Oktober 2016 di
Laboratorium Bioteknologi dan Rekayasa,
Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas
Jambi.
Parameter dalam penelitian adalah
aktivitas enzim -amilase pada bagian-bagian
kecambah kacang hijau yang diberi perlakuan
penanaman pertumbuhan pada hari yang
berbeda-beda. Metode yang digunakan dalam
penentuan aktivitas enzim -amilase ini
adalah dengan metode Fuwa, dan absorbansi
diukur dengan spektrofotometer pada
panjang gelombang 600 nm (Skoog dan
West,1971).
Aktivitas enzim -amilase
dinyatakan dengan U/mL (unit/mL) dimana
satu Unit enzim -amilase berarti jumlah
enzim yang mampu mengkatalis satu mol
substrat (Sari, 2004).
Bahan
Bahan baku yang digunakan adalah
biji kacang hijau. Bahan kimia yang
digunakan adalah larutan Na-asetat 0,2 M,
asam asetat 0,2 M, NaOH 0,02 M , larutan
KI/I2 0,1N, pati terlarut, HCl 1 M, dan ddH2O.
Alat
Alat yang digunakan adalah pH meter,
cawan petri, timbangan, pinset, gelas ukur,
gelas piala, mortar dan alu, erlenmeyer,
alat sentrifugasi, inkubator, waterbath,
Spektrofotometer Visible.
Prosedur Kerja
Persiapan Reagen
Disiapkan 3 macam reagen yaitu buffer
natrium asetat pH 5 0,2 M, larutan NaOH 0,02
M, dan sterilisasi akuades.
Penumbuhan kecambah kacang hijau
Biji kacang hijau disortasi hingga
diperoleh biji bersih dan utuh, dicuci,
direndam dengan aquades selama 30 menit,
ditiriskan, kemudian diperam dalam wadah
berpori sampai terjadi perkecambahan. Waktu
perkecambahan (1,3,5 dan 7 hari).
Pembuatan ekstrak enzim dari kecambah
kacang hijau
Kecambah dibersihkan dengan
melepas kulit luarnya, sebagian diambil
sebagai sampel untuk analisis kadar protein
dan air. Sebagian ditimbang kemudian
dihancurkan dengan blender, dimana untuk 1
g kecambah ditambahkan 5 mL buffer asetat
0,2 M pH 5. Kecambah yang sudah hancur
disimpan selama 10 menit sambil sekali-sekali
dikocok kemudian dilakukan penyaringan
dengan kapas. Filtrat yang dihasilkan
disentrifugasi selama 20 menit dengan
kecepatan 2000 rpm pada suhu 5 C.
Supernatan (ekstrak enzim) yang dihasilkan
diukur volumenya dan ditempatkan ke dalam
wadah steril untuk dianalisis antara lain;
aktivitas enzim amilase, pH, dan protein
terlarut.
Penentuan aktivitas enzim amilase dengan
metode FUWA
Pembuatan kurva kalibrasi
Diambil 200 L pati yang telah
terlarut dan dibuat variasi konsentrasinya
menjadi 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%,
0.6%, 0.7%, dan 0.9%. Lalu ditambahkan
dengan 200 L HCl 1M, 200 L KI / I2 serta 3
mL ddH2O. Setelah semua siap diukur
absorbansi pada panjang gelombang 600 nm
menggunakan spektrofotometer. Diplotkan
masing-masing hasil serapan yang diperoleh
untuk membuat kurva kalibrasi serta
mengetahui panjang gelombang
maksimumnya (maks).
Penentuan aktivitas enzim amylase
Dari pati yang telah dilarutkan, diambil
200 L pati terlarut 0.5% lalu ditambahkan
dengan 200 L enzim amilase dan diinkubasi
pada suhu 300 C selama 10 menit. Setelah itu,
diambil 200 L HCl 200 L KI / I2 dan 3.2 mL
ddH2O ditambahkan satu persatu kedalam
pati terlarut yang telah disiapkan. Setelah
pencampuran selesai dilakukan proses
pengukuran absorbansi terhadap sampel
menggunakan spektrofotometer pada panjang
gelombang 600 nm untuk mengetahui
aktivitas enzim amilase dari serapan yang
diperoleh.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Perisapan Reagen
Persiapan reagen ini ditujukan untuk
membuat larutan buffer asetat dilakukan
untuk membantu mempertahankan pH
selama pembentukan enzim -amilase.
Reagen buffer asetat dibuat dengan
mencampurkan larutan asam asetat dengan
basa konjugasinya yaitu natrium asetat
dengan menggunakan 64,7 mL natrium asetat
dengan diteteskan oleh asam asetat hingga pH
5 menggunakan alat pH meter. Dari hasil
didapatkan volume asam asetat yang terpakai
untuk mencaapai pH 5 adalah 9,7mL (194
tetes). Dilakukan pula penambahan aquades
hingga volume total 100 mL.. Hasil yang
didapat disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Pembuatan Buffer Asetat
Perlakuan Hasil
Volume Na-asetat 64,7 mL
Volume asam asetat 9,7 mL (194 tetes)
Larutan buffer bermanfaat untuk
melarutkan kotoran yang masih terikut di
dalam endapan enzim tersebut sekaligus bisa
mencegah enzim dari denaturasi dan
kehilangan fungsi biologisnya. Buffer dapat
mempertahankan kondisi enzim presipitat
agar tidak terjadi perubahan pH dan
mencegah agar enzim tidak mengalami
inaktivas.
Penumbuhan Kecambah Kacang Hijau
Pada saat perkecambahan, terjadi
degradasi karbohidrat, protein, dan lemak
menjadi senyawa yang lebih sederhana,
sehingga mudah dicerna. Karbohidrat sebagai
bahan persediaan makanan dirombak oleh
enzim -amilase dan beta-amilase yang saling
mengisi. Alfa-amilase memecah pati menjadi
dekstrin, sedangkan beta-amilase memecah
dekstrin menjadi maltosa. Akhirnya maltosa
diubah menjadi glukosa dan fruktosa.
Peningkatan ini mulai tampak setelah 24-48
jam masa perkecambahan.
Dalam pengamatan aktivitas enzim
amylase bahan yang digunakan adalah
kecambah kacang hijau. Hal ini dikarenakan
pada kecambah ini terdapat enzim -amilase
yang mudah untuk diisolasi jika dibandingkan
dengan jenis kacang-kacangan lainnya, selain
itu karena enzim ini terdapat di plasma sel
sehingga proses isolasinya akan lebih mudah.
Pemilihan kacang hijau sebagai sumber enzim
-amilase karena dalam bentuk kecambah
mengandung tokoferol (pro vitamin E) 936,4
ppm, fenolik 11,3 ppm.
Sebelum menanam bibit kacang hijau,
terlebih dahulu biji kacang hijau direndam
dalam air selama 30 menit. Tujuannya yaitu
mempercepat proses perkecambahan pada biji
kacang hijau melalui proses masuknya air
kedalam bagian biji kacang hijau yang lebih
dikenal dengan istilah imbibisi. Karena
masuknya air ke dalam biji kacang hijau
mengakibatkan zat-zat cadangan menjadi
aktif. Proses masuknya air melalui kulit biji
adalah proses fisik yang berhubungan dengan
sifat kimiawi dari kulit biji dan sifat tanggap
biji terhadap kesediaan air sekitarnya. Dengan
adanya air dapat mengaktifkan reaksi
metabolisme pada kecambah.
Tahapan awal yang dilakukan yaitu
penanaman biji kacang hijau dengan
menggunakan media kapas dengan variasi
waktu mulai dari 1,3,5 dan 7 hari. Tujuan dari
penggunaan variasi waktu ini adalah untuk
mengamati dan menganalisis waktu yang
menghasilkan enzim -amilase dalam jumlah
yang paling banyak dalam rentang waktu yang
digunakan. Hal ini dikarenakan enzim -
amilase ini mulai dibentuk saat fasa awal
perkecambahan tanaman kacang hijau.
Pembuatan Ekstrak Enzim Dari Kecambah
Kacang Hijau
Enzim -amilase yang berasal dari
tanaman kacang hijau ini adalah enzim yang
sifatnya endoseluler sehingga untuk isolasi
dan mengektraksi enzim ini, maka harus
menghancurkan kecambah tersebut terlebih
dahulu. Ekstrak enzim -amilase dapat
diperoleh dengan cara menghaluskan
kecambah kacang hijau yang telah dipanen
mulai dari yang berumur 1-5 hari dengan
menggunakan mortal dan alu. Tujuan dari
penghalusan kecambah kacang hijau ini
adalah untuk merusak jaringan dinding sel
pada kecambah kacang hijau ini, sehingga
enzim -amilase dapat keluar dari plasma sel
kacang hijau dan lebih mudah untuk diisolasi
dan diekstraksi.
Proses isolasi ini harus dilakukan
dalam kondisi yang dingin, untuk menjaga
kondisi enzim agar tidak terdenaturasi
sehingga proses isolasi dan ektraksi enzim -
amilase menjadi lebih cepat dan baik.
Keberhasilan proses isolasi enzim ini
dipengaruhi oleh kondisi sumber enzim, letak
enzim, bahan dan cara ektraksi yang
digunakan selama proses ini, dimana enzim -
amilase ini tergolong enzim ektraseluler
sehingga lebih mudah diekstraknya.
Kecambah yang telah halus
ditambahkan dengan buffer asetat 0,2 M pada
pH 5 yang merupakan pH optimum dari enzim
-amilase. Buffer asetat ini berperan sebagai
pelarut yang akan melarutkan enzim -
amilase yang ada pada kecambah kacang
hijau. Larutan buffer bermanfaat untuk
melarutkan kotoran yang masih terikut di
dalam endapan enzim tersebut sekaligus bisa
mencegah enzim dari denaturasi dan
kehilangan fungsi biologisnya. Buffer dapat
mempertahankan kondisi enzim presipitat
agar tidak terjadi perubahan pH dan
mencegah agar enzim tidak mengalami
inaktivas. Hal ini terjadi karena struktur 3D
dari enzim akan berubah, sehingga substrat
tidak dapat berikatan dengan sisi aktif enzim
dan proses yang seharusnya terjadi menjadi
terhambat.
Kecambah yang telah ditambahkan
dengan larutan buffer kemudian diinkubasi.
Inkubasi dilakukan selama 2 minggu. Proses
inkubasi bertujuan untuk menghomogenkan
larutan yang terbentuk dan memaksimalkan
proses pelarutan enzim amilase pada
kecambah oleh larutan buffer. Proses
penyaringan pada larutan campuran buffer
asetat dan kecambah kacang hijau untuk
mendapatkan filtrate yang merupakan ektrak
enzim amilase kasar.
Filtrat yang diperoleh disentrifugasi
untuk memisahkan larutan berdasarkan berat
molekul. Protein penyusun enzim amilase ini
memiliki berat molekul yang lebih kecil jika
dibandingkan dengan berat molekul protein
penyusun organel sel. Sehingga setelah
disentifugasi ini enzim -amilase akan berada
di permukaan atasnya (supernatant)
sementara organel-organel sel lainnya akan
berada di bagian bawahnya (pallet).
Supernatant yang diperoleh ini merupakan
ekstrak enzim -amilase murni.
Penentuan Aktivitas Enzim -amilase Penambahan air pada ektrak amilase
Dengan metode FUWA ini meningkatkan reaksi enzim amilase untuk
Ektrak enzim -amilase yang telah memecah amilum. dengan adanya air maka
diisolasi dengan variasi waktu tumbuh ini substrat lebih mudah berdifusi menuju enzim,
digunakan sebagai agen yang mengdegradasi sehingga kecepatan reaksi degradasi lebih
senyawa pati yang berperan sebagai cepat.
substratnya sehingga pati dapat didegradasi
Pembuatan kurva kalibrasi
menjadi gula-gula yang sederhana. Penentuan
Pengukuran absorbansi (jumlah pati
aktivitas enzim -amilase dengan metode
yang tidak terdegradasi oleh enzim -amilase)
FUWA adalah berdasarkan reaksi antara
dilakukan pada panjang gelombang 600 nm
amilosa dengan iodin. Dimana fungsi dari
yang merupakan panjang gelombang
iodin ini agar dapat bereaksi dengan pati-pati
maksimum dari enzim -amilase. Hasil
yang terdegradasi oleh enzim amilase dan
pengukuran absorbansi disajikan pada tabel
menghasilkan kompleks heliks dan
2.
memberikan warna biru yang khas. Larutan
iodin digunakan untuk deteksi adanya Tabel 2. Pembuatan kurva standar kalibrasi
amilase dalam medium atau bahan dimana
Panjang
degradasi yang terjadi pada pati diketahui Absorbansi
Konsentrasi gelombang
dengan hilangnya material yang terwarnai oleh (A)
()
iodine.
Pada percobaan ini konsentrasi pati 0,1 600 nm 0,313
yang digunakan untuk didegradasi dengan 0,2 600 nm 0,622
enzim -amilase dibuat bervariasi mulai dari 0,3 600 nm 0,735
konsentrasi 0,1%-0,9%. Tujuan dibuat 0,4 600 nm 0,759
beberapa macam konsentrasi ini agar dapat 0,5 600 nm 0,757
mengamati aktivitas kerja enzim yang paling 0,6 600 nm 0,760
maksimum dari variasi konsentrasi yang 0,7 600 nm 0,761
digunakan. Pada percobaan ini pati yang 0,9 600 nm 0,763
digunakan harus dalam keadaan yang segar
Berdasarkan hasil absorbansi yang
karena jika tidak segar, maka dikhawatirkan
diperoleh hasil secara keseluruhan pada
perubahan warna yang terjadi tidak sesuai
larutan standar metode FUWA ini mengalami
dengan literature. Dari hasil yang telah
peningkatan seiring dengan meningkatnya
dilakukan ini diperoleh hasil bahwa
konsentrasi. Adapun grafik kurva standar
perubahan warna yang teramati yakni warna
kalibrasi -amilase dengan metode FUWA
biru sesuai dengan literatur.
yaitu sebagai berikut:
Absorbansi diukur pada panjang
gelombang 600 nm setelah inkubasi. Aktifitas
-amilase ditentukan dengan mengetahui Konsentrasi vs Absorbansi
berkurangnya sejumlah enzim pada panjang
gelombang 600 nm dari waktu inkubasi 1
absorbansi

tersebut. Nilai absorbasi yang dihasilkan ini

merupakan nilai konsentrasi dari pati yang 0.5
tidak terdegradasi oleh enzim -amilase atau y = 0.0466x + 0.4739
substrat sisa dari hasil degradasi amylase ini. R = 0.5282
0
Penambahan reagen HCl bertujuan
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.9
untuk menonaktifkan enzim -amilase
sehingga proses degradasi enzim -amilase ini konsentrasi (%)
berhenti dan dapat diukur absorbansinya.
Seperti yang diketahui bahwa salah satunya
Grafik 1. Pembuatan kurva standar kalibrasi
adalah larutan asam dimana larutan HCl ini
mempengaruhi pH optimum dari enzim Berdasarkan grafik diatas dapat diihat
amilase ini sehingga daya kerja enzim hubungan antar konsentrasi pati terhadap
menurun dalam mendegradasi pati hingga nilai absorbansi yang dihasilkan adalah
penambahan yang berlebih yang berbanding lurus. Hal ini dapat dilihat pada
menyebabkan kerja enzim berhenti. konsentrasi pati 0,1% absorbansi yang
dihasilkan adalah 0,313 sedangkan pada terdegradasi oleh enzim -amilase atau
konsentrasi 0,9% absorbansi yang diperoleh substrat sisa dari hasil degradasi amilase ini.
adalah 0,763. Hasil perhitungan regresi secara
komputerisasi dan perhitungan manual Penambahan reagen HCl bertujuan
diperoleh persamaan regresi linier dari kurva untuk menonaktifkan enzim -amilase
standar metode FUWA ini yaitu : sehingga proses degradasi enzim -amilase
berhenti dan dapat diukur absorbansinya.
y = 0.0466x + 0.4739 Seperti yang diketahui bahwa salah satunya
R2 = 0.5282 adalah larutan asam dimana larutan HCl ini
Dari nilai korelasi R2= 0.5282 yang mempenagruhi pH optimum dari enzim -
diperoleh menunjukkan hubungan antara amilase sehingga daya kerja enzim menurun
konsentrasi dan absorbansi yang diperoleh dalam mendegradasi pati hingga penambahan
hubungannya kurang kuat, atau dari yang berlebih yang menyebabkan kerja enzim
persamaan regresi ini bisa dikatakan bahwa berhenti. Inkubasi selama 10 menit dalam
data yang dipeoleh dari percobaan ini kurang percobaan ini bertujuan untuk
valid jika diuji dengan beberapa metode uji mengoptimalkan proses degradasi enzim -
statistika. Tapi dari grafik terlihat jika pada amilase terhadap pati yang ada.
beberapa konsentrasi yang digunakan adanya
penurunan dan peningkatan nilai absorbansi. Hasil pengukuran absorbansi yang
Hal ini bisa disebabkan kesalahan saat diperoleh dari percobaan penggunaan enzim
melakukan preparasi sampel, alat kuvet yang -amilase dalam beberapa variasi waktu
belum di matching sebelumnya dan factor mulai dari 1,3,5 dan 7 hari pada larutan pati
lainnnya. Dari sini juga dapat dikatakan dengan konsentrasi 0,5% dapat dilihat pada
bahwa nilai absorbansi yang tinggi tabel 3. Penggunaan pati 0,5% ini merupakan
menunjukkan tingginya kandungan pati yang konsentrasi tengah dari beberapa variasi
tidak terlarut pada sampel. Selain itu jika konsentrasi yang digunakan. Pada percobaan
melakukan analisa absorbansi dengan ini diperoleh nilai absorbansi dari pati oleh
instrument Spektronik 20 harus enzim -amilase mulai mengalami fluktuasi
memperhatikan factor kepekatan dari larutan untuk -amilase kecambah 1,3,5 dan 7 hari.
uji, karena jika larutan terlalu pekat maka Menurut literatur, semakin lama penanaman
akan mempengaruhi kelinieran grafik yang kecambah maka absorbansinya semakin
dihasilkan dan menyebabkan penyimpangan menurun.
dari persamaan Lambert beer. Selanjutnya dari nilai absorbansi ini
Penentuan aktivitas enzim amilase digunakan untuk menentukan nilai
Aktivitas ektrak enzim -amilase ini konsentrasi pati yang tidak terhidrolisis
dapat dihitung dengan menggunakan dengan amilase.
persamaan regresi yang dihasilkan dari kurva
Tabel 3. Pengukuran Absorbansi Sampel
standar -amilase untuk menghitung
konsentrasi pati yang tidak terhidrolisis oleh Panjang Absorbansi (A)
enzim -amilase. Karena enzim amilase Hari gelombang gelap terang
berfungsi untuk mengdegradasi pati menjadi ()
gula-gula yang sederhana. Unit aktivitas 1 600 nm 0,722 0,734
spesifik enzim didefinisikan sebagai jumlah 3 600 nm 0,720 0,222
enzim yang dapat menghasilkan satu mol 5 600 nm 0,241 0,716
produk setiap detik per gram protein enzim. 0,729
7 600 nm 0,766 0,724
Apabila aktivitas enzim ini bekerja
dengan baik maka larutan akan semakin 0,741
bening, karena telah terdegradasi secara
sempurna, sedangkan apabila enzim ini Dari nilai konsentrasi yang dapat
kurang bekerja secara maksimal, maka dilihat bahwa enzim amilase ini mengalami
larutan akan berwarna lebih gelap, karena fluktuasi konsentrasi pati yang tidak
tidak dapat terdegradasi secara sempurna. terdegradasi pada kecambah 1,3,5,dan 7 hari.
Nilai absorbasi yang dihasilkan ini merupakan Jika dibandingkan dengan literatur
nilai konsentrasi dari pati yang tidak seharusnya semakin bertambahnya waktu
penanaman maka nilai konsentrasi pati yang kecambah. Adanya hasil seperti ini bisa
tidak terdegradasi oleh enzim amilase ini disebabkan adanya kesalahan saat preparasi
mengalami penurunan. Hal ini dapat dilihat sampel, pengukuran panjang gelombang
pada tabel 4. dengan kuvet yang belum matching dan factor
kondisi dan keadaan saat pengukuran
Tabel 4. Penentuan Aktivitas Enzim absorbansi gelombang pada 600 nm dengan
Konsentrasi pati Aktivitas enzim instrument spektronik 20. Karena walaupun
sisa (g/mL) (unit/L s) analisa menggunakan alat yang sama tapi,
Hari jika dilakukan pada kondisi yang berbeda
Gelap Terang Gelap Terang maka hasil yang diperoleh juga berbeda.
1 5,3240 5,5815 8,8733 9,3025x
x10-3 10-3 KESIMPULAN DAN SARAN
3 5,2811 -5,476 8,8018 9,1266 Berdasarkan penelitian yang telah
x10-3 x10-3
dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa
5 -4,9978 5,1952 8,3296 8,6586
x10-3 x10-3 Enzim -amilase yang berasal dari tanaman
5,4742 9,1236 kacang hijau ini adalah enzim yang sifatnya
x10-3 endoseluler sehingga untuk isolasi dan
7 6,2682 5,3669 10,447 8,9448 mengektraksi enzim ini, maka harus
x10-3 x10-3 menghancurkan kecambah tersebut terlebih
5,7317 9,5528 dahulu. Keberhasilan proses isolasi enzim ini
x10-3 dipengaruhi oleh kondisi sumber enzim, letak
enzim, bahan dan cara ektraksi yang
digunakan selama proses ini, dimana enzim -
Dari nilai konsentrasi ini di amilase ini tergolong enzim ektraseluler
konversikan menjadi aktivitas enzim sehingga sehingga lebih mudah diekstraknya.
dari percobaan ini dapat dilihat unit kerja
enzim terhadap pati yang terdegradasi dengan Persamaan regresi dengan metode
enzim amilase. Dari perhitungan didapatkan FUWA pada maks 600 nm yaitu y= 0.0466x +
bahwa nilai aktivitas enzim yang paling besar 0.4739 dengan nilai korelasinya R2 = 0.5282.
adalah pada kecambah kacang hijau yang Dari nilai konsentrasi dapat dilihat bahwa
berumur 7 hari karena pada ektrak kecambah enzim -amilase ini semakin mengalami
ini memiliki aktivitas sebesar 10,447 x10-3 kenaikan konsentrasi pati yang tidak
unit/L s untuk kondisi gelap dan 8,9448 x10-3 terdegradasi ini mulai dari 1 hari hingga 7
unit/L s untuk kondis terang dengan daun hari.
dan 9,5528 x10-3 unit/L s untuk kondisi terang
tanpa daun. Dari hasil analisis didapatkan hasil
bahwa aktivitas enzim -amilase yang paling
Dari data yang diperoleh bisa dilihat baik adalah pada kecambah yang kacang hijau
nilai aktivitas enzim yang dihasilkan yang berumur 7 hari karena pada ektrak
berbanding lurus dengan konsentrasi pati sisa kecambah ini memiliki aktivitas sebesar 10,447
hasil degradasi. Pada data tersebut semakin x10-3 unit/L s untuk kondisi gelap dan 8,9448
lama umur tumbuhan tersebut maka semakin x10-3 unit/L s untuk kondis terang dengan
banyak pula enzim amilasenya, sehingga daun dan 9,5528 x10-3 unit/L s untuk kondisi
aktivitas enzim nya mengalami peningkatan. terang tanpa daun.
Hal ini tidak sesuai denganliteratur bahwa
semakin lama umur tumbuhan tersebut maka Perlu dilakukan penelitian lebih
semakin sedikit pula enzim amilasenya, lanjut tentang kadar nutrisi, terutama protein
sehingga aktivitas enzim nya mengalami dan amilum, yang ada dalam kecambah
penurunan. kacang hijau sehingga dapat diketahui
pengaruh lamanya pertumbuhan kacang hijau
Tapi pada percobaan ini ada beberapa terhadap kandungan kadar protein total pada
data yang nilainya mengalami fluktuasi. kecambah kacang hijau tersebut.
Seharusnya nilai absorbansi, konsentrasi dan
aktivitas enzim -amilase mengalami
penurunan seiring berkurangnya umur
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih
kepada ibu Andita Utami, M.Si. dan Riski
Dwimalida Putri, M.Si., serta para asisten
praktikum dan semua pihak yang telah
membantu penulis menyelesaikan tulisan ini.

DAFTAR PUSTAKA
Cahyono, D. 2004. Pengaruh Proses
Pengeringan Terhadap Sifat Fisikokima
dan Fungsional Tepung Kecambah
Kacang Hijau Hasil Germinasi dengan
Perlakuan Natrium Alginat Sebagai
Elisitor Penolik Antioksidan. Skripsi IPB.
Tidak Dipublikasi. 72 hal.
Rahayu, K. 1988. Isolasi dan Pengujian
Aktivitas Enzym. Yogyakarta : Pusat
antar Aniversitas UGM. hal. 1-7.
Richana, N., Setyawan, A., Hartoto, L., dan
Damardjati, D.S. 1999. Kinetik Kultivasi
Produksi a-Amilase oleh Isolat Bakteri
Mesofilik MII-10. Jurnal Bioteknologi
Pertanian. 4 (2): 41-48.

Sari, Lucia Dwi A. 2004. Hubungan Aktivas

Enzim Amilase Dengan Perkecambahan
Pada Tiga Varietas Kedelai (Glycine max
(L) Merill.) yang Berbeda. Skripsi.
Jurusan Biologi. MIPA. Semarang :
Universitas Diponegoro.
Setyono, A. 1982. Aspek Penambahan Asam
Fitat dalam Kacang Hijau Selama
Perkecambahan. Tesis Pascasarjana.
Yogyakarta : UGM. hal. 54-59.
Skoog, D.A and D.M. West. 1971. Principles of
Instrumental Analysis. New York : Holt,
Rinehart and Winston, Inc.
Sumarno dan I. Manwan. 1990. Grain
Legumes National Coordinated Research
Program. Bogor : Central Res. Inst for
Agric. (CRIFC).
 LAMPIRAN

1. Perhitungan
Regresi linier Kurva Standar Metode FUWA

No x y x2 y2 xy
1 0.1 0.313 0.01 0.097969 0.0313
2 0.2 0.622 0.04 0.386884 0.1244
3 0.3 0.735 0.09 0.540225 0.2205
4 0.4 0.759 0.16 0.576081 0.3036
5 0.5 0.757 0.25 0.573049 0.3785
6 0.6 0.76 0.36 0.5776 0.456
7 0.7 0.761 0.49 0.579121 0.5327
8 0.9 0.763 0.81 0.582169 0.6867
n=8 =3.7 =5.47 2
=2.21 2
=3.913098 =2.7337

x= konsentrasi
y = Absorbansi
( )( )
a = ( )( )

8(2,7337)(3,7)(5,47)
= 8(2,21)3,72

= 0.0466

( )( )( )( )
b = ( )( )

(5,47)(2,21)(3,7)(2,7337)
= 8(2,21)3,72

= 0.4739
y =ax+ b
y =0,0466x + 0,4739
a. Korelasi
( )( )( )
r =
[( 2 )( )2 ][( 2 )( )2 ]

8(2,7337)(3,7)(5,47)
=
[8((2,21)3,72 )][8((3,913098)5,472 )]

1,6306
=
5,521697
1,6306
= 2,349829143

r = 0.693922792
R2 =0,52822
b. Penentuan konsentrasi
Dari nilai persamaan regresi linier yang dihasilkan yaitu:
y = 0.0466x + 0.4739
Kecambah 1 hari
Gelap Absorbansi = 0,722
y = 0.0466x + 0.4739
0,722 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =0,2481
0,2481
x =
0,0466
x =5,3240 g/mL

Terang Absorbansi = 0,734

y = 0.0466x + 0.4739
0,734 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =0,2601
0,2601
x =
0,0466
x =5,5815 g/mL

Kecambah 3 hari

Gelap Absorbansi = 0,720

y = 0.0466x + 0.4739
0,720 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =0,2481
0,2461
x =
0,0466
x =5,2811 g/mL

Terang Absorbansi = 0,222

y = 0.0466x + 0.4739
0,222 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =-0,2519
0,2519
x =
0,0466
x =-5,476 g/mL
Kecambah 5 hari
Gelap I Absorbansi = 0,241
y = 0.0466x + 0.4739
0,241 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =-0,2329
0,2329
x =
0,0466
x =-4,9978 g/mL
 Gelap II Absorbansi = 0,729
y = 0.0466x + 0.4739
0,729 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =0,2551
0,2551
x =
0,0466
x =5,4742 g/mL

Terang Absorbansi = 0,716

y = 0.0466x + 0.4739
0,716 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =-0,2421
0,2421
x =
0,0466
x =5,1952 g/mL

Kecambah 7 hari
Gelap Absorbansi = 0,766
y = 0.0466x + 0.4739
0,766 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x = 0,2921
0,2921
x =
0,0466
x = 6,2682 g/mL
Terang I Absorbansi = 0,724
y = 0.0466x + 0.4739
0,724 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =0,2501
0,2501
x =
0,0466
x =5,3669 g/mL

Terang II Absorbansi = 0,741

y = 0.0466x + 0.4739
0,741 = 0.0466x + 0.4739
0,0466x =-0,2671
0,2671
x =
0,0466
x =5,7317 g/mL

c. Penentuan aktivitas enzim

Kecambah 1 hari
Gelap Konsentrasi = 5,3240 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,3240 x 1/600 unit/L

 = 8,8733 x10-3 unit/L s
Terang Konsentrasi = 5,5815 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,5815 x 1/600 unit/L

= 9,3025 x10-3 unit/L s

Kecambah 3 hari
Gelap Konsentrasi = 5,2811 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,2811x 1/600 unit/L

= 8,8018 x10-3 unit/L s
Terang Konsentrasi = -5,476 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= -5,476 x 1/600 unit/L

= 9,1266 x10-3 unit/L s
Kecambah 5 hari
Gelap Konsentrasi = -4,9978 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= -4,9978 x 1/600 unit/L

= 8,3296 x10-3unit/L s
Gelap Konsentrasi = 5,4742 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,4742x 1/600 unit/L

= 9,1236 x10-3 unit/L s
Terang Konsentrasi = 5,1952 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,1952 x 1/600 unit/L

= 8,6586 x10-3 unit/L s
Kecambah 7 hari
Gelap Konsentrasi = 6,2682 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 6,2682 x 1/600 unit/L

= 10,447 x10-3unit/L s
Terang I Konsentrasi = 5,3669 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

 = 5,3669x 1/600 unit/L
= 8,9448 x10-3 unit/L s
Terang Konsentrasi = 5,7317 g/mL
1
Aktivitas enzim =cx unit/L

= 5,7317 x 1/600 unit/L

= 9,5528 x10-3 unit/L s

2. Gambar

Kecambah kacang hijau Kecambah kacang hijau 1 Kecambah kacang hijau

hari dihaluskan yang halus + buffer asetat

Kecambah kacang hijau 1 Enzim a-amilase Dianalisis dengan

hari + buffer asetat ditambah pati terlarut, spektrofotometri visible
disentrifugasi HCl, KI, dan ddH2O