LAPORAN RESMI PRAKTIKUM

ANALISIS OBAT, KOSMETIK, DAN MAKANAN

AMPISILIN KAPLET

Disusun oleh :

Kelompok 4 Golongan II Kelas FKK

1. Alfi Cahya Cintia Wati (14/362895/FA/10050) [ ]

2. Esti Yunita (14/362896/FA/10051) [ ]
3. Vintika Merrylia Sari (14/362897/FA/10052) [
]
4. Dealinda Husnasya (14/362899/FA/10053) [ ]

Hari/Jam Praktikum : Selasa/07.00-11.00 WIB

Tanggal Praktikum : 22 Februari 2017
Dosen Jaga : Dr. Sri Mulyani, SU.,Apt
Asisten Jaga : Bela, Muiz
Asisten Koreksi :

LABORATORIUM KIMIA FARMASI DASAR

BAGIAN KIMIA ANALISIS
FAKULTAS FARMASI UGM
YOGYAKARTA
2017
 PENETAPAN KADAR AMPISILIN
DALAM SEDIAAN KAPLET

A. TUJUAN
Menetapkan kadar ampisillin dalam sediaan kaplet dengan metode Iodometri.

B. PENDAHULUAN
Antibiotik adalah bahan kimia yang dihasilkan oleh mikroba yang dalam
konsentrasi tertentu mempunyai kemampuan menghambat atau membunuh mikroba
lain. Pada perkembangannya bahan yang dapat dikelompokkan sebagai antibiotik
bukan hanya hasil alamiah saja, akan tetapi bahan-bahan semisintetik yang
merupakan hasil modifikasi bahan kimia antibiotik alam (Sumadio dan Harahap,
1994).
Berdasarkan sasaran tindakan antibiotik terhadap mikroba maka antibiotik
dapat dikelompokkan menjadi lima golongan yaitu:
1. Antibiotik penghambat sintesis dinding sel mikroba.
Antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah penisilin, sefalosporin, basitrasin,
dan vankomisin.
2. Antibiotik penghambat sintesis protein sel mikroba.
Antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah golongan aminoglikosida,
makrolida, kloramfenikol, linkomisin dan tetrasiklin.
3. Antibiotik penghambat sintesis asam nukleat sel mikroba.
Antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah rifampisin dan golongan kuinolon.
4. Antibiotik pengganggu fungsi membran sel mikroba.
Antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah golongan polien.
5. Antibiotik penghambat metabolisme mikroba.
Antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah sulfonamida, trimetoprin dan asam
p-amino salisilat (PAS) (Ganiswarna, 1995).
Salah satu antibiotik yang sering digunakan adalah Ampisilin dari golongan
Pensisilin. Ampisilin berupa serbuk hablur, putih dan tak berbau. Dalam air
kelarutannya 1g/ml, dalam etanol absolut 1g/250ml dan praktis tidak larut dalam eter
dan kloroform (Wattimena, 1987).
Ampisilin merupakan derivat penisilin yang merupakan kelompok antibiotik β
–laktam yang memiliki spektrum antimikroba yang luas. Ampisilin efektif terhadap
mikroba Gram positif dan Gram negatif. Ampisilin digunakan untuk infeksi pada
saluran urin yang disebabkan oleh Escherichia coli dan juga untuk infeksi saluran
pernafasan, telinga bagian tengah yang disebabkan Streptococcus pneumoniae
(Wattimena, 1987).
Mekanisme kerja ampisilin yaitu menghambat sintesis dinding sel bakteri
dengan cara menghambat pembentukan mukopeptida, karena sintesis dinding sel
terganggu maka bakteri tersebut tidak mampu mengatasi perbedaan tekanan osmosa
di luar dan di dalam sel yang mengakibatkan bakteri mati (Wattimena, 1987).
Ampisilin memiliki gugus phenoxyl yang terikat oleh gugus alkyl dari rantai
alkylnya. Kemampuan membunuh bakteri ialah karena penicillin ini menghambat
perkembangan dinding sel kuman dengan jalan menjadikan inaktif, dengan demikian
tidak memungkinkan terhubungnya kedua lapisan linier serabut peptidoglycan yang
terdapat di kedua lapis dinding sel sebelah dalam (Brooks, 2004).
Semua penisilin mempunyai rumus bangun dasar sebagai berikut:

O
HS CH3

B A
R N
H N CH3

Di dalam O perdagangan ampisilin dapat

COOH'
dijumpai dalam bentuk sediaan kapsul, tablet, serbuk untuk suspensi
oral, dan injeksi. Sediaan-sediaan ini beredar dengan nama dagang dan nama generik.
Dimana sediaan dengan nama dagang antara lain Binotal (Bayer), Cetacillin (Soho),
Kalpicillin (Kalbe Farma), Parpicillin (Prafa). Sedangkan dengan nama generik
dikeluarkan oleh Kimia Farma, Indofarma, dan Phapros.
Di dalam beberapa literatur ampisilin dapat ditentukan kadarnya secara : titrasi
sebagai basa (Kovar, 1987), spektrofotometri ultra violet (Anonim, 1979),
kromatografi cair kinerja tinggi dengan fase gerak air : asetonitril : KH2PO4 1 M :
asam asetat 1 N (909: 80: 10: 1) (Anonim, 1995), dan KCKT dengan fase gerak
campuran 0,067 M KH2PO4 pH 4,6 : metanol (425 : 75) v/v (Munson, 1991).
Sedangkan dalam sediaan tablet, kapsul, dan suspensi oral ditentukan secara
iodometri (Anonim, 1995).

Penetapan kadar Ampisilin dilakukan seperti prosedur yang tertera pada

penetapan kadar antibiotik secara iodometri. Metode ini digunakan untuk penetapan
kadar sebagian besar senyawa antibiotik penisilin dan bentuk sediannya yang
tercantum dalam Farmakope, dan titrasi iodometri merupakan metode yang paling
 sesuai (Anonim, 1995). Iodometri merupakan salah satu metode analisis kuantitatif
volumetri secara oksidimetri dan reduksimetri melalui proses titrasi (Haryadi, 1990).
Iodometri merupakan titrasi tidak langsung dan digunakan untuk menetapkan
senyawa-senyawa yang mempunyai potensial oksidasi lebih besar dari sistem iodium-
iodida atau senyawa-senyawa yang bersifat oksidator seperti CuSO 4.5H2O. Pada
titrasi iodometri secara tidak langsung, natrium tiosulfat digunakan sebagai titran
dengan indikator larutan amilum. Natrium tiosulfat akan bereaksi dengan larutan
iodin yang dihasilkan oleh reaksi antara analit dengan larutan KI berlebih. Sebaiknya
indikator amilum ditambahkan pada saat titrasi mendekati titik ekivalen karena
amilum dapat memebentuk kompleks yang stabil dengan iodin.
Cincin β-laktam pada Ampicilin akan dipecah oleh alkali atau β-laktamase.
Senyawa yang terbentuk dapat ditetapkan kadarnya karena dapat mengikat iodium
sedangkan Ampicilin tidak dapat mengikat iodium. Metode ini merupakan metode
titrasi tidak langsung di mana kelebihan iodium akan dititrasi dengan baku natrium
tiosulfat. Metode iodometri agak spesifik, karena senyawa bukan penisilina yang ada
tidak ikut tertetapkan dengan cara melakukan blanko. Juga metode ini cukup peka
karena jumlah iod yang bereaksi cukup besar.

C. ALAT DAN BAHAN

Alat : Bahan :
1. Statif dan klem 1 buah 1. Na2S2O3
2. Buret 25 ml 1 buah 2. K2Cr2O7
3. Iodine flash 8 buah 3. NaOH
4. Labu takar 25 ml 2 buah 4. KI
5. Labu takar 100 ml 2 buah 5. NaHCO3
6. Labu takar 1000 ml 1 buah 6. I2
7. Beaker glass 50 ml 1 buah 7. Kanji
8. Beaker glass 100 ml 1 buah 8. HCl pekat
9. Beaker glass 250 ml 1 buah 9. Ampisilin kaplet
10. Beaker glass 300 ml ml 1 buah
11. Beaker glass 500 ml 1 buah
12. Pro pipet 1 buah
13. Pipet volume 1 ml 1 buah
14. Pipet volume 2 ml 2 buah
15. Pipet volume 10 ml 1 buah
16. Pipet volume 25 ml 1 buah
Gelas timbang 1 buah

D. CARA KERJA
Metode penetapan kadar secara iodometri

a. Pembuatan

Ditimbang 1,2563 gram

Dilarutkan dalam 100 mL aquades

b. Pembuatan NaOH 1 N
Dilarutkan 1 g NaOH p dalam 25 ml aquadest

Didinginkan larutan hingga suhu kamar

Disaring dengan kertas saring yang dikeraskan

Dimasukkan filtrat jernih ke dalam wadah tertutup rapat

c. Pembuatan Iodium 0,1 N

Ditimbang 1000,0 mg KI dan 600,0 mg I2

Dilarutkan dalam 500,0 mL aquades

d. Pembuatan Kanji 5%
Ditimbang 503,8 mg amilum dan dilarutkan dalam 100 mL aquades

Dipanaskan hingga semua amilum larut dan terbentuk larutan yang jernih

Didinginkan dan baru digunakan sebagai indikator

e. Pembakuan
Ditimbang seksama 50,2 mg K2Cr2O7yang sebelumnya dikeringkan

Dilarutkan dalam 100 ml aquadest

Ditambahkan 3 gram KI, 2 gram natrium bikarbonat, dan 5 ml HCl

Digoyangkan hingga larut, dan biarkan ditempat gelap 15 menit

Dititrasi dengan larutan dengan 2 ml indikator kanji 0,5%

Dihitung normalitasnya
 f. Sampel
Ditimbang seksama ± 125 mg sampel, dimasukkan labu takar

Ditambah aquades sampai 100 ml dan dihomogenkan

Diambil 2 ml larutan, dimasukkan dalam labu bersumbat

Ditambah 2 ml NaOH 1 N , didiamkan 15 menit

Ditambah 2 ml HCl pekat dan 10 ml iodium 0,01 N

Dibiarkan 15 menit terlindung dari cahaya

Dititrasi dengan baku Na2S2O3 0,01N dengan 2 ml indikator kanji 0,5%

g. Blanko
Ditimbang seksama ± 125 mg sampel, dimasukkan labu takar

Ditambah aquades sampai 100 ml dan dihomogenkan

Diambil 2 ml larutan, dimasukkan dalam labu bersumbat

Ditambah 2 ml HCl pekat dan 10 ml iodium 0,01 N

Dibiarkan 15 menit terlindung dari cahaya

Dititrasi dengan baku Na2S2O3 0,01N dengan 2 ml indikator kanji 0,5%

h. Analisis
Selisih volume larutan baku tiosulfat blanko dengan volume tiosulfat awal setara
dengan jumlah iodium yang bereaksi dengan ampisilin.

Tiap ml Na2S2O3 0,01 N setara dengan 3,714 mg ampisilin.

E. HASIL DAN PERHITUNGAN

1. Kesetaraan
V Na2S2O3 . N Na2S2O3 = mgrek Na-Ampisilin : BE Na-ampisilin
1 ml . 0,01 N = mgrek Na-ampsilin : (BM Na-ampisilin : valensi)
mgrek Na-ampisilin = 1 . 0,01 . (374,1 : 1)
mgrek Na-ampisilin = 3,741 mg

2. Pembuatan larutan baku Na2S2O3 0,01 N

Ditimbang 1,2563 gram Na2S2O3, lalu ad 100 ml aquadest.

3. Pembakuan larutan baku Na2S2O3 0,01 N

Ditimbang K2Cr2O3 sebanyak :
 1. 50,9 mg
2. 50,4 mg
3. 50,2 mg
Lalu ad 100 ml aquadest, dan diambil 25 ml.
Ditimbang KI sebanyak :
1. 3,0683 gram
2. 3,0901 gram
3. 3,0794 mg
Ditimbang NaHCO3 sebanyak :
1. 2,0178 gram
2. 2,0850 gram
3. 2,0187 gram
Ditambah HCl pekat sebanyak :
1. 5 ml
2. 5 ml
3. 5 ml
Volume titran Na2S2O3 :
1. 5,50 ml
2. 6,10 ml
3. 5,57 ml
Didapat Normalitas baku Na2S2O3 :

4. Pembuatan NaOH 0,1 N

Ditimbang 1,08 gram NaOH, ad 25 ml aquadest.
5. Pembuatan larutan I2 0,1 N

N =

0,1 =

Bobot I2 = 600 mg
Bobot KI = 1000 mg
Lalu ad 500 ml aquadest.

6. Pembuatan indikator kanji 0,5%

0,5 % = 0,5gram/100 ml H2O
Ditimbang kanji sebanyak 503,8 mg, lalu ad 100 ml aquadest.

7. Keseragaman bobot tablet

1. 738,9 mg 1. 755,6 mg
2. 749,8 mg 2. 754,0 mg
3. 750,4 mg 3. 765,1 mg
4. 745,4 mg 4. 743,4 mg
5. 753,1 mg 5. 742,3 mg
6. 748,9 mg 6. 759,8 mg
7. 750,5 mg 7. 745,6 mg
8. 740,9 mg 8. 751,3 mg
9. 751,2 mg 9. 741,4 mg
10. 744,0 mg
10. 764,5 mg

Bobot tablet rata-rata = 749,805 mg

SD = 7,4504

= 0,9936 %
8. Penimbangan sampel
1. Sampel I
Bobot kertas+sampel = 0,4731 g
Bobot kertas = 0,3467 g -
Bobot sampel = 0,1264 g
2. Sampel II
Bobot kertas+sampel = 0,4749 g
Bobot kertas = 0,3489 g -
Bobot sampel = 0,1260 g
3. Sampel III
Bobot kertas+sampel = 0,4711 g
Bobot kertas = 0,3442 g -
Bobot sampel = 0,1269 g
4. Sampel IV
Bobot kertas+sampel = 0,4719 g
Bobot kertas = 0,3454 g -
Bobot sampel = 0,1265 g

9. Volume titran
1. Blanko 1 = 1,50 ml
2. Blanko 2 = 1,50 ml
3. Blanko 3 = 1,35 ml
4. Blanko 4 = 1,46 ml
5. Sampel 1 = 1,20 ml
6. Sampel 2 = 1,10 ml
7. Sampel 3 = 1,15 ml
8. Sampel 4 = 1,18 ml

10. Perhitungan Kadar Ampicillin

= 181,6160 %

= 242,9162 %

= 120,5967 %
 = 169,3692 %

Kadar rata-rata sampel = = 178,6245 %

SD = 50,3165%

CV =

= 28,1688 %

F. PEMBAHASAN
Praktikum ini bertujuan supaya mahasiswa dapat menetapkan kadar ampisilin
dalam sediaan kaplet ampisilin dengan menggunakan metode iodometri. Dalam
praktikum ini, akan dianalisis apakah sampel obat ampisilin masih bermutu, dalam hal
kadarnya masih berada dalam batasan yang diperbolehkan oleh United State
Pharmacopeia (2005), yaitu tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 120%,
dihitung dari kadar yang tercantum dalam label claim sediaan. Kadar obat
berpengaruh terhadap khasiat atau efek obat. Pada percobaan ini, kadar ampisilin pada
sediaan kaplet yang tercantum dalam label claim adalah 500 mg.
Sediaan kaplet merupakan salah satu jenis sediaan farmasi (dosage form) yang
memerlukan berbagai macam uji, meliputi uji kualitas dan kuantitas sebelum
dipasarkan. Namun demikian dalam percobaan kali ini tidak semua uji fisika-kimia
dapat dilakukan karena keterbatasan alat dan waktu praktikum, sehingga uji yang
dilakukan lebih mengarah pada uji kuantitatif dari sediaan. Ampisilin sebagai
antibiotik yang bersifat tahan terhadap asam dan lebih luas spektrum kerjanya (broad
spectrum), efektif terhadap bakteri gram positif, bakteri gram negatif dan chlamydias.
Ampisilin mampu menghambat pertumbuhan mikroba dengan menghambat
biosintesis dinding sel mikroba dengan cara berlaku sebagai substrat palsu dan
menghambat transpeptidase sehingga tidak terjadi pembentukan ikatan silang lisin-
alanin (peptidoglikan) (Pratiwi, 2004).
Berikut pemerian dari sampel ampisilin :
 Gambar 1. Struktur Ampicillin

Ampisilin berbentuk anhidrat atau trihidrat. Mengandung tidak kurang dari

900 µg dan tidak lebih dari 1050 µg per mg C 16H19N3O4S, dihitung terhadap zat
anhidrat.
Pemerian : Serbuk hablur, putih; praktis tidak berbau.
Kelarutan : Sukar larut dalam air dan dalam metanol; tidak larut dalam benzena,
dalam karbon tetraklorida dan dalam kloroform.
Penetapan kadar :
Prosedur Lakukan seperti yang tertera pada Penetapan Kadar Antiibiotik secara
Iodometri <521>, menggunakan Ampisilin BPFI.
(Anonim, 1995)

Beberapa metode yang umum digunakan untuk menetapkan kadar Ampisilin

yaitu metode asidi-alkalimetri, metode iodometri dan metode spektrofotometri.
1. Metode asidi – alkalimetri
Metode asidi-alkalimetri didasarkan atas reaksi asam-basa, dimana penisilin
dirubah menjadi asam penisilinoat dengan bantuan penisilinase. Setiap molekul
penisilin akan membentuk satu gugus karboksil yang dapat dititrasi dengan baku
alkali. Sedangkan metode spektrofotometri dapat dilakukan karena molekul ampisilin
mampu mengabsorpsi sinar UV. Hal ini disebabkan karena dalam molekul ampisilin
terdapat gugus kromofor (ikatan rangkap terkonjugasi) yang bertanggung jawab
terhadap absorpsi sinar UV tersebut.
2. Metode Iodomeri
Merupakan metode titrasi reduksi-oksidasi yang dilakukan untuk zat-zat
dengan potensial oksidasi yang lebih besar dari sistem iodium-iodida. Reaksi reduksi-
oksidasi, yaitu reaksi yang didasarkan perpindahan elektron yang terjadi pada
reaksinya. Suatu reaksi dikatakan mengalami reaksi oksidasi apabila memenuhi satu
atau lebih kriteria, yaitu mengalami kenaikan bilangan oksidasi, bertambahnya atom
oksigen, dan berkurangnya jumlah atom hidrogen (dehidrogenasi). Sedangkan suatu
reaksi mengalami reduksi apabila terjadi penurunan bilangan oksidasi, pengurangan
atom oksigen, dan bertambahnya jumlah atom hidrogen.
 Iodium akan mengoksidasi zat-zat tersebut, tetapi iodium sendiri akan
mengalami reduksi menjadi iodida. Iodium yang tersisa dititrasi kembali
menggunakan larutan baku Na2S2O3. Banyaknya volume Na2S2O3 yang digunakan
sebagai titran setara dengan iodium yang dihasilkan dan setara dengan banyaknya
sampel. Dari sini hanya dapat diketahui iodium yang tersisa sehingga untuk
mengetahui iodium yang bereaksi dengan analit (dalam hal ini ampisilin) perlu
dilakukan titrasi blanko. Oleh karena itu iodometri dinamakan juga metode titrasi
tidak langsung. Cincin ß laktam pada penisilin dipecah oleh alkali atau penisilinase.
Asam penisiloat yang terjadi dapat ditetapkan kadarnya karean asam ini dapat
mengikat iod sedangkan penisilin tidak dapat mengikat iod.
Senyawa turunan penisilin (termasuk ampisilin) dapat dianalisis secara
iodometri karena turunannya D-penicillamine dapat bereaksi dengan iodium (I2),
sedangkan penisilin tidak dapat mengikat iod. Senyawa D-penicillamine ini terbentuk
dari turunan penisilin yang cincin β-laktamnya telah terbuka dan kemudian bereaksi
dengan asam. Reaksinya adalah sebagai berikut :

Dari reaksi di atas, terdapat tiga tahap yang diperlukan untuk menganalisis
turunan penisilin (termasuk ampicillin) secara iodometri, yaitu :
 Tahap 1 : Turunan penisilin diubah menjadi bentuk asam penisiloat (suatu asam
dikarboksilat) dengan cara hidrolisis dalam larutan NaOH. Dalam reaksi
ini, terjadi pembukaan cincin β-laktam.
Tahap 2 : Asam penisiloat dalam suasana asam akan menjadi D-penisilamin dan
asam benzilpenisilin.
Tahap 3 : D-penisilamin dioksidasi secara kuantitatif oleh iodin dan menghasilkan
senyawa disulfida. Kemudian kelebihan iodine dititrasi kembali
menggunakan titran berupa larutan natrium tiosulfat (Na2S2O3).
Berdasarkan reaksi tersebut, diketahui bahwa valensi ampisilin adalah sama
dengan satu. Pada reaksi dapat dilihat bahwa diperlukan dua mol D-penisilamin untuk
bereaksi dengan satu mol iodium (I2), dimana dua mol D-penisilamin ini diperoleh
dari dua mol ampisilin. Satu mol iodium setara dengan 2 elektron sesuai dengan
reaksi :
I2 + 2e- → 2I-
Sehingga urutannya menjadi sebagai berikut :
2 mol ampisilin ~ 2 mol asam penisiloat ~ 2 mol D-penisilamin ~ 1 mol I2 ~ 2 elektron

Valensi bisa ditentukan oleh berapa banyak jumlah grat (gram atom) I yang
dapat diikat oleh 1 mol senyawa obat, atau berapa banyak jumlah ½ grat (gram atom)
O yang diikat atau dilepaskan oleh 1 mol senyawa obat, atau berapa banyak jumlah
elektron yang diikat atau dilepaskan oleh 1 mol senyawa obat. Dengan demikian,

karena 2 mol ampisilin setara dengan 2 elektron, valensinya menjadi : .

Keaktifan senyawa turunan ampisilin terletak pada cincin β-laktamnya.

Apabila cincin tersebut masih utuh maka senyawa turunan penisilin berefek biologis.
Namun bila cincin ini rusak maka senyawa turunan penisilin tidak lagi berefek.
Perusakan (pembukaan) cincin β-laktam ini dapat terjadi karena reaksi dengan basa
atau dengan enzim penisilinase (Sudjadi, 1979).

3. Metode Spektrofotometri UV
Pada metode spektrofotometri sampel dianalisis berdasarkan keberadaan
kromofornya. Kromofor yang terdeteksi ini (data berupa absorbansi) sebanding
dengan kadar dari sampel. Padahal pada turunan senyawa penisilin, baik yang masih
 aktif maupun tidak, keduanya mengandung kromofor yang sama, yaitu gugus R yang
terdapat pada rantai samping struktur turunan penisilin. Sedangkan cincin β-laktam
tidak bertindak sebagai kromofor, sehingga apabila terdapat cincin yang terbuka tidak
terdeteksi menggunakan metode spektrofotometri. Misalkan pada senyawa
benzilpenisilin berikut :

basa atau

penisilinase

kromofor kromofor

Sedangkan metode HPLC dan mikrobiologi dapat mendeteksi kadar senyawa

turunan penisilin utuh seperti halnya iodometri. Hal ini disebabkan karena pada HPLC
terjadi pemisahan antara senyawa utuh dan inaktif tersebut karena kepolaran
keduanya berbeda. Sedangkan pada metode mikrobiologis diuji aktivitas biologis dari
senyawa, sehingga adanya senyawa yang tidak aktif dapat terdeteksi.
Pemilihan Metode Analisis :
Metode analisis ampicillin yang dipilih adalah titrasi iodometri, yang menurut
sumber Farmakope Indonesia Edisi IV adalah metode yang paling sesuai. Metode ini
merupakan metode yang sederhana dan mudah. Selain itu bahan-bahan yang
dibutuhkan juga murah.
Metode titrasi iodometri adalah metode yang baik digunakan untuk analisis
kuantitatif senyawa turunan penisilin, bahkan bila dibandingkan dengan metode
spektrofotometri. Hal ini disebabkan karena metode iodometri ini dapat mengukur
hanya senyawa turunan penisilin yang masih aktif (cincin β-laktamnya masih utuh)
karena digunakan blangko, yang berupa senyawa turunan penisilin (sampel yang
dianalis) namun tanpa ditambahkan alkali atau enzim penisilinase. Dengan ini dapat
diketahui kadar dari sampel antibiotik turunan penisilin utuh berapa, sedangkan pada
spektrofotometri hal ini tidak dapat dilakukan.
Serta bukan pula digunakan HPLC yang jauh lebih sensitif dibandingkan
dengan titrasi. Hal ini disebabkan karena metode titrasi selain sederhana, juga masih
termasuk sensitif untuk mendeteksi kadar senyawa sampel ampisilin yang diujikan.
Batas deteksi dari metode titrasi adalah semimikro s.d mili, masih bisa ditolerir karena
kadar dari sampel yang ditetapkan adalah 500 mg (sesuai yang tercantum dalam label
kemasan), lebih besar dari batas deteksi titrasi yang berarti sampel dapat terdeteksi
kadarnya dengan metode titrasi ini. Kadar ampisilin yang terdapat dalam sediaan
adalah ±10% dari label claim (Anonim, 1995). Kadar sebesar 500 mg ini masih dapat
dideteksi menggunakan metode titrasi karena titrasi dapat mendeteksi kadar hingga
semimikro. Sehingga metode titrasi dikatakan metode yang cukup sensitif untuk
ampisilin.
Tidak semua senyawa turunan penisilin dapat dianalisis menggunakan
spektrofotometri UV. Apabila gugus R rantai samping turunan penisilin tidak
mengandung gugus auksokrom, kromofor berupa benzen yang terdapat pada rantai

samping R masih belum cukup untuk dapat dideteksi karena harga ε (epsilon) yang
dihasilkan terlalu kecil. Suatu senyawa dapat dianalisis menggunakan
spektrofotometri apabila memiliki nilai epsilon lebih dari 1000. Ampisilin adalah
salah satu senyawa turunan penisilin yang tidak dapat dianalisis menggunakan metode
spektrofotometri UV karena tidak memiliki auksokrom pada strukturnya dan memiliki
harga epsilon kurang dari 1000. Perhitungan harga epsilonnya dinyatakan sebagai
berikut :

ε= 321,448

Dari perhitungan terbukti bahwa harga epsilon dari ampisilin kurang dari 1000
(hanya 321,448); sehingga ampisilin tidak dapat dianalisis menggunakan metode
spektrofotometri.

(Clarke, 2006)

Pada penetapan kadar sediaan kaplet ampisilin langkah pertama yang

dilakukan adalah pembuatan larutan baku Na2S2O3 dengan cara melarutkan 1,2563
gram Na2S2O3 dalam 100,0 mL akuades. Larutan Na2S2O3 merupakan larutan baku
sekunder atau larutan yang akan digunakan untuk mentitrasi sample.
Selanjutnya dilakukan pembakuan larutan Na2S2O3. Pada praktikum ini
Normalitas larutan Na2S2O3 yang didapat yaitu sebesar 0,0438 N. Larutan ini perlu
dibakukan karena konsentasinya cepat berubah oleh pengaruh lingkungan karena
senyawa yang digunakan sebagai larutan baku sekunder umumnya tidak stabil,
misalnya saja bersifat higroskopis, sensitive terhadap cahaya atau mudah terdegradasi
oleh udara. Pengaruh ketidakstabilan ini tidak hanya bersifat kimia tetapi juga dapat
bersifat fisik seperti misalnya saat penimbangan sering tidak tepat karena senyawa ini
memiliki berat molekul relative kecil dan mudah menyerap uap air di udara. Ke dalam
larutan Na2S2O3 ditambahkan Ditambahkan 3 gram KI, 2 gram natrium bikarbonat,
dan 5 ml HCl pekat. Digoyang hingga larut dan dibiarkan ditempat gelap selama 15
menit. Kemudian larutan tersebut dibakukan dengan menggunakan K2Cr2O7. Dimana
ditimbang 50,2 mg K2Cr2O7, dilarutkan dalam 100,0 mL akuades. Di ambil 25,0 mL
larutan K2Cr2O7 sebagai titran. Ditambahkan indikator kanji ketika terjadi perubahan
warna larutan dari kuning menjadi kuning muda. Setelah itu titrasi dilanjutkan
kembali hingga terjadi perubahan warna dari biru menjadi bening. Dicatat volume
K2Cr2O7 yang digunakan, serta digunakan untuk menghitung normalitas Na2S2O3.

Kalium bromat merupakan senyawa baku primer yang tidak perlu dibakukan
lagi terhadap senyawa lain. KBrO3 dapat digunakan sebagai baku primer karena
memiliki sifat-sifat sebagai berikut :
 Murni atau mudah dimurnikan
 Memiliki massa molekul relative yang besar
 Stabil dan tidak higroskopis
 kering, tidak terpengaruh oleh udara/lingkungan(zat tersebut
stabil);
 mudah larut dalam air;
 mempunyai massa ekivalen yang tinggi.
Kemudian dibuat pula larutan iodium. Meskipun bukan merupakan larutan
titran dalam metode iodometri (konsentrasi iodium tidak digunakan dalam
perhitungan kuantitatif). Iodium hanya berfungsi untuk membentuk I2 bebas yang
nantinya akan dititrasi dengan larutan Na2S2O3. Ditimbang 1000.0 mg KI dan 600.0
mg I2, serta dilarutkan dalam 500.0 mL akuades.
Pada praktikum ini, dibuat pula NaOH 0,1 N dengan melarutkan 1,0 gram
NaOH dalam 25,0 mL akuades. Serta dibuat juga, larutan indikator kanji yang
digunakan dibuat dengan cara melarutkan 503,8 mg amilum ke dalam 100 ml air
dingin. Kemudian suspensi amilum tersebut dipanaskan hingga semua amilum larut
dan terbentuk larutan yang jernih, kemudian didinginkan dan baru digunakan sebagai
indikator. Keuntungan penggunaan kanji adalah harganya murah dan mudah didapat.
Sedangkan kerugiannya adalah tidak mudah larut dalam air, tidak stabil pada suspensi
dengan air (sehingga selalu dibuat baru), membentuk kompleks yang sukar larut
dalam air bila bereaksi dengan iodium sehingga tidak boleh ditambahkan pada awal
titrasi tapi harus ditunggu hingga warna titrat kuning pucat. Penambahan indicator
pada awal titrasi dapat menimbulkan titik akhir titrasi yang tiba-tiba atau titik akhir
palsu. Indikator ini bersifat reversible, artinya warna biru yang timbul akan hilang lagi
apabila iodium direduksi oleh Na2S2O3 atau reduktor lainnya.
Sebelum dilakukan pengujian kadar dalam tablet ampisilin, dilakukan uji
keseragaman bobot sebagai salah satu persyaratan yang harus dipenuhi oleh sediaan
tablet. Keseragaman sediaan dapat ditetapkan dengan salah satu dari dua metode,
yaitu keseragaman bobot dan keseragaman kandungan. Menurut Farmakope
persyaratan keseragaman bobot dapat diterapkan dalam produk yang mengandung zat
aktif 50 mg atau lebih yang merupakan 50% atau lebih, dari bobot, satuan sediaan.
Keseragaman dari zat aktif lain jika ada dalam jumlah lebih kecil, ditetapkan dngan
persyaratan keseragaman kandungan. Untuk menetapkan keseragaman sediaan
dengan cara keseragaman bobot untuk tablet tidak bersalut seperti dalam percobaan
dapat dilakukan dengan menimbang secara seksama sepuluh tablet, satu persatu, dan
hitung bobot rata-rata. Suatu tablet dikatakan memenuhi uji keseragaman bobot jika
tidak lebih dari 2 tablet menyimpang sepaerti yang tertera dalam kolom 1 dan tidak
boleh 1 tablet menyimpang seperti dalam kolom

Bobot rata-rata Penyimpangan terhadap bobot rata-

rata

I II

≤ 25 mg 15% 30%

26-150 mg 10% 20%

151-300 mg 7,5% 15%

>300 mg 5% 10%
 Dari 20 kaplet ampisilin yang ditimbang satu per satu, seluruhnya memenuhi
persyaratan keseragaman bobot. Kemudian digerus 10 kaplet ampisilin yang
memenuhi kriteria. Kemudian ditimbang seksama dengan neraca analitik 125 mg
serbuk ampisilin dalam labu takar, di ad akuades hingga 100 mL, dan dihomogenkan.
Diambil 2,0 mL dengan pipet volume, dimasukkan dalam labu bersumbat (iodine
flask). Ditambah 2,0 mL NaOH 1 N. Ampisilin tidak dapat langsung ditetapkan
dengan iodometri karena tidak bereaksi dengan iodium. Oleh karena itu harus
dihidrolisis terlebih dahulu dengan NaOH untuk memutus ikatan β-laktam. Dibiarkan
15 menit agar reaksi hidrolisis terjadi sempurna dan dilakukan di dalam tempat gelap.
Asam ampisilinoat yang terjadi dapat ditetapkan kadarnya dengan iodometri karena
dapat direduksi oleh iod.
Kemudian ditambah 2,0 ml HCl 1 N untuk menetralkan atau bahkan membuat
suasana menjadi sedikit lebih asam. Penggunaan HCl 1 N tidak menimbulkan rekasi
terhadap sampel, sehingga untuk selanjutnya digunakan HCl pekat, dimana
penambahannya dilakukan dalam lemari asam. Penambahan HCl ini harus dilakukan
karena titrasi iodometri tidak boleh dilakukan pada pH > 8. Dalam lingkungan alkalis
iodium akan bereaksi dengan hidroksida membentuk iodida dan hipoiodit.
Selanjutnya terurai menjadi iodida dan iodat. Ion ini akan mengoksidasi thiosulfat
menjadi sulfat. Setelah itu ditambahkan 10 ml iodium 0.01 N, segera tutup labu agar
iodium tidak menguap dan biarkan selama 15 menit terlindung dari cahaya agar
terjadi reaksi antara asam ampisilinoat dengan iodium. Iodium akan mengoksidasi
asam ampisilinoat sedangkan iodium sendiri akan tereduksi menjadi iodida.
Larutan HCl akan bereaksi dengan senyawa asam ampisilinat hasil inaktivasi,
menghasilkan senyawa D-penisilamin dan asam benzilpenisilat. Senyawa D-
penisilamin ini yang akan dapat bereaksi (dioksidasi) dengan iodium, menghasilkan
senyawa disulfida dan asam iodida dalam larutan. Penempatan larutan di tempat gelap
(terlindung dari cahaya) selama 15 menit dimaksudkan untuk menghindari I2
teroksidasi oleh cahaya matahari. Waktu 15 menit diperuntukkan agar reaksi
berlangsung secara sempurna.
Larutan I2 ditambahkan secara berlebih (pada percobaan ditambahkan
sebanyak 10 ml), kemudian kelebihan I2 ini dititrasi kembali dengan Na2S2O3 0,0438
N (hasil pembakuan). Titrasi iodometri harus dilakukan dengan cepat dan digojog
kuat untuk untuk meminimalisasi terjadinya oksidasi iodida oleh udara bebas.
Penggojogan yang cepat menimbulkan gerakan molekul yang cepat sehingga
frekuensi molekul bertabrakan makin banyak dan reaksi berlangsung lebih cepat. Saat
penggojogan, diamati terjadinya perubahan warna larutan dari kuning menjadi
kuning pucat, kemudian ditambahkan indikator kanji (amilum) untuk meningkatkan
kepekaan titik akhir titrasi. Penambahan amilum akan membuat larutan menjadi
berwarna biru karena terbentuk komplek kanji-iodium, dan titik ekivalen ditandai
dengan penambahan 1 tetes larutan Na2S2O3 tepat menghilangkan warna biru (larutan
menjadi bening). Penyusun utama kanji adalah amilosa dan amilopektin, amilosa
dengan iodium membentuk warna biru sedangkan amilopektin dengan iodium
membentuk warna merah. Setelah ditambah indikator kanji, titrasi dilanjutkan
kembali hingga terjadi perubahan warna dari biru menjadi jernih. Dicatat volume
larutan Na2S2O3 yang digunakan.
Untuk blangko pada percobaan ini, digunakan larutan yang dibuat dengan
mencampurkan 2,0 mL larutan sampel ampisilin; 2,0 ml HCl; 10,0 ml iodium 0,01 N
kemudian didiamkan selama 15 menit terlindung cahaya, lalu dititrasi dengan
Na2S2O3 dengan indikator kanji. Pada larutan blangko tidak ditambahkan NaOH
sehingga tidak terjadi hidrolisa pada ampisilin.
Kemudian dari data-data yang sudah didapat dapat digunakan untuk
menghitung kadar ampisillin. Perhitungan kadar menggunakan rumus sebagai berikut:

Kadar =

Dimana, selisih volume Na2S2O3 blangko dan sampel merupakan volume I2

yang bereaksi dengan sampel. Sedangkan N Na2S2O3 merupakan normalitas Na2S2O3
yang di dapat pada pembakuan yang sudah dilakukan yakni sebesar 0,0438 N, BE
merupakan Bobot Ekivalen Na2S2O3 yakni sebesar 349,4 dan mg sampel merupakan
bobot sampel yang ditimbang masing-masing replikasi. Kemudian dikalikan dengan
50 yakni faktor pengenceran sampel dari pengambilan 2mL sampel dari 125mg dalam
100 mL pelarut dan dijadikan dalam bentuk persentase.
Dari perhitungan, diperoleh kadar ampicillin sebesar 178,6245% dengan SD
yang diperoleh sebesar 50,3165. Sedangkan CV (koefisien variasi) yang diperoleh
sebesar 28,1688% (CV > 5 %). CV yang besar (>5%) menunjukkan besarnya
kesalahan acak yang berarti hasil kurang presisi. Kesalahan acak adalah kesalahan
yang nilainya tidak dapat diramalkan dan tidak ada aturan yang mengaturnya serta
nilanya berfluktuasi. Kesalahan acak merupakan jenis kesalahan yang selalu terjadi
dalam analisis. Hal ini dapat disebabkan kurang sempurnanya reaksi maupun karena
kurang ketelitian praktikan.
Kadar dalam persen tersebut dikalikan bobot rata-rata tablet untuk
memperoleh kadar ampisillin dalam tiap tabletnya, bukan lagi kadar ampisillin dalam
sejumlah mg sampel yang ditimbang. Kadar ampisillin dalam tiap tablet sebesar 1339,
3354 mg.
Pengukuran bobot rata rata tablet pada percobaan ini telah memenuhi kaedah
persyaratan uji keseragaman bobot. Tablet dengan bobot >300mg dikatakan
memenuhi uji keseragaman bobot jika tidak lebih dari 2 tablet bobotnya menyimpang
5% dari bobot rata-rata dan tidak boleh 1 tablet bobotnya menyimpang 10% bobot
rata-rata. Pada percobaan, tidak ada satupun tablet yang bobotnya menyimpang.
Hasil kadar yang diperoleh (1339,3354 mg) tidak sesuai daripada kadar yang
tertera dalam label 500 mg. Besar hasil kadar menjadi tidak rasional karena angka
sangatlah besar sedangkat bobot rata-rata tablet ada dalam kisaran 700mg. Dapat
dilihat juga bahwa persen kadar melebihi 100%. Maka, perlu dilakukan evaluasi.
Kesalahan dalam penentuan kadar ampisillin disebabkan terdapat
ketidaktelitian dalam pembakuan. Dapat kita lihat bahwa angka normalitas Na2S2O3
yang didapat sebesar 0,0438 N. Padahal, apabila kita merujuk metode iodometri
dalam Farmakope Indonesia Edisi IV, normalitas yang dipersyaratkan yakni 0,01 N.
Tentu saja hal ini sangat mempengaruhi kondisi titrasi serta perhitungan. Sehingga
kadar yang didapatkan akan menjadi lebih besar. Kesalahan pada pembakuan dapat
disebabkan akibat kurang telitinya praktikum dalam menimbang bahan dan juga
menentukan titik dan volume akhir titrasi. Penentuan titik akhir dan volume akhir
titrasi menjadi langkah penting. Untuk mendapatkan kadar 0,01 N, estimasi volume
titrasi yang dibutuhkan adalah sekitar 25mL. Namun, pada percobaan hanya sekitar 5
mL-6 mL. Itu artinya dapat dimungkinkan titrasi dihentikan sebelum mencapai titik
akhir titrasi atau reagen yang digunakan kemungkinan sudah teroksidasi atau tidak
lagi dalam kondisi baik.
Saran percobaan penentuan kadar ampisillin dalam tablet yakni,
1. Pembakuan Na2S2O3 dilakukan dengan teliti dan presisi sehingga didapatkan
kadar 0,01 N, atau
2. Mengganti normalitas Na2S2O3 yang diinginkan menjadi lebih besar yakni 0,1
N sehingga apabila ada ketidaktelitian dalam pembakuan, penyimpangan kecil
 tidak akan banyak berpengaruh dibandingkan pada pembakuan dengan
normalitas sebesar 0,01 N.
Metode Iodometri pada percobaan ini tidak bisa ditentukan selektivitasnya
karena ketidakrasionalan kadar yang didapatkan.

G. KESIMPULAN
1. Penetapan kadar kaplet ampisilin dapat dilakukan melalui metode titrasi
iodometri.
2. Pemilihan metode iodometri ini mengacu pada literatur yaitu Farmakope
Indonesia edisi IV. Metode ini merupakan metode yang sederhana dan mudah.
Selain itu bahan-bahan yang dibutuhkan juga murah.
3. Persen kadar ampisillin sebesar 178,6245%, kadar ampisillin tiap tablet sebesar
1339,3354 mg dengan CV sebesar 28,1688%.
4. Nilai CV besar menunjukkan hasil kurang presisi.
5. Hasil analisis tidak sesuai dengan kadar yang tertera dalam etiket.
6. Metode Iodometri pada percobaan ini tidak bisa ditentukan selektivitasnya karena
ketidakrasionalan kadar yang didapatkan.

H. DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, Depkes RI, Jakarta.
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia Edisi IV, Depkes RI, Jakarta.
Anonim, 2005, United State Pharmacopeia, The USP Convention, Rockville.
Brooks GF, Butel JS, Morse SA., 2004, Jawetz, Melnick & Adelberg’s Medical
Microbiology, 23rd Ed, Mc Graw Hill, Boston.
Ganiswara, 1995, Farmakologi dan Terapi, Edisi 4, Bagian Farmakologi Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.
Haryadi, 1990, Ilmu Kimia Analitik Dasar, Gramedia, Jakarta.
Munson, 1991, Analisis Farmasi Metode Modern, Airlangga University Press,
Surabaya.
Kovar, 1987, Identifikasi Obat, Edisi keempat, ITB, Bandung.
Pratiwi, Silvia J., 2004, Buku Ajar Mikrobiologi Farmasi, Fakultas Farmasi
UGM, Yogyakarta
Sumadio dan Harahap, 1994, Biokimia dan Farmakologi Antibiotika, USU Press,
Medan.
Wattimena, 1987, Farmakodinamik dan Terapi Antibiotika, UGM Press, Yogyakarta.
Asisten Koreksi, Yogyakarta, 5 Maret 2017
Praktikan,
Alfi Cahya Cintia Wati (14/362895/FA/10050)
Esti Yunita (14/362896/FA/10051)
Vintika Merrylia Sari (14/362897/FA/10052)
Dealinda Husnasya (14/362899/FA/10053)