5 Mikrolaut Modul 5 Ta2012
5 Mikrolaut Modul 5 Ta2012
POKOK BAHASAN :
Teknik Pewarnaan GRAM (Pewarnaan Differensial)
TUJUAN PRAKTIKUM :
1. Mempelajari cara menyiapkan apusan bakteri dengan baik sebagai prasyarat untuk mempelajari
teknik pewarnaan;
2. Mempelajari prosedur Pewarnaan Gram, memahami tahapan prosedur dan reaksi kimiawi yang
terlibat dalam prosedur.
TINJAUAN PUSTAKA :
Bakteri berukuran sangat kecil dan tipis sehingga sukar dilihat struktur tubuhnya walaupun dengan
bantuan mikroskop. Untuk melihat morfologi bakteri secara lebih jelas dikembangkan teknik
pewarnaan bakteri. Prinsip pewarnaan bakteri adalah pertukaran antara ion zat warna dengan ion
protoplasma sel.
Terdapat dua kelompok zat pewarna bakteri, yaitu : (1) bersifat Asam, berupa anion dan umum
digunakan dalam bentuk garam natrium. (2) bersifat Alkali, berupa kation dan umum digunakan
dalam bentuk klorida.
Selain zat warna diperlukan zat tambahan yang berfungsi untuk mengendapkan hasil rekasi zat
warna dengan komponen dinding sel bakteri. Zat tersebut dikenal dengan istilah zat Pematek yang
akan melekatkan zat warna pada plasma sel.
Prosedur :
Sumber dari biakan Padat (Agar Culture)
1. Dengan menggunakan Jarum Ose, ambil 2 loop NaCl Fisiologis, tempatkan di atas Object
Glass;
2. Dengan menggunakan Jarum Ose (ujung runcing), ambil 1 koloni bakteri dari biakan
Padat, tempatkan di atas suspensi NaCl Fisiologis yang sudah ada di atas Object Glass,
3. Ratakan suspensi dengan membentuk area apusan;
4. Keringkan suspensi pada suhu ruang untuk beberapa menit;
5. Lewatkan suspensi di atas api bunsen untuk fiksasi apusan.
Ilustrasi Teknik Pembuatan Apusan bakteri dapat dilihat pada Gambar berikut :
Prosedur :
1. Persiapkan Apusan bakteri yang telah dibuat pada tahap sebelumnya;
2. Teteskan 1 tetes Zat Warna I (Gentian Violet) ke atas area apusan, biarkan selama 20 detik;
3. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan 2 detik;
4. Teteskan 1 tetes Larutan Iodine ke atas apusan, biarkan 30 detik s.d. 1 menit;
5. Cuci dengan Alcohol, hingga larutan yang mengalir sudah tidak berwarna (sekitar 10 20
detik);
6. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan selama 2 detik;
7. Teteskan 1 tetes Zat Warna II (Safranin/ Air Fuchsin), biarkan selama 20 detik;
8. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan selama 2 detik;
9. Keringkan di suhu ruang;
10. Amati di atas mikroskop dengan perbesar 100 x Objektif, dengan bantuan minyak imersi;