BIOSENSOR

I. Apa itu Biosensor?

Biosensor = bioreseptor + transduser. Biosensor terdiri dari dua komponen:
bioreseptor dan transduser. Bioreseptor adalah biomolekul yang mengenali analit
target, dan transduser mengubah peristiwa pengenalan menjadi sinyal yang
terukur. Keunikan sebuah biosensor adalah bahwa kedua komponen tersebut
diintegrasikan ke dalam satu sensor tunggal (Gambar 1.1). Kombinasi ini
memungkinkan seseorang untuk mengukur analit target tanpa menggunakan
reagen (Davis dkk, 1995). Misalnya, konsentrasi glukosa dalam sampel darah
dapat diukur secara langsung oleh biosensor yang dibuat khusus untuk
pengukuran glukosa, hanya dengan mencelupkan sensor ke dalam sampel. Ini
berbeda dengan tes yang biasa dilakukan, di mana banyak langkah persiapan
sampel diperlukan dan setiap langkah mungkin memerlukan reagen untuk
memperlakukan sampel. Kesederhanaan dan kecepatan pengukuran yang tidak
memerlukan keterampilan laboratorium khusus adalah keunggulan utama dari
biosensor.

gambar 1.1 konfigurasi biosensor

Enzim adalah Bioreseptor. Ketika kita makan makanan seperti hamburger dan
kentang goreng, itu dipecah menjadi molekul-molekul kecil di tubuh kita melalui
banyak langkah reaksi (reaksi pemecahan ini disebut katabolisme). Molekul-
molekul kecil ini kemudian digunakan untuk membuat blok bangunan tubuh kita,
seperti protein (reaksi sintesis ini disebut anabolisme). Masing-masing reaksi
katabolisme dan anabolisme ini (kombinasi disebut metabolisme) dikatalisis oleh
enzim tertentu. Oleh karena itu, enzim mampu mengenali molekul target spesifik
(Gambar 1.2). Kemampuan biorecognition dari enzim ini digunakan dalam
biosensor. Molekul biorecognizing lainnya (= bioreseptor) termasuk antibodi,
asam nukleat, dan reseptor.

Gambar 1.2 spesifikasi biosensor (tranduser).

Imobilisasi Bioreseptor. Salah satu persyaratan utama untuk biosensor adalah
bahwa bioreseptor dapat diimobilisasi di sekitar transduser. Imobilisasi dilakukan
baik dengan jebakan fisik atau ikatan kimia. Lampiran kimia sering melibatkan
ikatan kovalen ke permukaan transduser dengan reagen yang sesuai. Perawatan
komprehensif untuk imobilisasi tersedia di Hermanson (1996). Perlu dicatat
bahwa hanya dibutuhkan molekul bioreceptor dalam jumlah kecil, dan mereka
digunakan berulang kali untuk pengukuran.
Transduser. Transduser harus mampu mengubah peristiwa biorecognition
menjadi sinyal yang terukur (Gambar 1.3). Biasanya, ini dilakukan dengan
mengukur perubahan yang terjadi pada reaksi bioreseptor. Sebagai contoh, enzim
glukosa oksidase digunakan sebagai bioreseptor dalam biosensor glukosa yang
mengkatalisasi reaksi berikut:
oksidasi Glukosa
Glukosa + O2 Asam glukonat+ H2O2

Gambar 1.3 Tiga kemungkinan transduser

untuk pengukuran glukosa.
Untuk mengukur glukosa dalam larutan air, tiga transduser yang berbeda dapat
digunakan:
1. Sensor oksigen yang mengukur konsentrasi oksigen, hasil dari reaksi glukosa.
2. Sensor pH yang mengukur asam (asam glukonat), produk reaksi glukosa.
3. Sensor peroksidase yang mengukur konsentrasi H2O2, hasil dari reaksi glukosa.
Perhatikan bahwa sensor oksigen adalah transduser yang mengubah konsentrasi
oksigen menjadi arus listrik. Sensor pH adalah transduser yang mengubah
perubahan pH menjadi perubahan tegangan. Demikian pula, sensor peroksidase
adalah transduser yang mengubah konsentrasi peroksidase menjadi arus listrik.
Tinjauan yang sangat baik dari teknologi penginderaan glukosa dilaporkan oleh
Wilkins dan Atansov (1996).
Karakteristik Biosensor. Biosensor dicirikan oleh delapan parameter. Ini adalah:
(1) Sensitivitas adalah respon sensor terhadap perubahan satuan dalam konsentrasi
analit. (2) Selektivitas adalah kemampuan sensor untuk hanya merespons analit
target. Artinya, kurangnya respons terhadap bahan kimia lain yang mengganggu
adalah fitur yang diinginkan. (3) Rentang adalah rentang konsentrasi di mana
sensitivitas sensor th baik. Kadang-kadang ini disebut rentang dinamis atau
linieritas. (4) Waktu respons adalah waktu yang diperlukan sensor untuk
mengindikasikan 63% dari tanggapan akhir karena perubahan langkah dalam
konsentrasi analit. (5) Reproducibilitas adalah keakuratan dengan mana output
sensor dapat diperoleh. (6) Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah yang
ada respons terukurnya. (7) Waktu hidup adalah periode waktu di mana sensor
dapat digunakan tanpa penurunan signifikan dalam karakteristik kinerja. (8)
Stabilitas mencirikan perubahan dalam baseline atau sensitivitasnya selama
periode waktu tertentu.
Pertimbangan dalam Pengembangan Biosensor. Setelah analit target telah
diidentifikasi, tugas utama dalam mengembangkan biosensor meliputi:
1. Pemilihan bioreseptor yang cocok atau molekul pengenalan.
2. Pemilihan metode imobilisasi yang cocok.
3. Pemilihan dan desain transduser yang menerjemahkan reaksi pengikatan
menjadi sinyal yang dapat diukur.
4. Desain biosensor mempertimbangkan rentang pengukuran, linieritas, dan
meminimalkan gangguan, dan peningkatan sensitivitas.
5. Pengemasan biosensor ke perangkat yang lengkap.
Item pertama di atas membutuhkan pengetahuan dalam biokimia dan
biologi, yang kedua dan ketiga membutuhkan pengetahuan dalam kimia,
elektrokimia dan fisika, dan yang keempat membutuhkan pengetahuan tentang
kinetika dan transfer massa. Setelah biosensor dirancang, ia harus dikemas untuk
memudahkan pembuatan dan penggunaan. Tren saat ini adalah miniaturisasi dan
produksi massal. Teknologi fabrikasi IC (sirkuit terpadu) modern dan teknologi
micromachining semakin banyak digunakan dalam fabrikasi biosensor, karena
mereka mengurangi biaya produksi. Oleh karena itu, tim peneliti interdisipliner,
yang terdiri dari berbagai disiplin ilmu yang diidentifikasi di atas, sangat penting
untuk keberhasilan pengembangan biosensor.
Pertimbangan untuk pengembangan biosensor:
1. Pemilikan entitas biorecognition yang cocok
2. Pemilihan metode imobilisasi kimia
3. Pemilihan dan desain tranduser yang sesuai
4. Merancang biosensor untuk rentang pengukuran, linieritas dan
meminimalkan gangguan
5. Pengemasan biosensor ke dalam unit yang lengkap
II. Aplikasi Biosensor
1. Kesehatan
Pengukuran Metabolit. Dorongan awal untuk memajukan teknologi sensor
berasal dari bidang perawatan kesehatan, di mana sekarang secara umum diakui
bahwa pengukuran kimia darah sangat penting dan memungkinkan estimasi yang
lebih baik dari keadaan metabolisme pasien. Di unit perawatan intensif, misalnya,
pasien sering menunjukkan variasi cepat dalam komposisi biokimia dan level
yang memerlukan tindakan perbaikan segera. Juga, dalam penanganan pasien
yang kurang parah, perawatan yang lebih sukses dapat dicapai dengan
memperoleh tes instan. Saat ini, analisis instan yang tersedia tidak luas. Dalam
praktiknya, pengujian ini dilakukan oleh laboratorium analitik, tempat sampel
terpisah dikumpulkan dan dikirim untuk dianalisis, sering kali menggunakan
teknik analisis yang lebih tradisional.
Potensi pasar. Ada peningkatan permintaan untuk sensor yang murah dan dapat
diandalkan untuk digunakan di kantor dokter, ruang gawat darurat, dan ruang
operasi. Pada akhirnya, pasien sendiri harus dapat menggunakan biosensor dalam
pemantauan kondisi klinis, seperti diabetes. Mungkin benar bahwa pasar
biosensor utama dapat ditemukan di mana pengujian langsung diperlukan. Jika
biaya pemeliharaan instrumen laboratorium dimasukkan, maka perangkat
biosensor berbiaya rendah dapat diinginkan dalam seluruh spektrum aplikasi
analitis dari rumah sakit ke rumah.
Diabetes. Contoh "klasik" dan kontrol obat loop tertutup yang paling banyak
dieksplorasi ditemukan dalam pengembangan pankreas buatan. Pasien diabetes
memiliki kekurangan relatif atau absolut insulin, hormon polipeptida yang
diproduksi oleh sel beta pankreas, yang sangat penting untuk pengambilan
glukosa. Kurangnya sekresi insulin menyebabkan berbagai kelainan metabolisme,
termasuk kadar glukosa darah yang lebih tinggi dari normal. Pada pasien yang
telah kehilangan pulau Langerhan yang mensekresi insulin, insulin disuplai
melalui injeksi subkutan. Namun, kontrol yang baik sulit dicapai dan
hiperglikemia sering dijumpai. Lebih jauh lagi, bahkan hipoglikemia kadang-
kadang diinduksi, menyebabkan gangguan kesadaran dan komplikasi jangka
panjang yang serius pada jaringan yang terkait dengan kondisi glukosa rendah
yang terputus-putus ini.
Terapi Insulin. Metode yang lebih baik untuk pengobatan diabetes tergantung
insulin telah dicari dan sistem infus untuk pengiriman insulin terus menerus telah
dikembangkan (Hall, 1991). Namun, terlepas dari metode terapi insulin, induksi
harus dilakukan sebagai respons terhadap informasi tentang kadar glukosa darah
saat ini pada pasien. Tiga skema dimungkinkan (Gambar 1.4), dua yang pertama
tergantung pada pengukuran glukosa manual diskrit dan yang ketiga sistem "loop
tertutup", di mana pengiriman insulin dikendalikan oleh output dari sensor
glukosa yang terintegrasi dengan infuser insulin. Dalam kasus sebelumnya,
glukosa diperkirakan berdasarkan analisis sampel darah jari-tusukan dengan strip
tes kolorimetri atau lebih baru-baru ini dengan perangkat biosensor pensize
amperometrik oleh pasien sendiri. Jelas, kit diagnostik ini harus mudah dibawa-
bawa, mudah digunakan, dan membutuhkan keterampilan minimal serta
interpretasi yang mudah. Namun, bahkan dengan kemampuan untuk memantau
kadar glukosa saat ini, terapi insulin konvensional yang intensif memerlukan
suntikan setiap hari. Pendekatan loop terbuka ini tidak mengantisipasi dosis
insulin karena perubahan diet dan olahraga. Sebagai contoh, ditunjukkan bahwa
pemberian glukosa dengan injeksi subkutan, 60 menit sebelum makan
memberikan manajemen glukosa / insulin terbaik.

Gambar 1.4 skema dari terapi insulin

Pankreas Buatan. Pengenalan sistem loop tertutup, di mana pengukuran glukosa
terintegrasi memberikan kontrol umpan balik pada pemberian insulin yang
diprogram sebelumnya berdasarkan persyaratan kebiasaan, karena itu akan
meringankan pasien dari persyaratan uji yang sering dan, mungkin lebih
diinginkan, sering suntikan. Pada akhirnya, sistem loop tertutup menjadi pankreas
buatan, di mana kontrol glikemik dicapai melalui sensor glukosa yang
ditanamkan. Sensor implan yang diusulkan diberikan pada Gambar 1.5 (Turner et
al., 1990). Jelas, persyaratan untuk sensor ini sangat berbeda dari yang untuk kit
pengukuran diskrit. Seperti dirangkum dalam Tabel 6.2.1, masa pakai yang lama
dan biokompatibilitas merupakan persyaratan utama.
 Gamabar 1.5 Tampilan luas penampang glukosa implant elektroda dalam darah
Kontrol Proses Industri.
Kontrol Bioreaktor. Bioreaktor digunakan untuk mengolah sel-sel rekombinan
untuk produksi protein terapeutik seperti insulin. Produktivitas sistem tersebut
tergantung pada kondisi bioreaktor. Pemantauan waktu-nyata terhadap sumber-
sumber karbon, oksigen terlarut dan karbon dioksida, dan produk-produk
metabolisme dalam proses fermentasi dapat mengarah pada optimalisasi yang
memberikan peningkatan hasil produk dengan penurunan biaya pemrosesan dan
bahan (Scheper et al., 1996). Sementara pemantauan waktu nyata dengan kontrol
umpan balik yang melibatkan sistem otomatis memang ada, saat ini hanya
beberapa variabel umum yang diukur secara online, (misal, pH, suhu, CO2, O2)
yang seringkali hanya secara tidak langsung terkait dengan aktivitas kultur yang
dikendalikan. Jika aktivitas metabolisme seluler dapat dipantau secara real-time
menggunakan sensor, seseorang dapat dengan tepat mengubah variabel
lingkungan untuk meningkatkan produktivitas proses. Banyak manfaat dari
kontrol loop tertutup suatu keadaan seluler, seperti peningkatan hasil dan kualitas
produk. Ini adalah kurangnya sensor yang membatasi penggunaan kontrol online
loop tertutup kultur sel dan proses fermentasi.
Aplikasi Keamanan Militer dan Tanah Air.
Persyaratan untuk analisis cepat juga ada dalam aplikasi militer. Keterlibatan
militer baru-baru ini di Timur Tengah telah menyebabkan, agak cepat, penyebaran
sensor yang dapat digunakan di lapangan untuk agen perang kimia dan biologi.
Banyak sensor adalah kit analitik portabel kecil yang dapat disebut “dipsticks.”
Meskipun cukup kuat, kinerjanya di lapangan telah dilaporkan bervariasi. Dengan
demikian, ada kebutuhan besar untuk sensor kuat yang tidak memerlukan
perawatan. Kontak dan penginderaan jauh untuk agen perang saat ini sedang
dalam pengembangan. Sensor dan sistem terdistribusi untuk memantau bahaya
akibat aktivitas teroris saat ini sedang dikembangkan di bawah naungan dana
Departemen Keamanan Dalam Negeri.
Pemantauan Lingkungan. Badan Perlindungan Lingkungan (EPA) Pemantauan
Udara dan Air. Program Pengawasan dan Penilaian Lingkungan (EMAP) EPA
dibentuk untuk memberikan kartu laporan yang komprehensif tentang kondisi
sumber daya ekologi negara dan untuk mendeteksi tren dalam kondisi sumber
daya tersebut. EPA secara rutin memonitor air dan udara di daerah perkotaan dan
pedesaan. Baru-baru ini Departemen Keamanan Dalam Negeri telah memulai
upaya untuk memantau lingkungan di daerah perkotaan, terutama pusat populasi
besar, untuk agen bioterorisme potensial. Media pengukuran utama adalah air atau
udara, tetapi variasi analit target sangat luas. Di lokasi-lokasi yang berpotensi
polusi atau kegiatan teroris, akan diinginkan untuk memasang pemantauan dan
alarm real-time online, yang ditargetkan pada analit tertentu. Analit lingkungan
yang umum adalah permintaan oksigen biologis (BOD), keasaman atmosfer, dan
pH air sungai, deterjen, herbisida, dan konsentrasi pupuk dalam drainase dan
sungai (Leonard et al., 2003). Potensi teknologi biosensor untuk pemantauan
lingkungan sangat besar, dan dampak potensial sangat luas. Meskipun prinsip
deteksi mungkin sama untuk analit tertentu, platform teknologi aktual yang
digunakan akan tergantung pada aplikasi. Sebagai contoh, sensor glukosa untuk
penggunaan online di fermentor memiliki persyaratan yang sangat berbeda dari
yang digunakan untuk memantau konsentrasi glukosa pada pasien diabetes.
Kustomisasi untuk memenuhi kebutuhan aplikasi seringkali merupakan bagian
yang sangat penting dari pengembangan teknologi. Untuk detail tentang biosensor
untuk pemantauan lingkungan lihat Dennison dan Turner (1995) dan Wang et al.,
(1997).
III. Asal Biosensor
Elektroda Enzim. Biosensor pertama kali dijelaskan oleh Clark dan Lyons
(1962), ketika istilah enzim-elektroda diperkenalkan. Dalam elektroda enzim
pertama ini, enzim oksido-reduktase, glukosa oksidase, diadakan di sebelah
elektroda platinum dalam sandwich membran (Gambar 1.6). Anoda platinum yang
terpolarisasi pada +0,6 V merespons peroksida yang dihasilkan oleh reaksi enzim
dengan substrat. Substrat target utama untuk sistem ini adalah glukosa:
oksidasi Glukosa
Glukosa + O2 Asam glukonat+ H2O2
dan menyebabkan pengembangan penganalisa glukosa pertama untuk pengukuran
glukosa dalam darah lengkap. Instrumen Mata Air Kuning (Model YSI 23) ini
muncul di pasaran pada tahun 1974, dan teknik yang sama seperti yang digunakan
di sini telah diterapkan pada banyak sistem enzim oksido-reduktase yang
dimediasi oksigen lainnya.

Gambar 1.6 Elektroda enzim Clark

IV. Molekul Bioreseptor
Enzim telah menjadi molekul bioreseptor yang paling banyak digunakan dalam
aplikasi biosensor, dengan antibodi dan molekul reseptor protein semakin
tergabung dalam biosensor. Spesifisitas biosensor berasal dari spesifisitas molekul
bioreseptor yang digunakan. Enzim adalah contoh yang baik. Ia memiliki struktur
tiga dimensi yang hanya cocok untuk substrat tertentu. Enzim adalah protein yang
disintesis dalam sel dari asam amino sesuai dengan kode yang ditulis dalam DNA.
Enzim bertindak sebagai katalis untuk reaksi biokimia yang terjadi dalam sel.
Untuk mempertahankan aktivitas enzim yang tinggi, suhu dan pH lingkungan
harus dijaga pada tingkat yang tepat.
Antibodi. Antibodi mewakili salah satu kelas utama protein. Mereka membentuk
sekitar 20% dari total protein plasma dan secara kolektif disebut imunoglobulin
(Ig). Antibodi yang paling sederhana digambarkan sebagai molekul berbentuk Y
dengan dua situs pengikatan identik untuk antigen. Antigen dapat berupa
makromolekul apa saja yang menginduksi respons imun. Antibodi memiliki unit
struktural dasar yang terdiri dari empat rantai polipeptida: dua rantai ringan dan
dua rantai berat. Antibodi mengikat secara reversibel dengan antigen spesifik.
Berbeda dengan protein enzim, antibodi tidak bertindak sebagai katalis.
Tujuannya adalah untuk mengikat zat asing - antigen - untuk menghilangkannya
dari sistem peredaran darah. Antibodi monoklonal yang tergabung dalam kelas
IgG dari imunoglobulin biasanya digunakan dalam aplikasi sensor. Dalam banyak
kasus, antibodi poliklonal yang dimurnikan afinitas digunakan karena mereka
menunjukkan aviditas yang lebih tinggi terhadap antigen. Antibodi poliklonal dan
monoklonal terhadap antigen dapat dikembangkan dalam beberapa bulan. Saat ini,
harganya $ 6.000 hingga $ 20.000 per gram ketika diproduksi dalam jumlah besar.
Protein reseptor. Protein reseptor memiliki afinitas spesifik untuk senyawa aktif
secara biologis. Protein ini sebagian besar terikat pada membran. Ada reseptor
hormon, reseptor rasa, reseptor penciuman untuk penciuman, reseptor fotorik
untuk mata, dan lainnya. Protein reseptor mengaktifkan pembukaan dan
penutupan saluran membran untuk transportasi metabolit spesifik. Mereka juga
memainkan peran kunci dalam mentransduksi pesan intraseluler untuk tindakan
responsif. Karena protein reseptor mengenali entitas biologis tertentu, mereka
sering digunakan untuk mengukur analit target. Sebagai contoh, reseptor kematian
pada permukaan sel mengirimkan sinyal apoptosis yang diprakarsai oleh ligan
spesifik. Mereka memainkan peran penting dalam apoptosis dan dapat
mengaktifkan kaspase kaspase dalam beberapa detik setelah pengikatan ligan.
Jadi, ketika reseptor kematian adalah entitas penginderaan, orang berpotensi
mengukur keberadaan bahan kimia penginduksi apoptosis di lingkungan.
Pendekatan Lain. Pada prinsipnya, setiap biomolekul dan rakitan molekuler yang
memiliki kemampuan mengenali analit target dapat digunakan sebagai
bioreseptor. Bahkan, irisan membran atau seluruh sel telah digunakan dalam
biosensor. Gambar 1.7 merangkum kemungkinan bioreseptor yang dapat
digunakan dalam biosensor. Perhatikan bahwa bioreseptor memerlukan
lingkungan yang sesuai untuk mempertahankan integritas struktural dan aktivitas
biorespesifikasi mereka. Persyaratan ini dijelaskan pada gambar 1.7 bersama
dengan jenis sinyal yang dihasilkan sebagai hasil kegiatan biorecognition.
Transduser dalam biosensor harus responsif terhadap aktivitas biokimia ini.
V. Mekanisme Transduksi dalam Biosensor.
Transduser Konvensional. Mayoritas biosensor yang digunakan saat ini
menggunakan tiga jenis transduser untuk mengubah aksi molekul bioreceptor
menjadi sinyal yang terukur. Ini adalah: amperometri berdasarkan pengukuran
H2O2 atau O2; potensiometri berdasarkan pengukuran pH atau pIon; dan fotometri
yang menggunakan serat optik. Reaksi Biorecognition sering menghasilkan
spesies kimia yang dapat diukur dengan metode elektrokimia. Dalam hal ini,
biasanya produk reaksi adalah H2O2 (atau reaktan adalah O2) yang dapat diukur
dengan sepasang elektroda. Ketika tegangan yang sesuai terkesan pada salah satu
elektroda terhadap elektroda referensi (biasanya Ag / AgCl atau Calomel), spesies
target (H2O2 atau O2) berkurang pada elektroda dan ini menghasilkan arus listrik
(maka dinamakan amperometri). Dalam potensiometri, membran kaca atau
elektroda membran polimer digunakan untuk mengukur potensi membran
(karenanya dinamakan potensiometri) yang dihasilkan dari perbedaan konsentrasi
H+ atau ion positif lainnya melintasi membran. Dalam fotometri, cahaya dari
molekul indikator adalah sinyal yang diukur. Dalam metode ini, salah satu reaktan
atau produk dari reaksi biorecognition menghasilkan perubahan kolorimetri,
fluorescent atau luminescent yang diukur dengan menggunakan fotodetektor.
Biasanya, serat optik digunakan untuk memandu sinyal cahaya dari sumber ke
detektor. Adaptasi dan eksploitasi tiga rute ini, (amperometrik, potensiometri, dan
fotometrik), di mana penerimaan pengguna telah ditetapkan, telah menjadi
pendekatan yang jelas untuk pengembangan perangkat biosensor reagentless.
Transduser piezoelektrik. Transduser biosensor tidak terbatas pada tiga yang
dijelaskan di atas. Pada prinsipnya, variabel apa pun yang dipengaruhi oleh reaksi
biorecognition dapat digunakan untuk menghasilkan sinyal transduksi. Bahan
piezoelektrik dan perangkat gelombang akustik permukaan menawarkan
permukaan yang sensitif terhadap perubahan massa. Transduser ini telah
digunakan di mana reaksi biorecognition menyebabkan perubahan massa. Sebagai
contoh, kristal silikon piezoelektrik-disebut kuarsa microbalance kristal (QCM)-
telah digunakan untuk mengukur perubahan massa yang sangat kecil dalam urutan
pikogram. Sebagai contoh, lihat Bunde et al., (1998). QCM dengan antibodi
amobil terhadap patogen telah berhasil digunakan untuk mengukur keberadaan
patogen dalam sampel air. Penopang yang digerakkan secara piezoelektrik juga
telah digunakan untuk mengukur adsorpsi sejumlah kecil biokimia (Raiteri et al.,
2001).
Conductdetric Transducers. Pemantauan konduktansi solusi pada awalnya
diterapkan sebagai metode penentuan laju reaksi. Teknik ini melibatkan
pengukuran perubahan konduktansi karena migrasi ion. Banyak reaksi yang
dikaitkan dengan enzim menghasilkan perubahan dalam konsentrasi ion total dan
ini akan menyiratkan bahwa mereka cocok untuk biosensor konduktor.
Kapasitansi Listrik sebagai Transduser. Ketika reaksi biorecognition
menyebabkan perubahan konstanta pengukuran dielektrik medium di sekitar
bioreceptor, metode pengukuran kapasitansi dapat digunakan sebagai transduser.
Reaksi antigen-antibodi adalah contoh yang baik. Misalkan molekul antibodi
diimobilisasi antara dua elektroda logam dari daerah yang diketahui. Ketika
antigen ditambahkan dan mengikat dengan antibodi, konstanta dielektrik medium
antara dua elektroda diharapkan berubah secara signifikan. Perubahan ini
diterjemahkan menjadi perubahan kapasitansi.
Transduser Termometrik. Semua reaksi kimia disertai dengan penyerapan
(endotermik) atau evolusi (eksotermis) panas. Pengukuran ΔH, entalpi reaksi pada
temperatur yang berbeda, memungkinkan seseorang untuk menghitung ΔS
(entropi) dan ΔG (energi bebas Gibbs) untuk suatu reaksi dan karenanya
mengumpulkan data termodinamika dasar. Hidrolisis ATP misalnya adalah
eksotermik:
ATP4 + H2O~ ADP3- + HPO4- + H+; ΔH298 = -22,2 Kj (pH 7)
atau imunoreaksi antara anti-HSA dan antigennya menghasilkan HSA -30,5 kJ /
mol. Untuk reaksi terakhir ini, peningkatan total suhu untuk 1 mmol antibodi
adalah pada urutan 10–5 K, tetapi banyak reaksi yang dikatalisis oleh enzim
memiliki ΔH yang lebih besar, dan menghasilkan perubahan suhu yang lebih
mudah diukur.
Thermistor Enzim. Untuk perangkat biosensor, senyawa biorecognition harus
diimobilisasi pada elemen sensor suhu yang mampu mendeteksi perubahan suhu
yang sangat kecil. Inisiatif utama di bidang ini berasal dari kelompok Mosbach di
Universitas Lund. Awalnya, mereka mengimobilisasi glukosa oksidase atau
penisilinase dalam kolom kecil, sehingga perubahan suhu dalam limbah kolom
dipantau oleh termistor untuk memberikan termistor enzim yang sensitif terhadap
glukosa dan penisilin, masing-masing. Mereka juga telah menerapkan teknik ini
ke substrat lain dan untuk immunoassay menggunakan antigen berlabel enzim.
FET sebagai Transduser. Seiring dengan kemajuan yang dibuat dalam
biosensor, kebutuhan telah dikembangkan untuk miniaturisasi dan produksi
massal. Transistor efek medan (FET) yang digunakan secara luas di industri
semikonduktor dalam chip memori dan chip logika merespons perubahan medan
listrik (di depan "gerbang" FET). FET dengan demikian mampu mendeteksi
perubahan konsentrasi ion ketika gerbang terpapar ke solusi yang mengandung
ion. Oleh karena itu, konsentrasi pH dan ion dapat diukur dengan FET.
Keuntungan dari transduser ini adalah dapat langsung dimasukkan ke sirkuit
pemrosesan sinyal elektronik. Bahkan, sensor pH berbasis FET ukuran pena
sedang dipasarkan secara komersial.
Tabel 1.1 Tranduser lain yang digunakan dalam Biosensor.

VI. Rentang Aplikasi Status Biosensor

Current Satus. Saat Ini sejak pengembangan sensor glukosa Clark untuk
memantau proses fermentasi, banyak elektroda enzim telah dikembangkan
berdasarkan amperometri, potensiometri, dan fotometri. Sampel dari biosensor ini
diringkas dalam Tabel 1.2, 1.3 dan 1.4. Istilah "optode" (lihat Tabel 1.4)
digunakan untuk sensor yang menggunakan serat optik untuk transmisi sinyal
cahaya. Perhatikan bahwa bioreseptor yang digunakan adalah semua enzim
kecuali sensor antibodi.
Tabel 1.2 Biosensor Amperometik

Tabel 1.3 Biosensor Potensiometrik

Tabel 1.4 Sensor enzim berdasarkan pada optodes produk bioreseptor substrat
terdeteksi R

Produk Terdeteksi. Seperti dicatat dalam Tabel 1.2-4, analit secara tidak
langsung diukur dengan mengukur produk dari suatu reaksi karena enzim. Dalam
Tabel 1.2, oksigen yang sebenarnya diukur, dan konsentrasinya berbanding lurus
dengan konsentrasi analit. Untuk amperometri, mayoritas adalah H2O2 (dengan
pengecualian NADH), yang merupakan produk umum untuk enzim oksido-
reduktase. Untuk biosensor potensiometri, mayoritas adalah asam yang dideteksi
oleh sensor pH. Dalam reaktor fermentor dan kultur sel, produk metabolisme CO2
dan NH3 terdeteksi secara tidak langsung dengan mengukur perubahan pH.
Konfigurasi Biosensor. Ketika molekul-molekul bioreceptor dikombinasikan
dengan transduser yang cocok, sebuah biosensor dibuat. Gambar 1.8
menunjukkan berbagai konfigurasi biosensor. Perhatikan bahwa molekul-molekul
bioreseptor diimobilisasi dalam matriks yang sesuai untuk membentuk lapisan
bioaktif, yang kemudian ditempatkan di sekitar transduser. Elektroda selektif ion
transduser dan FET termasuk dalam kategori transduser potensiometrik; kawat
yang dilapisi termasuk dalam kategori sensor amperometrik; detektor plasmon
permukaan dan detektor gelombang akustik permukaan termasuk dalam kategori
transduser piezo. Bahan-bahan konstruksi untuk transduser juga diberikan dalam
gambar.

Gambar 1.8 berbagai jenis konfigurasi biosensor.

Membran Diskriminatif. Membran adalah salah satu komponen paling penting
dari suatu biosensor. Mereka digunakan untuk (1) hambatan terhadap molekul
non-analit, (2) perlindungan membran enzim-immobilisasi, sehingga mencegah
pengotoran; dan (3) mengendalikan rentang operasi biosensor. Ketika molekul
kecil adalah analit, makromolekul seperti protein dapat dicegah memasuki area
penginderaan aktif dengan menggunakan membran pori kecil. Perhatikan bahwa
protein menyerap dengan mudah pada sebagian besar permukaan dan karenanya
permukaan penginderaan busuk. Pengangkutan molekul bermuatan dapat
dimodulasi dengan menempatkan membran selektif ion. Kombinasi dari berbagai
membran diskriminatif dapat digunakan untuk menghalangi jalannya molekul-
molekul pengganggu yang berbeda. Perlu dicatat bahwa penggunaan membran
diskriminatif meningkatkan jeda waktu karena memperkenalkan resistensi
transpor difusif, dan dengan demikian pilihan ketebalannya yang bijaksana sangat
penting untuk berfungsinya dengan benar.
Persyaratan Sensitivitas. Kisaran dan jenis analit terbagi menjadi luas dan
bervariasi nilai-nilai dan dengan demikian tidak dapat dianggap menggunakan
kriteria tunggal. Aplikasi tertentu menentukan rentang konsentrasi yang
dibutuhkan. Seringkali ditentukan berdasarkan kisaran konsentrasi target yang
diharapkan dalam sampel. Misalnya, rentang konsentrasi metabolit sering dalam
kisaran uM, sedangkan hormon berada dalam kisaran nM. Virus dan patogen
ditemukan dalam 10-10.000 per mL. Dengan demikian jelas bahwa seringkali
pendekatan yang bervariasi diperlukan untuk sensor yang dirancang untuk
metabolit dibandingkan dengan mengukur antigen tumor.
Evolusi Biosensor. Biosensor dapat diklasifikasikan ke dalam tiga generasi
sesuai dengan tingkat integrasi komponen-komponen yang terpisah-yaitu metode
perlekatan molekul biorecognition atau bioreceptor ke elemen transduser dasar.
Pada generasi pertama, bioreceptor secara fisik terperangkap di sekitar sensor
dasar di balik membran diskriminatif seperti membran dialisis. Pada generasi
berikutnya, imobilisasi dicapai melalui ikatan kovalen pada antarmuka transduser
yang sesuai atau dengan penggabungan ke dalam matriks polimer pada
permukaan transduksi. Pada generasi kedua, komponen individu pada dasarnya
tetap berbeda (mis., Kontrol elektronik - elektroda - biomolekul), sedangkan pada
generasi ketiga molekul bioreceptor menjadi bagian integral dari elemen
penginderaan dasar (Gambar 1.10). Sementara definisi ini mungkin dimaksudkan
untuk sistem elektroda enzim, klasifikasi serupa yang sesuai untuk biosensor
secara umum dapat dibuat. Pada generasi kedua dan ketiga dari keluarga inilah
usaha pembangunan utama sekarang dapat dilihat.

Gamabr 1.9 dan 1.10 Rentang deteksi untuk beberapa analit secara klinis; Tiga
generasi Biosensor.
VII. Prospek Masa Depan. Dalam beberapa tahun terakhir, bidang
nanoteknologi yang muncul telah menghasilkan bahan yang sangat menarik,
beberapa di antaranya memberikan peluang bagi teknologi transduksi
penginderaan baru yang berguna untuk pengembangan biosensor. Selain itu,
penggunaan teknik perakitan mandiri dan sistem nano-elektromekanis telah
menghasilkan metodologi penginderaan laboratorium baru. Beberapa pendekatan
ini, meskipun tidak kuat untuk instrumentasi analitik umum atau penggunaan
lapangan, akan muncul di masa depan sebagai sensor praktis. Diskusi singkat
yang diberikan di bawah ini adalah untuk memberikan gambaran tentang metode
yang muncul.
Sensor perubahan massa bergantung pada perubahan frekuensi resonansi, karena
frekuensi alami bergantung pada massa massa yang berosilasi. Dalam kategori ini,
quartz crystal microbalance (QCM) atau osilator mode geser ketebalan telah
banyak digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen dengan memodifikasi
permukaan QCM dengan antibodi khusus untuk antigen target. Prinsip yang sama
telah dicoba dalam bentuk lain dari perangkat osilasi, seperti silikon
mikrosantileve, mikrosantilever yang bersemangat piezoelektrik, sensor
gelombang akustik permukaan (SAW) dan lainnya. Dalam perangkat SAW,
elektroda berada di sisi yang sama dari kristal dan transduser interdigital bertindak
sebagai pemancar dan penerima untuk merangsang gelombang permukaan yang
bergerak melintasi permukaan kristal. Perubahan pada gelombang yang
disebabkan oleh target pengikatan antigen ke permukaan terbatas pada permukaan
kristal, dan diukur. Sensor SAW jauh lebih banyak
sensitif daripada QCM, tetapi ketika fase air hadir di permukaan, sinyal sangat
dilemahkan. Di sisi lain, ketika tidak ada larutan cair yang bersentuhan, itu
memberikan pengukuran yang sangat sensitif untuk komposisi fase gas.
Spektroskopi Raman adalah alat yang berguna untuk analisis karena kemampuan
identifikasi kelompok kimianya yang sangat baik; Namun, keterbatasannya adalah
sensitivitas rendah. Pengamatan terbaru bahwa efisiensi hamburan Raman dapat
ditingkatkan dengan banyak urutan besarnya ketika analit diserap atau dekat
permukaan emas atau perak telah membuat teknik ini metodologi penginderaan
yang sangat kuat. Teknik yang dimodifikasi ini, dikenal sebagai hamburan Raman
surfaceenhanced (SERS), telah terbukti cocok dalam pengaturan laboratorium
untuk mengamati hibridisasi DNA. Dengan demikian, untaian tunggal fragmen
DNA dapat dilabeli dengan probe SERS. Probe SERG yang dihasilkan dapat
digunakan untuk mengidentifikasi gen atau mendeteksi komponen bakteri dan
virus. Peningkatan lebih lanjut dapat dicapai dengan menggunakan asam nukleat
peptida (PNA), yang awalnya dikembangkan sebagai obat penargetan gen. PNA
telah menunjukkan sifat hibridisasi yang luar biasa terhadap oligonukleotida
komplementer. Akibatnya, biosensor yang didasarkan pada penggantian lapisan
pengenalan DNA dengan PNA satu, menawarkan perbedaan yang ditingkatkan
secara signifikan antara sekuens DNA yang terkait erat, serta beberapa
keuntungan menarik lainnya. Ada juga banyak minat dalam sensor biofotonik dan
sensor DNA (Junhui et al., 1997). Sebagai contoh, peningkatan resonansi karena
partikel nano emas yang terikat pada molekul pengenalan telah terbukti efektif
dalam biofotonik. Kelebihan fotonik adalah kemampuan untuk mengukur tanpa
menghubungi sampel. Penggunaan serat optik dan variannya telah menyediakan
sumber yang kaya elemen transduksi. Dalam kasus-kasus ini, permukaan serat
(kaca) diderivatisasi dengan gugus amina dan kemudian secara kovalen
dihubungkan dengan suatu bioreseptor melalui gugus karboksilat. Ketika analit
mengikat, karakteristik transmisi cahaya diubah dan diukur. Karena ketersediaan
sumber cahaya monokromik yang murah (dioda pemancar cahaya) dan perangkat
penginderaan cahaya yang murah (dioda foto), perangkat biofotonik menawarkan
platform penginderaan yang relatif murah. Dalam bab ini, tinjauan biosensor
disajikan, berbagai elemen biosensor dijelaskan, dan ulasan singkat tentang
bioreseptor dan mekanisme transduksi disediakan.

Referensi:
J.S. Wilson. Sensor Technology Handbook. Newnes is an imprint of Elsevier.
United States of America. 2005.